Name: Utilização da membrana chorioallantoico de frango em modelo vivo para estudar cânceres ginecológicos e urológicos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Aprenda a utilizar a membrana corioalantoica de frango como modelo vivo para estudar tumores ginecológicos e urológicos. Este método permite o crescimento rápido de tumores em ambiente imunotolerante, facilitando testes terapêuticos.

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Os autores desejam agradecer ao Dr. Fuyuhiko Tamanoi e Binh Vu pelo treinamento inicial sobre este método. As discussões com a Dra. Este trabalho não teria sido possível sem financiamento das seguintes fontes: o Programa de Pesquisa sobre Doenças Relacionadas ao Tabaco Bolsa de Pós-Doutorado (27FT-0023, à ACS), o Departamento de Defesa (DoD) Programa de Pesquisa do Câncer de Ovário (W81XWH-17-1-0160), NCI/NIH (1R21CA216770), Programa de Pesquisa de Doenças Relacionadas ao Tabaco Prêmio Piloto de Alto Impacto (27IR-0016) e apoio institucional da UCLA, incluindo um JCCC Seed Grant (NCI/NIH P30CA016042) e um 3R Grant do Escritório do Vice-Chanceler para Pesquisa para LW.

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Os autores não têm nada para divulgar.

A expansão e o enenxerto tumoral usando o modelo CAM permite um crescimento tumoral mais rápido e diretamente observável do que o existente nos modelos animais vivos. Além disso, os custos são significativamente menores uma vez que a compra inicial de equipamentos é concluída, especialmente quando comparada com o custo de camundongos imunocomprometidos. O estado inicial, imunocomprometido de embriões de frango prontamente permite enenxerto de tecido humano e murina. Mesmo com esses pontos fortes, o modelo CAM tem limitaç...

Os camundongos serviram como o organismo modelo clássico para o estudo de doenças humanas, incluindo a malignidade. Como mamíferos, eles compartilham muitas semelhanças com os humanos. Seu alto grau de similaridade genética permitiu que a manipulação transgênica do genoma do camundongo fornecesse uma enorme visão sobre o controle genético das doenças humanas1. A vasta experiência no manuseio e experimentação com camundongos resultou em seu ser o modelo de escolha para pesquisa biomédica. No entanto, além das preocupações éticas e científicas em relação aos modelos de murina, eles também podem ser bastante caros e demorados2,3. O desenvolvimento de tumores pode levar semanas ou até meses. A moradia em uma instituição típica sozinha pode funcionar entre centenas e milhares de dólares enquanto os tumores estão se desenvolvendo. O câncer de ovário é um exemplo dessa desvantagem porque seu crescimento em modelos de urina pode facilmente levar meses. Atrasos no progresso da pesquisa potencialmente afetam a persistente baixa taxa de sobrevivência de pacientes com câncer de ovário de apenas 47% (ou seja, um aumento na sobrevida de apenas 10% ao longo de 30 anos)4. Da mesma forma, os cânceres urológicos (cânceres de rim, próstata e bexiga) constituem 19% de todos os casos de câncer nos Estados Unidos e 11% das mortes relacionadas ao câncer4. Assim, uma nova abordagem in vivo para estudar cânceres ginecológicos e urológicos poderia economizar um tempo, trabalho e dinheiro consideráveis, mesmo que esse modelo seja aplicado apenas a experimentos iniciais de triagem. Além disso, a aceleração resultante dos achados da pesquisa poderia impactar significativamente os 177.000 indivíduos diagnosticados com esses cânceres anualmente.
O modelo CAM de frango oferece muitas vantagens que abordam as questões acima mencionadas. Um modelo popular para estudar angiogênese5,6, invasão celular tumoral7,8, e metástase7,9, o modelo de cam de embrião filhote já foi usado para estudar muitas formas de câncer, incluindo glioma10,11,12, carcinoma celular cabeça e pescoço13,14, leucemia15,16, câncer pancreático17, e câncer colorretal18. Além disso, os modelos CAM foram gerados para neuroblastoma19,linfoma burkitt20,melanoma21e fibrosarcoma felina22. Estudos anteriores também apresentaram enenxerto de câncer de bexiga23 e linhas de células cancerígenas de próstata24,mas com detalhes limitados do protocolo. Não só os ovos são muito mais baratos que os ratos, mas também produzem resultados altamente reprodutíveis25,26. Eles mostram o desenvolvimento rápido da vasculatura, e o enenxerto tumoral pode ocorrer tão rapidamente quanto alguns dias e ser visualizado longitudinalmente pela janela aberta. Com o período de 21 dias entre fertilização de óvulos e eclosão, os experimentos podem ser concluídos dentro de algumas semanas. Além disso, as necessidades de moradia limitadas de baixo custo, e o pequeno tamanho prontamente permitem experimentos em larga escala que seriam proibitivos para estudos de camundongos.
Por isso, buscamos otimizar o modelo CAM para o enenxerto de cânceres ginecológicos e urológicos. Devido ao estado imunocomprometido do embrião de frango27precoce, tanto o rato quanto as células humanas podem ser prontamente implantados. Como tal, temos conseguido enenxertor cânceres de ovário, rim, próstata e bexiga. Para cada um desses tipos de tumores, o CAM prontamente aceita linhas estabelecidas de murina e/ou células tumorais humanas. É importante ressaltar que os tecidos tumorais humanos primários recém-colhidos também podem enertar células digeridas ou pedaços de tecido sólido com altas taxas de sucesso. Cada um desses tipos de câncer e fontes celulares requer otimização, que compartilhamos aqui.

