Name: Implantação de stents coronários de tamanho humano na aorta abdominal de rato usando um acesso trans-femoral (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-11-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 4 s
Description: Aprenda a implantar stents coronários de tamanho humano na aorta abdominal de ratos por acesso trans-femoral. Este método minimamente invasivo é altamente reprodutível e acessível para pesquisadores com pouca experiência operatória.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Gostaríamos de agradecer à Sra. Angela Freund por sua inestimável assistência técnica com a incorporação e produção de slides. Também gostaríamos de agradecer ao Sr. Tadeusz Stopinski no Instituto de Ciência Animal & Cirurgia Experimental do Instituto de Ciência Animal & Experimental por sua ajuda perspicaz com o trabalho veterinário.

Os experimentos foram realizados de acordo com a Lei Alemã de Bem-Estar Animal (TSchG) e a Diretiva 2010/63/UE relativas à proteção de animais utilizados para fins científicos. A aprovação oficial deste estudo foi concedida pelo Comitê Governamental de Cuidados e Uso de Animais (Protocolo nº: AZ 87-51.04.2010.A065; Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen, Recklinghausen, Alemanha). O protocolo de estudo cumpriu o Guia de Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. O tratamento da dor pós-operatória baseia-se nas recomendações da Sociedade Alemã de Ciência Animal Laboratorial (GV-SOLAS), bem como da Terapia Veterinária da Dor.
1. Técnicas básicas e procedimentos comuns
<ol><li>Use ratos homozigososapoE -/- Ratos Sprague-Dawley. Identificar o genótipo de cada animal usando os métodos padrão17.</li>
	<li>Mantenha os animais em condições idênticas (21 °C ± 2 °C, 60% ± 5% de umidade e um ciclo claro/escuro de 12 horas) e garanta o livre acesso à água e aos alimentos.</li>
	<li>Realizar todos os procedimentos em condições limpas, mas não estésteres.</li>
	<li>Uma vez que o rato é anestesiado, realize todos os procedimentos sob um microscópio cirúrgico em uma ampliação de 16x.</li>
	<li>Use cotonetes de algodão para hemostasia de compressão. Os cotonetes de gaze (5 cm x 5 cm) encharcados com solução de Ringer lactado são úteis para manter a virilha úmida.</li>
	<li>Siga as normas de descarte de resíduos para descartar materiais usados.</li>
</ol>2. Preparações antes da cirurgia
<ol><li>Prepare as drogas veterinárias antes de começar a operação. Mantenha todas as soluções em temperatura ambiente, a menos que seja indicado de outra forma.</li>
	<li>
Trinta minutos antes do procedimento, administre 0,03-0,05 mg/kg buprenorfina subcutânea.
</li>
	<li>Anestesiar o rato com uma injeção intraperitoneal de 100 mg/kg de peso corporal (BW) (S)-cetamina e 8 mg/kg de xilazina BW.</li>
	<li>Avalie o peso do rato usando uma balança de pesagem.</li>
	<li>Coloque o rato em uma almofada de aquecimento e fixe os membros superiores e inferiores usando fita médica. Posicione o rato com seu membro traseiro esquerdo totalmente estendido e o máximo possível de linha com sua coluna vertebral, de modo a criar uma linha reta entre artéria femoral e aorta. Isso facilitará o avanço do stent montado em balão através da bifurcação aórtica.</li>
	<li>Manter anestesia com inalação de 1,5 vol% de isoflurane em 97,5% de oxigênio a uma vazão de 2 L/min. NOTA: Deixe o rato respirar espontaneamente, sem entubação.</li>
	<li>Aplique pomada ocular para evitar danos oculares durante a inconsciência.</li>
	<li>Raspe a pele da virilha e da área inferior do abdômen do rato e esterilize a pele correspondente com uma solução povidone-iodo.</li>
	<li>Antes de iniciar a cirurgia, verifique a profundidade adequada da anestesia beliscando a ponta da cauda e o tecido interdigital.</li>
</ol>3. Cirurgia
<ol><li>Faça uma incisão medial de ~0,5\u20121 cm na virilha esquerda para abrir a pele e a fáscia subjacente.</li>
	<li>Dissecar e sondar sem rodeios nas profundezas até que a artéria femoral esquerda pulsante possa ser identificada.</li>
	<li>Usando fórceps muito finos, prepare a artéria femoral removendo suavemente o tecido conjuntivo circundante. Tenha cuidado para danificar nem o nervo femoral nem a veia femoral, que é medial para a artéria.</li>
	<li>Prepare cerca de 1 cm da artéria femoral. Coloque cuidadosamente a ponta dos fórceps sob o vaso para levantá-la suavemente.</li>
