Name: Um modelo de interposição venosa de coelho imitando cirurgia de revascularização usando enxertos de veia para avaliar hiperplasia intimal sob pressão arterial (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-15T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Aprenda a criar um modelo de interposição venosa em coelhos para estudar hiperplasia intimal sob pressão arterial. Este protocolo reprodutível auxilia pesquisadores em cirurgia cardiovascular a desenvolver novas estratégias terapêuticas.

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Este trabalho foi apoiado por bolsas de pesquisa do Ministério da Educação, Cultura, Esportes, Ciência e Tecnologia do Japão (25462136).

NOTA: Todos os procedimentos cirúrgicos realizados em animais devem ser realizados de acordo com o Guia de Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (www.nap.edu/catalog/5140.html) ou outras diretrizes éticas adequadas. Os protocolos devem ser aprovados pela comissão de bem-estar animal na instituição apropriada antes de prosseguir.
1. Preparação de animais
<ol><li>Compre coelhos brancos japoneses machos (ou coelhos com tamanho equivalente do corpo) pesando 2,7-3,0 kg.</li>
	<li>Aclimate os coelhos por 1 semana em um ciclo claro-escuro de 12 horas e alimente uma dieta regular de comida de coelho antes do procedimento.</li>
</ol>2. Anestesia e configuração animal
NOTA: Todos os procedimentos subsequentes devem ser realizados sob condições assépticas. O campo cirúrgico e os dispositivos devem ser desinfetados com 10% de solução de povidone-iodo, 70% de álcool ou um composto quaternário de amônio antes do uso.
<ol><li>Anestesiar um coelho com administração intravenosa de sódio pentobarbital (25 mg/kg) através da veia auricular.</li>
	<li>Depois de garantir que o coelho perdeu sua força, transfira-o para uma mesa de operação e coloque-o na posição supina. Cubra o nariz e a boca com uma máscara anestéstica. Iniciar a administração da anestesia geral com a inalação de 0,7-1,0% mistura isoflurano-oxigênio. NOTA: Se o coelho começar a se mover, um surto temporal de isoflurano de até 2% será eficaz.</li>
	<li>Corte a pele no pescoço e no ombro usando um cortador de cabelo elétrico. Depois de desinfetar a superfície pulverizando 70% de etanol ou outra solução antisséptica, raspe o resto do cabelo na região cervical com uma navalha. Desinfete o campo cirúrgico com 10% de povidone-iodo e administre cloridrato de lidocaína (3 mg/kg) subcutâneamente como anestesia local. NOTA: Examine o movimento repetitivo da traqueia. Observe a pulsação da veia jugular e da artéria carótida. Quando as taxas respiratórias e pulsátilas diminuem, considere uma redução temporária na administração da anestesia. Monitorar a saturação percutânea de oxigênio e a freqüência de pulso também é útil. NOTA: O protocolo pode ser pausado aqui.</li>
</ol>3. Colheita da veia jugular
NOTA: Os anestésicos locais (como a lidocaína) devem ser usados antes de fazer a incisão cutânea.
<ol><li>Antes da incisão da pele, administre enrofloxacina profilática (5 mg/kg) subcutâneamente. Para analgesia, administre 0,05 mg/kg de buprenorfina subcutânea duas vezes por dia durante 3 dias. NOTA: Para evitar uma queda na temperatura corporal, pode ser utilizado um esfoliante cirúrgico do local da incisão em vez de pulverizar o corpo do animal com 70% de etanol.</li>
	<li>Incise 50-60 mm da região cervical com bisturi cirúrgico longitudinalmente. Dissecar sem rodeios os tecidos subcutâneos e a fáscia para expor um segmento de 20 a 30 mm da veia jugular. Liga todos os ramos da veia exposta com suturas de seda 4-0.</li>
	<li>Coloque uma sutura de seda 2-0 em torno das veias jugular internas e externas para realizar a ligadura imediatamente após a incisa da veia jugular no próximo passo.</li>
	<li>Incida a parede venosa (aproximadamente 1 mm) do lado distal da veia. Insira um cateter de balão 2-French do corte em direção ao lado proximal da veia. Liga a sutura de seda 2-0 nos locais distais das veias jugularas.</li>