<table><tbody><tr><td>-010 Teflon (PTFE) Branco 55 Duro Shore D O-Rings</td><td>The O-Ring Store</td><td>TEF010</td><td>Anel antiaderente para semeadura de células. 1/4"ID X 3/8"OD X 1/16"CS Politetrafluoretileno (PTFE).</td></tr><tr><td>C4-2</td><td>ATCC</td><td>CRL-3314</td><td>Linha celular de câncer de próstata humano.</td></tr><tr><td>As células CWR22Rv1</td><td></td><td></td><td>CWR foram o gentil presente do Dr. David Agus (Keck Medicine of University of Southern California)</td></tr><tr><td>Anticorpo de citoqueratina 8/18 (C-51)</td><td>Novus Biologicals</td><td>NBP2-44929-0,02mg</td><td>Usado em uma diluição de 1:100 para análise imuno-histoquímica de tumores CAM de ovário humano.</td></tr><tr><td>D-Luciferina Firefly, sal de potássio</td><td>Goldbio</td><td>LUCK-1G</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de operação delicada; Curvo; Afiado-afiado; Comprimento da lâmina de 30 mm; 4-3/4 pol. Comprimento total</td><td>Roboz Surgical</td><td>RS6703</td><td>Este é fornecido como um exemplo. Qualquer tesoura curva semelhante também funcionaria.</td></tr><tr><td>Dremel 8050-N/18 Micro 8V Max Kit de ferramentas</td><td>Dremel</td><td>8050-N/18</td><td>Este kit contém todas as ferramentas necessárias.</td></tr><tr><td>Ovos de galinha fertilizados (Rhode Island Red - Brown, Lab Grade)</td><td>AA Lab Eggs Inc.</td><td>N/A</td><td>Um fornecedor local de ovos precisaria ser identificado, pois esse fornecedor só entrega regionalmente.</td></tr><tr><td>HT-1376</td><td>ATCC</td><td>CRL-1472</td><td>Linha celular de câncer de bexiga humana.</td></tr><tr><td>Hovabator Genesis 1588 Kit Combo de Incubadora de Ovos Deluxe</td><td>Armazém de Incubadora</td><td>HB1588D-NONE-1102-1588-1357</td><td>Outras incubadoras de ovos podem ser usadas, mas sua confiabilidade precisaria ser verificada. Após a implantação, uma incubadora de células com o CO2 desativado também pode ser usada.</td></tr><tr><td>ID8</td><td></td><td></td><td>Não disponível comercialmente, consulte PMID: 10753190.</td></tr><tr><td>Incu-Bright Cool Light Egg Candler</td><td>Incubator Warehouse</td><td>1102</td><td>Outros candlers podem ser usados; no entanto, este é preferido entre aqueles que testamos. Este candler está incluído no kit de incubadora mencionado acima.</td></tr><tr><td>Fórceps de Íris, 10cm, Curvado, Serrilhado, Pontas de 0.8mm</td><td>Instrumento de Precisão Mundial</td><td>15915</td><td>Isso é fornecido como um exemplo. Qualquer fórceps curvo semelhante também funcionaria. Várias marcas foram usadas para este método.