Name: Çay (Camellia sinensis L.) türetilmiştir yeni kurulan hücre süspansiyon kültürü altı sistemik Böcek Ilacı metabolizması üzerinde çalışma Yaprak -ları (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: Keşfedin çay yapraklarından hücre süspansiyon kültürü kurma yöntemini ve sistemik böcek ilaçlarının metabolizmasını inceleme tekniğini. Bu protokol bitki metabolizması çalışmaları için değerli bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma ulusal anahtar araştırma & geliştirme programı (2016YFD0200900) Çin, Çin Ulusal Doğal bilimsel Vakfı (No. 31772076 ve No. 31270728), Çin doktora sonrası Bilim Vakfı (2018M630700) ve açık Fonu tarafından destekleniyordu Çay tesisi biyoloji ve kullanım devlet anahtar Laboratuvarı (SKLTOF20180111).

1. çay nasır kültürü
Not: steril yaprakları ilk araştırma grubu17geliştirilen içinde vitro-yetiştirilen bağlanırlar hatları türetilmiştir. Bölüm 5 ' e kadar olan tüm prosedürler, bir kuluçte kültür zamanı dışında steril bir laminar akış kaputunda yürütülmüştür.
<ol><li>İki medyanın pH 'Sını (Murashige ve Skoog [MS] bazal orta ve Gamborg 'un B5 sıvı orta) 5,8 için otoklavlama öncesinde (121 °C, 20 dk) ayarlayın.</li>
	<li>Makas kullanarak steril bir yaprak orta ven boyunca Cut, ve daha sonra bir petri çanak yaklaşık 0,3 cm x 0,3 cm küçük parçalar halinde her yarısını alt bölümlere.</li>
	<li>Steril Method (küçük yaprak parçaları) bitki hormonları 2, 4-D (1,0 mg l-1) ve KT (0,1 mg l-1) içeren MS bazal medya üzerine yerleştirin. Altı Method 100 ml MS bazal medya içeren bir 300 ml Flask yerleştirilebilir.</li>
	<li>Karanlık 25 °c sabit sıcaklıkta Yukarıdaki yaprak Method kültürü. 28 gün sonra, indüklenen nasır ilk nesil seçin ve taze Flask (bir alt kültür) transfer. 3 − 4 alt kültürden sonra gevşek ve kayrak nasır kazanın.</li>
</ol>2. çay hücresi süspansiyon kültürü
<ol><li>Steril koşullarda steril bir cerrahi bıçak kullanarak katı ortamdan küçük parçalara (0,5 − 2 mm aralığında) kadar güçlü, soğuk ve gevşek aramaları keser.</li>
	<li>Küçük arama parçaları yaklaşık 3 gr ağırlığında. 2, 4-D (1,0 mg l-1) ve KT (0,1 mg l-1) ile tamamlayıcı 20 ml B5 sıvı medya içeren bir 150 ml Flask içine nasır yerleştirin.</li>
	<li>Karanlık 120 RPM 'de bir sallayarak inkübörü içinde sabit bir sıcaklıkta (25 ± 1 °C) sıvı hücre süspansiyon kültür.</li>
	<li>7 ila 10 gün sonra, kültür şişeler kaldırmak ve onları birkaç dakika stand izin.</li>
	<li>Taze orta için alt kültür için tohum malzemesi olarak tüm süpernatant alın (taze orta için süspansiyon anne sıvı alt kültür oranı 1:1 ve 1:2 arasında değişmektedir). Çöktürülmüş, büyük nasırlarını çıkarın.</li>
	<li>Her biri 28 gün 3 − 4 alt kültür döngüsünden sonra son iyi yetiştirilen hücre süspansiyonu kültürünü elde edersiniz.</li>
</ol>3. hücre canlılığı Triphenyl tetrazolyum klorür tahlil
<ol><li>100 °c ' de canlı hücrelerden oluşan bir numuneyi, canlılığı boyama öncesinde kontrol hücresi olarak 10 dakika boyunca öldür.</li>
	<li>6000 x g'de 8 dakika boyunca tüm hücre süspansiyonu kültürünü santrifüjle 2,5 ml fosfat-tamponlu tuz (PBS) tampon (pH 7,3) hücrelerinde askıya almadan önce süpernatant çıkarın ve el ile 1 dakika sallayın.</li>
	<li>% 0.4 Triphenyl tetrazolyum klorür (TTC) çözeltisi 2,5 ml ekleyin ve tekrar elle sallayın.</li>
	<li>Karışımı, ayakta bulunan bir kuluçk (30 °C) içinde 1 saat boyunca kulvatın.</li>
</ol>4. böcek öldürücüler ile çay hücresi süspansiyon kültürlerinin tedavi ve örnekleme
<ol><li>Dört neonicotinoidin (thiametoxam) 400 μL filtre sterilize edilmiş stok çözeltisi (500 μg ml-1) bir kısım ekleyin acetayiprid, imidacloprid, ve imidaclothiz) veya iki organophosp, (dimethoate ve omethoate) hücre süspansiyon kültürlerine, Sıra -sıyla. Not: amaç ksenobiyotik davranışları karşılaştırmak için, farklı bileşikleri test etmek için hücre süspansiyonları aynı anne toplu kullanın.</li>
	<li>Sabit sıcaklıkta (25 ± 1 °C) böcek öldürücülerle hücre süspansiyonlarının örneklerine ve kuluçlan hızı (120 rpm) sallama. Örnekleri alın (bkz. Adım 4,3 veya 4,4) 0, 3, 5 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 ve 75 gün.</li>
	<li>Bir neonicotinoid içeren bir örnek test etmek için, homojen hücre kültürünün 1 ml kısım kaldırmak, bir 1,5 ml plastik santrifüj tüp içine yerleştirin ve 2 dakika için 4000 x g Santrifüjü.<ol>
<li>Yüksek performanslı sıvı kromatografi-ultraviyole (HPLC-UV) ve ultra yüksek performanslı sıvı kromatografi-dört ayaklı zaman-uçuş (UPLC-QTOF) kütlesi ile analizden önce 0,22-μm gözenek boyutunda filtre membranı aracılığıyla Süpernatantları geçirin spektrometri (malzeme tablosu).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bir Organophosphate içeren bir örnek test etmek için, hücre kültürünün bir 500 μL kısım kaldırmak ve bir 35 ml santrifüj tüp veya bir 1,5 ml plastik santrifüj tüp içine yerleştirin (neonicotinoid gibi ikinci örnek hazırlayın).<ol>
<li>0,1 gr sodyum klorür ve 5 mL aseton/etil asetat (3:7, v/v), 500 μL numunelerin 35 mL Santrifüjlü tüpüne ekleyin.</li>
		<li>1 dakika karışımları Vortex ve sonra onları 10 dakika dinlenmesine izin.</li>
		<li>2,5 mL 'yi 10 mL 'lik cam tüpüne götürün ve 40 °C ' de azot evaporatör kullanarak yakın kuruluğu Buharlaştırıcı olarak yerleştirin.</li>
		<li>1 mL aseton, 1 dk için Vortex ile kalıntı çözülür, gaz kromatografi-alev fotometrik dedektör (GC-FPD) tarafından analiz önce bir 0,22-μm filtre membranı üzerinden geçirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. böcek öldürücüler ile bozulmamış çay bitkinin numune hazırlanması
Not: bozulmamış çay bitki deneme bir hidroponik sistemde bir besin çözeltisi 50 mL yetiştirilen çay fidanları kullanarak yapılmıştır (30 NH4+, 10 No3-, 3,1 PO4-, 40 K+, 20 CA2 +, 25 mg2 +, 0,35 Fe2 +, 0,1 B 3 +, 1,0 MN2 +, 0,1 Zn2 +, 0,025 cu2 +, 0,05 Mo+, ve 10 Al3 +, mg L-1)18. Bir deneysel sera, Anhui tarımsal Üniversitesi 'nde 20 °C ' de hafif karanlık bir döngüye (12 saat ışık ve 12 saat karanlığa) sahipti.
<ol><li>15 gün boyunca 4 L plastik tencerede beş bitki koyun.</li>
	<li>0 ppm (kontrol) veya 100 ppm tiaminetoxam veya dimethoate plastik tencere, sırasıyla ekleyin.</li>
	<li>19perokside daldırmak dışında, önceki yönteme göre bozulmamış bitki örneği hazırlamak ve sonra doğru bir kitle spektrum için kütle spektrometresi ile analiz.</li>
</ol>6. enstrüman Analizi
<ol><li>
Neonicotinoidlerin metabolik davranışının HPLC analizi
	<ol>
<li>Bir HPLC-UV kullanın (malzeme tablosu) 254 nm bir dalga boyu thiasetoxam ve acetayiprid içeriği ve metabolik ürünleri algılamak için, ve Imidacloprid ve imidaclothiz de 270 Nm örneklerde Bölüm 4,3. Not: HPLC-UV durumu önceki çalışma19ile aynıydı.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Organofosfatların metabolik davranışının GC Analizi
	<ol>
<li>(Malzeme tablosu) bir kiral sütun kullanarak bir GC-FPD tarafından Bölüm 4,4 örneklerinde dimethoate ve omethoate içeriğini algılar.</li>
		<li>Azot taşıyıcı gaz olarak kullanın ve 1,0 mL min-1akış hızını ayarlayın.</li>
		<li>İlk sıcaklığı 120 °C ' ye ayarlayın ve 5 dakika tutun. sıcaklığı 150 °C ' de 30 °C dk-1 ' e yükseltin ve 3 dakika tutun. 10 °c Min-1 ' e 170 °C ' ye kadar artış ve 7 dakika tutun. Son olarak 30 °C Min-1 ' e 210 °c ' ye yükseltir ve sonra 5 dakika tutun.</li>
		<li>Enjeksiyon sıcaklığını 200 ° c 'ye ayırısız modda ayarlayın; Dedektör sıcaklığını 250 °C ' ye ayarlayın.</li>
		<li>Enjeksiyon hacmini 1 μL olarak ayarlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
UPLC-QTOF hücre kültüründe böcek ilacı metabolitleri Analizi
	<ol>
<li>Bir C18 sütun (malzeme tablosu) Ile UPLC-QTOF kullanarak hücre kültüründe (Bölüm 4,3 örnekleri) böcek öldürücülerin metabolitleri algılayın.</li>
