Name: Pretargeted Radioimmunotherapy baseado na reação de Diels-Alder de demanda inversa elétron (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-29T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: Aprenda a aplicar radioimunoterapia pré-alvejada em modelos murinos de câncer colorretal usando anticorpo huA33-TCO e radioligante de tetrazina marcado com 177Lu. Este método permite injeção separada do anticorpo e radioligante.

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Os autores agradecer Dr. Jacob Houghton conversas úteis. Os autores também gostaria de agradecer o NIH para seu financiamento generoso (R00CA178205 e U01CA221046).

<ol><li>Goldenberg, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+Therapy+of+Cancer+with+Radiolabeled+Antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Targeted Therapy of Cancer with Radiolabeled Antibodies.</a> Journal of Nuclear Medicine. 43 (5), 693-713 (2002).</li>
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<li>Green, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+Analysis+of+Bispecific+Antibody+and+Streptavidin-Targeted+Radioimmunotherapy+for+B-cell+Cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Comparative Analysis of Bispecific Antibody and Streptavidin-Targeted Radioimmunotherapy for B-cell Cancers.</a> Cancer Research. 76 (22), 6669(2016).</li>
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<li>Schubert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Tumor+Pretargeting+System+Based+on+Complementary+L-Configured+Oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Novel Tumor Pretargeting System Based on Complementary L-Configured Oligonucleotides.</a> Bioconjugate Chemistry. 28 (4), 1176-1188 (2017).</li>
<li>Forero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase+1+Trial+of+a+Novel+Anti-CD20+Fusion+Protein+in+Pretargeted+Radioimmunotherapy+for+B-cell+Non-Hodgkin+Lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Phase 1 Trial of a Novel Anti-CD20 Fusion Protein in Pretargeted Radioimmunotherapy for B-cell Non-Hodgkin Lymphoma.</a> Blood. 104 (1), 227(2004).</li>
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<li>Meyer, J. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioorthogonal+Masking+of+Circulating+Antibody-TCO+Groups+Using+Tetrazine-Functionalized+Dextran+Polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Bioorthogonal Masking of Circulating Antibody-TCO Groups Using Tetrazine-Functionalized Dextran Polymers.</a> Bioconjugate Chemistry. 29 (2), 538-545 (2018).</li>
<li>Houghton, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretargeted+Immuno-PET+of+Pancreatic+Cancer%3A+Overcoming+Circulating+Antigen+and+Internalized+Antibody+to+Reduce+Radiation+Doses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pretargeted Immuno-PET of Pancreatic Cancer: Overcoming Circulating Antigen and Internalized Antibody to Reduce Radiation Doses.</a> Journal of Nuclear Medicine. 57 (3), 453-459 (2016).</li>
<li>Keinänen, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretargeting+of+Internalizing+Trastuzumab+and+Cetuximab+with+a+%2818%29F-Tetrazine+Tracer+in+Xenograft+Models%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging+Research%22%5BJournal%5D)">Pretargeting of Internalizing Trastuzumab and Cetuximab with a (18)F-Tetrazine Tracer in Xenograft Models.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging Research. 7, 95(2017).</li>
<li>Billaud, E. M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-flow+Photosynthesis+of+New+Dienophiles+for+Inverse-Electron-Demand+Diels-Alder+Reactions.+Potential+Applications+for+Pretargeted+In+Vivo+PET+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Science%22%5BJournal%5D)">Micro-flow Photosynthesis of New Dienophiles for Inverse-Electron-Demand Diels-Alder Reactions. Potential Applications for Pretargeted In Vivo PET Imaging.</a> Chemical Science. 8 (2), 1251-1258 (2017).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Um dos pontos fortes desta abordagem na vivo pretargeting — especialmente em relação às estratégias baseia bispecific anticorpos e radiolabeled haptens — é sua modularidade: trans- cyclooctene partes podem ser anexados a qualquer anticorpo, e tetrazine radioligands pode ser radiolabeled com uma extraordinária variedade de radionuclídeos, sem prejudicar a sua capacidade de reagir com os seus parceiros de clique. Ainda a adaptação desta abordagem para outro sistema de antígeno/anticorpo não é tão simples ...