</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Clipper Distribuindo</td><td>0010250</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de Imagem In Vivo IVIS Lumina II</td> Matriz <td>de Membrana Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Matrigel HC; Solução de</td><td>matriz extracelular</td><td>Corning</td><td>354248</td> sem LDEV</tr><tr><td>MyC-CaP</td><td>ATCC</td><td>CRL-3255</td><td>Linha celular de câncer de próstata murino.</td></tr><tr><td>Controlador de pipeta portátil Pipet-Aid XP</td><td>Drummond Scientific</td><td>4-000-101</td><td>Qualquer controlador de pipeta semelhante seria apropriado.</td></tr><tr><td>Agulhas hipodérmicas PrecisionGlide</td><td>BD</td><td>305196</td><td>Isso é fornecido como exemplo. Qualquer agulha 18G funcionaria de forma semelhante.</td></tr><tr><td>RENCA</td><td>ATCC</td><td>CRL-2947</td><td></td></tr><tr><td>Semken Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11008-13</td><td>Isso é fornecido como um exemplo. Qualquer fórceps semelhante ou outro estilo que se adapte à preferência do pesquisador seria apropriado.</td></tr><tr><td>SKOV3</td><td>ATCC</td><td>HTB-77</td><td>Linha celular de câncer de ovário humano.</td></tr><tr><td>Pinça de amostra</td><td>Ciências de Microscopia Eletrônica</td><td>72914</td><td>Isso é fornecido como um exemplo. A pinça usada para afastar a concha para imagens de bioluminescência tem aproximadamente 12,8 cm de comprimento com pontas de 3 mm de largura.</td></tr><tr><td>Bolas de algodão estéreis</td><td>Fisherbrand</td><td>22-456-885</td><td>Isso é fornecido como um exemplo. Qualquer bola de algodão estéril seria suficiente.</td></tr><tr><td>Varetas de Agitação com Policial de Borracha; 5mm de diâmetro, 6 pol. de comprimento</td><td>United Scientific Supplies</td><td>GRPL06</td><td>Isso é fornecido como um exemplo. Qualquer haste de agitação de vidro semelhante também funcionaria.</td></tr><tr>Linha <td>celular de câncer de bexiga humana</td> <td>T24</td><td>ATCC</td><td>HTB-4</td>.</tr><tr><td>Curativo Transparente Tegaderm Original Estilo de Moldura 2 3/8" x 2 3/4"</td><td>Placas de</td> Cultura de Tecidos Moore Medical <td>21272</td><td></td></tr><tr><td>, 10 cm de diâmetro</td><td>Corning</td><td>353803</td><td>Isso é fornecido como um exemplo. Qualquer prato semelhante e estéril de 10 cm pode ser usado. O tratamento de cultura de tecidos não é necessário.</td></tr><tr><td>Tubulação de Laboratório Transparente Tygon - parede de 1/4 x 3/8 x 1/16 (50 pés)</td> <td>Tygon</td><td>AACUN017</td><td>Isso é fornecido como exemplo. Qualquer tubulação de tamanho semelhante também funcionaria.</td></tr></tbody></table>