	<li>Infle o balão com 0,2 mL de ar. Desnuda a intimação da veia usando três passagens do cateter para esfoliação endotelial. NOTA: Este procedimento é considerado equivalente à distensão de enxerto de veia safena em cirurgias de revascularização humana, o que causa esfoliação endotelial.</li>
	<li>Liga a extremidade proximal da veia. Corte a veia para colher. NOTA: Distingue cuidadosamente a extremidade distal e proximal da veia colhida, pois a anastomose na artéria deve ser realizada de forma invertida (ou seja, a extremidade distal da veia deve ser anastomosa da extremidade proximal da artéria). Por exemplo, a inserção de um cateter intravenoso de um determinado lado funcionaria como um marcador.</li>
	<li>Para manipulações terapêuticas para a veia jugular colhida, trate a veia colhida com métodos projetados para cada questão de pesquisa (por exemplo, eletroporação26 ou imersão direta com soluções27 para transdutação de microRNAs nas veias). NOTA: Para este protocolo, os enxertos venosos foram embebidos em solução salina tamponada por fosfato, microRNA de controle e microRNA-145. O protocolo pode ser pausado aqui.</li>
</ol>4. Interpor a artéria carótida pela veia jugular colhida
<ol><li>Exponha um segmento de 20 a 30 mm da artéria carótida ipsilateral. Separe a artéria cuidadosamente da veia e nervo próximo. Liga todos os ramos da veia exposta com sutura de seda 4-0.</li>
	<li>Administrar o sódio de heparina por via intravenosa (200 UI/kg). Espere de 3 a 4 min.</li>
	<li>Fixar as extremidades proximal e distal da artéria com grampos cirúrgicos. Corte a artéria no meio, entre os grampos. Injete salina normal na artéria carótida incisiva proximamente e distalmente para distendir a artéria. NOTA: Uma artéria carótida de coelho tende a encolher. Escolha um site bem distendido como um site de anastomose.</li>
	<li>Anastomose a veia colhida para a artéria de uma forma invertida de ponta a ponta.<ol>
<li>Insira um cateter intravenoso de 20 G na veia colhida desde o distal até a direção proximal para manter o lúmen venoso aberto durante a anastomose distal.</li>
		<li>Anastomose a extremidade proximal da veia para a extremidade distal da artéria usando 8-0 suturas interrompidas de polipropileno. Coloque dois estiques de âncora no local e no local oposto. Adicione o lado superior da linha de anastomose entre as estrias de âncora.</li>
		<li>Vire a artéria e o enxerto de veia de cabeça para baixo. Adicione stiches na parte restante da linha de anastomose.</li>
		<li>Retire o cateter intravenoso da veia. Aperte o enxerto venoso proximamente e decline a artéria carótida distalmente. Verifique se o enxerto venoso está se expandindo gradualmente.</li>
		<li>Anastomose a extremidade distal da veia para a extremidade proximal da artéria usando 8-0 suturas interrompidas de polipropileno. Declâmp a artéria para verificar o sangramento dos locais de anastomose. Adicione suturas para hemostasia, se necessário. NOTA: Uma compressão suave do local sangrando com gaze e espera pode ser suficiente para hemostasia. Verifique a expansão imediata e a forte pulsação do enxerto venoso após a depressão proximal. Se isso não for observado, considere repetir as etapas 4.4.2-4.4.3</li>
	</ol>
</li>
	<li>Liga a artéria carótida interna com uma sutura de seda 4-0 para simular uma condição de escoamento ruim e para facilitar a hiperplasia intimal.</li>
	<li>Limpe a ferida com salina. Feche a ferida usando 3-0 poliglactina 910, camada por camada.</li>
</ol>5. Procedimentos pós-operatórios
<ol><li>Acabe com a anestesia e remova a máscara de anestesia depois de verificar a respiração espontânea do animal. Verifique as condições do animal com freqüência até que ele se recupere da anestesia.</li>
	<li>Mantenha o animal separado de outros animais até que a função respiratória seja totalmente restaurada. Apoie a respiração manualmente, se necessário. Não devolva o animal para um grupo maior até a recuperação completa.</li>
	<li>Verifique a ingestão de alimentos e água após a recuperação da anestesia e forneça suporte nutricional adequado. Administrar analgésicos (por exemplo, buprenorfina 0,05-0,2 mg/kg subcutâneamente 2x por dia durante 3 dias) e verificar se há sinais de desconforto ou dor.</li>
</ol>