Radioimmunotherapy (RIT) — o uso de anticorpos para a entrega de radionuclídeos terapêuticos para tumores — tem sido uma abordagem atraente para o tratamento de câncer1,2. Com efeito, esta promessa tem sido sublinhada pelos Estados Unidos, Food and Drug Administration da aprovação de dois radioimmunoconjugates para o tratamento de linfoma não-Hodgkin: 90Y-ibritumomab tiuxetan e 131tositumomab eu3 , 4. ainda mesmo desde seus primeiros dias, as perspectivas clínicas de RIT foram dificultadas por uma complicação crítica: taxas de dose alta de radiação para os tecidos saudáveis5,6. De um modo geral, radioimmunoconjugates para RIT são rotulados com radionuclídeos de vida longa (por exemplo, 131eu [t½ = 8,0 dias] e 90Y [t½ = 2,7 dias]) com meia-vida física que se encaixam bem com o farmacocinéticas longa semi-vida de imunoglobulinas. Isto é essencial, pois garante que radioatividade suficiente permanece, uma vez que o anticorpo alcançou sua biodistribuição ideal após vários dias de circulação. No entanto, esta combinação de tempos de residência de longa no sangue e tempo físico de meia-vida inevitavelmente resulta na irradiação dos tecidos saudáveis, desse modo reduzindo relações terapêuticas e limitando a eficácia da terapia7. Várias estratégias têm sido exploradas para contornar este problema, incluindo a utilização de fragmentos de anticorpos truncado como Fab, Fab', F(ab')2, minibodies e nanobodies8,9,10. Uma das mais promissoras e fascinante, no entanto, abordagens alternativas, inegavelmente complexas é na vivo pretargeting11.
In vivo pretargeting é uma abordagem de imagem nuclear e terapia que visa aproveitar o requintado afinidade e seletividade de anticorpos enquanto contornando seus inconvenientes farmacocinéticos11,12,13. Para este fim, o anticorpo radiolabeled usado em radioimmunotherapy tradicional é desconstruído em dois componentes: uma pequena molécula radioligantes e um immunoconjugate que pode ligar tanto um antígeno tumoral e o radioligantes acima mencionados. O immunoconjugate é injetado primeiro e dado um 'avanço', muitas vezes de vários dias, durante o qual ele se acumula no tecido-alvo e limpa o sangue. Posteriormente, a pequena molécula radioligantes é administrado e combina com o immunoconjugate do tumor ou rapidamente limpa do corpo. Em essência, na vivo pretargeting depende de realização de radioquímica dentro do próprio corpo. Ao reduzir a circulação de radioatividade, esta abordagem simultaneamente reduz a doses de radiação para os tecidos saudáveis e facilita o uso de radionuclídeos (por exemplo, 68Ga, t½ = 68 min211; Como, t½ = 7,2 h) com meias-vidas que são normalmente considerados incompatíveis com vetores baseados em anticorpos.
Começando na década de 1980, um punhado de diferentes abordagens na vivo pretargeting foram desenvolvidos, incluindo estratégias baseadas em anticorpos bispecific, a interação entre streptavidin e biotina e a hibridação de complementares os oligonucleotides14,15,16,17,18. Ainda cada uma foi realizada a volta em diferentes graus por complicações, a mais famosa a imunogenicidade potente de anticorpos streptavidin-modificado19,20. Nos últimos cinco anos, o nosso grupo e outros desenvolveram uma abordagem na vivo pretargeting baseia o rapid e opaco elétron inversa demanda Diels-Alder ligadura entre trans- cyclooctene (TCO) e tetrazine (Tz) 21,22,23,24. A mais bem sucedida destas estratégias empregaram um anticorpo TCO-modificado e um radioligantes Tz-rolamento, como TCO é geralmente mais estável na vivo do que seu parceiro (Figura 1) de Tz25,26. Como em outras metodologias pretargeting, o immunoconjugate mAb-TCO é administrado primeiro e dado tempo para limpar de circulação e se acumulam no tecido do tumor. Posteriormente, a pequena molécula Tz radioligantes é injetado, após o qual ele clica com o immunoconjugate dentro do tecido-alvo ou limpa rapidamente do corpo. Esta na vivo pretargeting estratégia provou altamente eficaz para PET e SPECT de imagem com vários sistemas diferentes de antígeno/anticorpo, consistentemente produzir imagens com alto contraste e permitindo o uso de radionuclídeos de vida curto, tais como 18 F (t½ = 109 min) e Cu de 64(t1/2 = 12,7 h)21,22,24. Mais recentemente, demonstrou-se a eficácia do clique-baseado pretargeted radioimmunotherapy (Thayse) em modelos murino de adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) e carcinoma colorrectal27,28. Para este fim, o radionuclídeo terapêutico 177Lu (βmáx = 498 keV, t1/2 = 6,7 dias) foi empregado em conjunto com dois anticorpos diferentes: 5B1, que tem como alvo o antígeno de carboidrato 19,9 (CA19.9) expressado ubiquitously no PDAC , e huA33, que tem como alvo a A33, uma glicoproteína transmembrana expressos em > 95% dos cancros colo-rectais. Em ambos os casos, esta abordagem a 177Lu-Thayse rendeu concentrações de alta atividade no tecido do tumor, criou um efeito terapêutico dose-dependente e simultaneamente reduzidas concentrações de actividade em tecidos saudáveis em relação ao tradicional radioimmunoconjugates diretamente-rotulados.
Neste artigo, descrevemos os protocolos para Thayse usando um radioligantes tetrazine Lu-DOTA-rotulado de 177([177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz) e uma variante de TCO-modificado do anticorpo huA33 (huA33-TCO). Mais especificamente, nós descrevemos a construção de huA33-TCO (Figura 2), a síntese e radioativos de [177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz (Figura 3 e Figura 4) e o desempenho da vivo em biodistribuição e estudos longitudinais terapia em modelos murino de carcinoma colorrectal. Além disso, na discussão e resultados representativos, apresentamos um conjunto de dados de amostra, possíveis estratégias de endereço para a otimização desta abordagem e considerar esta estratégia no contexto mais vasto na vivo pretargeting e Thayse. Finalmente, é importante notar que enquanto nós escolhemos focar pretargeting usando huA33-TCO e [177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz no presente protocolo, esta estratégia é altamente modular e pode ser adaptado para atender uma ampla gama de anticorpos e radionuclidos.

