Name: Um modelo murino da doença da encefalite viral aguda induzida pelo vírus da dengue (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 23 s
Description: Aprenda a criar um modelo murino imunocompetente ICR para estudar a neuropatia induzida pelo vírus da dengue. Este protocolo permite monitorar encefalite viral aguda in vivo e avaliar intervenções terapêuticas.

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Este estudo foi apoiado por subvenções do Ministério da ciência e tecnologia (MOST107-2321-B-038-001) e o financiamento intramural 106TMU-CIT-01-2, Taipei, Taiwan.

Protocolos experimentais de estudo animal foram aprovados pelo Comitê institucional de cuidado animal e usuário do centro médico de defesa nacional (número IACUC: 16-261), de acordo com as diretrizes estabelecidas pelo Ministério da ciência e tecnologia, Taiwan.
1. procedimento de infecção
<ol><li>Prepare os estoques DENV2 (Strain PL046) não adaptados9 (originalmente obtidos dos centros de controle de doenças em Taiwan, variando de 2,5 x 107 a 1 x 109 pfu/ml).</li>
	<li>Diluir o estoque de vírus para 1 x 106 Pfu com Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 médio para um volume total de 40 μl.</li>
	<li>Encha uma seringa de 0,3 mL equipada com uma agulha de 30 G com 10 μL (2,5 x 105 Pfu) de vírus diluído e encha outra seringa de 0,3 ml equipada com uma agulha de 30 g com 30 μl (7,5 x 105 Pfu) de vírus diluído.</li>
	<li>
Segure o 7 dia-velho ICR Leitão mouse e realizar os seguintes passos.
	<ol>
<li>Para a injeção intracerebral, segure o mouse em uma posição propensa pressionando a aurícula entre o dedo indicador e o polegar, e injetar intracerebralmente 10 μL de vírus diluído na área lambda, o ponto na interseção da sutura sagital e lambdóide a 16.</li>
		<li>Após a injeção intracerebral, segure o mouse em uma posição supina usando o dedo indicador e o polegar e injete intraperitonealmente 30 μL de vírus diluído suavemente no murino abdomenl. Nota: para evitar o canibalismo, 75% álcool é usado para criar uma perda temporária da sensação olfativa da mãe. Adicionalmente, cobrindo as ninhadas com fezes de sua mãe e urina é sugerido.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coloque os ratos de sucção de volta em suas gaiolas e aguarde 5 minutos para verificar a sua segurança pós-estimulação com a avidez de camundongos, incluindo a caminhada e sucção do leite materno. Nota: Na maioria das vezes, camundongos demonstram atividade normal pós-estimulação e não parece haver quaisquer efeitos nocivos após o desafio técnico. Durante este experimento, os animais foram mantidos pelo Comitê institucional de cuidado animal e usuário do centro médico de defesa nacional, Taiwan.</li>
	<li>Avaliar o progresso diário dos camundongos em termos de peso corporal (usando um balanço de micrograma), doença viral aguda como encefalite (por escore de doença conforme descrito na seção 2) e taxa de sobrevida9,10,11 ,12,13,14,15.</li>
</ol>2. pontuação da doença
<ol><li>Monitore a classe de doenças virais agudas da encefalite-como. Atribua uma pontuação de 0 a camundongos saudáveis; 1 a camundongos com sintomas de doença menor, incluindo perda de peso, mobilidade reduzida e orientação do corpo corcunda; 2 a camundongos que exibem apreensão límbica; 3 a camundongos exibem fraqueza límbica, incluindo movimentação com dificuldade e fraqueza do membro anterior ou membro posterior; 4 para paralisia; 5 para a morte. Nota: Uma vez que a pontuação atinge 3, os sintomas da doença são considerados evoluir rapidamente.</li>
	<li>Traçar a pontuação da doença, de acordo com a etapa 2,1, para cada dia como uma figura baseada em curva usando a média ± DP dos escores de teste diários em cada grupo.</li>
</ol>

