Name: Instilação intratraqueal de células-tronco em ratos neonatais de termo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 27 s
Description: Aprenda a instilação intratraqueal de células-tronco mesenquimais em ratos neonatos Sprague-Dawley. Este método permite avaliar a eficácia terapêutica pulmonar de forma direcionada e econômica.

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Este estudo foi parcialmente apoiado por uma subvenção da Meridigen Biotech Co., Ltd. Taipei, Taiwan (A-109-008).

Este procedimento foi aprovado pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Médica de Taipei.
NOTA: Os MSCs humanos foram transfectados com proteína fluorescente verde (GFP) e genes de luciferase de vagalume (Fluc) de uma empresa comercial(Tabela de Materiais).
1. Caracterização de MSCs humanos com luciferase de vagalume e proteína fluorescente verde
<ol><li>Manter os MSCs humanos transfeinados com GFP e Fluc em mídia completa (modificação média-alfa média mínima essencial [αMEM], suplementado com soro bovino fetal de 10-15%, 2 mM L-glutamina, 1ng/mL básico FGF e PSF) a 37 °C com umidade saturada e 5% CO2. Células de passagem a ~70-90% de confluência.</li>
	<li>Observe os MSCs sob um microscópio de contraste de fase fluorescência(Figura 1A) e analise os níveis de expressão de Fluc e GFP14.</li>
	<li>Caracterize os MSCs analisando a expressão de marcadores de CD incluindo CD44, CD73, CD90, CD105 utilizando citometria de fluxo (Figura 1B). Induzir a diferenciação trilineagem de células-tronco a adipócitos, condrócitos e osteocitos, e confirmar a diferenciação de trilineagem(Figura 1C) por von Kossa, óleo vermelho O e manchas azuis alcianas seguindo um protocolo comercial15,,16.</li>
</ol>2. Anesthetização de filhotes de rato
<ol><li>Permita que ratos de Sprague-Dawley, datados do tempo, entreguem vaginalmente a termo.</li>
	<li>Remova os filhotes de rato da gaiola no pós-natal dia 5.</li>
	<li>Anestesia os filhotes de rato usando anestesia gasosa (ou seja, 2% isoflurane) em uma câmara de anestesia.</li>
	<li>Confirme a anestesia adequada verificando a respiração e os reflexos. NOTA: A respiração deve se tornar superficial e os reflexos devem diminuir. Filhotes de rato permanecem inconscientes por pelo menos ~10 minutos com esta concentração de isoflurane.</li>
</ol>3. Instilação intratraqueal
<ol><li>Uma vez anestesiados, contenha os filhotes de rato em uma entubação em ângulo de ~60° e segure os filhotes no lugar com fita de rotulagem de laboratório nos quatro membros.</li>
	<li>Aplique fita abaixo do nariz para fixar a cabeça e identificar o pescoço para perfurar a traqueotomia.</li>
	<li>Desinfete a área de incisão (ou seja, pescoço) com uma almofada de preparação de 75% de álcool.</li>
	<li>Faça uma incisão vertical de 0,3 cm do pescoço médio acima da traqueia com microscisores para evitar danificar as artérias carótidas.</li>
	<li>Disseque as camadas de gordura e músculo para localizar a traqueia com pinças afiladas de ponta curva sem gancho.</li>
	<li>Segure a traqueia com a pinça afilada de ponta curva.</li>
	<li>Segure uma seringa de 100 μL ereto e injete lentamente 30 μL de soro fisiológico normal (ou seja, controle) ou 30 μL de MSCs rotulados fluc-GFP (1 x 105 células) na traqueia através de uma seringa de agulha de 30 G durante a fase inspiratória.</li>
	<li>Feche a incisão com um ponto de seda 6-0, amarre o nó o menor possível e corte as extremidades o mais curto possível.</li>
	<li>Coloque os ratos sob luz infravermelha ou em uma almofada de aquecimento para se manterem aquecidos e permitir que eles se recuperem da anestesia.</li>
	<li>Confirme se os ratos são quentes, rosados e capazes de movimento espontâneo antes de devolver os ratos à gaiola.</li>
</ol>4. Monitorando a distribuição pulmonar de MSCs
<ol><li>Para rastrear os MSCs humanos transplantados, injete intraperitoneally os ratos com sal de potássio de luciferina em soro fisco tamponado de fosfato (PBS) a uma dose de 125 mg/kg de peso corporal 15 min após a injeção de MSC.</li>
	<li>Anestesiar os ratos usando 2% de isoflurane através de cones de nariz.</li>
	<li>Adquira imagens sequenciais em intervalos de 5 a 15 s 10 min após a administração da luciferina com binning médio, 1 f/stop e um campo de visão de 26 cm utilizando um sistema de imagem de pequenos animais(Tabela de Materiais).</li>
	<li>Quantifique a atividade de luminescência dos pulmões com base nas regiões automáticas de interesse utilizando software de imagem (Tabela de Materiais)17.</li>
</ol>