<table><tbody><tr><td>(E)-Ciclooc-4-enilo 2,5-dioxo-1-carbonato de pirrolidinilo (TCO-NHS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>764523</td><td>Armazenar a -80 &graus; C</td></tr><tr><td>2,5-Dioxo-1-pirrolidinil 5-[4-(1,2,4,5-tetrazin-3-il)benzilamino]-5-oxopentanoato (Tz-NHS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>764701</td><td>Armazenar a -80 &deg; C</td></tr><tr><td>Acetonitrila (MeCN)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A998-4</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de Amônio (NH4OAc)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A639-500</td><td></td></tr><tr><td>Boc-PEG7-amina (O-(2-Aminoetil)-O&prime;-[2-(Boc-amino)etil]hexaetilenoglicol)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70023</td><td>Armazenar a -20 &graus; C</td></tr><tr><td>Diclorometano (DCM)</td><td>Fisher Scientific</td><td>D143-1</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO), anidro</td><td>Fisher Scientific</td><td>D12345</td><td></td></tr><tr><td>EMD Millipore Amicon Ultra-2 Unidade de Filtro Centrífugo</td><td>Fisher Scientific</td><td>UFC205024</td><td></td></tr><tr><td>GE Healthcare Colunas de Dessalinização PD-10 Descartáveis</td><td>Fisher Scientific</td><td>45-000-148</td><td></td></tr><tr><td>N, N-Dimetilformamida (DMF), anidro</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC610941000</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>70-011-044</td><td>10x Concentrado</td></tr><tr><td>p-SCN-Bn-DOTA</td><td>Macrocíclicos</td><td>B-205</td><td>Armazene a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Trietilamina (TEA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC157911000</td><td></td></tr><tr><td>Ácido Trifluoroacético (TFA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A116-50</td><td></td></tr><tr><td>Dispositivo de medição de tumor</td><td>Peira TM900</td><td>Peira TM900</td><td></td></tr></tbody></table>

pretargeted radioimmunotherapy baseado na reação de diels-alder de demanda inversa elétron