<ol><li>Guzman, M. G., Gubler, D. J., Izquierdo, A., Martinez, E., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Dengue infection.</a> Nature Reviews Disease Primers. 2, 16055(2016).</li>
<li>Katzelnick, L. C., Coloma, J., Harris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue%3A+knowledge+gaps%2C+unmet+needs%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Dengue: knowledge gaps, unmet needs, and research priorities.</a> Lancet Infectious Diseases. 17 (3), e88-e100 (2017).</li>
<li>Carod-Artal, F. J., Wichmann, O., Farrar, J., Gascon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+complications+of+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neurological complications of dengue virus infection.</a> Lancet Neurology. 12 (9), 906-919 (2013).</li>
<li>Geneva: World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Dengue%3A+Guidelines+for+Diagnosis%2C+Treatment%2C+Prevention+and+Control%3A+New+Edition%22">Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control: New Edition</a>. , WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee (2009).</li>
<li>Amaral, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+infection+with+dengue-3+virus+induces+meningoencephalitis+and+behavioral+changes+that+precede+lethality+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Intracerebral infection with dengue-3 virus induces meningoencephalitis and behavioral changes that precede lethality in mice.</a> Journal of Neuroinflammation. 8, 23(2011).</li>
<li>de Miranda, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-3+encephalitis+promotes+anxiety-like+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Dengue-3 encephalitis promotes anxiety-like behavior in mice.</a> Behavioural Brain Research. 230 (1), 237-242 (2012).</li>
<li>Velandia-Romero, M. L., Acosta-Losada, O., Castellanos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+infection+by+a+neuroinvasive+neurovirulent+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurovirology%22%5BJournal%5D)">In vivo infection by a neuroinvasive neurovirulent dengue virus.</a> Journal of Neurovirology. 18 (5), 374-387 (2012).</li>
<li>Despres, P., Frenkiel, M. P., Ceccaldi, P. E., Duarte Dos Santos, C., Deubel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+in+the+mouse+central+nervous+system+in+response+to+infection+with+mouse-neurovirulent+dengue+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis in the mouse central nervous system in response to infection with mouse-neurovirulent dengue viruses.</a> Journal of Virology. 72 (1), 823-829 (1998).</li>
<li>Tsai, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+retard+dengue+virus-induced+acute+viral+encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Microglia retard dengue virus-induced acute viral encephalitis.</a> Scientific Reports. 6, 27670(2016).</li>
<li>Cheng, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Nrf2+by+the+dengue+virus+causes+an+increase+in+CLEC5A%2C+which+enhances+TNF-alpha+production+by+mononuclear+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Activation of Nrf2 by the dengue virus causes an increase in CLEC5A, which enhances TNF-alpha production by mononuclear phagocytes.</a> Scientific Reports. 6, 32000(2016).</li>
<li>Ho, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+dengue+virus+infection+and+viral+cytotoxicity+in+neuronal+cells+in+vitro+and+in+vivo+by+targeting+endocytic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Blockade of dengue virus infection and viral cytotoxicity in neuronal cells in vitro and in vivo by targeting endocytic pathways.</a> Scientific Reports. 7 (1), 6910(2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-TNF-alpha+restricts+dengue+virus-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Anti-TNF-alpha restricts dengue virus-induced neuropathy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 104 (5), 961-968 (2018).</li>
<li>Kao, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antiparasitic+drug+niclosamide+inhibits+dengue+virus+infection+by+interfering+with+endosomal+acidification+independent+of+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">The antiparasitic drug niclosamide inhibits dengue virus infection by interfering with endosomal acidification independent of mTOR.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (8), e0006715(2018).</li>
<li>Tsai, T. T., Chen, C. L., Tsai, C. C., Lin, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+heat+shock+factor+1+as+an+antiviral+strategy+against+dengue+virus+replication+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting heat shock factor 1 as an antiviral strategy against dengue virus replication in vitro and in vivo.</a> Antiviral Research. 145, 44-53 (2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+virus+infection+increases+microglial+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Dengue virus infection increases microglial cell migration.</a> Scientific Reports. 7 (1), 91(2017).</li>
<li>Benskey, M. J., Manfredsson, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+Stereotaxic+Delivery+of+rAAV+and+Special+Considerations+in+Vector+Handling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal Stereotaxic Delivery of rAAV and Special Considerations in Vector Handling.</a> Methods in Molecular Biology. , 199-215 (2016).</li>
<li>Fong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+encephalitis%2Fencephalopathy+with+reversible+splenial+lesion+%28MERS%29+due+to+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mild encephalitis/encephalopathy with reversible splenial lesion (MERS) due to dengue virus.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 36, 73-75 (2017).</li>
<li>Sarathy, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lethal+murine+infection+model+for+dengue+virus+3+in+AG129+mice+deficient+in+type+I+and+II+interferon+receptors+leads+to+systemic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">A lethal murine infection model for dengue virus 3 in AG129 mice deficient in type I and II interferon receptors leads to systemic disease.</a> Journal of Virology. 89 (2), 1254-1266 (2015).</li>
<li>Schul, W., Liu, W., Xu, H. Y., Flamand, M., Vasudevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dengue+fever+viremia+model+in+mice+shows+reduction+in+viral+replication+and+suppression+of+the+inflammatory+response+after+treatment+with+antiviral+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A dengue fever viremia model in mice shows reduction in viral replication and suppression of the inflammatory response after treatment with antiviral drugs.</a> The Journal of Infectious Diseases. 195 (5), 665-674 (2007).</li>
<li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Viral+Encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute Viral Encephalitis.</a> New England Journal of Medicine. 379 (6), 557-566 (2018).</li>
<li>Yauch, L. E., Shresta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+dengue+virus+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of dengue virus infection and disease.</a> Antiviral Research. 80 (2), 87-93 (2008).</li>
<li>Assir, M. Z., Jawa, A., Ahmed, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+dengue+syndrome%3A+subacute+thyroiditis+and+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Expanded dengue syndrome: subacute thyroiditis and intracerebral hemorrhage.</a> BMC Infectious Diseases. 12, 240(2012).</li>
<li>Kumar, R., Prakash, O., Sharma, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+hemorrhage+in+dengue+fever%3A+management+and+outcome%3A+a+series+of+5+cases+and+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Intracranial hemorrhage in dengue fever: management and outcome: a series of 5 cases and review of literature.</a> Surgical Neurology. 72 (4), 429-433 (2009).</li>
<li>Simanjuntak, Y., Liang, J. J., Lee, Y. L., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repurposing+of+prochlorperazine+for+use+against+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Repurposing of prochlorperazine for use against dengue virus infection.</a> Journal of Infectious Diseases. 211 (3), 394-404 (2015).</li>
<li>Rocha, B. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-specific+serotype+related+to+clinical+severity+during+the+2012%2F2013+epidemic+in+centre+of+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Poverty%22%5BJournal%5D)">Dengue-specific serotype related to clinical severity during the 2012/2013 epidemic in centre of Brazil.</a> Infectious Disease Poverty. 6 (1), 116(2017).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