	<li>Roscas de sutura de seda 4-0 sob as partes distal e proximal da artéria e formam slings. Aperte as extremidades de cada um dos dois estilado entre os ramos de um grampo cirúrgico. Use os grampos cirúrgicos para controlar a artéria. Estique suavemente e levante os estilados para interromper temporariamente o fluxo sanguíneo. NOTA: Trabalhe rápido para evitar um torniquete prolongado que possa levar a danos teciduais.</li>
	<li>Usando micro tesoura afiada, realize uma arteriotomia no meio da artéria femoral.</li>
	<li>Introduza um fio guia através da arteriotomia. Ao atingir o sling do fio proximal, solte a tensão da rosca movendo o grampo cirúrgico e avance o fio-guia mais para a aorta abdominal. NOTA: Corte o fio guia usando um cortador de arame para facilitar o manuseio.</li>
	<li>Coloque a extremidade proximal do fio guia entre o diafragma e as artérias renais. NOTA: O avanço do fio-guia é muito longe, traz o risco de lesão aórtica ou cardíaca. Recomendamos abrir o abdômen para garantir o posicionamento adequado do fio guia e do stent pelo menos para os primeiros vários animais.</li>
	<li>Introduza um stent coronário crimped e montado em balão medindo 2,25 mm x 8 mm (máx. 2,5 mm x 8 mm) sobre o fio guia na artéria femoral e avance-o para a aorta abdominal.</li>
	<li>Coloque o stent logo acima da bifurcação aórtica, mas abaixo das artérias renais. Implante o stent inflando o cateter de balão para 12 atm por 15 s usando um sistema de seringa inflacionária.</li>
	<li>Esvazie o cateter de balão e mantenha pressão negativa de acordo com as recomendações do fabricante para o stent em uso.</li>
	<li>Retire lentamente o cateter deflacionado enquanto deixa o stent no lugar.</li>
	<li>Pouco antes de retirar o cateter, crie tensão na alça da rosca acima da incisão com o grampo cirúrgico para interromper novamente o fluxo sanguíneo. Em seguida, remova o cateter do balão e liga diretamente o vaso proximally.</li>
	<li>Amarre os laços proximais e os fios distais para ligar a artéria femoral e confirmar hemostasia adequada da arteriotomia. As artérias colaterais garantirão mais perfusão ao membro.</li>
	<li>Feche o músculo sobrepondo a artéria, bem como a incisão da pele usando suturas não resorbáveis de 10-0.</li>
</ol>4. Cuidados com animais após implantação de stent
<ol><li>Imediatamente após a operação, permita que o rato se recupere por 60 minutos em uma gaiola de unidade de terapia intensiva especial com ar aquecido (30\u201235 °C) e um suprimento de oxigênio.</li>
	<li>Observe os animais cuidadosamente até que esteja totalmente recuperado. Depois, mova os ratos para uma gaiola normal. Fornecer acesso a ad libitum à água e à comida.</li>
	<li>Administrar a analgesia pós-operatória a cada 6-12 horas com 0,03-0,05 mg/kg buprenorfina (s.c., em 500μl NaCl) para um total de 72 horas sob avaliação clínica.</li>
	<li>Tenha o alimento misturado com clopidogrel (15 mg/kg) para evitar trombose do stent implantado.</li>
	<li>Para melhorar as condições hipercolesterolômicas e a formação de placas, inicie a alimentação dietética ocidental em 6\u20128 semanas após o nascimento e continue até a eutanásia. Se desejar, uma coorte de animais alimentados com comida normal de ratos pode servir de controle.</li>
</ol>5. Coleta e processamento de tecidos
<ol><li>Antes de iniciar a explantação do tecido no ponto de tempo designado, eutanize o animal de acordo com as diretrizes da IACUC. Colher a aorta stented para análise histológica no final do período de observação.</li>
	<li>Abra o abdômen por uma incisão midline e remova o segmento stent da aorta, bem como partes não-stentadas adjacentes da aorta, medindo 0,5 cm cada.</li>
	<li>Coloque o tecido em uma solução de formalina tamponada de 4% por 24 horas para fixação.</li>
	<li>Incorporar o tecido arterial stent em plástico e realizar coloração histológica e imunohistoquímica de acordo com os protocolos padrão18,19.</li>
</ol>6. Análise histomorfométrica
<ol><li>Realize a análise histomorfométrica de seções sequenciais da parte proximal, média e distal da aorta stented por meio de um microscópio ligado a um computador com um software de análise de imagem apropriado.</li>
	<li>Traçar os contornos da lâmina elástica externa (EEL, entre adventitia e mídia), lamina elástica interna (IEL, entre mídia e neointima), e lúmen com um tablet gráfico de desenho. A partir desses valores, calcule a área de EEL, área de IEL e área de lúmen com o software.</li>
	<li>Calcular a porcentagem de reenose de área transversal no stent (ISR): <img alt="Fórmula de cálculo ISR, equação para análise da área médio-intimal, pesquisa vascular." src="/files/ftp_upload/61442/61442equ01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Equation 1">