Pretargeted Radioimmunotherapy Based on the Inverse Electron Demand Diels-Alder Reaction

Enquanto radioimmunotherapy (RIT) é uma abordagem promissora para o tratamento de câncer, o Half-Life longo farmacocinético de anticorpos radiolabeled pode resultar em doses de radiação para os tecidos saudáveis. Talvez não surpreendentemente, várias estratégias diferentes foram desenvolvidas para contornar esta limitação preocupante. Uma das mais promissoras dessas abordagens é pretargeted radioimmunotherapy (Thayse). Thayse baseia-se na dissociação entre o radionuclídeo de imunoglobulina a, injetá-las separadamente e em seguida, permitindo-lhes combinar na vivo no tecido-alvo. Esta abordagem aproveita as propriedades excepcionais do tumor-direcionamento de anticorpos enquanto contornando seus inconvenientes farmacocinéticos, desse modo reduzindo a doses de radiação para os tecidos não-alvo e facilitar o uso de radionuclídeos com meias-vidas considerado demasiado curto para uso em radioimmunoconjugates tradicionais. Nos últimos cinco anos, nosso laboratório e outros desenvolveram uma abordagem na vivo pretargeting baseado na reação de Diels-Alder (IEDDA) de elétrons-demanda inversa entre trans- cyclooctene (TCO) e tetrazine (Tz). Esta estratégia tem sido aplicada com sucesso a pretargeted tomografia por emissão de pósitrons (PET) e de emissão de fóton único computadorizada (SPECT) de imagem com uma variedade de sistemas de antígeno-anticorpo. Em um par de publicações recentes, temos demonstrado a eficácia de Thayse IEDDA-baseado em modelos murino de adenocarcinoma ductal do pâncreas e carcinoma colorrectal. Neste protocolo, descrevemos os protocolos para Thayse usando um radioligantes tetrazine Lu-DOTA-rotulado de 177([177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz) e uma variante de TCO-modificado do câncer colorretal direcionamento anticorpo huA33 (huA33-TCO). Mais especificamente, iremos descrever a construção de huA33-TCO, a síntese e radioativos de [177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz e o desempenho de biodistribuição no vivo e estudos longitudinais terapia em modelos murino de carcinoma colorretal.

A conjugação de TCO para huA33 baseia-se o acoplamento entre o TCO-NHS-amina reativos e os resíduos de lisina na superfície da imunoglobulina a. Este método é altamente robusto e reprodutível e confiável, produz um grau de-rotulagem de 2-4 TCO/mAb. Neste caso, a espectrometria de massa MALDI-ToF foi empregada para confirmar um grau de rotulagem de aproximadamente 4.0 TCO/mAb; um valor semelhante foi obtido usando um fluoróforo-modificado tetrazine como um repórter24</sup...

Este protocolo descreve a síntese e caracterização de um trans- cyclooctene (TCO)-anticorpo e uma 177tetrazine Lu-rotulado (Tz) radioligantes para pretargeted radioimmunotherapy (Thayse) modificados. Além disso, ele detalha o uso dessas duas construções para na vivo biodistribuição e estudos longitudinais terapia em um modelo murino de câncer colorretal.

Pretargeted Radioimmunotherapy baseado na reação de Diels-Alder de demanda inversa elétron

While radioimmunotherapy (RIT) is a promising approach for the treatment of cancer, the long pharmacokinetic half-life of radiolabeled antibodies can ...