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<li>de Vries, M. R., Simons, K. H., Jukema, J. W., Braun, J., Quax, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vein+graft+failure%3A+from+pathophysiology+to+clinical+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Vein graft failure: from pathophysiology to clinical outcomes.</a> Nature Reviews Cardiology. 13 (8), 451-470 (2016).</li>
<li>Dietrich, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+development+of+vein+graft+atheroma+in+ApoE-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Rapid development of vein graft atheroma in ApoE-deficient mice.</a> American Journal of Pathology. 157 (2), 659-669 (2000).</li>
<li>Kumar, A., Lindner, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodeling+with+neointima+formation+in+the+mouse+carotid+artery+after+cessation+of+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 17 (10), 2238-2244 (1997).</li>
<li>Lindner, V., Fingerie, J., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+arterial+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse model of arterial injury.</a> Circulation Research. 73 (5), 792-796 (1993).</li>
<li>Moroi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+genetic+deficiency+of+endothelial+nitric+oxide%2C+gender%2C+and+pregnancy+in+vascular+response+to+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (6), 1225-1232 (1998).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para revelar.

O presente protocolo foi projetado para fornecer uma plataforma experimental para testar várias intervenções moleculares ou genéticas para VSMCs para controlar o fenótipo do estado proliferativo para o estado contrátil e, posteriormente, atenuar a progressão da hiperplasia intimal venosa in vivo. Utilizando este modelo, preparamos com sucesso a hiperplasia intimal 2 semanas após a cirurgia (Figura 1A) e indicamos o potencial terapêutico do microRNA-145 para controlar o fenótipo VSMC<sup clas...