</li>
	<li>Calcular a área neointimal total (Ai): <img alt="A&lt;sub&gt;i&lt;/sub&gt; = fórmula da área do IEL / área do lúmen; diagrama para análise da estrutura vascular." src="/files/ftp_upload/61442/61442equ02.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Equation 2">
</li>
	<li>Meça a espessura neointimal (NIT) sobre cada suporte de stent como a distância entre strut e lúmen. Meça o NIT entre os suportes de stent como a distância entre IEL e lúmen. NOTA: Alternativamente, calcule o NIT como <img alt="Fórmula de cálculo NIT, equação mostrando a relação do índice de tração em estudos de ciência de materiais" src="/files/ftp_upload/61442/61442equ03.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Equation 3"> onde PL e PIEL são o lúmen e perímetro interno elástico de lamina,respectivamente 20.</li>
	<li>Realizar análises adicionais de acordo com os requisitos do estudo.</li>
</ol>

<ol><li>Patel, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ACC%2FAATS%2FAHA%2FASE%2FASNC%2FSCAI%2FSCCT%2FSTS+2017+Appropriate+Use+Criteria+for+Coronary+Revascularization+in+Patients+With+Stable+Ischemic+Heart+Disease%3A+A+Report+of+the+American+College+of+Cardiology+Appropriate+Use+Criteria+Task+Force%2C+American+Association+for+Thoracic+Surgery%2C+American+Heart+Association%2C+American+Society+of+Echocardiography%2C+American+Society+of+Nuclear+Cardiology%2C+Society+for+Cardiovasular+Angiography+and+Interventions%2C+Society+of+Cardiovascular+Computed+Tomography%2C+and+Society+of+Thoracic+Surgeons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">ACC/AATS/AHA/ASE/ASNC/SCAI/SCCT/STS 2017 Appropriate Use Criteria for Coronary Revascularization in Patients With Stable Ischemic Heart Disease: A Report of the American College of Cardiology Appropriate Use Criteria Task Force, American Association for Thoracic Surgery, American Heart Association, American Society of Echocardiography, American Society of Nuclear Cardiology, Society for Cardiovasular Angiography and Interventions, Society of Cardiovascular Computed Tomography, and Society of Thoracic Surgeons.</a> Journal of the American College of Cardiology. 69 (17), 2212-2241 (2017).</li>
<li>Virmani, R., Farb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+in-stent+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Lipidology%22%5BJournal%5D)">Pathology of in-stent restenosis.</a> Current Opinion in Lipidology. 10 (6), 499-506 (1999).</li>
<li>Buccheri, D., Piraino, D., Andolina, G., Cortese, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+and+managing+in-stent+restenosis%3A+a+review+of+clinical+data%2C+from+pathogenesis+to+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Disease%22%5BJournal%5D)">Understanding and managing in-stent restenosis: a review of clinical data, from pathogenesis to treatment.</a> Journal of Thoracic Disease. 8 (10), 1150-1162 (2016).</li>
<li>Perkins, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+models+of+restenosis+and+their+application+in+the+evaluation+of+drug-eluting+stent+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Preclinical models of restenosis and their application in the evaluation of drug-eluting stent systems.</a> Veterinary Pathology. 47 (1), 58-76 (2010).</li>
<li>Kim, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathologic+analysis+of+in-stent+neointimal+regression+in+a+porcine+coronary+model%5BTitle%5D)+AND+%22Coronary+Artery+Disease%22%5BJournal%5D)">Histopathologic analysis of in-stent neointimal regression in a porcine coronary model.</a> Coronary Artery Disease. 11 (3), 273-277 (2000).</li>
<li>Plump, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+hypercholesterolemia+and+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice+created+by+homologous+recombination+in+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Severe hypercholesterolemia and atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice created by homologous recombination in ES cells.</a> Cell. 71 (2), 343-353 (1992).</li>
<li>Breslow, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mouse+models+of+lipoprotein+metabolism+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Transgenic mouse models of lipoprotein metabolism and atherosclerosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (18), 8314-8318 (1993).</li>
<li>Knowles, J. W., Maeda, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+modifiers+of+atherosclerosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Genetic modifiers of atherosclerosis in mice.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 20 (11), 2336-2345 (2000).</li>
