Name: Aplicação da tecnologia de Microfluidic Biochip para detectar soro alérgeno-específicas E de imunoglobulina (sIgE) (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Aprenda a detectar IgE sérica específica usando um sistema de biochip microfluídico com quimiluminescência. Este método de baixo custo requer menos amostra sérica e é aplicável a alergias respiratórias, alimentares e cutâneas.

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Os autores Obrigado Professor Mei Jiang pela ajuda na análise estatística e Sr. Hammer Tsui na preparação do manuscrito. Este estudo foi suportado por tecnologia Fundação (201804020043) e a ciência de Guangzhou e Nacional Natural Science Foundation da China (NSFC 81572063 e 81802076 NSFC). Grupos de financiamento de acordo com o projeto de estudo, análise de dados, preparação de manuscrito e decisão de publicar. Nenhum outro financiamento foi recebido para este estudo.

Este estudo e o uso de amostras de soro humano foram aprovados pelo Comitê de ética da Universidade o primeiro afiliado Hospital de Guangzhou Medical (GYYY-2016-73). Todos os participantes têm dado o seu consentimento escrito independentemente ou através de seus pais (no caso das crianças).
1. base informações do grupo de estudo
Nota: O repositório de informações de alergia do estado chave laboratório de doença respiratória (ar-SKLRD) é um banco de grande soro estabelecido dentro do Hospital Instituto de Guangzhou respiratória (GIRH). Iniciada na última década, o ar-SKLRD já começou a coletar e armazenar amostras de soro de pacientes com doenças alérgicas, juntamente com suas informações clínicas (tabela 1)4,5. O atual estudo foi realizado com soros do ar-SKLRD.
<ol><li>Banco de dados do ar-SKLRD para soros colhidos de janeiro de 2015 para junho de 2018 e seleccione os pacientes com doença alérgica, que foram encontrados para ser sensível para os alérgenos comuns na região.</li>
	<li>Certifique-se de que todos os pacientes selecionados têm doenças alérgicas-relacionados, tais como rinite alérgica e asma, dermatite alérgica, ou urticária, e que o soro destes pacientes contém vários imunoglobulina de alérgeno específico de soro E (sIgE) sensibilizações de alérgenos comuns nesta região, detectados pelo sistema 1.</li>
	<li>Excluir pacientes com prontuários incompletos, aqueles perdeu para acompanhamento, aqueles que se recusam a fornecer o consentimento informado sobre a utilização de suas amostras de soro para fins científicos, aqueles com uma imunodeficiência identificada, aqueles atualmente na imunoterapia ou agentes imunomoduladores, ou aqueles encontrados para ter infecções parasitárias.</li>
	<li>Certifique-se de que nenhuma prescrição de tratamento ou medicamento foi dado antes da colheita de soro a fim de minimizar a interferência com os achados de laboratório. Todas as amostras de soro que não cumprem os critérios foram rejeitadas.</li>
</ol>2. estudar o fluxo e as medidas de interesse
Nota: O sistema microfluidic precisa de 100 µ l de soro para a determinação de 19 alérgenos. O sangue venoso (5 mL) foi coletado de cada paciente, utilizando uma embarcação de sangue vácuo contendo gel de separação. Depois da centrifugação por 10min a 1.000 x g, a camada superior foi coletada para o teste. Não utilizado soro foi armazenado a-80 ° C. Antes do teste, o soro foi mantido em temperatura ambiente por 30 min e foi abalado com um misturador do vortex. Ciclos de congelamento e descongelamento repetidos foram evitados.
<ol><li>Principalmente, testar as amostras de soro para o evento inteiro alérgenos de Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), pelo de gato (e1), pelos de cão (e5), grama de Bermuda (g2), Timóteo (de grama G6), baratas (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans (m5), tasna (w1), clara de ovo (f1), leite (f2), trigo (f4), amendoim (f13), soja (f14), amêndoa (f20), caranguejo (f23) e camarão (f24). Siga as instruções dadas na secção 3. Nota: determinação do sIgE foi feita com o IgE alérgeno específico ensaio kit (veja a Tabela de materiais) e medido por um analisador de quimioluminescência.</li>
	<li>Selecione aleatoriamente amostras de três dentre as amostras com suficiente (pelo menos 900 µ l) de soro para um estudo de reprodutibilidade. Mantendo todas as condições inalteradas, medir os três soros para evento de alérgeno diariamente por 9 dias consecutivos (ou seja, um total de 100 x 9 = 900 µ l de soro).</li>
</ol>3. procedimento de teste semiautomação do sistema microfluídicos
