Configuração da Espectrometria de Massa de Plasma Acoplada de Eletroforese Capilar (CE-ICP-MS) para quantificação de espécies de redox de ferro (Fe(II), Fe(III))

O ferro excessivo resulta em ferro ativo redox livre dois mais que pode causar efeitos devastadores dentro da célula, como estresse oxidativo e mortes celulares por peroxidação lipídica conhecida como ferroptose. Medições quantitativas de ferro ferro e ferro férrico são a chave para uma visão mais aprofundada desses processos prejudiciais. Esta técnica CE-ICP-Ms fornece ambos:análise rápida e baixos limites de quantificação, que são necessários para quantificar espécies ferro-redox.

Comece selecionando um nebulizador com um baixo volume auto-aspirador e preparando as peças apropriadas para montar a interface caseira. Conecte dois conectores de luer feminino de três vias com um conector luer de cone macho conectando a extremidade esquerda da barra de luer inferior de três vias ao conector masculino e ao conector masculino à conexão média do luer superior de três vias. Em seguida, coloque um tubo de um centímetro sobre o fio de platina e use um tubo de silicone de um centímetro para conectar o primeiro tubo e o bocal de um conector luer masculino.

Fixar o conjunto à conexão média do conector luer inferior de três vias por rotação do parafuso. Empurre um tubo de um centímetro sobre a saída do capilar CE e posicione a oito a nove centímetros da extremidade, em seguida, conecte-o ao bocal do conector luer masculino com um tubo de silicone. Coloque toda a montagem através da barra do conector T superior e fixe o conector luer masculino e a extremidade esquerda do conector luer feminino por rotação do parafuso.

Em seguida, fixar o tubo de silicone de 25 centímetros no bocal de um conector luer masculino e fixar todo o conjunto na parte inferior da barra do conector de isca inferior de três vias. Empurre firmemente o tubo de silicone de um centímetro, cinco milímetros sobre a extremidade do nebulizador. Enquanto o segundo conector de cone luer macho é conectado à parte saliente do tubo.

Mova a parte da interface com o capilar ce saliente para o cone masculino no nebulizador, em seguida, insira cuidadosamente o capilar através do cone masculino e a parte mais larga do capilar nebulizador. Se necessário, ajuste o comprimento do capilar saliente desparafusando o luer masculino esquerdo, movendo o luer com tubos conectados na posição necessária e reinstalando-o. Os conectores luer feminino superior devem caber firmemente no cone masculino.

Quando terminar a configuração proceder com iCP-Ms. Curvas de calibração foram criadas para ferro três e ferro duas espécies redox. Os limites de detecção foram de 3,1 microgramas por litro para ferro dois e 3,2 microgramas por litro para ferro três e a linearidade foi demonstrada até 150 microgramas por litro.

A análise do Sh-SY5Y Cell Lysate mostrou uma migração ligeiramente mais lenta para espécies de redox de ferro devido à condutividade um pouco maior. As concentrações medidas de ferro três e ferro dois foram de 330 microgramas por litro e 84 microgramas por litro, respectivamente. Resultando em uma proporção de ferro de 2 a 3 de 0,25.

O passo mais importante deste protocolo é a cuidadosa inserção do capilar ce saliente através da interface montada e seu posicionamento adequado relacionado ao capilar de nebulizadores. Os métodos aqui apresentados podem se tornar uma ferramenta promissora para aprofundar a visão dos processos moleculares dependentes do ferro. Estudos cuidadosamente projetados são necessários para validar se a quantificação de mais de dois mais de ferro pode servir como um potencial biomarcador para identificar tecidos em risco de danos letais mediados por ferro no contexto de doenças neurodegenerativas e cancerígenas.