<li>Wheeler, J. B., Mukherjee, R., Stroud, R. E., Jones, J. A., Ikonomidis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+of+murine+thoracic+aortic+structural+and+cellular+changes+with+aging+to+passive+and+active+mechanical+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Relation of murine thoracic aortic structural and cellular changes with aging to passive and active mechanical properties.</a> Journal of the American Heart Association. 4 (3), 001744(2015).</li>
<li>Rodriguez-Menocal, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+in-stent+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of in-stent restenosis.</a> Atherosclerosis. 209 (2), 359-366 (2010).</li>
<li>Langeveld, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+abdominal+aorta+stenting%3A+a+new+and+reliable+small+animal+model+for+in-stent+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Rat abdominal aorta stenting: a new and reliable small animal model for in-stent restenosis.</a> Journal of Vascular Research. 41 (5), 377-386 (2004).</li>
<li>Oyamada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-iliac+rat+aorta+stenting%3A+a+novel+high+throughput+preclinical+stent+model+for+restenosis+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Trans-iliac rat aorta stenting: a novel high throughput preclinical stent model for restenosis and thrombosis.</a> Journal of Surgical Research. 166 (1), 9(2011).</li>
<li>Touchard, A. G., Schwartz, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+restenosis+models%3A+challenges+and+successes%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Preclinical restenosis models: challenges and successes.</a> Toxicologic Pathology. 34 (1), 11-18 (2006).</li>
<li>Wei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+E-deficient+rats+develop+atherosclerotic+plaques+in+partially+ligated+carotid+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein E-deficient rats develop atherosclerotic plaques in partially ligated carotid arteries.</a> Atherosclerosis. 243 (2), 589-592 (2015).</li>
<li>Zhao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperlipidemia+induces+typical+atherosclerosis+development+in+Ldlr+and+Apoe+deficient+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Hyperlipidemia induces typical atherosclerosis development in Ldlr and Apoe deficient rats.</a> Atherosclerosis. 271, 26-35 (2018).</li>
<li>Ekuni, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occlusal+disharmony+accelerates+the+initiation+of+atherosclerosis+in+apoE+knockout+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids+in+Health+and+Disease%22%5BJournal%5D)">Occlusal disharmony accelerates the initiation of atherosclerosis in apoE knockout rats.</a> Lipids in Health and Disease. 13 (144), 13(2014).</li>
<li>Bhattacharya, D., Van Meir, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+genotyping+method+to+detect+small+CRISPR-Cas9+induced+indels+by+agarose+gel+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A simple genotyping method to detect small CRISPR-Cas9 induced indels by agarose gel electrophoresis.</a> Scientific Reports. 9 (1), 39950(2019).</li>
<li>Malik, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravascular+stents%3A+a+new+technique+for+tissue+processing+for+histology%2C+immunohistochemistry%2C+and+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Heart%22%5BJournal%5D)">Intravascular stents: a new technique for tissue processing for histology, immunohistochemistry, and transmission electron microscopy.</a> Heart. 80 (5), 509-516 (1998).</li>
<li>Kumar, A. H., McCauley, S. D., Hynes, B. G., O'Dea, J., Caplice, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+protocol+for+processing+stented+porcine+coronary+arteries+for+immunostaining%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Histology%22%5BJournal%5D)">Improved protocol for processing stented porcine coronary arteries for immunostaining.</a> Journal of Molecular Histology. 42 (2), 187-193 (2011).</li>
<li>Jiang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+vein+graft+model%3A+adaptation+to+differential+flow+environments%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">A novel vein graft model: adaptation to differential flow environments.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 286 (1), 18(2004).</li>