		<li>Akış hızını 0,2 mL min-1olarak ayarlayın. Enjeksiyon hacmini 10 μL olarak ayarlayın.</li>
		<li>Neonicotinoid tedavi numuneleri için, ilk mobil aşamasını% 85 A (5 mM amonyum Format suyu) ve% 15 B (Asetonitril) olarak ayarlayın. 10 dk üzerinde,% 38 için mobil faz B artış ve% 15 geri dönmek 1 dakika, 9 dakika tutun.</li>
		<li>Organofosfat tedavi örnekleri için, ilk mobil faz ayarlayın 55% A (0,1% formik asit suyu) ve 45% B (acetonitrile). Üzerinde 5 dk, artış mobil faz B için 70%, sonra geri dönün 45% B üzerinde 0,5 dk, tutmak için 2,5 dk.</li>
		<li>QTOF işlem parametrelerini aşağıdaki gibi ayarlayın: gaz sıcaklığı, 325 °C; kurutma gazı (Azot), 10 L min-1; Kılıf gaz sıcaklığı, 350 °C; Kılıf gaz akışı, 11 L min-1; kapiller voltaj, 4000 V; Meme gerilimi, 1000 V; fragmentor voltaj, 100 egemenliğinize böcek ve 110 v için organofosfor böcek öldürücüler için v; Skimmer voltaj, 65 V; pozitif iyon modunda çalışma.</li>
		<li>Cihazı tam tarama spektrumuna ve hedef MS/MS moduna ayarlayın.</li>
		<li>Doğru kütle araçlarını kullanarak verileri işleme; MS/MS ek açıklamanın yanı sıra literatür12,15,20,21,22ile hiçbir standart ürün ile metabolitleri Infer.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Bozulmamış bitki ekstresi içinde böcek ilacı metabolitleri UPLC-Orbitrap Analizi
	<ol>
<li>UPLC-Orbitrap kütle spektrometresi (malzeme tablosu) kullanarak bozulmamış Bitki ekstresinin böcek ilaçlarının metabolitlerini algılayın.</li>
		<li>Kütle spektrometresi (malzeme tablosu) çalışma parametrelerini aşağıdaki gibi ayarlayın: kılıf gaz basıncı, 35 ARB; gaz sıcaklığı, 300 °C; Meme gerilimi, 3,5 KV; kapiller sıcaklığı, 350 °C.</li>
		<li>UPLC-QTOF hücre kültürünün analizi için yukarıdaki (Steps 6.3.3 ve 6.3.4) olarak elüsyon programlarını ayarlayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tentative+identification%2C+quantitation%2C+and+principal+component+analysis+of+green+pu-erh%2C+green%2C+and+white+teas+using+UPLC%2FDAD%2FMS%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Tentative identification, quantitation, and principal component analysis of green pu-erh, green, and white teas using UPLC/DAD/MS.</a> Food Chemistry. 126 (3), 1269-1277 (2011).</li>
<li>Alcazar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+green%2C+white%2C+black%2C+Oolong%2C+and+Pu-erh+teas+according+to+their+free+amino+acids+content%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Differentiation of green, white, black, Oolong, and Pu-erh teas according to their free amino acids content.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (15), 5960-5965 (2007).</li>
<li>Kopjar, M., Tadic´, M., Pilizˇota, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenol+content+and+antioxidant+activity+of+green%2C+yellow+and+black+tea+leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+and+Biological+Technologies+in+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Phenol content and antioxidant activity of green, yellow and black tea leaves.</a> Chemical and Biological Technologies in Agriculture. 2 (1), 1-6 (2015).</li>
<li>Chen, H., Yin, P., Wang, Q., Jiang, Y., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+QuEChERS+sample+preparation+method+for+the+analysis+of+70+pesticide+residues+in+tea+using+gas+chromatography-tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Analytical+Methods%22%5BJournal%5D)">A modified QuEChERS sample preparation method for the analysis of 70 pesticide residues in tea using gas chromatography-tandem mass spectrometry.</a> Food Analytical Methods. 7 (8), 1577-1587 (2014).</li>
<li>Hou, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+the+Nonsystemic+Behavior+of+the+Pesticide+Ferbam+on+Tea+Leaves+by+Engineered+Gold+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">Alteration of the Nonsystemic Behavior of the Pesticide Ferbam on Tea Leaves by Engineered Gold Nanoparticles.</a> Environmental Science & Technology. 50 (12), 6216-6223 (2016).</li>
<li>Abdel-Gawad, H., Mahdy, F., Hashad, A., Elgemeie, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+of+C-14-Ethion+insecticide+in+the+presence+of+deltamethrin+and+dimilin+pesticides+in+cotton+seeds+and+oils%2C+removal+of+ethion+residues+in+oils%2C+and+bioavailability+of+its+bound+residues+to+experimental+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Fate of C-14-Ethion insecticide in the presence of deltamethrin and dimilin pesticides in cotton seeds and oils, removal of ethion residues in oils, and bioavailability of its bound residues to experimental animals.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (51), 12287-12293 (2014).</li>
<li>Fang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradation+Dynamics+and+Dietary+Risk+Assessments+of+Two+Neonicotinoid+Insecticides+during+Lonicerajaponica+Planting%2C+Drying%2C+and+Tea+Brewing+Processes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food%22%5BJournal%5D)">Degradation Dynamics and Dietary Risk Assessments of Two Neonicotinoid Insecticides during Lonicerajaponica Planting, Drying, and Tea Brewing Processes.</a> Journal of Agricultural and Food. 65 (8), 1483-1488 (2017).</li>
<li>Pan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissipation+pattern%2C+processing+factors%2C+and+safety+evaluation+for+dimethoate+and+its+metabolite+%28omethoate%29+in+tea+%28Camellia+sinensis%29%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Dissipation pattern, processing factors, and safety evaluation for dimethoate and its metabolite (omethoate) in tea (Camellia sinensis).</a> PloS One. 10 (9), e0138309(2015).</li>
<li>Pavlic, M., Haidekker, A., Grubwieser, P., Rabl, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+intoxication+with+omethoate%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Legal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Fatal intoxication with omethoate.</a> International Journal of Legal Medicine. 116 (4), 238-241 (2002).</li>
<li>Mohapatra, S., Ahuja, A. K., Deepa, M., Sharma, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Residues+of+acephate+and+its+metabolite+methamidophos+in%2Fon+mango+fruit+%28Mangifera+indica+L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+Environmental+Contamination+and+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Residues of acephate and its metabolite methamidophos in/on mango fruit (Mangifera indica L.).</a> Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 86 (1), 101-104 (2011).</li>
<li>Phugare, S. S., Gaikwad, Y. B., Jadhav, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradation+of+acephate+using+a+developed+bacterial+consortium+and+toxicological+analysis+using+earthworms+%28Lumbricus+terrestris%29+as+a+model+animal%5BTitle%5D)+AND+%22International+Biodeterioration+%26+Biodegradation%22%5BJournal%5D)">Biodegradation of acephate using a developed bacterial consortium and toxicological analysis using earthworms (Lumbricus terrestris) as a model animal.</a> International Biodeterioration & Biodegradation. 69, 1-9 (2012).</li>
<li>Ford, K. A., Casida, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+metabolism+and+pharmacokinetics+of+seven+neonicotinoid+insecticides+in+spinach%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Comparative metabolism and pharmacokinetics of seven neonicotinoid insecticides in spinach.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 56 (21), 10168-10175 (2008).</li>