O número de pacientes que sofrem de doenças isquêmicas devido à aterosclerose está aumentando em todo o mundo1. Apesar dos atuais avanços em terapias médicas e cirúrgicas para doenças cardiovasculares, as doenças isquêmicas do coração, como o infarto do miocárdio, continuam sendo uma das principais causas de morbidade e mortalidade2. Além disso, as doenças arteriais periféricas caracterizadas pela redução do fluxo sanguíneo para os membros induzem isquemia crítica aos membros, onde aproximadamente 40% dos pacientes perdem as pernas dentro de 6 meses após o diagnóstico, e a taxa de mortalidade é de até 20%3.
Cirurgias de revascularização, como enxerto de bypass da artéria coronária (CABG) e cirurgia de bypass para artérias periféricas, são as principais opções terapêuticas para doenças isquêmicas. O objetivo dessas cirurgias é fornecer uma nova via sanguínea para fornecer fluxo sanguíneo suficiente em direção ao local distal das lesões estenóticas ou ocluídas das artérias ateroscleróticas. Embora enxertos arteriais in situ, como artérias torácicas internas para CABG, sejam preferidos como enxertos de bypass devido à paciência mais longa esperada, enxertos venosos, como veias saphenous autólogas, são comumente utilizados devido à maior acessibilidade e disponibilidade4. O ponto fraco dos enxertos venosos é a baixa taxa de patency em comparação com a dos enxertos de artéria5 devido à hiperplasia intimal acelerada quando submetida à pressão arterial, o que leva à doença do enxerto venoso6.
A doença do enxerto venoso desenvolve-se através dos seguintes três passos: 1) trombose; 2) hiperplasia intimal; e 3) aterosclerose7. Para enfrentar a doença do enxerto venoso, muitas pesquisas básicas têm sido realizadas8. Até agora, nenhuma estratégia farmacológica além de terapias antiplaquetárias e de redução de lipídios são recomendadas para prevenção secundária após cirurgias de revascularização coronariana ou periférica nas diretrizes recentes9,,10,11,12. Assim, para superar a doença do enxerto venoso, especialmente a hiperplasia intimal, é necessário o estabelecimento de uma plataforma experimental relevante para novos estudos.
A hiperplasia intimal é um fenômeno adaptativo que ocorre em resposta à mudança no ambiente, onde as células musculares lisas vasculares (VSMCs) proliferam, se acumulam e geram matriz extracelular no intima. Consequentemente, apresenta uma base para o ateroroma de enxerto7. No hiperplástico intima, os VSMCs suportam a proliferação, e a produção em vez de contração, denominada "mudança phenotípica"8. É um dos principais alvos de pesquisa para controlar o fenótipo dos VSMCs dos enxertos venosos para prevenir a doença do enxerto venoso, e inúmeros estudos básicos têm sido realizados sobre este tema8. No entanto, um estudo clínico controlado randomizado que teve como objetivo alcançar o controle farmacológico do fenótipo VSMC mostrou resultados limitados13. Além disso, não há terapias padronizadas para prevenir hiperplasia intimal. Mais pesquisas básicas, incluindo estudos de modeloanimal, são necessárias.
Para promover pesquisas nesse campo, é fundamental estabelecer um modelo animal que recapitula enxertos venosos sob pressão arterial, permitindo uma observação pós-operatória de longo prazo. Carrel et al. estabeleceram um modelo canino de implantação da veia jugular externa na artéria carótida14. Tem sido utilizada uma variedade de enxertos venosos para investigar os efeitos fisiológicos e patológicos das alterações na pressão arterial, incluindo a veia cava inferior enxertada na aorta torácica ou abdominal, ou a veia safena enenxertada na artéria femoral15,16,17. Esses modelos foram construídos em animais maiores, como porcos ou cães, que são adequados para imitar uma doença do enxerto venoso em um caso clínico. No entanto, o estabelecimento de um modelo animal que possa ser preparado sem técnicas cirúrgicas especiais e a um custo menor seria ideal para pesquisadores que tentam desenvolver uma nova estratégia terapêutica para atenuar a hiperplasia intimal através do controle do fenótipo VSMC in vivo. Inicialmente, foi introduzida a interposição da veia jugular na artéria carótida em um coelho no campo da neurocirurgia18,19. Posteriormente, foi aplicada a pesquisas sobre hiperplasia intimal20,21. O modelo inicial consiste apenas na interposição venosa, economizando tempo. Além disso, um estudo subsequente demonstrou que a preparação de um enxerto venoso também afetou a hiperplasia intimal22. Davies et al. avaliaram o efeito da lesão do cateter de balão na hiperplasia intimal em uma interposição venosa de coelho modelo23,24. Embora a lesão do cateter de balão, além da interposição venosa, tenha sido mais relevante para um ambiente clínico, também foi desejado um modelo mais reprodutível. Assim, Jiang et al. examinaram o impacto dos ambientes de fluxo diferencial na hiperplasia intimal e estabeleceram um procedimento de ligadura de ramo distal como um modelo reprodutível25. No entanto, eles utilizaram uma técnica de punho no momento da interposição do enxerto venoso que parece diferente da anastomose costurada à mão no ambiente clínico. No presente protocolo, relatamos um procedimento reprodutível, clinicamente relevante e amplamente disponível para a preparação de um modelo de interposição venosa de coelho para avaliar a hiperplasia intimal sob pressão arterial.

<table><tbody><tr><td>Solução de iodopovidona a 10%</td><td>Nakakita</td><td>872612</td><td>Consumíveis cirúrgicos</td></tr><tr><td>2-0 VICRYL Plus</td><td>Johnson and Johnson VCP316H</td><td></td><td>Consumíveis cirúrgicos</td></tr><tr><td>4-0 Sutura de seda</td><td>Alfresa pharma</td><td>GA04SB</td><td>Consumíveis cirúrgicos</td></tr><tr><td>8-0 Sutura de polipropileno</td><td>Ethicon</td><td>8741H</td><td>Consumíveis cirúrgicos</td></tr><tr><td>Cefazorin sódico</td><td>Nichi-Iko Pharmaceutical</td><td>6132401D3196</td><td>Antibióticos</td></tr><tr><td>Cateter Fogarty (2Fr)</td><td>Edwards Lifesciences LLC</td><td>E-060-2F</td><td>Descartáveis cirúrgicos</td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Nipro</td><td>873334</td><td>Anticoagulante</td></tr><tr><td>Cateter intravenoso (20G)</td><td>Terumo</td><td>SR-OT2051C</td><td>Descartáveis cirúrgicos</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Fujifilm</td><td>095-06573</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Cloridrato de lidocaína</td><td>MP Biomedicals</td><td>193917</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Pentobarbital sódico</td><td>Indústria Química de Tóquio</td><td>P0776</td><td>Anestesia</td></tr></tbody></table>

um modelo de interposição venosa de coelho imitando cirurgia de revascularização usando enxertos de veia para avaliar hiperplasia intimal sob pressão arterial