Nota: O sistema 2 é a integração de tecnologia automática microfluidic proteína microarray, luz fria análise, análise paralela de IgE e tecnologia de processamento de imagem. Protocolo do teste é dividido em quatro partes: a preparação do equipamento, carregamento de amostra, incubação e medição.
<ol><li>
Preparação do equipamento
	<ol>
<li>Ligue o PC e o poder do analisador. Nota: O interruptor de alimentação está à esquerda da base.</li>
		<li>Inicie o programa LabIT no PC. Se a janela de aviso de Quadro escuro aparece, clique em Okey para executar o teste de vazamento. Depois, clique no logo do centro para entrar na interface de operação. Nota: O sistema lembrará o usuário executar o teste de vazamento , se é ocioso por mais de 24 h.</li>
		<li>Verifique a temperatura de reação e CCD (charge - coupled device) Temp no canto inferior direito da tela. A temperatura de reação deve elevar-se a 37 ° C ± 1 ° C em cerca de 10 min, e o CCD Temp deve cair para-15 ° C ± 1 ° C.</li>
		<li>Executar o teste de vazamento após o CCD Temp baixou para-15 ° C ± 1 ° C. Antes de executar o teste de vazamento, certificar-se de que não existem outros itens dentro do instrumento e feche a porta. Clique em ferramentas | Teste de sistema | Teste de vazamento. Não abra a porta durante o teste. Quando o teste for concluído, a janela de relatório irá aparecer.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Carregamento de amostra
	<ol>
<li>Adicione 620 µ l de tampão de lavagem, 120 µ l de tampão de bloqueio, 60 µ l de conjugados A e B, 60 µ l de substrato A e B e 100 µ l de amostras de soro para o tanque de reagente correspondente no cartucho microfluidic.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Incubação
	<ol>
<li>Clique no ID do cartucho, use o scanner de código de barras para verificar o número serial do cartucho, digite a ID de amostra, colocar o cartucho para o analisador e fecha a porta e clique em Analyzer e executar para iniciar a análise.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Medição
	<ol>
<li>Exporte os resultados para o software estatístico (por exemplo, Excel) após a medição. Nota: Após 30 min de incubação, o analisador automaticamente executa a medição e relata o resultado.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Fora o analisador de comutação
	<ol>
<li>Para manutenção de rotina, depois de terminar o teste, remova o cartucho e limpe do analisador aquecimento interno ferro e eletroímã levemente com 75% de álcool. Nota: Não pressione com força ou agitar o eletroímã.</li>
		<li>Feche a janela LabIT. A janela de monitoramento de temperatura irá aparecer. Fechará automaticamente quando o CCD aquece para o modo de proteção de 5 ° C. Nessa altura, será seguro desligar a energia do analisador e PC. Nota: Não feche manualmente a janela de monitoramento antes que o CCD Temp aumentou para 5 ° C de temperatura e não desligue o poder do analisador nem o PC durante o warm-up CCD.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. definição de reatividade sIgE
Nota: Para uma amostra de soro não diluído, o intervalo de detecção do sistema o 2 é 0,21 – 100 IU/mL.
<ol><li>Com base no valor limiar de 0,35 UI/mL, considere um sIgE nível superior a 0,35 UI/mL para ser positivo6,7. Avaliar a reatividade dos testes sIgE como8: classe 1 (≥0.35 e < 0,70 UI/mL), classe 2 (≥0.70 e < 3,50 UI/mL), classe 3 (≥3.50 e < 17,50 UI/mL), classe 4 (≥17.50 e < 50,00 UI/mL), classe 5 (≥50.00 e < 100,00 UI/mL) e classe 6 (≥100.00 UI/mL).</li>
</ol>5. análise estatística
<ol><li>Use um histograma para mostrar a taxa positiva dos 19 alérgenos (Figura 1) e use a curva de Levey-Jennings para demonstrar a repetibilidade da deteção sistema (Figura 2)9.</li>
	<li>Selecione os três mais comuns alérgenos inalantes e alérgenos alimentares (no total, seis alérgenos) e comparar os resultados com o I 1 sistema para avaliar seu desempenho diagnóstico clínico10,11. Incluem a taxa de concordância, sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivos e negativos e a área sob o receptor operando curva característica (ROC) (AUC) como os critérios de avaliação.</li>
	<li>Aplicação de análise de correlação Spearman12 para descrever as correlações entre os dois sistemas e usar o valor de kappa para a consistência. Categorizar o valor de kappa como quase perfeito (0.8-1.0), substancial (0,6-0,8), moderada (0,4-0,6), razoável (0,2 – 0,4) ou pobres (< 0.2)13. Usar a análise estatística SPSS 23,0 e MedCalc 11.0 e definir P < 0,05 como significância estatística.</li>
</ol>