<li>Frear, D. S., Swanson, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+cisanilide+%28cis-2%2C5-Dimethyl-1-Pyrrolidinecarboxanilide%29+by+Excised+Leaves+and+Cell+Suspension+Cultures+of+Carrot+and+Cotton%5BTitle%5D)+AND+%22Pesticide+Biochemistry+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Metabolism of cisanilide (cis-2,5-Dimethyl-1-Pyrrolidinecarboxanilide) by Excised Leaves and Cell Suspension Cultures of Carrot and Cotton.</a> Pesticide Biochemistry and Physiology. 5, 73-80 (1975).</li>
<li>Sandermann, H. Jr, Scheel, D., Trenck, T. H. V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+plant+cell+cultures+to+study+the+metabolism+of+environmental+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Ecotoxicology+and+Environmental+Safety%22%5BJournal%5D)">Use of plant cell cultures to study the metabolism of environmental chemicals.</a> Ecotoxicology and Environmental Safety. 8 (2), 167-182 (1984).</li>
<li>Karmakar, R., Bhattacharya, R., Kulshrestha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+metabolite+profiling+of+the+insecticide+thiamethoxam+in+plant+and+cell+suspension+culture+of+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Comparative metabolite profiling of the insecticide thiamethoxam in plant and cell suspension culture of tomato.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 57 (14), 6369-6374 (2009).</li>
<li>Lichtner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phloem+mobility+of+crop+protection+products%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Journal+of+Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">Phloem mobility of crop protection products.</a> Australian Journal of Plant Physiology. 27, 609-614 (2000).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shoot+basal+ends+as+novel+explants+for+in+vitro+plantlet+regeneration+in+an+elite+clone+of+tea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Horticultural+Science+%26+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Shoot basal ends as novel explants for in vitro plantlet regeneration in an elite clone of tea.</a> Journal of Horticultural Science & Biotechnology. 87 (1), 71-76 (2012).</li>
<li>Meng, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake%2C+Translocation%2C+Metabolism%2C+and+Distribution+of+Glyphosate+in+Nontarget+Tea+Plant+%28Camellia+sinensis+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Uptake, Translocation, Metabolism, and Distribution of Glyphosate in Nontarget Tea Plant (Camellia sinensis L).</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. (65), 7638-7646 (2017).</li>
<li>Hou, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+Extraction+Method+for+Determination+of+Neonicotinoid+Residues+in+Tea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Effective Extraction Method for Determination of Neonicotinoid Residues in Tea.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 61, 12565-12571 (2013).</li>
<li>Karmakar, R., Kulshrestha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence%2C+metabolism+and+safety+evaluation+of+thiamethoxam+in+tomato+crop%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Management+Science%22%5BJournal%5D)">Persistence, metabolism and safety evaluation of thiamethoxam in tomato crop.</a> Pest Management Science. 65 (8), 931-937 (2009).</li>
<li>Dauterman, W. C., Viado, G. B., Casida, J. E., O'Brien, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+Dimethoate+and+Metabolites+Following+Foliar+Application+to+Plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Persistence of Dimethoate and Metabolites Following Foliar Application to Plants.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 8 (2), 115-119 (1960).</li>
<li>Lucier, G. W., Menzer, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nature+of+oxidative+metabolites+of+dimethoate+formed+in+rats%2C+liver+microsomes%2C+and+bean+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Nature of oxidative metabolites of dimethoate formed in rats, liver microsomes, and bean plants.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 18 (4), 698-704 (1970).</li>
<li>Yang, G. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYang%2C+GW+%22Construction+of+Camellia+sinensis+Cell+Suspension+Culture+and+Primary+Study+on+Kineties%22">Construction of Camellia sinensis Cell Suspension Culture and Primary Study on Kineties</a>. , College of Food Science and Nutrition Engineering. China Agricultural University. (2004).</li>
<li>Jiao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+Metabolic+Behaviors+of+Six+Systemic+Insecticides+in+a+Newly+Established+Cell+Suspension+Culture+Derived+from+Tea+%28L.%29+Leaves%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Comparison of the Metabolic Behaviors of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (L.) Leaves.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66, 8593-8601 (2018).</li>
<li>Mustafa, N. R., Winter, D. W., Iren, F. V., Verpoorte, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation%2C+growth+and+cryopreservation+of+plant+cell+suspension+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Initiation, growth and cryopreservation of plant cell suspension cultures.</a> Nature Protocols. 6, 715-742 (2011).</li>
<li>Zhong, J. J., Bai, Y., Wang, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+plant+growth+regulators+on+cell+growth+and+ginsenoside+saponin+production+by+suspension+cultures+of+Panax+quinquefolium%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Effects of plant growth regulators on cell growth and ginsenoside saponin production by suspension cultures of Panax quinquefolium.</a> Journal of Biotechnology. 45, 227-234 (1996).</li>
<li>Grover, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+monoterpenoids+and+aroma+compounds+from+cell+suspension+cultures+of+Camellia+sinensis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%2C+Tissue+and+Organ+Culture%22%5BJournal%5D)">Production of monoterpenoids and aroma compounds from cell suspension cultures of Camellia sinensis.</a> Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 108, 323-331 (2012).</li>
<li>Lei, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevent+Browning+of+Axillary+Buds+in+vitro+Culture+of+Camellia+sinensis%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Agricultural+Science+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Prevent Browning of Axillary Buds in vitro Culture of Camellia sinensis.</a> Chinese Agricultural Science Bulletin. 28, 190-193 (2012).</li>
<li>Hou, X., Guo, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+various+nitrogen+sources+on+the+growth+and+nitrate+assimilation+indicator+of+suspension+roselle+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Guihaia%22%5BJournal%5D)">The effect of various nitrogen sources on the growth and nitrate assimilation indicator of suspension roselle cell.</a> Guihaia. 18, 169-172 (1998).</li>
<li>Shimabukuro, R. H., Walsh, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenobiotic+Metabolism+in+Plants%3A+In+vitro+Tissue%2C+Organ%2C+and+Isolated+Cell+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Symposium+Series%22%5BJournal%5D)">Xenobiotic Metabolism in Plants: In vitro Tissue, Organ, and Isolated Cell Techniques.</a> ACS Symposium Series. 97 (1), 3-34 (1979).</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Bu makalede, explants seçimi, hücre viability belirlenmesi ve yüksek metabolik ile bir çay hücresi süspansiyon kültürünün kurulması da dahil olmak üzere, çay bitki dokusu pestisit metabolizması bir model kurulması ayrıntılı süreci sunar Etkinlik. Bir bitki dokusunun herhangi bir parçası sterilize edilmiş bir ortamda nasır başlatmak için kullanılabilir25. Çay yaprakları bu çalışmada nasır başlatma için seçildi, sadece çünkü yaprakları daha az zemin altında parçaları daha kontamine eğilimindedir, am...