A Rabbit Venous Interposition Model Mimicking Revascularization Surgery using Vein Grafts to Assess Intimal Hyperplasia under Arterial Blood Pressure

Embora enxertos venosos tenham sido comumente usados como enxertos autólogos em cirurgias de revascularização para doenças isquêmicas, a patência a longo prazo permanece pobre devido à aceleração da hiperplasia intimal devido à exposição à pressão arterial. O presente protocolo é projetado para o estabelecimento de hiperplasia intimal venosa experimental interpondo veias jugulares de coelho às artérias carótidas ipsilaterais. O protocolo não requer procedimentos cirúrgicos profundos no tronco do corpo e a extensão da incisão é limitada, o que é menos invasivo para os animais, permitindo a observação a longo prazo após a implantação. Este procedimento simples permite aos pesquisadores investigar estratégias para atenuar a progressão da hiperplasia intimal dos enxertos venosos implantados. Utilizando este protocolo, reportamos os efeitos da transdução de microRNA-145 (miR-145), que é conhecida por controlar o fenótipo das células musculares lisas vasculares (VSMCs) do estado proliferativo ao estado contrátil, em enxertos venosos colhidos. Confirmamos a atenuação da hiperplasia intimal dos enxertos venosos através da transdução de miR-145 antes da cirurgia de implantação através da mudança do fenótipo dos VSMCs. Aqui relatamos uma plataforma experimental menos invasiva para investigar as estratégias que podem ser usadas para atenuar a hiperplasia intimal de enxertos venosos em cirurgias de revascularização.

A Figura 1A mostra uma imagem representativa de hiperplasia intimal bem sucedida em 2 semanas após a cirurgia de interposição venosa (painel superior). O painel inferior mostra os efeitos terapêuticos de nanopartículas poli(ácido cogólico- lacótico-co-glicólico) microRNA-145 que atenuaram a hiperplasia intimal (painel inferior). A Figura 1B mostra a comparação da hiperplasia intimal entre o grupo controle utilizando os grupos de controle de solução salina tampon...

O presente protocolo visa criar experimentalmente hiperplasia intimal venosa submetendo veias à pressão arterial arterial para o desenvolvimento de estratégias para atenuar a hiperplasia intimal venosa após cirurgia de revascularização usando enxertos venosos.

Um modelo de interposição venosa de coelho imitando cirurgia de revascularização usando enxertos de veia para avaliar hiperplasia intimal sob pressão arterial

Although vein grafts have been commonly used as autologous grafts in revascularization surgeries for ischemic diseases, the long-term patency remains poor ...