<ol><li>Ramanathan, R., Bhatia, J. J., Sekar, K., Ernst, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+in+preterm+infants+with+respiratory+distress+syndrome+treated+with+poractant+alfa%2C+calfactant+or+beractant%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Mortality in preterm infants with respiratory distress syndrome treated with poractant alfa, calfactant or beractant: a retrospective study.</a> Journal of Perinatology. 33, 119-125 (2013).</li>
<li>Gien, J., Kinsella, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of bronchopulmonary dysplasia.</a> Current Opinion in Pediatrics. 23, 305-313 (2011).</li>
<li>Pasha, A. B., Chen, X. Q., Zhou, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchopulmonary+dysplasia%3A+Pathogenesis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">Bronchopulmonary dysplasia: Pathogenesis and treatment.</a> Experimental and Therapeutic. 16, 4315-4321 (2018).</li>
<li>Committee on Fetus and Newborn. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+corticosteroids+to+treat+or+prevent+chronic+lung+disease+in+preterm+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Postnatal corticosteroids to treat or prevent chronic lung disease in preterm infants.</a> Pediatrics. 109, 330-338 (2002).</li>
<li>Watterberg, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Academy+of+Pediatrics%3B+Committee+on+Fetus+and+Newborn.+Policy+statement-postnatal+corticosteroids+to+prevent+or+treat+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">American Academy of Pediatrics; Committee on Fetus and Newborn. Policy statement-postnatal corticosteroids to prevent or treat bronchopulmonary dysplasia.</a> Pediatrics. 126, 800-808 (2010).</li>
<li>Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marrow+stromal+cells+as+stem+cells+for+nonhematopoietic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Marrow stromal cells as stem cells for nonhematopoietic tissues.</a> Science. 276, 71-74 (1997).</li>
<li>Nemeth, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+stromal+cells+attenuate+sepsis+via+prostaglandin+E%282%29-+dependent+reprogramming+of+host+macrophages+to+increase+their+interleukin-10+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bone marrow stromal cells attenuate sepsis via prostaglandin E(2)- dependent reprogramming of host macrophages to increase their interleukin-10 production.</a> Nature Medicine. 15 (2), 42-49 (2009).</li>
<li>Chou, H. C., Li, Y. T., Chen, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+attenuate+experimental+bronchopulmonary+dysplasia+induced+by+perinatal+inflammation+and+hyperoxia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells attenuate experimental bronchopulmonary dysplasia induced by perinatal inflammation and hyperoxia.</a> American Journal of Translational Research. 8, 342-353 (2016).</li>
<li>Chen, C. M., Chou, H. C., Lin, W., Tseng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surfactant+effects+on+the+viability+and+function+of+human+mesenchymal+stem+cells%3A+in+vitro+and+in+vivo+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Surfactant effects on the viability and function of human mesenchymal stem cells: in vitro and in vivo assessment.</a> Stem Cell Research & Therapy. 8, 180(2017).</li>
<li>Kim, Y. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+simultaneously+attenuates+both+lung+and+brain+injuries+in+hyperoxic+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Intratracheal transplantation of mesenchymal stem cells simultaneously attenuates both lung and brain injuries in hyperoxic newborn rats.</a> Pediatric Research. 80, 415-424 (2016).</li>
<li>Fleurence, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+efficacy+of+intratracheal+adeno-associated+virus+administration+to+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Comparative efficacy of intratracheal adeno-associated virus administration to newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 16, 1298-1306 (2005).</li>
<li>Waszak, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+intratracheal+adenoviral+vector+administration+on+lung+development+in+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effect of intratracheal adenoviral vector administration on lung development in newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 13, 1873-1885 (2002).</li>
<li>O'Reilly, M., Thébaud, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+bronchopulmonary+dysplasia.+The+term+rat+models%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of bronchopulmonary dysplasia. The term rat models.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307, 948(2014).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP+labeling+and+hepatic+differentiation+potential+of+human+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">GFP labeling and hepatic differentiation potential of human placenta-derived mesenchymal stem cells.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 35, 2299-2308 (2015).</li>
<li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8, 315-317 (2006).</li>
<li>Zhang, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+osteogenic+capacity+for+bone+tissue+engineering+of+fetal+compared+with+perinatal+and+adult+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Superior osteogenic capacity for bone tissue engineering of fetal compared with perinatal and adult mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 27, 126-137 (2009).</li>
<li>Huang, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+surfactant+and+budesonide+on+pulmonary+distribution+of+fluorescent+dye+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+and+Neonatology%22%5BJournal%5D)">Effect of surfactant and budesonide on pulmonary distribution of fluorescent dye in mice.</a> Pediatric and Neonatology. 56, 19-24 (2015).</li>
<li>Keyaerts, M., Caveliers, V., Lahoutte, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging%3A+looking+beyond+the+light%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging: looking beyond the light.</a> Trends in Molecular Medicine. 18, 164-172 (2012).</li>
<li>Yeh, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-tracheal+administration+of+budesonide%2Fsurfactant+to+prevent+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intra-tracheal administration of budesonide/surfactant to prevent bronchopulmonary dysplasia.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193, 86-95 (2016).</li>
<li>Nguyen, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+inoculation+of+Fischer+344+rats+with+Francisella+tularensis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intratracheal inoculation of Fischer 344 rats with Francisella tularensis.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56123(2017).</li>
<li>de Almeida, P. E., van Rappard, J. R., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+for+tracking+cell+fate+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence for tracking cell fate and function.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301, 663-671 (2011).</li>
<li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49, 3-10 (2011).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Recém-nascidos com problemas respiratórios comumente requerem surfactante intratraqueal e/ou tratamento corticosteroide199. Ensaios clínicos da fase I humana demonstraram a segurança dos MSCs intratraqueais em bebês prematuros8. Esses estudos sugerem que a administração intratraqueal de medicamentos é uma opção importante para recém-nascidos com dificuldade respiratória. Estudos de modelos animais são mais úteis se as características do modelo forem ...