<li>Cornelissen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+E+deficient+rats+generated+via+zinc-finger+nucleases+exhibit+pronounced+in-stent+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein E deficient rats generated via zinc-finger nucleases exhibit pronounced in-stent restenosis.</a> Scientific Reports. 9 (1), 54541(2019).</li>
<li>Ritskes-Hoitinga, M. G. T., Jensen, T. L., Mikkelsen, L. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRitskes-Hoitinga%2C+MGT+%22The+Laboratory+Mouse+%28Second+Edition%29%22">The Laboratory Mouse (Second Edition)</a>. , Elsevier Academic Press. Chapter 4.3 567-599 (2012).</li>
<li>Rune, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+Western+diet+fed+apolipoprotein+E-deficient+rats+exhibit+only+modest+early+atherosclerotic+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Long-term Western diet fed apolipoprotein E-deficient rats exhibit only modest early atherosclerotic characteristics.</a> Scientific Reports. 8 (1), 23835(2018).</li>
<li>Daemen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+late+coronary+stent+thrombosis+of+sirolimus-eluting+and+paclitaxel-eluting+stents+in+routine+clinical+practice%3A+data+from+a+large+two-institutional+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Early and late coronary stent thrombosis of sirolimus-eluting and paclitaxel-eluting stents in routine clinical practice: data from a large two-institutional cohort study.</a> Lancet. 369 (9562), 667-678 (2007).</li>
<li>Cornelissen, A., Vogt, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+stenting+on+coronary+endothelium+from+a+molecular+biological+view%3A+Time+for+improvement%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">The effects of stenting on coronary endothelium from a molecular biological view: Time for improvement.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (1), 39-46 (2019).</li>
<li>Mori, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+mechanisms+of+left+main+stent+failure%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Pathological mechanisms of left main stent failure.</a> International Journal of Cardiology. 263, 9-16 (2018).</li>
<li>Wolinsky, H., Glagov, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+abdominal+and+thoracic+aortic+medial+structure+in+mammals.+Deviation+of+man+from+the+usual+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Comparison of abdominal and thoracic aortic medial structure in mammals. Deviation of man from the usual pattern.</a> Circulation Research. 25 (6), 677-686 (1969).</li>
<li>Lowe, H. C., James, B., Khachigian, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+in-stent+restenosis%3A+rat+aortic+stenting%5BTitle%5D)+AND+%22Heart%22%5BJournal%5D)">A novel model of in-stent restenosis: rat aortic stenting.</a> Heart. 91 (3), 393-395 (2005).</li>
<li>Unthank, J. L., Nixon, J. C., Lash, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+adaptations+in+collateral+and+microvascular+resistances+after+ligation+of+the+rat+femoral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Early adaptations in collateral and microvascular resistances after ligation of the rat femoral artery.</a> Journal of Applied Physiology. 79 (1), 73-82 (1985).</li>
<li>Nevzati, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradable+Magnesium+Stent+Treatment+of+Saccular+Aneurysms+in+a+Rat+Model+-+Introduction+of+the+Surgical+Technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Biodegradable Magnesium Stent Treatment of Saccular Aneurysms in a Rat Model - Introduction of the Surgical Technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (128), e56359(2017).</li>
<li>Aquarius, R., Smits, D., Gounis, M. J., Leenders, W. P. J., de Vries, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+diverter+implantation+in+a+rat+model+of+sidewall+aneurysm%3A+a+feasibility+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+NeuroInterventional+Surgery%22%5BJournal%5D)">Flow diverter implantation in a rat model of sidewall aneurysm: a feasibility study.</a> Journal of NeuroInterventional Surgery. 10 (1), 88-92 (2018).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Este protocolo descreve a implantação de stents coronários de tamanho humano na aorta abdominal de apoE-/- ratos. Vários pontos técnicos merecem ser enfatizados. Primeiro, deve ser evitada uma incompatibilidade entre o tamanho do stent e o tamanho da aorta. Colocar um stent muito pequeno pode levar à malapa do stent, enquanto a implantação de um stent muito grande para a aorta pode causar excesso de alongamento, rasgos e ferimentos do vaso. Por isso, recomendamos o uso de stents entre 2,0 e 2,5 mm de diâmetro,...