Nosso protocolo fornece um modelo fácil, econômico, reprodutível e clínico relevante para pesquisadores no campo da hiperplasia intimal venosa. Nosso protocolo é economicamente, clinicamente e tecnicamente equilibrado. Portanto, é altamente recomendado para pesquisadores que desejam aplicar seus resultados in vitro a um ambiente in vivo.Acreditamos que nosso protocolo pode ser aplicado a um modelo animal maior para o desenvolvimento de novas estratégias de tratamento em doenças isquêmicas do coração e extremidades inferiores. Nosso protocolo é principalmente relevante para o campo da cirurgia cardiovascular. No entanto, também pode ser usado para lidar com alterações degenerativas nas fístulas arteriovenosas em pacientes com doença renal em estágio terminal.Após anestésico local, e administração analgésico de antibióticos profiláticos, desinfete o local cirúrgico com 10% de povidona-iodo. E faça uma incisão de 50 a 60 milímetros com um bisturi cirúrgico na região cervical do coelho branco japonês anestoetizado. Dissecar sem rodeios os tecidos subcutâneos e a fáscia para expor um segmento de 20 a 30 milímetros da veia jugular.E use suturas de seda 4-0 para ligar todos os ramos da veia exposta. Coloque uma sutura de seda 2-0 ao redor das veias jugulares internas e externas e faça uma incisão de um milímetro na parede venosa do lado distal da veia. Insira um cateter de balão 2-francês do corte em direção ao lado proximal da veia.E ligadurar a sutura de seda 2-0 nos locais distais das veias jugulares. Infle o balão com 200 microliters de ar. E use o balão para desnudar a intima da veia três vezes para esfoliação endotelial.Após a terceira passagem, liga a extremidade proximal da veia e corte a veia no local distal. Em seguida, insira um cateter intravenoso de 20 bitolas na veia colhida do distal para a direção proximal, e corte a veia no local proximal. Para interpor a artéria carótida com a veia jugular da colheita, exponha um segmento de 20 a 30 milímetros da artéria carótida ipsilateral.E separe a artéria cuidadosamente da veia e nervo próximos. Ligate todos os ramos da veia exposta com sutura de seda 4-0. E administre por via intravenosa 200 Unidades Internacionais por quilograma de sódio heparina.Fixar as extremidades proximal e distal da artéria com grampos de borracha cirúrgicos. E corte a artéria entre os grampos. Injete soro fisiológico normal na artéria carótida incisada proximicamente e distally para distend a artéria.E coloque a veia de colheita perto da artéria para anastomose o vaso de uma forma invertida de ponta a ponta. Para anastomose a extremidade proximal da veia até a extremidade distal da artéria, coloque dois pontos de âncora de 8-0 polipropileno no local e no local oposto. Adicione pontos na parte superior da linha de anastomose entre os pontos de âncora.Vire a artéria e o enxerto de veia de cabeça para baixo. E adicione pontos na parte restante da linha de anastomose. Em seguida, remova o cateter intravenoso da veia e fixe o enxerto venoso proximicamente.Declamp a artéria carótida distally. E observe se o enxerto venoso se expande gradualmente. Usando 8-0 polipropileno interrompeu suturas, anastomose a extremidade distal da veia até a extremidade proximal da artéria.E declamp a artéria para verificar o sangramento dos locais de anastomose. Por fim, liga a artéria carótida interna com uma sutura de seda 4-0 para simular uma condição de escoamento ruim e facilitar a hiperplasia intimal. Em seguida, limpe a ferida com soro fisiológico.Feche a incisão com 3-0 poliglactina 910 em camadas. E permitir que o coelho se recupere totalmente com o monitoramento antes de devolver o animal à sua gaiola. Nesta imagem representativa, pode-se observar uma hiperplasia intimal bem sucedida às 2 semanas após a cirurgia de interposição venosa.Aqui, podem ser observados os efeitos terapêuticos das nanopartículas poli(ácido clicíclico-coglicólico) carregadas na morfologia da hiperplasia intimal. De fato, o tratamento com microRNAs carregadas com nanopartículas poli (ácido láctico-coglicólico)resulta em atenuação significativa da hiperplasia intimal. Além disso, a imunostaining para Ki-67, um marcador proliferativo celular, revela menos células Ki-67 positivas dentro do grupo tratado microRNA-145 indicando uma alteração de fenótipo nas células musculares lisas vasculares do estado proliferativo imaturo para o estado contraítil maduro.O principal objetivo do nosso protocolo é alcançar a patência do enxerto implantado. Também é importante confirmar que o enxerto se expande após a declamagem da artéria carótida.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Uma técnica para a criação otimizada microcirúrgica dos aneurismas da bifurcação arterial imitando bifurcação humana aneurismas cerebrais é descrita. Uma bolsa venosa é suturada em uma bifurcação criadas artificialmente verdadeiro de ambas as artérias carótida comum. Técnicas microcirúrgicas facilitado e anticoagulação pós-operatória agressiva e analgesia levar a taxas de morbidade minimizados e bons índices de permeabilidade aneurisma.

Microcirúrgica venoso Bolsa Bifurcação Arterial-aneurismas no Modelo de Coelho: Aspectos Técnicos

Hiperplasia neointimal é a causa principal de estenose nas veias arterializado. Propomos um novo protocolo através do qual a veia jugular externa direita é enxertado por meio da técnica do manguito na artéria carótida comum de ratos Sprague Dawley. A taxa de sobrevivência foi de 100% no ponto de momento de sacrifício.

Treinar um técnica microcirúrgica sofisticado: Interposição de enxerto de veia jugular externa na artéria carótida comum em ratos

Neste vídeo, demonstramos um procedimento para a coleta cirúrgica de um segmento da veia jugular de um modelo de coelho. O segmento ressecado pode ser usado como enxerto de veia autóloga para estudar a hiperplasia intimal que se desenvolve devido à pressão arterial.