<ol><li>Kamble, S., Bharmal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incremental+Direct+Expenditure+of+Treating+Asthma+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Asthma+Research%22%5BJournal%5D)">Incremental Direct Expenditure of Treating Asthma in the United States.</a> Journal of Asthma Research. 46 (1), 73-80 (2009).</li>
<li>Paganelli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+antibodies+in+the+diagnosis+of+atopic+disease.+Clinical+evaluation+of+a+new+in+vitro+test+system%2C+UniCAP%2C+in+six+European+allergy+clinics%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Specific IgE antibodies in the diagnosis of atopic disease. Clinical evaluation of a new in vitro test system, UniCAP, in six European allergy clinics.</a> Allergy. 53 (8), 763-768 (1998).</li>
<li>Wang, J., Godbold, J. H., Sampson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+serum+allergy+%28ige%29+tests+performed+by+different+assay+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Correlation of serum allergy (ige) tests performed by different assay systems.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 121 (5), 1219-1224 (2008).</li>
<li>Sun, B., Zheng, P., Wei, N., Huang, H., Zeng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-sensitization+to+silkworm+moth+%28Bombyx+mori%29+and+9+inhalant+allergens+among+allergic+patients+in+Guangzhou%2C+Southern+China%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Co-sensitization to silkworm moth (Bombyx mori) and 9 inhalant allergens among allergic patients in Guangzhou, Southern China.</a> PLoS ONE. 9 (5), e94776(2014).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Component-Resolved+Diagnostic+Study+of+Dermatophagoides+Pteronyssinus+Major+Allergen+Molecules+in+a+Southern+Chinese+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigational+Allergology+%26+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Component-Resolved Diagnostic Study of Dermatophagoides Pteronyssinus Major Allergen Molecules in a Southern Chinese Cohort.</a> Journal of Investigational Allergology & Clinical Immunology. 25 (5), 343-351 (2015).</li>
<li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((grass+pollen+allergens+and+components+detected+in+a+southern+Chinese+cohort+of+patients+with+allergic+rhinitis+and%2For+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">grass pollen allergens and components detected in a southern Chinese cohort of patients with allergic rhinitis and/or asthma.</a> Molecular Immunology. 78 (2016), 105-112 (2016).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+profiles+of+serum+specific+IgE+and+IgG4+to+Dermatophagoides+pteronyssinus+allergen+and+its+major+components+during+allergen+immunotherapy+in+a+cohort+of+southern+Chinese+children%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Longitudinal profiles of serum specific IgE and IgG4 to Dermatophagoides pteronyssinus allergen and its major components during allergen immunotherapy in a cohort of southern Chinese children.</a> Molecular Immunology. 74 (2016), 1-9 (2016).</li>
<li>Lee, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+measurement+using+AdvanSure%28R%29+system%3A+comparison+of+detection+performance+with+ImmunoCAP%28R%29+system+in+Korean+allergy+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Specific IgE measurement using AdvanSure(R) system: comparison of detection performance with ImmunoCAP(R) system in Korean allergy patients.</a> Clinica Chimica Acta. (9-10), 914-919 (2012).</li>
<li>Eckels, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+control%2C+analysis+and+secure+sharing+of+Luminex%28R%29+immunoassay+data+using+the+open+source+LabKey+Server+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Bmc+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Quality control, analysis and secure sharing of Luminex(R) immunoassay data using the open source LabKey Server platform.</a> Bmc Bioinformatics. 14 (1), 145(2013).</li>
<li>Bland, J. M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+methods+for+assessing+agreement+between+two+methods+of+clinical+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement.</a> Lancet. 327 (8476), 307-310 (1986).</li>