utilização da membrana chorioallantoico de frango em modelo vivo para estudar cânceres ginecológicos e urológicos

Using the Chicken Chorioallantoic Membrane In Vivo Model to Study Gynecological and Urological Cancers

Os modelos mouse são os testes de referência para estudos de câncer vivo. No entanto, o custo, o tempo e as considerações éticas levaram a pedidos de alternativas nos modelos de câncer vivo. O modelo de membrana chorioallantoico de frango (CAM) fornece uma alternativa barata e rápida que permite a visualização direta do desenvolvimento do tumor e é adequada para a imagem in vivo. Como tal, buscamos desenvolver um protocolo otimizado para enenxerto de tumores ginecológicos e urológicos nesse modelo, que apresentamos aqui. Aproximadamente 7 dias após a fertilização, a célula do ar é movida para o lado vascularizado do óvulo, onde uma abertura é criada na concha. Tumores de murina e linhas celulares humanas e tecidos primários podem então ser ertados. Estes são tipicamente semeados em uma mistura de matriz extracelular e meio para evitar dispersão celular e fornecer suporte de nutrientes até que as células recrutem um suprimento vascular. Os tumores podem crescer por até 14 dias adicionais antes da eclosão dos ovos. Ao implantar células stably transinduzidas com luciferase firefly, a imagem de bioluminescência pode ser usada para a detecção sensível do crescimento tumoral na membrana e células cancerígenas espalhadas pelo embrião. Esse modelo pode potencialmente ser usado para estudar tumorigenicidade, invasão, metástase e eficácia terapêutica. O modelo CAM de frango requer significativamente menos tempo e recursos financeiros em comparação com os modelos tradicionais de murina. Como os ovos são imunocomprometidos e tolerantes imunes, tecidos de qualquer organismo podem potencialmente ser implantados sem animais transgênicos caros (por exemplo, camundongos) necessários para implantação de tecidos humanos. No entanto, muitas das vantagens deste modelo poderiam potencialmente também ser limitações, incluindo o curto tempo de geração de tumores e o status imunocomprometido/imunocomprometido/tolerante imune. Além disso, embora todos os tipos de tumores apresentados aqui enerram no modelo de membrana chorioallantoico de frango, eles o fazem com diferentes graus de crescimento tumoral.

Até agora, descobrimos que esse método de implantação foi bem sucedido para cânceres de ovário, rim, próstata e bexiga. Cada um foi otimizado para identificar condições específicas para implantação, embora possa haver flexibilidade. Dos tipos de tumores testados, o crescimento do câncer de ovário foi muito menos pronunciado e tipicamente não visível sem a ajuda da imagem de bioluminescência(Figura 1). No entanto, um endurecimento da CAM poderia ser sentido co...

Apresentamos o modelo de membrana chorioallantoico de frango como uma alternativa, transplantável, no modelo vivo para o enenxerto de linhas de células cancerígenas ginecológicas e urológicas e tumores derivados do paciente.

Utilização da membrana chorioallantoico de frango em modelo vivo para estudar cânceres ginecológicos e urológicos

Mouse models are the benchmark tests for in vivo cancer studies. However, cost, time, and ethical considerations have led to calls for alternative in vivo ...