Çay dünya1,2en çok tüketilen alkolsüz içeceklerin biridir. Çay yaprakları ve odunsu çok yıllık Camellia sinensis L. çay bitkileri büyük tarlaları yetiştirilen ve çok sayıda böcek zararlıları için duyarlı olan tomurcukları üretilmektedir3,4. Organophosphorus ve egemenliğinize böcek ilaçları genellikle sistemik böcek öldürücüler olarak kullanılır5 whiteflies gibi zararlıları çay bitkileri korumak için, yaprak Hoppers, ve bazı lepidopteran türler5/6. Uygulamadan sonra, bu böcek öldürücüler bitki içine emilir veya transloke. Tesis içinde, bu sistemik böcek öldürücüler hidroliz, oksidasyon veya bitki enzimlerinin azaltma reaksiyonları yoluyla dönüştürülebilir. Bu dönüşüm ürünleri daha Polar ve üst bileşiklerin daha az toksik olabilir. Ancak, bazı organofosfat için, bazı ürünlerin bioactivities daha yüksektir. Örneğin, acephate daha toksik methasidophos içinde metabolize edilir8,9, ve omethoate içine dimethoate10,11. Bitki metabolik çalışmalar bu nedenle bir bitki içinde bir pestisit kaderini belirlemek için önemlidir12.
Bitki dokusu kültürler pestisit metabolizmasını araştırmak için yararlı bir platform olduğu kanıtlanmıştır, tespit metabolitleri bozulmamış bitkiler bulunan benzer ile13,14,15. Doku kültürlerinin kullanımı, özellikle hücre süspansiyon kültürler, çeşitli avantajları vardır. Öncelikle, deneyler mikroorganizmaların serbest yapılabilir, böylece pestisit dönüşümü veya mikroplar tarafından bozulması müdahalesi kaçınarak. İkincisi, doku kültürü her zaman kullanım için tutarlı malzemeler sağlar. Üçüncüsü, metabolitleri bozulmamış bitkilerin daha doku kültürlerinden ayıklamak için daha kolay, ve doku kültürler genellikle daha az interring bileşikleri ve bileşiklerin daha düşük karmaşıklık var. Son olarak, doku kültürler daha kolay tek bir deneme16pestisit metabolizması bir dizi karşılaştırmak için kullanılabilir.
Bu çalışmada, steril-yetiştirilen çay bağlanırlar yapraklarından türetilen bir hücre süspansiyonu başarıyla kuruldu. Daha sonra çay hücresi süspansiyon kültürü, altı sistemik böcek öldürücülerine ilişkin dağılma davranışlarını karşılaştırmak için kullanılmıştır.
Bu ayrıntılı protokol, araştırmacılar bir bitki dokusu kültür platformu çay Ksenobiyotiklerin metabolik kaderi incelemek için yararlı kurabilir, böylece bazı rehberlik sağlamak için tasarlanmıştır.