<li>Carletta, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+Agreement+on+Classification+Tasks%3A+The+Kappa+Statistic%5BTitle%5D)+AND+%22Computational+Linguistics%22%5BJournal%5D)">Assessing Agreement on Classification Tasks: The Kappa Statistic.</a> Computational Linguistics. 22 (2), 249-254 (1996).</li>
<li>Shyur, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+multiple+allergen-specific+IgE+by+microfluidic+immunoassay+cartridge+in+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Determination of multiple allergen-specific IgE by microfluidic immunoassay cartridge in clinical settings.</a> Pediatric Allergy and Immunology. 21, 623-633 (2010).</li>
<li>Cesana, B. M., Antonelli, P., Gallazzi, E., Marino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+measurement+methods%3A+an+endless+application+of+wrong+statistical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of measurement methods: an endless application of wrong statistical methods.</a> Intensive Care Medicine. 37 (6), 1038-1040 (2011).</li>
<li>Park, K. H., Lee, J., Sim, D. W., Lee, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Singleplex+Specific+IgE+Detection+Immunoassays%3A+ImmunoCAP+Phadia+250+and+Immulite+2000+3gAllergy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of Singleplex Specific IgE Detection Immunoassays: ImmunoCAP Phadia 250 and Immulite 2000 3gAllergy.</a> Annals of Laboratory Medicine. 38 (1), 23-31 (2018).</li>
<li>Teppo, H., Revonta, M., Haahtela, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+rhinitis+and+asthma+have+generally+good+outcome+and+little+effect+on+quality+of+life+-+a+20-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Allergic rhinitis and asthma have generally good outcome and little effect on quality of life - a 20-year follow-up.</a> Allergy. 66 (8), 1123-1125 (2011).</li>
<li>Fischer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+type+I+sensitization+to+alpha-gal+in+forest+service+employees+and+hunters%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Prevalence of type I sensitization to alpha-gal in forest service employees and hunters.</a> Allergy. 72 (10), 1540-1547 (2017).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multicentre+study+assessing+the+prevalence+of+sensitizations+in+patients+with+asthma+and%2For+rhinitis+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">A multicentre study assessing the prevalence of sensitizations in patients with asthma and/or rhinitis in China.</a> Allergy. 64 (7), 1083-1092 (2009).</li>
<li>Ahlstedt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+usefulness+of+specific+IgE+blood+tests+in+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Allergy%22%5BJournal%5D)">Understanding the usefulness of specific IgE blood tests in allergy.</a> Clinical & Experimental Allergy. 32 (1), 11-16 (2002).</li>
<li>Wood, R. A., Segall, N., Ahlstedt, S., Williams, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy+of+IgE+antibody+laboratory+results%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Allergy+Asthma+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">Accuracy of IgE antibody laboratory results.</a> Annals of Allergy Asthma & Immunology. 100 (2), 288-289 (2008).</li>
<li>Aberer, W., Kränke, B., Hager, A., Wick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+allergy+testing+needs+better+standardization--test+results+from+different+laboratories+lack+comparability+mostly+due+to+missing+effective+standards%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">In vitro allergy testing needs better standardization--test results from different laboratories lack comparability mostly due to missing effective standards.</a> International Archives of Allergy & Immunology. 108 (1), 82-88 (1995).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Semelhante aos resultados de muitos outros estudos15,16,17, os resultados do sistema microfluidic baseado em soros de 293 pacientes alérgicos mostrou aquela casa ácaros (incluindo d. pteronyssinus, D. farinaee b. tropicalis) são os principais alérgenos inalantes, levando a doenças alérgicas no sul da China, Considerando que para o alimento, leite, amendoim, camarão e caranguejo são os alérgenos mais c...