A intervenção coronária percutânea (ICI), combinada com a implantação de um stent coronário, representa o padrão-ouro no tratamento intervencionista da doença arterial coronariana1. O sucesso a longo prazo dos stents, no entanto, pode ser limitado pela ocorrência de restenose in-stent (ISR) que é determinada por uma proliferação excessiva de tecido neointimal dentro do stent2,3. O ISR pode exigir uma nova intervenção com bypass da artéria coronária ou re-PCI. Uma variedade de modelos animais foram sugeridos para o estudo do ISR, cada um deles apresentando vantagens e deficiências. As principais desvantagens dos modelos de artérias ilíacas suínos mais utilizados e coelhinhos, embora desenvolvendo lesões marcadamente semelhantes aos humanos após a implantação do stent4,5, são grandes custos de animais e habitação que trazem dificuldades logísticas especialmente em estudos de longo prazo, bem como limitações no manuseio e equipamentos. Além disso, a disponibilidade de anticorpos para proteínas celulares de suínos e coelhos é limitada. Por outro lado, os modelos murine proporcionam as principais vantagens do alto rendimento e reprodutibilidade, bem como a facilidade de manuseio, moradia e, portanto, custo-efetividade. Além disso, um maior número de anticorpos estão disponíveis. No entanto, enquanto os camundongos deficientes e-deficientes de apolipoproteína (apoE-/-) camundongos têm sido amplamente utilizados para o estudo da aterosclerose6,7,8, eles são inadequados para o estudo do ISR, pois os stents devem ser miniaturizados para serem implantados em camundongos, potencialmente mudando as propriedades mecânicas dos stents. Além disso, a parede aórtica de camundongos mede entre 50 μm em camundongos jovens e 85 μm em camundongos antigos9, e os stents devem ser implantados usando níveis de pressão tão baixos quanto 2 atm, o que pode levar à malapposição do stent10. Os ratos, no entanto, permitem a implantação de stents coronários humanos disponíveis comercialmente, e demonstram um curso de cura vascular semelhante a animais maiores após a implantação do stent aórtico, relatado pela primeira vez por Langeveld et al.11. Esta técnica originalmente exigia um acesso trans-abdominal, o que exigia uma constrição física da aorta para conseguir uma interrupção temporária do fluxo sanguíneo. Para evitar a lesão potencialmente associada do vaso e reações inflamatórias, a técnica foi posteriormente refinada pela introdução de um acesso transilílico, o que resultou, além disso, em uma maior taxa de sobrevivência dos animais12.
Como ratos de tipo selvagem não desenvolvem lesões ateroscleróticas13, apoE-/- ratos foram gerados usando técnicas de nuclease como Transcription Activator-Like Effector Nuclease (TALEN)14, Clustered Regularmente Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR/Cas9)15, e Zinc Finger (ZF)16. ApoE-/- ratos estão disponíveis comercialmente desde 2011. Fornecendo um fundo atherogênico, os ratos apoEpermitem uma avaliação mais realista dos stents coronários do tamanho humano, especialmente no que diz respeito ao ISR.