<table><tbody><tr><td>Asetamiprid (% 99.8)</td><td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>46717</td><td>CAS No: 135410-20-7</td></tr><tr><td>Asetonitril (CAN, %99.9)</td><td>Tedia</td><td>AS1122-801</td><td>CAS No: 75-05-8</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Solarbio Bilim ve Teknoloji</td><td>A8190</td><td>CAS No: 9002-18-0</td></tr><tr><td>Clothianidin (% 99.8)</td><td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>525</td><td>CAS No: 210880-92-5</td></tr><tr><td>Dimetoat (% 98.5)</td><td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>109217</td><td>CAS No: 60-51-5</td></tr><tr><td>Imidacloprid (% 99.8)</td><td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>91029</td><td>CAS No: 138261-41-3</td></tr><tr><td>Imidaclothiz (% 99.5)</td><td>Toronto Research Chemical</td><td>I275000</td><td>CAS No: 105843-36-5</td></tr><tr><td>Kinetin (KT, >98.0%)</td><td>Solarbio Bilim & Teknoloji</td><td>K8010</td><td>CAS No: 525-79-1</td></tr><tr><td>Omethoate (% 98.5)</td><td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>105491</td><td>CAS No: 1113-02-6</td></tr><tr><td>Polivinilpolipirolidon (PVPP)</td><td>Solarbio Bilim ve Teknoloji</td><td>P8070</td><td>CAS No: 25249-54-1</td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Tocris Bioscience</td><td>5511</td><td>CAS No: 57-50-1</td></tr><tr><td>Thiamethoxam (% 99.8)</td><td>Dr. Ehrenstorfer</td><td>20625</td><td>CAS No: 153719-23-4</td></tr><tr><td>Trifeniltetrazolyum Klorür (TTC,% 98.0)</td> <td>Solarbio Science & Teknoloji</td><td>T8170</td><td>CAS No: 298-96-4</td></tr><tr><td>2,4-Diklorofenoksiasetik Asit (2,4-D, %>98.0)</td><td>Guangzhou Saiguo Biotech</td><td>D8100</td><td>CAS No: 94-75-7</td></tr><tr><td>kiral kolon</td><td>Agilent CYCLOSIL-B</td><td>112-6632</td><td>Kromatografi kolonu (30 m & kez; 0.25 mm & kez; 0.25 & mu; m)</td></tr> <tr><td>Gaz kromatografisi (GC)</td> <td>Shimadu</td><td>2010-Plus</td><td>Alev Fotometrik Dedektörü (FPD) ile Eşleştirilmiş&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC)</td><td>Agilent</td><td>1260</td><td>Ultraviyole dedektörü (UV) ile eşleştirilmişHSS</td></tr> <tr><td>T3 C18 sütunu</td><td>Sular</td><td>186003539</td><td>Kromatografi sütunu (100 mm ve kez; 2,1 mm ve kez; 1,8 & mu; m</td></tr><tr><td>) Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UPLC)</td><td>Agilent</td><td>1290-6545</td><td>Tandem dört kutuplu uçuş süresi kütle spektrometresi (QTOF)</td></tr><tr><td>Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UPLC)</td><td>Orbitrap kütle spektrometresine bağlı</td> <td>Thermo Scientific</td><td>Ultimate 3000-Q Eksaktif Odak</td></tr></tbody></table>