O oxigênio suplementar é frequentemente necessário para tratar recém-nascidos com problemas respiratórios1. No entanto, a hiperoxiaterapia em bebês tem efeitos adversos a longo prazo. Exposição prolongada a altas concentrações de oxigênio leva a inflamação e lesão pulmonar aguda, semelhante à displasia broncopulmonar humana (BPD)2. A DBP é uma complicação importante do tratamento da hiperoxia que pode ocorrer apesar da terapia surfactante precoce, procedimentos de ventilação ideais e aumento do uso de ventilação de pressão positiva não invasiva em bebês prematuros. Embora muitas estratégias de tratamento tenham sido relatadas para o BPD3,nenhuma terapia conhecida pode reduzir essa complicação.
O uso de corticosteroides é um tratamento potencial para prevenir a DBP, pois a inflamação pulmonar desempenha um papel crucial em sua patogênese. No entanto, a terapia corticosteroide sistêmica não é geralmente recomendada para bebês prematuros devido aos efeitos adversos de longo prazo4,,5.
As células estromamicanas mesenquimais (MSCs) possuem características pluripotentes e podem se diferenciar em vários tipos celulares, incluindo osso, cartilagem, tecido adiposo, músculo e tendões6. Os MSCs têm efeitos imunológicos, anti-inflamatórios e regenerativos7, e estudos em animais mostram os benefícios terapêuticos dos MSCs e seus componentes secretados em lesões pulmonares induzidas por hiperoxia em roedores8,,9. O transplante de MSC intratraqueal e intravenoso tem sido demonstrado para proteger contra lesões pulmonares hiperóxicas neonatais. Portanto, a administração intratraqueal de células-tronco e a terapia combinada de surfactante e corticosteroide podem ser uma estratégia de tratamento potencial para tratar recém-nascidos com distúrbios respiratórios. Estudos pré-clínicos têm utilizado administração intratraqueal de células-tronco e vírus associado ao adeno em ratos recém-nascidos10,,11,,12. No entanto, não está disponível uma apresentação passo a passo da técnica e o rastreamento in vivo das células-tronco transplantadas. O rato recém-nascido é apropriado para estudar os efeitos da administração intratraqueal em bebês prematuros com dificuldade respiratória porque o estágio saccular do pulmão de rato ao nascer é equivalente ao do pulmão humano em 26-28 semanas de gestação13. Um método eficaz de administração na traqueia de ratos é crucial para uma distribuição pulmonar bem sucedida. A técnica aqui apresentada permite o estudo da administração intratraqueal de células e/ou medicamentos para o tratamento de doenças pulmonares neonatais utilizando ratos como modelo para humanos.