A prevalência de alergias aumentou de forma constante nas últimas décadas e está afetando 20% - 30% da população global1. Identificação dos alérgenos causadores tem um significado importante na gestão das doenças. Na China, uma vez que testes cutâneos de pele in vivo registrado não estão disponíveis no país, determinação in vitro de IgE do soro específico é o mais importante e ferramenta comumente usada para tipo I alergia diagnostica2. Isso é semelhante às práticas no mundo ocidental, mas embora ImmunoCAP sistema (sistema 1), um sistema de base de enzima-lig da imunoabsorção fluorescência, é percebido como o padrão ouro para o diagnóstico de alergia in-vitro3, seu uso na China é muito limitado devido de seu alto preço do equipamento e do reagente. Portanto, é extremamente necessário um novo sistema de diagnóstico de alergia alternativo com uma relação preço-desempenho elevado.
O sistema BioIC (sistema 2) é um sistema baseado em cartucho microfluidic, baseado no princípio da quimioluminescência para multiplexado ensaios de IgE específicos do soro. Com um tamanho de 7 cm x 4 cm, o cartucho microfluídicos é composto de três camadas de plástico moldado por injeção. A parte superior é de 3 mm de espessura em policarbonato transparente que carrega boa estabilidade durante os processos de montagem térmica. Juntamente com a camada de 3 mm de espessura inferior construída a partir de um copolímero de acrilonitrila, butadieno e estireno (ABS), la sanduíches a 0,5 mm de espessura camada média feita de borracha de silicone. Sendo na cor preta, a camada média oferece mais baixo fundo durante a detecção de quimioluminescência. Em cima do gel de silicone, uma fina camada de membrana de nitrocelulose (NC membrana) é pulverizada na posição correspondente à zona de reação, que permite que a mancha de diferentes proteínas alergênicas. O objetivo deste estudo é avaliar o desempenho clínico do sistema microfluidic para determinação de IgE alérgeno-específicos no soro multiplexado.

