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Ensaio de imunoprecipitação cromatina utilizando nucleases Microcócicas em células de mamíferos
Ensaio de imunoprecipitação cromatina utilizando nucleases Microcócicas em células de mamíferos
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JoVE Journal Genetics
Chromatin Immunoprecipitation Assay Using Micrococcal Nucleases in Mammalian Cells

Ensaio de imunoprecipitação cromatina utilizando nucleases Microcócicas em células de mamíferos

Full Text
15,506 Views
11:42 min
May 10, 2019

DOI: 10.3791/59375-v

Takahiro Yamakawa1, Keiichi Itakura1

1Department of Molecular and Cellular Biology,Beckman Research Institute of City of Hope

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

A imunoprecipitação da cromatina (ChIP) é uma ferramenta poderosa para a compreensão dos mecanismos moleculares da regulação genética. No entanto, o método envolve dificuldades na obtenção de fragmentação cromatina reprodutível por cisalhamento mecânico. Aqui, nós fornecemos um protocolo melhorado para um ensaio da microplaqueta usando a digestão enzimática.

Neste protocolo, podemos identificar as interações entre proteínas e DNA, revelando a regulação transcricional do gene. Isso ajuda a entender os mecanismos moleculares nas células. Modificamos os protocolos pré-existentes e, em seguida, estabelecemos protocolos de ensaio simples e mais claros.

Basta seguir o protocolo desde o primeiro passo para que o ensaio possa ser feito com sucesso. Para preparar a cromatina cruzada, em um capô de fumaça, adicione quatro mililitros de mídia de cultura celular 1%VCaP e 0,229 mililitros de 18,5% PFA a um prato de seis centímetros. Gire suavemente o prato para distribuir a PFA uniformemente.

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Genética edição 147 regulação gênica modificação de histona imunoprecipitação cromatina nuclease microcócica RNA polimerase II histona trimetilada H3 lisina 4

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