<table><tbody><tr><td>6-0 seda</td><td>Ethicon</td><td>1916G</td><td></td></tr><tr><td>Almofada de Preparação de Álcool</td><td>CSD</td><td>3032</td><td></td></tr><tr><td>BD Stemflow hMSC Analysis Kit</td><td>BD Biosciences</td><td>562245</td><td>marcadores de CD</td></tr><tr><td>CMV-Luciferase-EF1&alpha;-copGFP BLIV 2.0 Lentivector para In Vivo Imaging</td><td>SBI</td><td>BLIV511PA-1</td><td></td></tr><tr><td>CryoStor10</td><td>BioLife Solutions</td><td>640222</td><td></td></tr><tr><td>MSCs humanas</td><td>Meridigen Biotech Co., Ltd. Taipei, Taiwan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luz infravermelha</td><td>JING SHANG</td><td>JS300T</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Halocarbono</td><td>26675-46-7</td><td></td></tr><tr><td>IVIS-200 sistema de imagem de pequenos animais</td><td>Caliper LifeSciences, Hopkinton, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sal de potássio luciferina</td><td>Promega, Madison, WI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micro-tesoura, reta</td><td>Vannas</td><td>H4240</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina normal</td><td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td><td>113531</td><td>Solução Isotônica de Cloreto de Sódio</td></tr><tr><td>Agulha RN de Pequeno Cubo, calibre 30</td> Seringa <td>Hamilton Company, Reno, NV</td><td>7799-06</td><td></td></tr><tr><td>(100 &micro; l)</td> <td>Hamilton Company, Reno, NV</td><td>81065</td><td></td></tr><tr><td>Xenogen Living Image 2.5 software</td><td>Caliper LifeSciences, Hopkinton, MA</td><td>N / A</td><td></td></tr></tbody></table>