A infecção por DENV tem sido detectada no SNC de pacientes com dengue grave3,17, sugerindo a possibilidade de manifestação de encefalite viral aguda ocorrida durante a patogênese da dengue. Aqui, nós relatamos um modelo in vivo murino da infecção de DENV para estudar a participação da deficiência orgânica do CNS na dengue severa, particular com um foco em doenças virais agudas DENV-induzidas da encefalite-como. Em comparação com os modelos precedentes, particular...

O DENV, um vírus transmitido por artrópodes da família Flaviviridae , contém um GENOMA de RNA de sentido positivo que codifica três proteínas estruturais virais (capsídeo, pré-membrana e envelope) e sete proteínas não estruturais virais (ns1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B , e NS5). Os quatro sorotipos de DENV (DENV1-4), que infectam aproximadamente 390 milhões povos anualmente, causam uma carga global mesmo que os governos tenham dirigido esforços substanciais para o vetor do mosquito e o controle da doença1. Atualmente, vacinas protetoras e medicamentos antivirais terapêuticos estão em desenvolvimento e exigem mais validação a longo prazo2. Na prática clínica, embora um paciente com dengue com infecção do SNC seja raro, precisa ser mais explorado para compreender a diversidade do desenvolvimento da doença da dengue3. São necessárias mais investigações e validação; notavelmente, a Organização Mundial de saúde (OMS) incluiu o comprometimento do comprometimento do SNC, como comprometimento cognitivo, convulsões, encefalopatia e encefalite, na classificação da dengue grave3,4. Construir modelos animais da infecção de DENV é indispensável para explorar a neuropatogénese da infecção de DENV.
Para a geração de infecção do SNC por DENV, vários estudos têm executado diferentes vias de infecção por DENV, incluindo (1) inoculação intracerebral de camundongos C57BL/6 que receberam 4 x 103 unidades formadoras de placas (Pfu) de DENV35, 6, (2) inoculação intraperitoneal de camundongos Balb/c que receberam 7 x 104 Pfu de in vitro neuroadaptados DENV47, (3) inoculação intracerebral de camundongos suíços que receberam 1 x 105 Pfu de in vivo neuroadaptado DENV18, e (4) coinoculação intracerebral e intraperitoneal de camundongos amamentando ICR que receberam 1 x 106 Pfu de DENV29. De acordo com os achados desses estudos5,6,7,8,9, a infecção por DENV em camundongos resulta em replicação viral no cérebro, levando a infecções virais agudas encefalite-como síndromes, mudanças comportáveis acompanhadas da paralisia do membro e da instabilidade postural, do neurotoxicidade e da inflamação do CNS, do escapamento geral e localizado do plasma através da barreira do sangue-cérebro (BBB), e da letalidade. Todos os resultados destes estudos5,6,7,8,9 mostraram a capacidade de DENV para infectar o CNS e a indução de encefalite viral aguda-como doença após a infecção.
Com base em nossos achados atuais9,10,11,12,13,14,15, criamos um modelo murino de infecção por DENV como um in vivo plataforma para examinar a eficácia terapêutica de agentes/fatores alvejados de encontro à replicação viral, assim como a neurotoxicidade. Aqui, nós relatamos o protocolo utilizado para criar um rato exogâmica imuno-competente de ICR para estudar a infecção do CNS e para monitorar o desenvolvimento dos neuropatias com severties diferentes causados por DENV. Os resultados mostram a progressão significativa da encefalite-como a doença em ratos DENV-contaminados em uma maneira tempo-dependente.