<table><tbody><tr><td>Analisador Agnitio BioIC</td><td>Agnitio Science & Tecnologia(Taiwan, China)</td><td>BA-G2000</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Kit de detecção de IgE específica para alérgenos</td><td>Agnitio Science & Tecnologia (Taiwan, China)</td><td>DR17A12</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Cartrideg Placa de colocação</td><td>Agnitio Science & Tecnologia (Taiwan, China)</td> <td>T20SET</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Reagent Dispenser</td><td>Agnitio Science & Tecnologia (Taiwan, China)</td> <td>DS-1</td><td></td></tr><tr><td>Imagem bidimensional máquina de código de barras</td><td>Agnitio Science & Tecnologia(Taiwan, China)</td><td>Pacote de software NLS-HR200</td><td></td></tr><tr><td>, LabIT</td><td>Agnitio Science & Tecnologia(Taiwan, China)</td><td>Versão 2.4.12</td><td></td></tr><tr><td>Misturador de vórtice VORTEX-5</td><td>Haimen Kylinbell Lab Lastruments Co., Ltd.</td><td>VÓRTICE-5</td><td></td></tr></tbody></table>

aplicação da tecnologia de microfluidic biochip para detectar soro alérgeno-específicas e de imunoglobulina (sige)

Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE)

Doença alérgica é comum em adultos e crianças. Identificação dos alérgenos causadores é significativa na prevenção e gestão de doença. No entanto, um sistema de medição específico de imunoglobulina E (IgE) com uma relação preço-desempenho elevado está faltando na China continental, especialmente nos hospitais de cuidados primários. Este artigo descreve os procedimentos de princípio e operação de usando um sistema de cartucho-baseado da quimioluminescência microfluidic para detectar IgE alérgeno-específicos no soro. Os resultados foram comparados com os do ImmunoCAP (sistema 1), o padrão industrial, e a reprodutibilidade do sistema para detectar pacientes sensibilizados a alérgenos comuns é avaliada. Os resultados mostraram que, em comparação com o ImmunoCAP (sistema 1), o sistema BioIC (sistema 2) tem boa precisão e sensibilidade na detecção de IgE específicos do soro contra vários alérgenos inalantes e alimentos, mas com um custo significativamente menor. Ele pode servir como uma boa alternativa para sistema 1 em hospitais de cuidados primários na China continental, que têm menor disponibilidade financeira.

Taxas positivas para 19 alérgenos comuns Os resultados em 293 soro são mostrados na Figura 3. Entre todos os alérgenos inalantes, d. farinae tiveram a maior taxa positiva (80,89%, 273/293), seguido por D. pteronyssinus (% 78.84, 231/293). Entre os alérgenos alimentares, caranguejo tem a maior taxa positiva (20.48%, 60/293), seguido por 13.65% (40/293) para camarão. A taxa total de positiva para alérgenos inalante...

Este trabalho apresenta um protocolo para a detecção de imunoglobulina soro específico E com um sistema de cartucho-baseado da quimioluminescência microfluídicos e a avaliação de sua utilidade no diagnóstico de alergia.

Aplicação da tecnologia de Microfluidic Biochip para detectar soro alérgeno-específicas E de imunoglobulina (sIgE)

Allergic disease is common in both adults and children. Identification of the causative allergens is significant in disease management and prevention. ...