Este protocolo descreve como aplicar uma metodologia pretargeted à radioterapia direcionada de xenógrafos de câncer no modelo do camundongo. A radioimunoterapia pretargeted ou PRIT nos permite injetar o anticorpo e radioligand separadamente, e deixar os dois combinarem in vivo usando química de clique. Enquanto apresentamos PRIT usando um modelo de xenógrafo de câncer colorretal, esta técnica pode ser aplicada a qualquer anticorpo de alvo de antígeno superficial.É importante selecionar um antígeno que não internalize rapidamente ou desadeudo extensivamente, pois estes podem reduzir a eficácia da abordagem. Para sintetizar huA33-TCO, prepare pela primeira vez uma solução de 125 microliter de 40 mililígenos por mililitro TCO-NHS em metilaformamida seca em um tubo de microcentrífuga de 1,7 mililitro. Esta solução pode ser alitada e congelada a 80 graus celsius para uso em experimentos futuros.Em um tubo de microcentrifuge separado de 1,7 mililitro prepara uma solução de cinco miligramas por mililitro de huA33 em um mililitro de salina tamponada de fosfato. Utilizando pequenas alíquotas de carbonato de sódio molar de 0,1, ajuste o pH da solução de anticorpos para entre 8,8 e 9,0. Use papel pH ou um medidor de pH com um microeletrodo para monitorar o pH, e tenha cuidado para que o pH não exceda 9,0.Adicione um volume correspondente a 40 equivalência molar de TCO-NHS à solução de anticorpos. Para evitar a precipitação do TCO-NHS hidrofóbico, adicione-o lentamente e com agitação. Deixe a reação incubar a 25 graus celsius em uma batedeira térmica por uma hora com leve agitação.Antes de purificar o imunoconjugado huA33-TCO usando uma coluna de exclusão de tamanho descartável pré-embalada, equilibre a coluna de exclusão de tamanho descrita pelo fornecedor para remover quaisquer conservantes presentes na coluna durante o armazenamento que geralmente envolve lavar a coluna cinco vezes com um volume de PBS que corresponde ao volume da coluna. Adicione a mistura de reação à coluna de exclusão de tamanho, observando o volume da mistura de reação. Depois que a mistura de reação entrar, a coluna adiciona uma quantidade apropriada de PBS para trazer o volume total de solução adicionado à coluna até 2,5 mililitros.Colete o produto usando dois mililitros de PBS como eluente. Meça a concentração do huA33-TCO usando um espectotómetro UV vis monitorando o comprimento de onda em 280 nanômetros. Se uma solução com maior concentração de imunoconjugado for desejada concentre a solução huA33-TCO usando uma unidade de filtro centrífuga com um corte de peso molecular de 50.000 seguindo as instruções do fabricante.Armazene o imunoconjugado huA33-TCO completo a 4 graus celsius no escuro. Se for para ser usado mais de quatro dias no futuro armazene-o a 80 graus celsius no escuro. Em um tubo de centrífugas de 1,7 mililitros adicione 200 microliters de 0,25 tampão de acetato de amônio molar ajustado para pH 5.5.Adicione a quantidade desejada de cloreto de Lutetium-177 à solução tampão. A quantidade adicionada dependerá do número de indivíduos no experimento e das doses radioativas que estão sendo administradas. Adicione Tetrazine PEG7-DOTA em DMSO à mistura radioativa.O valor adicionado depende do número de indivíduos que estão sendo testados. Deixe a solução incubar a 37 graus celsius por 20 minutos. Verifique se a rotulagem de rádio está completa usando cromatografia de camada fina radio-instantânea com 50 milimões EDTA pH 5.5 como fase móvel.O Lutetium-177-DOTA-PEG7-Tetrazine permanecerá na linha de base, enquanto o Lutetium-177 livre será coordenado pelo EDTA e viajará com a frente solvente. É fundamental que a colocação dos tumores subcutâneos não