Colheita de enxerto de veia jugular de um modelo de coelho: um procedimento cirúrgico para excisão de um segmento de veia jugular de coelho para estudos ex vivo

Este vídeo demonstra a interposição da artéria carótida do coelho com a veia jugular para induzir a hiperplasia intimal venosa ao submeter as veias à pressão arterial. Este modelo ajudará a investigar intervenções moleculares e genéticas para atenuar a progressão da hiperplasia intimal após cirurgias de revascularização.

Interposição de Artéria Carótida e Veia Jugular: Técnica para Induzir Hiperplasia Intimal Venosa em Modelo de Coelho

Fonte: Wanderer, S., et al. Modelo de aneurisma de bifurcação microcirúrgica da bolsa arterial em coelho. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a criação de um modelo experimental de aneurisma em um coelho usando uma bolsa de vaso tratada com elastase. Após a excisão de um segmento da ACC direita, a bolsa é tratada com elastase e, em seguida, suturada à ACC esquerda para restaurar o fluxo sanguíneo. O estresse resultante nas paredes enfraquecidas da bolsa induz a formação de aneurisma.

Desenvolvimento de um modelo experimental de aneurisma em um coelho usando uma bolsa de vaso tratada com elastase

Este vídeo demonstra um modelo para estudar o desenvolvimento de hiperplasia miointimal após cirurgia de interposição venosa em ratos.

Veia Interposição Modelo: Um modelo adequado para estudar Bypass Graft Perviedade

Este método descreve a colocação de enxertos de veia interposição em coelhos, a transdução de enxertos e a realização da expressão do transgene durável. Isso permite que a investigação de papéis fisiológicos e patológicos de transgenes e seus produtos de proteína nas veias transplantadas e teste de terapias do gene para a doença do enxerto de veia.

Um modelo de coelho da expressão do Transgene durável na veia Jugular para enxertos de interposição da artéria carótida comum

Nós descrevemos um procedimento cirúrgico usado para induzir a isquemia periférica nos coelhos com hiperlipidemia e diabetes. Esta cirurgia actua como um modelo pré-clínico para as circunstâncias experimentadas na doença de artéria periférica nos pacientes. A angiografia também é descrita como um meio de medir a extensão da isquemia introduzida e a recuperação da perfusão.

Modelo pré-clínico de isquemia de membros posteriores em coelhos diabéticos

Desenvolver e testar dispositivos endovasculares para tratamento de aneurisma intracraniano ainda é de grande importância. A maioria dos modelos de aneurisma usados hoje sentem falta das características importantes de uma parede arterial degenerada ou da hemodinâmica de uma verdadeira bifurcação. Por isso, buscamos projetar um novo modelo de bifurcação de bolsa arterial em coelhos.

Modelo de Aneurisma de Bifurcação Microcirúrgica arterial no Coelho

Neste protocolo, a nova cirurgia de revascularização do miocárdio foi realizada através de uma pequena incisão na parede torácica esquerda, sem circulação extracorpórea. Foi realizado um estudo anatomopatológico pós-operatório, que mostrou espessamento intimal.

Estabelecimento e Avaliação de um Modelo de Enxerto de Veia Suína

Um modelo animal apropriado é necessário para entender os mecanismos patológicos subjacentes à estenose da valva aórtica (SVA) e avaliar a eficácia das intervenções terapêuticas. O presente protocolo descreve um novo procedimento para o desenvolvimento do modelo de AVS em coelhos através de uma lesão direta por balão in vivo.

Modelo de estenose da valva aórtica de coelho induzida por lesão direta por balão

Aprenda a criar um modelo de interposição venosa em coelhos para estudar hiperplasia intimal sob pressão arterial. Este protocolo reprodutível auxilia pesquisadores em cirurgia cardiovascular a desenvolver novas estratégias terapêuticas.

Um modelo de interposição venosa de coelho imitando cirurgia de revascularização usando enxertos de veia para avaliar hiperplasia intimal sob pressão arterial (Vídeo) | JoVE Journal

Um modelo de interposição venosa de coelho imitando cirurgia de revascularização usando enxertos de veia para avaliar hiperplasia intimal sob pressão arterial

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