Name: Um modelo pré-clínico de impacto cortical controlado para hemorragia traumática, contusão e neuroinflamação (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-10T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Aprenda o modelo de impacto cortical controlado em camundongos para estudar hemorragia traumática, contusão cerebral e neuroinflamação. Este método permite controlar a gravidade da lesão e investigar respostas imunes pós-trauma.

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<li>Chen, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salidroside+improves+behavioral+and+histological+outcomes+and+reduces+apoptosis+via+PI3K%2FAkt+signaling+after+experimental+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Salidroside improves behavioral and histological outcomes and reduces apoptosis via PI3K/Akt signaling after experimental traumatic brain injury.</a> PLoS One. 7 (9), 45763(2012).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Broca Trefina Curta de 4mm</td><td>Salvin Dental Specialties, Inc.</td><td>TREPH-SHORT-4</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo anti-Iba1</td><td>Wako chemicals</td><td>#019-19741</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo anti-Ly76</td><td>abcam</td><td>ab91113</td><td></td></tr><tr><td>cimento carboxilato</td><td>3M</td><td>70201136010</td><td></td></tr><tr><td>impactor de lesão de contusão cortical</td><td>Design personalizado e Fabricação, Inc.</td><td>S/N 49-2004-C, eCCI Modelo 6.3</td><td>Dispositivo CCI (S/N 49-2004-C, eCCI Modelo 6.3)</td></tr> <tr><td>acetato violeta de cresil</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5042</td><td></td></tr><tr><td>DAB kit de coloração</td><td>Vector</td><td>SK-4105</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo secundário IgG de cabra anti-coelho, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11034</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo secundário IgG de cabra anti-rato, Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11007</td><td></td></tr><tr><td>Pinças de Hematoxilina</td><td>ScyTek</td><td>HMM500</td><td></td>de Mayer</tr><tr><td></td><td>ferramentas de ciências finas</td><td>11252-20 NO. 5</td><td></td></tr><tr><td>isoflurano</td><td>Panion & BF Biotech Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaína 0,25%</td> <td>Hospira</td><td></td><td></td></tr><tr><td>carbonato de lítio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>62470</td><td></td></tr><tr>estrutura <td></td><td></td><td></td><td>esteriotexica</td></tr> tesoura tesoura <tr><td></td><td>de ciência fina ferramentas</td><td>14068-12</td><td></td></tr><tr><td>solvente azul 38</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3382</td><td></td></tr></tbody></table>

um modelo pré-clínico de impacto cortical controlado para hemorragia traumática, contusão e neuroinflamação

A Preclinical Controlled Cortical Impact Model for Traumatic Hemorrhage Contusion and Neuroinflammation

Ilustração da colocação estereotáxica e do procedimento de craniotomia.
O modelo CCI é conhecido por sua estabilidade e reprodutibilidade na produção de lesões que variam de leves a graves18. A técnica estereotáxica adequada e o procedimento de craniotomia são os principais determinantes na produção de lesão cerebral induzida por CCI estável e reprodutível (Figura 1A, B). Um procedimento ideal de craniotomi...

Um modelo pré-clínico de impacto cortical controlado para hemorragia traumática, contusão e neuroinflamação

Cerebral contusion is a severe medical problem affecting millions of people worldwide each year. There is an urgent need to understand the ...