Çay (camellia sinensis l.) türetilmiştir yeni kurulan hücre süspansiyon kültürü altı sistemik böcek ilacı metabolizması üzerinde çalışma yaprak -ları

Study on the Metabolism of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (Camellia Sinensis L.) Leaves

Çay bitkinin in vitro dokularında kullanarak böcek ilacı metabolizmasını incelemek için bir platform geliştirilmiştir. Steril çay fidanları yaprakları Murashige ve Skoog üzerinde gevşek nasır oluşturmak için indüklenen edildi (MS) bitki hormonları ile bazal medya 2, 4-dichlorophenoxyasetic asit (2, 4-D, 1,0 mg l-1) ve Kinetin (kt, 0,1 mg l-1). Callus, her biri 28 gün süren 3 veya 4 turdan sonra kuruldu. Loose nasır (yaklaşık 3 g) daha sonra aynı bitki hormonları içeren B5 sıvı medya içine aşı ve 25 ± 1 °c karanlıkta bir sallayarak kuluçk (120 rpm) kültürlü oldu. 3 − 4 alt kültürden sonra, 1:1 ve 1:2 (süspansiyon anne sıvısı: taze orta) arasında değişen bir alt kültür oranıyla çay yapraklarından türetilen bir hücre süspansiyonu kuruldu. Bu platformu kullanarak, altı böcek öldürücüler (5 μg mL-1 her thiaetoxam, imidacloprid, acetayiprid, imidaclothiz, dimethoate, ve omethoate) çay yaprağı türeyen hücre süspansiyon kültürü içine eklenmiştir. Böcek öldürücülerinin metabolizması sıvı kromatografi ve gaz kromatografi kullanılarak izleniyordu. Çay hücresi süspansiyonu kültürünün kullanışlılığını doğrulamak için, tedavi edilen hücre kültürlerinde ve bozulmamış bitkilerin içinde bulunan thiaminetoxan ve dimethoate metabolitleri kitle spektrometresi kullanılarak karşılaştırıldı. Tedavi edilen çay hücresi kültürlerinde, thiametoksin yedi metabolitleri ve dimethoate iki metabolitleri bulundu, tedavi edilen bozulmamış bitkiler iken, thiametokam sadece iki metabolitleri ve bir dimethoate bulundu. Bir hücre süspansiyonunun kullanımı, özellikle çay gibi zor bir matris için, bozulmamış çay bitkilerin kullanımına kıyasla metabolik analizini basitleştirmiştir.

Alan yetiştirilen çay ağaçları hasat yaprakları ve steril bir ortamda içinde vitro yetiştirilen çay fidanları gelen yaprakları gelen nasır indüksiyon kontaminasyon ölçümü ile karşılaştırıldığında, Browning, ve indüksiyon sonra 28 MS medya ekimi gün ( Şekil 1a). Callus büyüme 20, 37, 62 ve 90 gün Kültür (Şekil 1B) kaydedildi. İn vitro yetiştirilen yapraklardan elde edilen Nasır, yetiştirmenin tüm 90 gün boyunca alan yetiştirilen y...

Bu çalışma, bir hücre süspansiyon kültürü çay (Camellia sinensis L.) bu böcek ilaçları gibi tüm bitki tarafından alınabilir dış bileşiklerin metabolizmasını incelemek için kullanılabilir yaprakları türetilen kurulması için bir protokol sunuyor.

Çay (Camellia sinensis L.) türetilmiştir yeni kurulan hücre süspansiyon kültürü altı sistemik Böcek Ilacı metabolizması üzerinde çalışma Yaprak -ları

A platform for studying insecticide metabolism using in vitro tissues of tea plant was developed. Leaves from sterile tea plantlets were induced to form ...

