Quantificação absoluta do metabolismo da síntese de proteínas livres de células por cromatografia líquida de fase reversa-espectrometria

A síntese de proteínas sem células é uma tecnologia emergente em sistemas e biologia sintética para a produção in vitro de proteínas. Os sistemas de síntese de proteínas livres de células não têm parede celular, portanto temos acesso direto a metabólitos. Neste protocolo, quantificamos as medidas absolutas de 40 metabólitos envolvidos no metabolismo central de carbono e energia, o que nos permite caracterizar o metabolismo livre de células.

O protocolo conta com a metástase dos compostos com anilina, o que permite uma melhor separação e maior resolução de espectrometria de massa. Além disso, usamos padrões internos com uma isotópica que rotulamos anilina, para quantificação absoluta dos metabólitos. Os metabólitos marcados coelute, que elimina os efeitos da supressão de ferro.