<table><tbody><tr><td>Roswell Park Memorial Institute 1640 medium (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>11875-085</td><td>Vírus Diluente</td></tr><tr><td>0.3 mL Seringa de Insulina&nbsp;</td><td>BD Ultra-Fine&shy;II</td><td>328838</td><td>Injeção intracerebral e intraperitoneal</td></tr><tr><td>Microbalança</td><td>Camundongo de peso</td>LabX <td>AL104</td> da <td>METTLER TOLEDO</td></tr><tr><td>DENV2 não adaptado (cepa PL046)</td><td>Os Centros de Controle de Doenças de</td> <td>Taiwan-Infectar</td> <td>camundongo</td></tr><tr><td>Instituto de Pesquisa do Câncer (ICR) camundongo lactante</td><td>BioLASCO Taiwan Co.,</td> <td>Ltd-Nosso</td> <td>modelo murino</td></tr></tbody></table>

um modelo murino da doença da encefalite viral aguda induzida pelo vírus da dengue

A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Viral Encephalitis-like Disease

O vírus da dengue (DENV), um vírus transmitida por artrópodes transmitido por mosquitos, pode causar a doença grave conhecida como febre hemorrágica da dengue, que é caracterizada por complicações letais devido ao vazamento de plasma, ascite, derrame pleural, desconforto respiratório, hemorragia grave e comprometimento de órgãos. Alguns casos de infecção por DENV apresentam manifestações neurológicas; Entretanto, os estudos não exploraram mais a neuropatogénese DENV-induzida. Neste estudo, nós apresentamos um protocolo para usar um camundongo imunocompetente de ICR (Instituto de pesquisa do cancer) para investigar a indução da infecção do sistema nervoso central (CNS) com o DENV, seguido pela progressão da encefalite viral aguda-como Doença.

As complicações neurológicas dengue-associadas severas foram relatadas nos pacientes para a patogénese4da dengue. Embora estes casos sejam raros na clínica, criar um modelo murino imuno-competente da infecção de DENV pode ser usado não somente para estudar o imunopatogênese mas igualmente para explorar a infecção do CNS, o neuroinflammation, a neurotoxicidade, e o viral agudo encefalite-como a doença. Neste estudo, de acordo com nosso modelo atual...

Aqui, nós apresentamos um protocolo para criar um modelo murino imuno-competente do ICR (Instituto do cancer da pesquisa) da infecção do sistema nervoso central para indicar o desenvolvimento da neuropatia. A monitoração de desordens encefalalitic virais agudas por contagens idênticas da doença podia ser executada mostrando a neuropatia vírus-induzida dengue in vivo.

Um modelo murino da doença da encefalite viral aguda induzida pelo vírus da dengue

Dengue virus (DENV), an arthropod-borne virus transmitted by mosquitoes, may cause the severe disease known as dengue hemorrhagic fever, which is ...