interfira na sua técnica de contenção. Recomendo colocá-los no lado flanco que é oposto à sua mão de contenção.Desde que me contenha com a mão esquerda, escolhi colocar os tumores no flanco direito. Classificar camundongos nus atrímicos femininos com xenógrafo de câncer colorretal, de modo que o volume médio de tumor em cada coorte é aproximadamente igual. Para isso, liste os números de identificação animal, padrão de entalhe de ouvido e volume de tumor em três colunas separadas de um programa de planilha.Classifique os dados do menor ao maior volume de tumores. Em uma quarta coluna atribuir a cada animal um número de gaiola. Pedale pelas gaiolas em um padrão parecido com uma cobra até que todos os animais sejam designados para uma gaiola.Uma vez que as gaiolas são atribuídas classificam os dados por número de gaiola. Para injetar as doses de imunoconjugados de 150 microliters de solução huA33-TCO em seringas pré-tratadas com albumina de soro bovino de 1% na PBS, e armazenar essas seringas no gelo. Para injetar o radioligand, primeiro desenhe doses em 150 microliters de soro fisiológico 0,9% estéril contendo 1,1 equivalência molar da Tetrazine-PEG7-DOTA radiolabeled em relação à quantidade de huA33-TCO administrado.Use pinças para medir o lado mais longo do tumor oblongo, bem como a largura que é perpendicular ao comprimento. Pesar cada rato em um equilíbrio para acompanhar o ganho de peso ou a perda de peso ao longo do tempo. Finalmente, calcule o volume usando a fórmula para o volume de um elipsoide assumindo que a altura é aproximadamente igual à largura.Mostrado aqui é a biodistribução de um in vivo pretargeting com huA33-TCO e Lutetium-177-DOTA-PEG7-Tetrazine em camundongos nude atrímicos com tumores de caner colorretal humano s.1222 humanos. Todos os intervalos de injeção produzem altas concentrações de atividade no tecido tumoral, bem como baixas concentrações de atividade em órgãos saudáveis. O intervalo de injeção de 24 horas proporciona a maior absorção tumoral em 120 horas após a injeção.Com base nesses achados, foi escolhido um intervalo de 24 horas para o estudo subsequente de terapia longitudinal. Aqui é mostrado o estudo de terapia longitudinal de cinco grupos de camundongos com tumores SW1222 subcutâneos retratados no volume médio do tumor em função do tempo, e o volume do tumor normalizado para o volume inicial em função do tempo. Há uma grande diferença na resposta das coortes experimentais em comparação com os grupos de controle.Enquanto os tumores nos camundongos que receberam apenas um componente da estratégia de radioimunoterapia pretargeted continuaram a crescer sem controle, os tumores dos camundongos que receberam o regime completo de radioimunoterapia pretargeted pararam de crescer e, finalmente, encolheram. É importante ressaltar que não foram observados efeitos colaterais tóxicos, e todos os animais mantiveram um peso dentro de 20% de sua massa inicial. Surpreendentemente, os ratos das coortes experimentais tinham um registro perfeito de sobrevivência no final da investigação.Ao tentar este procedimento é de extrema importância medir com precisão e reprodutivelmente os tumores. Ao trabalhar com radioatividade consulte o oficial de segurança de radiação da sua instituição para desenvolver protocolos e instalações seguras. Ter controles de segurança adequados no local limitará sua exposição e evitará contaminação.Pretargeting oferece uma dose de radiação menor para órgãos de fundo do que a radioimunoterapia tradicional. Ao compartilhar este protocolo, esperamos que outros possam testar seus próprios modelos e ideias que levarão a novos e emocionantes avanços para o tratamento do paciente.