O engrafamento de tumores na membrana corioallantóica do frango, ou CAM, pode ser usado para estudos de tumorigenicidade, eficácia do tratamento ou crosstalk celular. Este método permite um crescimento rápido e econômico do tumor em um ambiente in vivo imunotolerante. Usando o modelo CAM, novas abordagens terapêuticas podem ser rapidamente testadas usando linhas celulares ou até mesmo amostras de tumores do paciente.Os aspectos mais cruciais deste protocolo são garantir a formação adequada do CAM e não interromper a CAM ou vasculatura durante a abertura dos ovos. No dia do desenvolvimento sete ou oito, quando a CAM se desenvolveu totalmente, desligue o rotador de ovos e coloque aproximadamente um a três ovos no rack de ovos no armário de biossegurança. Com as luzes apagadas, coloque um gemada contra a casca do ovo para identificar e marcar a localização da célula de ar de um ovo, em seguida, mova o gemada de ovo sobre a casca para encontrar uma grande rede de vasos sanguíneos, girando o ovo conforme necessário.Uma vasculatura ideal se ramificará perto do meio do ovo. Use um marcador para rastrear a vasculatura a ser usada para implantação. Depois de voltar a acender a luz no capô, use uma ferramenta rotativa sem fio equipada com uma pedra de moagem de carboneto de silício para fazer um pequeno buraco na concha diretamente sobre o centro da célula de ar.Quando a maior parte da concha tiver sido removida, mas com a membrana interna branca intacta, faça outro pequeno buraco onde a janela vascular será aberta como apenas demonstrado. Quando o segundo orifício estiver pronto, use uma agulha de calibre 18 para perfurar suavemente a membrana interna branca sobre a célula de ar e vasculatura tomando cuidado para que a membrana interna branca, mas não a CAM, seja interrompida em toda a área perfurada. Com a luz do capô desligada novamente, use o candler de ovo para verificar se a célula de ar foi transferida do final do ovo para a área sobre a vasculatura.Se necessário, coloque tubos de vácuo inseridos em um controlador de pipeta ao redor do orifício sobre a célula de ar original e aplique suavemente sucção em rajadas curtas para mover a célula de ar. Marque o contorno da nova localização da célula de ar aproximadamente 0,5 centímetros dentro do limite do CAM de ar e fixe um pedaço de fita de embalagem apenas grande o suficiente para cobrir o buraco sobre a nova célula de ar. Depois de preparar os outros dois ovos como acabou de demonstrar, devolva os ovos à incubadora e abra quaisquer ovos adicionais para o experimento em grupos de um a três, como demonstrado.Quando todos os ovos forem abertos, transfira de um a três ovos com células de ar realocadas para o rack de ovos em um armário de biossegurança e use uma ferramenta rotativa sem fio equipada com uma roda de corte circular para cortar uma pequena linha sobre o limite da célula de ar completamente através da célula sem interromper a CAM ou vasculatura. Usando uma tesoura curva, corte ao redor da célula de ar restante para criar uma janela na concha e verificar a viabilidade do embrião. Embriões viáveis exibirão uma vasculatura extensa, albumina clara, movimento de embriões e/ou batimentos cardíacos visíveis.Em embriões não viáveis, a CAM pode parecer opaca com poucos, se houver, vasos presentes e os embriões podem ser pequenos ou ausentes sem movimento ou batimento cardíaco. Usando fórceps Semkin, puxe pequenos pedaços de algodão de uma bola de algodão estéril e limpe suavemente a superfície CAM dos embriões viáveis para remover qualquer pó de concha e detritos, em seguida, cubra a abertura da casca com um pedaço de seis por sete centímetros transparente de filme sem tocar na CAM e retornar os ovos para a incubadora com a janela aberta voltada para cima. Use um pedaço de rack de ovos, a