Este protocolo de um modelo de doença que você vê a infecção pelo vírus da dengue no cérebro se torna uma plataforma in vivo para triagem de vetores virais e hospedeiros associados à neuropagênese. Ao contrário dos modelos anteriores, nossos modelos usam ferramentas da infecção com um baixo título viral, para infectar o Instituto de Pesquisa do Câncer imunocompetente amamentando camundongos para indução de procriação de doenças encefálicas. Demonstrando o procedimento será Ting-Jing Shen, um candidato a doutorado do meu laboratório.Antes de iniciar o procedimento de infecção, diluir o vírus da dengue não adaptado dois estoques, para uma vezes 10 para a quinta placa formando unidades por 40 microliters de RPMI 1640 concentração média. Em seguida, carregue uma seringa de 0,3 mililitro equipada com uma agulha calibre 30 com 10 microliters de vírus diluído. E uma seringa de 0,3 mililitros equipada com uma agulha calibre 30, com 30 microliters de vírus por animal.Para a entrega intercerebral do vírus, pressione o oráculo entre o polegar e o dedo indicador para conter suavemente um rato do Instituto de Pesquisa do Câncer de sete dias em posição propensa e injetar o volume de 10 microliteres de vírus diluído na área lambda, na intersecção da sutura sagital e lambdoid. Após a injeção intercerebral, use o polegar e o dedo indicador para segurar o rato em uma posição supina, e suavemente intraperitonealmente, injete o volume de 30 microliter do vírus diluído, no abdômen murino. Para a pontuação da progressão da doença, atribua uma pontuação de zero a cinco para cada camundongo inoculado diariamente, de acordo com o grau de doenças semelhantes à encefalite viral aguda, e plote os escores para cada dia como uma figura baseada em curva, utilizando a média mais e menos o desvio padrão dos escores diários de teste em cada grupo.Em comparação com as mudanças de peso corporal medidas em camundongos simulados, médios apenas inoculados, os animais inoculados pelo vírus da dengue apresentam uma diminuição do peso corporal em todos os momentos durante o ensaio. Além disso, os animais infectados pelo vírus da dengue demonstram um aumento significativo nas posturas de coluna, convulsões límbicas, fraqueza límbica, paralisia e morte em comparação com os sintomas apresentados por animais simulados inoculados. De fato, camundongos infectados pela dengue apresentam uma redução temporal dependente das taxas de sobrevivência que não é observada em animais inoculados simulados, confirmando o estabelecimento de um modelo infeccioso de vírus da dengue dentro do sistema nervoso central que demonstra a progressão de doenças semelhantes à encefalite viral aguda em camundongos.A punção do local errado pode resultar em bloqueio de agulhas pelo escore e o estouro da solução do vírus fora da cabeça, resultando em injeção falhada e uma infecção falha. Após o procedimento, amostras cerebrais podem ser colhidas para danos patológicos, infiltração de células imunes e análise de replicação viral por citometria de fluxo de hematoxilina e eosina, e ensaio de formação de placa, respectivamente. Nosso modelo murine imunocompetente fornece uma plataforma para explorar os mecanismos patogênicos da infecção pelo vírus da dengue, para o desenvolvimento de vacinas contra o vírus da dengue, ou drogas anti-dengue.O vírus da dengue é um patógeno de nível dois de biossegurança, e, como tal, todos os experimentos com esse vírus devem ser concluídos em um laboratório de biossegurança animal qualificado nível dois.

a-murine-model-dengue-virus-induced-acute-viral-encephalitis-like

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo demonstra o placar de indução e clínicos de um modelo animal de esclerose múltipla: doenças crônico-recidivante encefalomielite autoimune experimental em ratos DA. A doença, induzida pela imunização ratos com uma emulsão contendo medula espinhal de ratos inteiros e adjuvante de Freund completo, apresenta sinais clínicos semelhantes à doença humana.

Indução e pontuação clínica de doenças crônico-recidivante encefalomielite autoimune experimental

Utilizando luciferase e sistemas de imagem in vivo (IVIS) como um novo meio de identificar objectivos de doença antes de desenvolvimentos clínicos ocorrer. IVIS nos permitiu visualizar em tempo real a invasão de vírus encefalíticas durante vários dias, fornecendo um modelo de doença mais precisa para o estudo futuro. Também permitiu-nos identificar as características potenciais de proteção de antivirais e de vacinas mais rápido do que os modelos animais atualmente utilizados. A capacidade de...