Este modelo pode ser utilizado para estudar as patologias associadas à contusão cerebral, incluindo hemorragia intracraniana, toxicidade do ferro, morte de neurônios, lesão axonal, déficit neurológico e inflamação neural. A principal vantagem dessa técnica é que a gravidade do dano cerebral pode ser facilmente controlada pela manipulação dos parâmetros bioquímicos, como velocidade e morte do impacto no dispositivo CCI. A lesão de estilhaçamento cortical focal induzida por CCI é altamente reprodutível.A técnica estereotáxica adequada e o procedimento de craniotomia são os principais determinantes na produção de lesão cerebral induzida por CCI estável e reprodutível. Em geral, o investigador novo no procedimento terá dificuldade em estabilizar o camundongo na estrutura esteriotexica e fazer a craniotomia apropriada. Demonstrando o procedimento estará a Sra. Jhih Shuan Lin, uma técnica de laboratório do meu laboratório.Comece confirmando a falta de reflexo de beliscar o dedo do pé no animal para garantir que ele esteja devidamente anestesiado. Raspe a cabeça do mouse com um cortador elétrico na direção caudal a rostral. Mas não apare os bigodes.Coloque o mouse na estrutura estereotáxica e insira cuidadosamente as barras auriculares nos canais auditivos, certificando-se de que a cabeça do mouse esteja estabilizada por ambas as barras auriculares igualmente. Mantenha a anestesia em um a 2% de isoflurano durante a cirurgia. Aplique vaselina em ambos os olhos para evitar o ressecamento durante a cirurgia.Em seguida, use cotonetes estéreis para desinfetar a cabeça raspada com betadine seguido de etanol a 70%. Administre 100 microlitros de bupivacaína a 0,25% por via subcutânea com uma agulha de insulina de calibre 31 e massageie suavemente o local da injeção para melhor absorção. Faça uma incisão longitudinal ao longo da linha média do couro cabeludo com um bisturi ou tesoura.Em seguida, use um hemostático para puxar a pele para o lado direito. Deixe o crânio exposto secar por um minuto. Em seguida, limpe qualquer sangue residual e tecidos no crânio com um cotonete estéril.Verifique se a cabeça do animal está nivelada no plano horizontal e identifique os pontos anatômicos, Bregma e Lambda, marcando ambos os locais com um lápis. Certifique-se de que a cabeça do animal esteja nivelada na direção rostral-caudal, medindo as coordenadas Z de Bregma e Lambda. Use o mesmo procedimento para posicionar horizontalmente a cabeça.Use uma agulha de insulina de calibre 31 para identificar o local da craniectomia. Defina a origem XY como Bregma e mova lateralmente a agulha três milímetros para a direita. Marque esta posição como o local da craniectomia e desenhe um círculo de quatro milímetros de diâmetro no crânio com um lápis.Corte ao longo do círculo delineado a lápis com uma micro broca de alta velocidade com a trefina para criar um orifício aberto de quatro milímetros de diâmetro. Remova a aba óssea com uma pinça e guarde-a em solução salina normal gelada. Enxágue suavemente o orifício com solução salina antes de aplicar pressão na superfície do cérebro para parar o sangramento.No dispositivo CCI, ajuste a ponta arredondada do pêndulo de 2.5 milímetros de diâmetro para um ângulo de 22.5 graus. Zere a ponta de impacto na superfície dural e defina os parâmetros de impacto na caixa de controle para uma velocidade de quatro metros por segundo e uma profundidade de deformação de dois milímetros. Retraia a ponta de metal.Descarregue o pistão para gerar impactação no cérebro. Em seguida, coloque um cotonete estéril na área lesionada para parar o sangramento. Substitua o retalho ósseo e prenda-o com cimento dentário.Feche o couro cabeludo com adesivo tecidual. Coloque o mouse sob a lâmpada de calor em uma gaiola de recuperação limpa com roupa de cama até a recuperação total. A técnica estereotáxica adequada e o procedimento de craniectomia são os principais determinantes na produção de lesão cerebral induzida por CCI estável e reprodutível.Um procedimento de craniectomia ideal causaria lesão histológica mínima no cérebro operado simuladamente. Alterações no dano cerebral e perda do corpo caloso foram observadas nos dias 1, 3, 7 e 28 após a ICC. Além disso, atrofia cerebral unilateral no lado da contusão foi observada no dia 28 pós-CCI.A neuroinflamação foi revelada pela micróglia ativada positiva para Iba1 e acúmulo de macrófagos ao redor da borda da área de contusão. A hemorragia intraparenquimatosa também foi detectável pela coloração positiva para Ly76 do primeiro ao sétimo dia pós-CCI. Uma mistura de glóbulos vermelhos com morfologia celular rompida e intacta foi observada no sétimo dia pós-ICC, sugerindo que as hemácias foram lisadas neste estágio.Este fenômeno foi consistente com a observação de que a deposição de ferro férrico foi detectável na região de contusão dos dias sete a 28 pós-CCI. Microglia e macrófagos ativados foram observados no estriado longe do local da contusão dos dias três a 28 pós-CCI, indicando lesões do corpo caloso e estriado. Essa técnica abre caminho para o investigador explorar ainda mais a interação neuroinflamatória induzida por hemorragia cerebral por meio da compreensão da resposta das células imunes, como a microglia, após a contusão por hemorragia.

a-preclinical-controlled-cortical-impact-model-for-traumatic

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Lateral fluido percussão (LFP), um modelo estabelecido de lesão cerebral traumática em camundongos, é demonstrada. LFP preenche três critérios principais para modelos animais: relevância, fiabilidade, validade e clínicos. O procedimento, que consiste em craniotomia cirúrgico, a fixação do cubo seguida de indução de lesão, resultando em lesões focais e difusas, é descrito.