Aqui, descrevemos o método através da rota de acesso transfemoral e usando um stent de eluição de drogas de cobalto-cromo (DES) comercialmente disponível, no entanto, também pode ser aplicado para o estudo de outros tipos de stent, como stents metálicos nus (BMS) ou stents biodegradáveis.

<table><tbody><tr><td><forte>Dieta</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SNIFF Dieta rica em gordura + Clopidogrel (15 mg/kg)</td><td>SNIFF Spezialdi&auml; ten GmbH, Soest</td><td>preparado sob medida</td><td>Western Diet</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Drugs and Anesthetics</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Essex Pharma</td><td>997.00.00</td><td></td></tr><tr><td>ISOFLO (Isoflurane Vapor) vaporizador</td><td>Eickemeyer</td><td>4802885</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Forene Abbott</td><td>B 506</td><td></td></tr><tr><td>Solução isotônica (0,9%) de NaCl</td><td>DeltaSelect GmbH</td><td>PZN 00765145</td><td></td></tr><tr><td>Solução de lactato de Ringer</td><td>Baxter Deutschland GmbH</td><td>3775380</td><td></td></tr><tr><td>(S)-cetamina</td><td>CEVA Alemanha</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xilazina</td><td>Medistar Alemanha</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><forte>Consumíveis</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seringas de 10 mL</td><td>BD Plastipak</td><td>4606108V</td><td></td></tr><tr><td>Seringas de 2 mL</td><td>BD Plastipak</td><td>4606027V</td><td></td></tr><tr><td>6-0 sutura de prolene</td><td>ETHICON</td><td>N-2719K</td><td></td></tr><tr><td>4-0 sutura de seda</td><td>Seraflex</td><td>IC 158000</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen Pomada para Olhos e Nariz</td><td>Bayer Vital GmbH</td><td>6029009.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Cotonetes de gaze de algodão</td><td>Fuhrmann GmbH</td><td>32014</td><td></td></tr><tr><td>Fita de seda Durapore</td><td>3M</td><td>1538-1</td><td></td></tr><tr><td>Solução de desinfecção da pele com poliálcool</td><td>Anti-séptica GmbH</td><td>72PAH200</td><td></td></tr><tr><td>Agulha Sterican 18 G</td><td>B. Braun</td><td>304622</td><td></td></tr><tr><td>Agulha Sterican 27 3/4 G</td><td>B.Braun</td><td>4657705</td><td></td></tr><tr><td>Papel de seda</td><td>disponível</td><td></td> <td>comercialmente</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><forte>Instrumentos cirúrgicos</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinça Graefe curvada x1</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>11151-10</td><td></td></tr><tr><td>Graefe fórceps em linha reta</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulhas Mathieu</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Semken</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>11008-13</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica pequena curvada</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>14029-10</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica pequena reta</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps padrão padrão</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>Tesouras de mola Vannas</td><td>Fine Science Tools Inc.</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de dissecação</td><td>Leica MZ9</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Almofada de aquecimento com temperatura controlada</td><td>Sygonix</td><td>26857617</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Equipamento para implantação de stent</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stent farmacológico Xience 2,25mm x 8mm</td><td>Abbott Vascular USA</td><td>1009544-18</td><td></td></tr><tr><td>Fio-guia Fielder XT PTCA fio-guia: 0,014" x 300cm</td><td>ASAHI INTECC CO., LTD Japão</td><td>Sistema de</td> seringa de insuflação AGP140302 <td></td></tr><tr><td></td><td>Abbott 20/30 Priority Pack</td><td>1000186</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Processamento e análise de tecidos</ forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>30% H2O2</td><td>Roth</td><td>9681</td><td>Histologia</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Roth</td><td>K928.1</td><td>Histologia</td></tr><tr><td>Giemsas Azur-Eosina-Methylenblau</td><td>Merck</td><td></td><td>109204 Histologia</td></tr><tr><td>Tablet de Desenho Gráfico</td><td>WACOM Europe GmbH CTL-6100WLK-S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Roti Histofix, Formaldeído 4% tamponado</td><td>Roth</td><td>P087</td><td>Histologia</td></tr><tr><td>Technovit 9100</td><td>Morphisto</td><td>12225.K1000</td><td>Histologia</td></tr></tbody></table>