Çay dünya çapında en popüler içecekler biridir. Pestisitler bazen zararlılardan çay bitkileri korumak için kullanılır. Bazı sistemik pestisitler çay ağacında enzimler tarafından bunun için yapılabilir.Ve sonra oksidasyon, hidroliz veya redüksiyon reaksiyonları ile entegre. Bitki hücresi süspansiyon kültürleri bir olarak kullanılabilir, kolayca pestisitlerin bitki metabolizması davranışı incelemek için. Bu yöntemin çeşitli avantajları vardır.İlk olarak, serbest mikroorganizmaların koşulları üzerinde çalıştırılabilir, böylece, mikropların neden olduğu pestisit bozulması nın girişim kaçınarak. İkincisi, herhangi bir zamanda bizim için sabit malzeme sağlayabilir. Son olarak, aynı zamanda kolayca tek bir deneyde pestisit davranış teorileri karşılaştırmak için kullanılabilir.Bu çalışmada çay yaprağının değişken renklerinden çay hücresi süspansiyon kültürleri oluşturmak. Hücre süspansiyonlarının en uygun kültürler durumu daha sonra altı pestisitin dağılma davranışını karşılaştırmak için kullanılmıştır. Bu deney Jiao Weiting ve Ge Guoqin tarafından yapılacaktır.Bu eksplant kaynağı olarak çalışır bizim çay steril plantes. Makas kullanarak steril bir yaprağın orta kanadı boyunca kesin. Ve sonra, bir Petri kabında yaklaşık 0,3 kat 0,3 santimetre küçük parçalar halinde her yarısını bölmek.Steril eksplaleri 2, 4-D ve KT içeren MS görsel ortamına yerleştirin. Altı ekspertiz 300 mililitrelik bir şişeye yerleştirilebilir. Kültür yaprak karanlıkta 25 derece santigrat sabit bir sıcaklıkta eksekti. 28 gün sonra, indüklenen nasır Ilk nesil seçin ve sonra taze şişe aktarın.Üç ila dört alt kültürden sonra gevşek ve değişken nasır elde edin. Steril koşullar altında steril bir cerrahi bıçak kullanarak katı ortamdan büyük olanları, değişken ve gevşek nasırları küçük parçalara ayırın. Bir nasırın üç gramını bulduk.Nasırı 2, 4-D ve KT içeren B5'e yerleştirin. Kültür karanlıkta sallayarak kuvöz sabit bir sıcaklıkta sıvı hücre süspansiyon. 7-10 gün kaldıktan sonra, kültür şişesini çıkarın ve birkaç dakika bekletin. Buradaki süpernatant'ı tortu olarak ele alalım, kültürü taze ortama zorlar.Çökelmiş büyük nasırları çıkarın. Her biri 28 günlük dört ila üç alt kültür döngüsünden sonra son bakımlı hücre süspansiyon kültürünü edinin. Canlılık boyama önce kontrol hücresi olarak on dakika boyunca yüz santigrat derece canlı hücrelerin bir örnek tutun.6 sekiz dakika boyunca tüm hücre süspansiyon kültürü santrifüj, 000 G.Hücreleri 5 mililitre PBS tampon içine askıya almadan önce supernatant çıkarın ve elle bir dakika sallayın. TTC çözeltisi 2,5 mililitre ekleyin ve tekrar elle sallayın. Karışımı 13 santigrat derecede ayakta duran bir kuluçka makinesinde bir saat kuluçkaya yatırın.Tüm neonicotinoids Thiamethoxam, Asetinoprid, Imidacloprid ve Imideproxaz stok çözeltisi sterilize etmek için görünümünde dört yüz mikrolitre bir aliquot ekleyin. Hepsi organik ilk aşamaya. Dimethoate ve hücre süspansiyon kültürleri içine sırasıyla omethoate.Sabit sıcaklıkta insektisitler ile hücre süspansiyonları Kültür örnekleri, ve inkübatör hızı sallayarak. Örnekleri farklı günlerde alın. Neonicotinoid içeren örneği test etmek için homojen hücre kültürünün 1 mililitrelik aliquot'u çıkarın.1.5 mililitrelik plastik santrifüj tüpüne yerleştirin ve 4,000 G'de iki dakika santrifüj edin. HPLC-UV ve UPLC QTOF tarafından analiz edilmeden önce süpernatant'ı 0,22 mikrometre filtre membranından geçirin. Numuneyi test etmek için organik ilk aşamada devam edin.Hücre kültürünün 500 mikrolitrelik aliquot çıkarın ve 35 mililitre santrifüj tüp veya 1.5 mililitre plastik santrifüj tüp içine yer. 500 mikrolitre numunenin 35 mililitrelik santrifüj tüpüne 0,1 gram sodyum klorür ve beş mililitre ekstrakt çözücü ekleyin. Karışımı bir dakikalığına girdaplayın.Ve sonra 10 dakika dinlenmelerine izin verin. 10 mililitrelik cam bir tüp içine 2,5 mililitre supernatant alın ve 14 santigrat derecede bir azot buharlaştırıcı kullanarak yakın kuruluğa buharlaşır. Bir mililitre aseton ile kalıntı çözün.Bir dakika için girdap, GC-FPD tarafından analiz önce 0.22 mikrometre filtre membran ı geçirin. On beş gün boyunca dört litreplastik tencere beş bitki koyun. Plastik kaplar içine Thiamethoxam veya dimethoaxe mililitre başına mililitre veya 100 mikrogram başına sıfır mikrogram ekleyin.Önceden ıslatma dışında, önceki yönteme göre bozulmamış bitki örneğini hazırlayın ve orbitrap kütle spektrometresi ile analiz edin. 254 nanometre dalga boylarında Thiamethoxam ve Acetimoprid içeriği ve metabolik ürünleri tespit etmek için bir HPLCUV kullanın, ve Imidacloprid ve Imideproksaz 270 nanometre. Bir boru sütunkullanarak GC-FPD ile dimethoate ve omethoate içeriğini algılayın.Karbon-18 sütunlu UPRC QTOF'u kullanarak hücre kültüründeki insektisit metabolitlerini tespit edin. UPLC Orbitrap kütle spektrometresi kullanarak test bitki ekstresinde böcek metabolitlerini tespit edin. Bir steril plantlet nasır daha düşük kontaminasyon esmerleme ama daha yüksek endüktivite olduğunu aldı çay yaprakları ndan nasır.Steril yapraklardan elde edilen nasır her zaman parlak sarımsı, seçilmiş yapraklardan elde edilen nasır ise kahverengi lekelerle beyazdı. KT konsantrasyonu litrebaşına 0.1 miligram iken, nasır rengi sarımsı ve doku gevşek oldu. Kandus büyüme hızı en yüksek, kadar 61.5%zaman konsantrasyonu 2, 4-D litre başına bir miligram ve KT konsantrasyonu litre başına 0.5 miligram oldu.Nasır büyüme verileri en iyi ve nasır büyüme oranı en yüksek ulaştı 46.9%Bu nedenle, bitki homent en iyi kombinasyonu 2 litre başına bir miligram oldu, 4-D ve çay nasır büyümesi için KT litre başına 0.1 miligram. Nasır yaprakları tamamen dördüncü alt kültürtarafından kapladı ve alt kültür döngüsü 28 gün iken. Nasır sarımsı renk ve gevşek doku ve hiçbir esmerlik ile şiddetle büyümüştü.Nasırın brüt verileri ve hücre süspansiyonunun rengi karşılaştırıldıktan sonra, B5 sıvı ortamı hücre süspansiyon kültürü için daha uygundu. Hücre süspansiyon kültürünün OD değeri hücre büyüme miktarını temsil etmek için kullanılmıştır. Ekimin 75 günü boyunca, 40 mililitre başına 15 gramlık oranın diğer iki oranın kinden önemli ölçüde daha yüksek bir OD değerine sahipti.Çay hücresi süspansiyon kültürü içinde hücre canlılığı TTC boyama ile test edildi. Renksiz TTC bileşiği canlı hücrelerin mitokondrisinde dehidrogenaz ile kırmızı formadin dönüştürülebilir, ancak ölü hücrelerde renk değiştirilemez. Ve bu bir çay hücresi süspansiyon kültürü kurma tüm sürecidir.Bu bir hücre süspansiyon kültür tekniği kullanılarak çay farklı pestisitmetabolizması ilk karşılaştırmalı çalışmadır. Çeşitli pestisit metabolitleri tespit edildi ve bazıları daha fazla tutulan çay bitkileri araştırıldı. Bu yeni yöntem çay veya diğer bitkilerde pestisit metabolik çalışmalar için model olarak hizmet verebilir.