borda do rotador de ovos ou outro item adequado para sustentar todos os ovos que continuam rolando.Para preparar a suspensão celular cancerígena para transplante, colher as células da cultura celular cancerígena de interesse e sedimentar as células por centrifugação. Aspire o supernasce e mecanicamente resuspenda as células no meio residual. Coloque a suspensão celular no gelo e use uma pipeta para medir o volume de células em média.Em seguida, resuspengou as células a uma concentração de um a dois milhões de células em 20 a 100 microlitres de médio suplementado com 2,7 a 4 miligramas por matriz extracelular mililitro e quaisquer fatores de crescimento ou outros aditivos de interesse. Para implantação de células cancerígenas, usando um anel antiaderente, coloque até seis ovos para serem implantados no rack de ovos e role as bordas do curativo transparente do filme em direção à janela aberta para remover o filme das conchas. Verifique se os ovos são viáveis e saudáveis.Os ovos ideais terão um grande vaso com vasos de ramificação menores dentro do centro da área aberta. Usando fórceps de íris curvas, coloque um anel antiaderente estéril sobre a CAM sobre o vaso idealmente sobre um ponto de ramificação. Use uma haste de vidro estéril para arrotar suavemente a CAM e pipetar a suspensão da célula cancerosa no centro do anel.Quando todas as células tiverem sido entregues, sele a abertura com um quarto de seis por sete centímetros transparentes e rotule o ovo com uma designação de implante apropriada. Em seguida, coloque os ovos firmemente na incubadora com a abertura da casca virada para cima. Para implantar células cancerígenas sem o uso de um anel antiaderente, aspire a suspensão celular em uma ponta de pipeta de tamanho apropriado e segurando a porção superior da ponta cuidadosamente ejetar a ponta pipeta e colocar a ponta horizontalmente em um prato de cultura de tecido estéril de 10 centímetros.Depois que as pontas tiverem sido carregadas, coloque o prato em uma incubadora Celsius de 37 graus por 15 a 30 minutos, verificando se há polimerização após 15 minutos. Uma pequena quantidade de líquido normalmente vazará à medida que cada ponta é colocada no prato. Use este líquido para estimar a extensão da polimerização dentro da ponta.Quando a matriz estiver pronta, coloque uma ponta sobre uma pipeta de tamanho apropriado e deprimir o êmbolo para forçar a suspensão parcialmente polimerizada da célula sobre a CAM idealmente sobre o ponto ramificado de um vaso grande e bem desenvolvido. Utilizando esses métodos, tanto linhas de células cancerígenas humanas quanto murinas e peças tumorais primárias resultaram no enxerto bem sucedido de tumores com morfologias consistentes com as observadas em outros modelos in vivo. Dos tipos de tumores testados, o crescimento do câncer de ovário foi muito menos pronunciado e tipicamente não visível sem a assistência de imagens de bioluminescência.Os efeitos da adição de fatores de crescimento ou hormônios no momento da implantação também podem ser testados usando esses métodos. Para o câncer de rim, a implantação de células cancerígenas de células claras de células claras a partir de linhas celulares estabelecidas ou pedaços de tumores renais humanos primários produz formação tumoral rápida e robusta. Além disso, várias linhas de células cancerígenas de próstata humana e murina e linhas de células cancerígenas da bexiga humana e peças tumorais primárias foram usadas para estabelecer tumores usando esse modelo.É crucial evitar interromper o CAM e a vasculatura e garantir que o CAM não adere à concha ao abrir a janela. Após o enxerto bem-sucedido, o modelo CAM pode ser usado para avaliar a eficácia terapêutica de tratamentos de interesse ou interações entre diferentes tipos de células dentro de um tumor.