O sistema de tecnologia microfluidic biochip é uma seção baseada em cartuchos microfluidos que usa o princípio de quimiomiluminescência para assage de especif de soro IGE. Em comparação com outros métodos de detecção, os sistemas bioIC têm as vantagens de serem de baixo custo e exigirem menos soro para detectar soro IGE. As implicações dessa técnica tendem ao diagnóstico de doenças alérgicas, como rinite e asma, pois muitos desses pacientes são sensibilizados com alérgenos detectáveis comuns.Embora este método possa fornecer insights sobre doenças alérgicas respiratórias, ele também pode ser aplicado a outras situações, como alergias alimentares e cutâneas. Como essa técnica é mais fácil de usar, e tem um método reduzido para treinamento de operadores, indivíduos novos no sistema podem aprender a usá-la rapidamente. A demonstração vívida deste assunto é fundamental, pois determina se o teste é bem sucedido e requer uma operação manual hábil.Para testar amostras de soro para anticorpos de imunoglobulina séum E a alérgenos inteiros, selecione aleatoriamente três amostras com pelo menos 900 microliters de soro e pegue o chip do kit e numera-o. Em seguida, ligue o computador e a potência do analisador. Inicie o programa de TI do Laboratório no computador.Se a janela de aviso do quadro escuro aparecer, clique em OK para executar um teste de vazamento e clique no logotipo central para entrar na interface de operação. Verifique a temperatura de reação e a carga acoplado ao dispositivo ou temperatura ccd, a temperatura de reação deve subir para 37 mais ou menos um grau celsius em cerca de dez minutos e a temperatura ccd deve cair para menos 15 mais ou menos um grau celsius. Quando a temperatura do CCD cair para menos 15 mais ou menos um grau celsius, confirme que não há outros itens dentro do instrumento, e feche a porta.Em seguida, clique em ferramentas, teste do sistema, teste de vazamento. Quando o teste estiver concluído, a janela do relatório aparecerá. Em seguida, carregue 620 microliters de tampão de lavagem, 120 microliters de tampão de bloqueio, 60 microliters de conjugados A e B, 60 microliters de substratos A e B, e 100 microliters de cada amostra de soro nos tanques de reagente correspondentes no cartucho microfluido.Depois de clicar no ID do cartucho, use o scanner de código de barras para digitalizar o número de série do cartucho e digite o ID da amostra.Em seguida, coloque o cartucho no analisador, feche a porta e clique no analisador e execute para iniciar a análise. Ao final da análise, exporte os resultados para um programa de software estatístico adequado e remova o cartucho do analisador. Limpe levemente o ferro de aquecimento interno e o eletroímã do analisador com 75% de álcool e feche a janela de TI do Laboratório.A janela de monitoramento de temperatura aparecerá e fechará automaticamente quando o CCD aquecer até o modo de proteção de cinco graus celsius, momento em que é seguro desligar o analisador e o computador. O sistema microfluido produz resultados repetitivos, como demonstrado por esses dados para caspa de gato, caspa de cachorro e barata após nove rodadas de testes. Como observado, todos os dados estão dentro do intervalo de dois desvios padrão, o que é consistente com o erro clínico máximo permitido.Como esperado das taxas de positividade para os alérgenos, todos os resultados de avaliação para alérgenos inalantes são superiores aos alérgenos alimentares. Como a área sob os valores da curva demonstra uma faixa de 0,613 a 0,984, e a área sob os valores de curva para os três alérgenos inalatórios é superior a 0,950, pode-se concluir que o sistema dois tem alta precisão em relação ao sistema um. A análise de consistência para os dois sistemas revela que os valores kappa para os três inalantes são todos maiores do que os valores kappa para os alérgenos alimentares que, em geral, ficam abaixo de 0,4.Nestes gráficos de dispersão construídos com o sistema dois resultados ao longo do eixo x e do sistema um resultados ao longo do eixo y, a distribuição da concentração de imunoglobulina sérico E resulta dos dois sistemas para seis alérgenos diferentes. Antes de iniciar a detecção, verifique sempre a reação e as temperaturas do CCD, pois estão ligadas à precisão do teste. Após esse procedimento, outros métodos como o diagnóstico de componentes resolvidos podem ser realizados para responder a perguntas adicionais sobre padronização cruzada de alérgenos e co-sensibilização.A tecnologia de chips microfluidos tem sido aplicada com sucesso no campo do diagnóstico de alergia para resolver problemas como soro inadequado e alto custo médico Como trabalhar com soro humano, os sintomas podem ser perigosos. O uso dos equipamentos de proteção pessoal adequados e outras precauções devem ser sempre tomadas durante a realização deste procedimento.

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Medicine

Medicina

O vídeo demonstra um ensaio baseado em células para detectar a imunoglobulina G anti-aquaporina-4 usando um biochip contendo células não transfectadas e células transfectadas que expressam aquaporina-4. Este método tem aplicações no diagnóstico de distúrbios do espectro da neuromielite óptica, confirmados por forte fluorescência verde no biochip.

Um ensaio para detectar imunoglobulina G anti-aquaporina-4 sérica

Este vídeo mostra a detecção de eletroquimioluminescência de autoanticorpos de ilhotas no soro humano. Os anticorpos no soro fazem a ponte entre o antígeno conjugado com rutênio e o antígeno de captura biotinilado, formando complexos que são detectados por medições de eletroquimioluminescência.