study-on-metabolism-six-systemic-insecticides-newly-established-cell

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Bu makale, pestisit duyarlılık anket ve eklembacaklı zararlıları temas direnci ve sistemik böcek ilaçları tespit etmek için kullanılan teknikler gösteriyor ve tartışır.

İnsektisit Direnci İzleme için biyoanalizlere

Bu el yazması, herbisit metabolizma hızlarının, bir dikot otundan eksize edilen yapraklarla nasıl etkili bir şekilde ölçülebileceğini, böylece değişkenliği nasıl azaltabileceğini ve tipik olarak tüm bitki tahlillerinde gözlemlenen herbisit alımının veya translokasyonunun olası kafa karıştırıcı etkilerini ortadan kaldırabileceğini açıklamaktadır.

Bir kesilmiş yaprak Testi ile Dikot Weeds Herbisit Metabolizma düşük Ölçme

İnsektisit değerlendirmeler genellikle yetişkin böcekler yerine olgunlaşmamış aşamalarında karşı hedeflenir. Burada, ilk nimf yatak böcek aşamasına bir karşılaştırma ile yatak hata yumurta karşı böcek değerlendirmek için bir protokol mevcut. Bu protokoller, yetişkin olmayan yaşam evrelerinde insektisit etkinliğini değerlendirmek için başka böcekler için ayarlanabilir.

Yatak Bug karşı Böcek etkinliğini değerlendirmek için bir yöntem,<em&gt; Cımex lectularius</em&gt; Yumurta ve İlk instars

Burada, bir aracılı baculovirus böcek hücre ifade sistemi ile ev sinek carboxylesterase proteinler vitro üretmek ve daha sonra işlevsel olarak Permetrin, metabolize onların rolleri böylece, karakterize bir protokol pyrethroid veriyor mevcut rezistansının hücre tabanlı MTT tahlil ve vitro metabolik çalışmalar yürütmektedir.

Carboxylesterases böcek ilacı dayanıklı ev sinekleri, sinek Domestica içinde işlevsel karakterizasyonu

Burada, Ectropis grisescens olgun larva toprak faktörler (Örneğin, substrat tipi ve nem içeriği) karşılık olarak pupation tercih araştırmak için bir protokol mevcut seçim biyoanalizler kullanarak. Biz de hayır-seçim biyoanalizler pupation davranışları etkileyen faktörleri belirlemek için bir protokol ve yaşayanlar, mevcut E. grisescens.

Seçim ve No-seçim biyoanalizler Pupation tercih ve Ectropis grisescens başarısı ortaya çıkması

Mevcut protokol, pestisitle kirlenmiş hükümleri yalnız arıların larvalarına, Osmia excavata'ya beslemek için bir yöntem açıklamaktadır. Prosedür, pestisitin yalnız arıların larvalarına ekotoksisitesini inceler.

Pestisitlerin yalnız arıların larvaları üzerindeki etkisinin değerlendirilmesi

İnsektisitlerin kahve meyvesi delicisine (CBB) karşı toksisitesini test etmek için yeşil kahve meyvelerini (GF'ler) kullanan bir yöntem geliştirilmiştir. İnsektisitler veya toksik maddeler, CBB istilasından önce veya sonra dezenfekte edilmiş GF'lere uygulandı. Böcek mortalitesi, iticilik ve üreme kapasitesi, diğer parametrelere ek olarak değerlendirildi.

Kontrol Ajanlarını ve İnsektisitleri Kahve Berry Borer Hypothenemus hampei'ye Karşı Test Etme Metodolojisi

Mevcut protokol, bitkilerde 2,4-dibromofenol metabolitlerinin tanımlanması için basit ve etkili bir yöntemi açıklamaktadır.

Bitkilerde 2,4-Dibromofenol Metabolizmasının Aydınlatılması

Bu protokol, bir fitokimyasalın lepidopteran böcek larvaları üzerindeki potansiyel toksik etkisini değerlendirmek için zorunlu besleme testini açıklar. Bu, öldürücü ve öldürücü dozu, caydırıcı aktiviteyi ve fizyolojik etkiyi optimize etmek kolay, oldukça ölçeklenebilir bir böcek biyo-tahlilidir. Bu, çevre dostu böcek ilaçlarını taramak için kullanılabilir.

Fitokimyasalların Helicoverpa armigera Üzerindeki İnsektisidal Etkisinin Değerlendirilmesi için Beslenme Deney Sistemi Geliştirilmesi

Protokol, bitkilerde triazol pestisitlerinin metabolitlerinin integral sitotoksisitesini değerlendirmek için yeni bir yöntemi açıklamaktadır.

Bitkilerde Tipik Triazol Pestisitlerin Metabolitlerinin Sitotoksisitesinin Değerlendirilmesi

Keşfedin çay yapraklarından hücre süspansiyon kültürü kurma yöntemini ve sistemik böcek ilaçlarının metabolizmasını inceleme tekniğini. Bu protokol bitki metabolizması çalışmaları için değerli bir araç sunar.

Çay (Camellia sinensis L.) türetilmiştir yeni kurulan hücre süspansiyon kültürü altı sistemik Böcek Ilacı metabolizması üzerinde çalışma Yaprak -ları (Video) | JoVE Journal

Çay (Camellia sinensis L.) türetilmiştir yeni kurulan hücre süspansiyon kültürü altı sistemik Böcek Ilacı metabolizması üzerinde çalışma Yaprak -ları

Daha fazla video keşfet