In Vivo Imaging Systems Detecção (IVIS) de um vírus de Neuro-invasiva encefalítico

O vídeo demonstra a indução de encefalomielite autoimune experimental em um modelo de camundongo injetando uma combinação de glicoproteínas de oligodendrócitos de mielina e Mycobacterium tuberculosis inativado. O modelo permite que os pesquisadores estudem os mecanismos da doença e testem intervenções terapêuticas.

Indução de encefalomielite autoimune experimental em modelo de camundongo

Este vídeo demonstra a geração de um modelo de camundongo com uma infecção do SNC. Um filhote de leite é injetado com o vírus tanto intracraniana quanto intraperitonealmente. O vírus se espalha, infectando o SNC, causando morte e inflamação das células neuronais. O filhote é avaliado quanto a sintomas de infecção à medida que a doença progride.

Geração de um Modelo Murino com Infecção do Sistema Nervoso Central

Neste vídeo, um modelo de camundongo com esclerose múltipla é estabelecido usando encefalomielite autoimune experimental (EAE). O camundongo é injetado com uma emulsão contendo um peptídeo neuronal e um adjuvante, desencadeando uma resposta imune que ativa as células T autorreativas. Isso é seguido por uma injeção de toxina coqueluche (PTX) para aumentar a permeabilidade da barreira hematoencefálica, permitindo que as células T autorreativas se infiltrem no cérebro. Essa infiltração inicia uma...

Este vídeo demonstra a indução de convulsões induzidas pelo manuseio em um camundongo infectado com o vírus da encefalomielite murina de Theiler (TMEV). O camundongo infectado, que possui neurônios hiperexcitáveis, é exposto a estímulos físicos externos. Essa exposição causa estresse, levando a uma atividade elétrica anormal nos neurônios, o que resulta em convulsões.

Convulsões induzidas pelo manuseio em um modelo de camundongo

Vírus da influenza A (IAVs) são importantes patógenos respiratórios humanos. Para entender a patogenicidade de IAVs e realizar testes pré-clínicos de vacina romance abordagens, modelos animais, imitando a fisiologia humana são necessários. Aqui, descrevemos técnicas para avaliar a patogênese do IAV, respostas humorais e eficácia de vacina usando um modelo do rato da infecção.

Estudos de vírus da influenza A em um modelo do rato da infecção

Aqui nós descrevemos um método para estabelecer um modelo de Zika a microcefalia induzida por vírus no mouse. Este protocolo inclui métodos para inoculação intracerebral embrionária, neonatal e adulto-fase do vírus Zika.

Estabelecer modelos de Mouse para doenças neurológicas induzida por vírus Zika usando estratégias de injeção Intracerebral: embrionárias, Neonatal e adulto

O protocolo aqui apresentado permite a reprodução de uma desmielinização de matéria cinzenta generalizada de ambos os hemisférios corticais em ratos agouti machos adultos. O método compreende a implantação intracerebral de um cateter, imunização subclínica contra glicoproteína de oligodendrocyte de mielina e injeção intracerebral de uma mistura de citocinas pró-inflamatórias através do cateter implantado.

Modelo de Rato de Demyelinação Cortical Cerebral Generalizada Induzida por uma injeção intracerebral de citocinas pró-inflamatórias

O objetivo do protocolo é demonstrar as técnicas utilizadas para investigar a doença viral, isolando e quantificando o vírus Zika, de múltiplos órgãos em um camundongo após a infecção.

Isolamento e quantificação do vírus Zika de múltiplos órgãos em um mouse

A infecção intracerebral com o vírus da encefalomielite murina de Theiler (TMEV) em camundongos C57BL/6 replica muitos dos sintomas clínicos iniciais e crônicos da encefalite viral e subsequente epilepsia em pacientes humanos. Este artigo descreve a infecção viral, sintomas e histopatologia do modelo TMEV.

Modelo de Epilepsia de Etiologia Infecciosa utilizando o Vírus da Encefalomielite Murina de Theiler

Aprenda a criar um modelo murino imunocompetente ICR para estudar a neuropatia induzida pelo vírus da dengue. Este protocolo permite monitorar encefalite viral aguda in vivo e avaliar intervenções terapêuticas.

Um modelo murino da doença da encefalite viral aguda induzida pelo vírus da dengue

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