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Neste vídeo, descrevemos uma técnica para abrir a casca do ovo de um ovo de galinha fertilizado para expor sua membrana corioalantóide ou CAM carregando uma rede de vasos sanguíneos ramificados. O CAM exposto pode ser usado para modelagem de tumor in ovo.

Janela de ovo: um método de abertura de casca de ovo de galinha fertilizada para expor a vasculatura da membrana corioalantóide

Neste vídeo, descrevemos a implantação de células cancerígenas em uma membrana corioalantóide de galinha para gerar um modelo in ovo. O modelo enxerta com sucesso as células do câncer de ovário para estudar a progressão do câncer ginecológico.

Modelagem de câncer baseada em membrana corioalantóide de frango: um modelo in ovo para estudar tumorigênese e metástase de células cancerígenas

Este vídeo demonstra o procedimento de injeção intravenosa de células cancerígenas na vasculatura da membrana corioalantóide de galinha para gerar um modelo de metástase de câncer CAM. As células injetadas eventualmente formam colônias dispersas de células cancerígenas, permitindo o estudo da invasão e metástase do câncer.

Injeção intravenosa de células cancerígenas na vasculatura da membrana corioalantóide de galinha: um procedimento para estabelecer o modelo de câncer de membrana corioalantóide para estudar a invasão e metástase do câncer

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Membrana corioalantóide de pintinho ou modelo de tumor CAM: um método in ovo para simular a invasão perineural de células tumorais

Este vídeo demonstra o isolamento da membrana corioalantóide portadora de tumor do embrião de galinha. O CAM colhido pode ser usado para outras aplicações a jusante.

Colheita de membrana corioalantóide de pintinho: um método para isolar a membrana corioalantóide com enxerto tumoral de ovo de galinha

A membrana corioalantóica (CAM) do pintinho é imunodeficiente e altamente vascularizada, tornando-se um modelo natural in vivo de crescimento tumoral e angiogênese. Neste protocolo, descrevemos um método confiável de crescimento de tumores tridimensionais de carcinoma hepatocelular vascularizado (CHC) usando o ensaio CAM.

o<em&gt; In Ovo</em&gt; Chick Corioalantóide membrana (CAM) como um Ensaio Xenoenxerto modelo eficiente de carcinoma hepatocelular

A invasão perineural é um phenotype agressivo para carcinomas de pilha Squamous da cabeça e da garganta e outros tumores. O modelo de membrana corioalantoica de pintinho tem sido usado para estudar angiogênese, invasão de câncer e metástase. Aqui nós demonstramos como este modelo pode ser utilizado para avaliar a invasão perineural in vivo.

A membrana Chorioalantoica Chick in vivo modelo para avaliar invasão perineural em câncer de cabeça e pescoço

Carcinoma de células renais metastáticas claras é uma doença sem um modelo animal abrangente para investigação pré-clínica completa. Este protocolo ilustra dois novos modelos animais para a doença: o modelo de camundongo sutópicamente implantado e o modelo de membrana chorioallantoico de frango, ambos demonstram metástase pulmonar semelhante a casos clínicos.

Comparando modelo de carcinoma de célula séuológica metastática clara estabelecida no rim do rato e na membrana chorioallantoico de frango

Este protocolo descreve três métodos sobre como obter e usar embriões de frango de 5 a 8 dias de idade e sua membrana corioalantóica (CAM) como um modelo in vivo para estudar imagens de ultrassom com contraste e entrega de drogas mediadas por microbolhas.

A preparação de embriões de frango ex ovo e vasos de membrana corioalantóica como modelo in vivo para imagens de ultrassom com contraste e estudos de liberação de drogas mediados por microbolhas

Este é um método eficaz para testar supressores ou condutores de metástase de câncer. As células, transduzidas com uma biblioteca de expressão, são injetadas na vasculatura da membrana corioallantóica do frango para formar colônias metastáticas. Colônias que têm diminuído ou aumentado a invasividade são extirpadas, expandidas, reinjetadas para confirmar seu fenótipo e, finalmente, analisadas usando alto sequenciamento de rendimento.

Descoberta de reguladores metastáticos usando um modelo de membrana corioallantóica intravital rápida e quantitativa

Aqui, descrevemos um protocolo para o desenvolvimento de um modelo de xenoenxertia de membrana corioalantóica (CAM) para tecido ovariano humano e demonstramos a eficácia da técnica, o tempo de revascularização do enxerto e a viabilidade tecidual ao longo de um período de enxertia de 6 dias.

Modelo de membrana corioalantóide de pintinhos (CAM) como ferramenta para o estudo do transplante de tecido ovariano

Aprenda a utilizar a membrana corioalantoica de frango como modelo vivo para estudar tumores ginecológicos e urológicos. Este método permite o crescimento rápido de tumores em ambiente imunotolerante, facilitando testes terapêuticos.

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