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Research

JoVE Journal

Chemistry

Química

Este vídeo descreve a técnica de radioimunoterapia pré-direcionada ou PRIT, na qual imunoconjugados seguidos de radioligantes são administrados para o tratamento de tumores. Esta radioimunoterapia reduz as doses de radiação para tecidos saudáveis e utiliza radionuclídeos com meias-vidas muito baixas, incompatíveis com vetores baseados em anticorpos.

Radioimunoterapia pré-direcionada: um método para entrega direcionada de radionuclídeos terapêuticos a tumores

A cicloadição de Diels-Alder de demanda inversa de elétrons bioortogonal foi aproveitada para criar uma estratégia de imagem PET pré-direcionada eficaz e modular para o câncer. Neste protocolo, as etapas desta metodologia são descritas no contexto de um sistema modelo que emprega o anticorpo direcionado ao câncer colorretal huA33 e um radioligante marcado com 64.

Aproveitando a demanda Bioorthogonal Inverse Electron Diels-Alder para Pretargeted PET Imagem

Devido à sua meia-vida radioativa de vários dias e propriedades de decaimento favoráveis, o radiometal emissor de pósitrons 89Zr é extremamente adequado para uso em radiofármacos baseados em anticorpos para imagens PET. Neste protocolo, serão descritas a bioconjugação, radiossíntese e aplicação pré-clínica de 89anticorpos marcados com Zr.

O bioconjugação e radiossíntese de<sup&gt; 89</sup&gt; Anticorpos Zr-DFO-rotulados

Aqui, descrevemos um protocolo para radiomarcação e teste in vivo de derivados tridentados de quelato de 99mTc(I) e tetrazina para pré-direcionamento e química bio-ortogonal.

Preparação e Avaliação de<sup&gt; 99m</sup&gt; Tc-rotulados tridentadas Quelatos de Pré-alvo Usando Bioorthogonal Química

Neste protocolo, descreveremos a síntese de vagens, phenyoxadiazolyl metil sulfona-baseado reagente para a ligação local-seletivo de cargas para os tióis de biomoléculas, especialmente de anticorpos. Além disso, descreveremos a síntese e caracterização de um quelante bifuncional PODS-rolamento e sua conjugação com um anticorpo de modelo.

Síntese e Bioconjugation dos reagentes Thiol-reativa para a criação de Site-seletivamente modificado Immunoconjugates

A fotoimunoterapia quase infravermelha (NIR-PIT) é uma estratégia terapêutica emergente do câncer que utiliza um conjugado de anticorpos fotoabsorto (IR700Dye) e luz NIR para destruir células cancerosas. Aqui, apresentamos um método para avaliar o efeito antitumoral do NIR-PIT em um modelo de camundongo de câncer de pulmão disseminado pleural e mesotelioma pleural maligno usando bioluminescência por imagem.

Fotoimunoterapia infravermelha próxima para modelos de mouse de disseminação pleural

Este protocolo descreve a metodologia para rastreamento não invasivamente de células T geneticamente modificadas para expressar receptores de antígeno quimérico in vivo com uma plataforma clinicamente disponível.

Imagem dinâmica das células T do receptor de antígeno quimérico com [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Tomografia Computadorizada

Este estudo ilustra o potencial metodológico da combinação de radioembolização transarterial de ítrio-90 (Y-90 TARE) com um anticorpo monoclonal anti-PD-1 como uma estratégia neoadjuvante eficaz que leva à hepatectomia em pacientes com carcinoma hepatocelular (CHC) com alto risco inicial de recorrência. Ele enfatiza a segurança, a viabilidade e a orientação processual passo a passo dessa abordagem.

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Microondas assistidas Intramoleculares Dehydrogenative Diels Alder-Reações para a síntese de Naftalenos funcionalizados / Corantes solvatocrômico

Nós apresentamos um método para a rápida imobilização, reversível de moléculas pequenas e montagens de nanopartículas funcionalizadas para a superfície Plasmon Resonance (SPR) estudos, usando seqüencial on-chip química cicloadição bioorthogonal e antígeno-anticorpo de captura.

Microfluidic On-chip Reação Capture-cicloadição para imobilizar reversível pequenas moléculas ou estruturas multi-componentes para aplicações de biossensores

Aprenda a aplicar radioimunoterapia pré-alvejada em modelos murinos de câncer colorretal usando anticorpo huA33-TCO e radioligante de tetrazina marcado com 177Lu. Este método permite injeção separada do anticorpo e radioligante.

Pretargeted Radioimmunotherapy baseado na reação de Diels-Alder de demanda inversa elétron

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