instilação intratraqueal de células-tronco em ratos neonatais de termo

Intratracheal Instillation of Stem Cells in Term Neonatal Rats

A exposição prolongada a altas concentrações de oxigênio leva a inflamação e lesão pulmonar aguda, que é semelhante à displasia broncopulmonar humana (BPD). Em bebês prematuros, a DBP é uma complicação importante, apesar do uso precoce da terapia surfactante, estratégias ideais de ventilação e ventilação positiva não invasiva. Como a inflamação pulmonar desempenha um papel crucial na patogênese do BPD, o uso de corticosteroides é um tratamento potencial para preveni-la. No entanto, o tratamento corticosteroide sistêmico não é geralmente recomendado para bebês prematuros devido a efeitos adversos a longo prazo. Estudos pré-clínicos e ensaios clínicos da fase I em humanos demonstraram que o uso de células estromais mesenquimais (MSCs) em lesões pulmonares induzidas por hiperoxia e em bebês prematuros é seguro e viável. O transplante de MSC intratraqueal e intravenoso tem sido demonstrado para proteger contra lesões pulmonares hiperóxicas neonatais. Portanto, a administração intratraqueal de células-tronco e o tratamento combinado de surfactante e glicocorticoide surgiu como uma nova estratégia para tratar recém-nascidos com distúrbios respiratórios. O estágio de desenvolvimento dos pulmões de ratos ao nascer é equivalente ao dos pulmões humanos em 26-28 semanas de gestação. Assim, os ratos recém-nascidos são apropriados para estudar a administração intratraqueal para bebês prematuros com dificuldade respiratória para avaliar sua eficácia. Esta técnica de instilação intratraqueal é uma opção clinicamente viável para a entrega de células-tronco e drogas nos pulmões.

A distribuição pulmonar da instilação intratraqueal de células-tronco no termo ratos neonatais foi determinada por células-tronco rotuladas por vagalume (Fluc). Os MSCs foram rotulados com Fluc e marcados com proteína fluorescente verde através da transdução lentiviral. A Figura 1A demonstra um alto nível de expressão de GFP em MSCs humanas, e 93,7% da população apresentou expressão positiva de GFP detectada pela citometria de fluxo. Os MSCs caracterizaram-se pela análise da expressão de mar...

Descrito é um protocolo para a realização de transplante intratraqueal de células estromais mesenquimais (MSCs) através de injeção intratraqueal a termo ratos neonatais. Esta técnica é uma opção clinicamente viável para a entrega de células-tronco e drogas em pulmões de ratos neonatais para avaliar sua eficácia.

Instilação intratraqueal de células-tronco em ratos neonatais de termo

Prolonged exposure to high concentrations of oxygen leads to inflammation and acute lung injury, which is similar to human bronchopulmonary dysplasia ...

A instilação intratraqueal é um biotécnico clínico para o parto de células-tronco e drogas em um pulmão neonatal para avaliar a eficácia de Chilman. Esta técnica pode ser boa fé para uso com uma variedade de aplicação primária em um rato neonatal e é uma medida relativamente fácil e econômica para o tratamento da doença pulmonar. No quinto dia pós-natal, contenha filhotes de rato Sprague-Dawley anestesiados, em uma entubação de 60 graus.E afixar fita de rotulagem de laboratório em todos os quatro membros de cada filhote para fixá-los no lugar. Aplique fita abaixo de cada nariz para fixar as cabeças. E apontou o primeiro pescoço para perfuração traqueotomia.Use uma almofada de preparação de 75% de álcool para desinfetar a área de incisão. E faça uma incisão vertical de 3 centímetros acima da traqueia para evitar danificar as artérias carótidas. Use pinças afiladas curvas sem gancho para dissociar as camadas de gordura e músculo para localizar a traqueia.Quando a traqueia puder ser observada, use a pinça para agarrar a traqueia e use uma seringa de 100 microliteres equipada com uma agulha de calibre 30 para injetar uma vez dez da quinta luciferase de vagalume GFP rotulada células mes

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Avanços significativos na identificação de células-tronco estão sendo continuamente feitos. Para traduzir estas descobertas, no entanto, novos métodos para a entrega de celular devem ser concebidos. Aqui eu relato que as vias aéreas proporcionar uma rota segura para o transplante de células-tronco para os pulmões.

