Aplicando imagens de células vivas e tomografia crio-elétron para resolver características espaciales do Sistema de Secreção Legionella pneumophila Dot/ICM

Este protocolo é útil para caracterizar as funções de montagem de peles de secreção bacteriana e pode levar a uma compreensão fundamental dos mecanismos moleculares necessários para interações patógenas hospedeiras. Essa técnica integra abordagens complementares que preservam a estrutura nativa da amostra e permitem e veem a visualização de complexos proteicos em células bacterianas intactas. Aumenta nossa compreensão das relações de função estrutural dos sistemas de secreção bacteriana.

Este método pode ser adaptado para estudar outros tipos de sistemas de secreção ou outros complexos celulares em uma ampla variedade de espécies bacterianas. Comece fazendo almofadas de agarose para imagens de células vivas. Prepare cerca de 30 mL de solução de agarose de derretimento 1% baixa na água e micro-ondas em um frasco de vidro por cerca de 90 segundos girando-o ocasionalmente até que a agarose seja completamente dissolvida.