Detecção de autoanticorpos de ilhotas humanas usando um ensaio de eletroquimioluminescência

Este vídeo demonstra um protocolo para detectar imunoglobulina E específica do soro usando um sistema de quimioluminescência baseado em cartucho microfluídico. As IgE séricas interagem com alérgenos distintos imobilizados na zona de reação do cartucho, que são posteriormente detectados com anticorpos anti-IgE conjugados com peroxidase e um substrato quimioluminescente, permitindo a detecção simultânea de múltiplas IgEs específicas para alérgenos.

Um sistema de detecção baseado em cartucho microfluídico para imunoglobulina E específica para alérgenos

O trabalho proposto avalia o potencial de diagnóstico de superfície de ressonância de plasmon de imagem directa e amplificado (SPRI) ensaios, particularmente para a detecção da hormona de crescimento humana recombinante em soro humano cravada, comparando SPRI resulta directamente com comercialmente disponíveis de ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA) kit.

Análise comparativa da hormona de crescimento humano no soro utilizando SPRI, Nano-SPRI e ELISA Assays

Descrevemos aqui um método para gerar microarrays de antígenos personalizáveis que podem ser usados para a detecção simultânea de autoanticorpos séricos IgG e IgM de humanos e camundongos. Essas matrizes permitem alto rendimento e detecção quantitativa de anticorpos contra quaisquer antígenos ou epítopos de interesse.

Geração de duas cores Antigen Microarrays para a detecção simultânea de auto-anticorpos IgG e IgM

Este trabalho descreve um protocolo que utiliza uma abordagem resolvida por componentes para estudar a sensibilização para alérgenos do pólen em uma coorte de pacientes do sul da China com rinite alérgica e / ou asma.

Uma abordagem de diagnóstico resolvida por componente para um estudo sobre alergênios de pólen de grama em sulistas chineses com rinite alérgica e / ou asma

Aqui, apresentamos os métodos para detectar autoanticorpos ilhota humana utilizando ensaios de eletroquimioluminescência (ECL). O protocolo, usado para prever o tipo 1 diabetes, pode ser expandido em cima para detectar autoanticorpos para outras doenças auto-imunes.

Ensaios de eletroquimioluminescência para humano ilhéu auto-anticorpos

Este trabalho mostra o potencial da tecnologia de matriz (PGA) glicano impressa para a análise de anticorpos anti-hidrato de carbono em pequenos animais em circulação.

Matriz de glicano impressa: Uma técnica sensível para a análise do repertório de anticorpos anti-hidrato de carbono em pequenos animais em circulação

Baseada em célula de ensaio é um método amplamente utilizado para detectar imunoglobulina de soro antiaquaporina-4 G. Esse método pode ser aplicado para o diagnóstico clínico e pesquisas científicas de transtornos do espectro óptico Neuromielite.

Deteção de imunoglobulina Antiaquaporina-4 G de soro humano por ensaio baseados em células

Aqui apresentamos o ensaio de liberação do mediador, usando uma linha celular de leucemia basofílica de rato transfeminada com o receptor IgE humano, para simular a desgranulação de células efeitos tipicamente observadas em reações alérgicas tipo 1. Este método investiga a atividade biológica dos alérgenos de forma altamente sensível, reprodutível e adaptável.

Ensaio de liberação de mediador humanizado como um read-out para potência alergênico

Em linha com a necessidade urgente de triagem para diabetes tipo 1, doença celíaca e doença por coronavírus 2019, desenvolvemos um ensaio de eletroquimioluminescência 6-Plex de alto rendimento para detectar simultaneamente todos os quatro autoanticorpos de ilhotas, autoanticorpos de transglutaminase tecidual e anticorpos para o domínio de ligação ao receptor do coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave.

Uma triagem multiplexada de alto rendimento para diabetes tipo 1, doenças celíacas e COVID-19

Aprenda a detectar IgE sérica específica usando um sistema de biochip microfluídico com quimiluminescência. Este método de baixo custo requer menos amostra sérica e é aplicável a alergias respiratórias, alimentares e cutâneas.

Aplicação da tecnologia de Microfluidic Biochip para detectar soro alérgeno-específicas E de imunoglobulina (sIgE)

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