Traqueotomia: Um Método para Transplante de Células-Tronco para o pulmão

Injeções intratraqueais solutos entregar diretamente para os pulmões. Este procedimento visa a entrega do instillate nas regiões distais do pulmão, e é, portanto, muitas vezes incorporadas em estudos que visam estudar alvéolos. Nós fornecemos um protocolo de sobrevivência detalhadas para a realização de injeções intratraqueais em camundongos.

Instilação traqueal direta de Solutos em pulmão de rato

Nós desenvolvemos uma nova abordagem cirúrgica para administração intratraqueal de agentes bioactivos para o feto de rato. A via de entrega é mais eficiente na segmentação dos pulmões do rato fetal do que o normalmente usado injecção intra-amniótica. Este procedimento tem a data ainda não foi descrita em um modelo de rato.

Uma nova abordagem cirúrgica para administração intratraqueal de agentes bioativos em um modelo de camundongo Fetal

Este vídeo demonstra o estabelecimento de infecção pulmonar em um modelo de roedor imunocompetente por meio de intubação e instalação de suspensões bacterianas nos lobos pulmonares. Este modelo permite estudos de eficácia antibacteriana em animais imunocompetentes.

Instilação Intrabrônquica de Streptococcus pneumoniae em Modelos de Roedores Imunocompetentes

Um método para fornecer células-tronco neurais, adaptáveis para soluções ou suspensões injetáveis, através da artéria carótida comum (mouse) ou artéria carótida externa (rato) após o derrame isquêmico ser relatado. As células injetadas são distribuídas amplamente por todo o parenchyma cerebral e podem ser detectadas até 30 d após o parto.

Entrega intra-arterial de células-tronco neurais ao cérebro de ratos e ratos: aplicação à isquemia cerebral

Essa técnica de incutir drogas diretamente na traqueia de roedores neonatais é importante no estudo do impacto de medicamentos ou biológicos administrados localmente em doenças pulmonares neonatais. Além disso, este método também pode ser usado para induzir lesões pulmonares em modelos animais.

Um método minimamente invasivo para a instilação intratraqueal de drogas em roedores neonatais para tratar doenças pulmonares

Este método elimina qualquer invasão importante durante as injeções celulares causadas pela solução de suspensão celular.

Um novo método de injeção de células com invasão mínima

Um método para o isolamento de células-tronco neurais e células progenitoras de oligodendrócitos do cérebro de ratos vivos é apresentado aqui em detalhes experimentais. Permite múltiplas coletas dessas células dos mesmos animais sem comprometer seu bem-estar.

Método "Brain Milking" para o Isolamento de Células-Tronco Neurais e Células Progenitoras de Oligodendrócitos de Ratos Vivos

Este trabalho apresenta um modelo animal de fibrose induzida pela transição endotelial-mesenquimal, como visto em defeitos cardíacos congênitos, como estenose aórtica crítica ou síndrome do coração esquerdo hipoplásico, que permite a avaliação histológica detalhada do tecido, a identificação de vias de sinalização regulatórias e o teste de opções de tratamento.

Modelo de Transplante Cardíaco Heterotópico Neonatal em Rato para Estudo da Transição Endotelial-Mesenquimal

A terapia celular oferece uma intervenção promissora para a fibrose pulmonar usando células progenitoras para reparar tecidos danificados e melhorar a função pulmonar. Como a imagem desempenha um papel fundamental no rastreamento da integração celular, descrevemos o rastreamento in vivo guiado por imagens de partículas magnéticas da terapia celular para fibrose pulmonar em um modelo de camundongo.

Rastreamento in vivo guiado por imagem de células progenitoras epiteliais pulmonares distais transplantadas para fibrose pulmonar usando imagens de partículas magnéticas

Aprenda a instilação intratraqueal de células-tronco mesenquimais em ratos neonatos Sprague-Dawley. Este método permite avaliar a eficácia terapêutica pulmonar de forma direcionada e econômica.

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