Percussão Fluid lateral: Modelo de Lesão em Ratos

Lesões cerebrais traumáticas (TCEs) continuam sendo um sério problema de saúde. Utilizando o modelo de cirurgia de impacto cortical controlado, pesquisas sobre os efeitos do TCE e possíveis métodos de tratamento podem ser realizadas.

Controlado Modelo Impact Cortical para lesão cerebral traumática

Este protocolo demonstra as metodologias para um modelo do rato do ferimento de cérebro traumático do abrir-crânio e a transplantação de pilhas células-derivadas pluripotentes induzidas humanas cultivadas no local da lesão. Os testes comportamentais e histologic dos resultados destes procedimentos são descritos igualmente em breve.

Modelo de impacto cortical controlado da lesão cerebral do rato com transplantação terapêutica de células neurais pluripotentes induzidas humanas da pilha de haste

A alteração do neurotransmissor é um mecanismo de disfunção neural que ocorre após concussão e contribui para as conseqüências de longo prazo, às vezes catastróficas. Este modelo de rato combina microdiálise, permitindo a quantificação do neurotransmissor in vivo, com uma técnica de queda de peso que exerce rápida aceleração e desaceleração da cabeça e tronco, um fator importante do trauma craniocerebral humano.

Um romance e modelo de rato translacional de concussão combinando força e rotação com Microdiálise cerebral in vivo

Aqui nós descrevemos um protocolo para a indução de ferimento de cérebro traumático murino através de um impacto cortical controlado da abrir-cabeça.

Modelo murino de impacto cortical controlado para a indução de traumatismo cranioencefálico

Este protocolo apresenta métodos para caracterizar a resposta neuroinflammatória e hemodinâmica à lesão cerebral traumática leve e integrar esses dados como parte de uma análise de sistemas multivariados utilizando regressão parcial de quadrados.

Análise de Sistemas da Resposta Neuroinflammatória e Hemodinâmica à Lesão Cerebral Traumática

O protocolo descreve traumatismo cranioencefálico leve em modelo de camundongo. Em particular, um protocolo passo-a-passo para induzir um traumatismo cranioencefálico fechado na linha média leve e a caracterização do modelo animal são totalmente explicados.

Modelo de Lesão Cerebral Traumática Leve em Camundongos com Controle Eletromagnético

Aqui, é demonstrado como um modelo de traumatismo cranioencefálico fechado acordado pode ser usado para examinar os efeitos do traumatismo cranioencefálico leve repetido (r-mTBI) na plasticidade sináptica no hipocampo. O modelo replica características importantes do r-mTBI em pacientes e é usado em conjunto com a eletrofisiologia in vitro .

Avaliação das Alterações na Plasticidade Sináptica Utilizando um Modelo de Traumatismo Cranioencefálico Leve

Este protocolo apresenta um modelo de camundongo modificado de lesão cerebral traumática leve repetitiva (rmTBI) induzida por um método de traumatismo cranioencefálico fechado (CHI). A abordagem apresenta uma janela de crânio afinado e percussão de fluido para reduzir a inflamação comumente causada pela exposição às meninges, juntamente com melhor reprodutibilidade e precisão na modelagem de rmTBI em roedores.

Modelo de camundongo modificado de lesão cerebral traumática leve repetitiva incorporando janela de crânio afinado e percussão fluida

Modelos simplificados de traumatismo cranioencefálico (TCE) facilitaram o desenvolvimento de abordagens terapêuticas. Este protocolo descreve a criação de um córtex de camundongo ferido por facada usando agulhas, permitindo a análise de hemorragia e inflamação. O modelo de camundongo TBI com ferida por faca oferece a vantagem de ser realizado sem a necessidade de equipamento especializado.

Modelo de camundongo com ferida por faca para estudar hemorragia e inflamação em lesão cerebral traumática

Aprenda o modelo de impacto cortical controlado em camundongos para estudar hemorragia traumática, contusão cerebral e neuroinflamação. Este método permite controlar a gravidade da lesão e investigar respostas imunes pós-trauma.

Um modelo pré-clínico de impacto cortical controlado para hemorragia traumática, contusão e neuroinflamação

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