implantação de stents coronários de tamanho humano na aorta abdominal de rato usando um acesso trans-femoral

Implantation of Human-Sized Coronary Stents into Rat Abdominal Aorta Using a Trans-Femoral Access

A intervenção coronária percutânea (ICI), combinada com a implantação de um stent coronário, representa o padrão-ouro no tratamento intervencionista da doença arterial coronariana. A restenose in-stent (ISR) é determinada por uma proliferação excessiva do tecido neointimal dentro do stent e limita o sucesso a longo prazo dos stents. Uma variedade de modelos animais têm sido usados para elucidar processos fisiopatológicos subjacentes à restenose de stent (ISR), sendo o coronário suíno e os modelos de artéria ilíaca de coelho sendo os mais utilizados. Os modelos murinos oferecem as vantagens de alta produtividade, facilidade de manuseio e habitação, reprodutibilidade e ampla disponibilidade de marcadores moleculares. O modelo de camundongos deficientes apolipoprotein E (apoE-/- ) tem sido amplamente utilizado para estudar doenças cardiovasculares. No entanto, os stents devem ser miniaturizados para serem implantados em camundongos, envolvendo mudanças importantes de suas propriedades mecânicas e (potencialmente) biológicas. O uso de apoE-/- ratos podem superar essas deficiências como apoE-/- ratos permitem a avaliação de stents coronários de tamanho humano e, ao mesmo tempo, fornecendo um fenótipo aterogênico. Isso faz deles um modelo excelente e confiável para investigar isr após a implantação do stent. Aqui, descrevemos, em detalhes, a implantação de stents coronários humanos comercialmente disponíveis na aorta abdominal de ratos com um apoE-/- fundo usando um acesso trans-femoral.

Este protocolo descreve a implantação de stent na aorta abdominal de ratos utilizando uma rota de acesso trans-femoral(Figura 1). O primeiro ponto central deste modelo animal é que ele permite a implantação de stents coronários de tamanho humano. Um stent coronário comercialmente disponível e montado em balão pode ser colocado na aorta abdominal de ratos. Assim, além disso, o mesmo princípio de implantação de stent como em humanos pode ser aplicado. Outra vantagem do uso de ratos é a disponi...

Este protocolo descreve a implantação de stents coronários humanos na aorta abdominal de ratos com um apoE-/- fundo usando um acesso trans-femoral. Em comparação com outros modelos animais, os modelos murinos carregam as vantagens da alta produtividade, reprodutibilidade, facilidade de manuseio e habitação, e uma ampla disponibilidade de marcadores moleculares.

Implantação de stents coronários de tamanho humano na aorta abdominal de rato usando um acesso trans-femoral

Percutaneous coronary intervention (PCI), combined with the deployment of a coronary stent, represents the gold standard in interventional treatment of ...

Este protocolo utiliza um modelo animal para estabelecer um método acessível para caracterizar os efeitos dos stents coronários humanos na patologia vascular. As principais vantagens do nosso modelo são que é minimamente invasivo, altamente reprodutível e facilmente realizado mesmo por pesquisadores com pouca experiência operatória. Demonstrando o procedimento estará Roberta Florescu, médica do nosso laboratório.Após esse procedimento, outras ferramentas de diagnóstico clínico e patológico podem ser utilizadas, como tomografia de coerência óptica ou análise histológica. Depois de confirmar a falta de resposta ao reflexo pedal em um rato adulto anestesiado, coloque o rato em uma almofada de aquecimento em decúbito dorsal com o membro posterior direito totalmente estendido e alinhado com a coluna vertebral e fixe os membros superiores e inferiores com fita adesiva. Aplique pomada nos olhos do animal e raspe o pelo da virilha e da parte inferior do abdômen.Em seguida, esterilize a pele exposta com uma solução de iodopovidona. Para o implante do stent, faça uma incisão medial de 0,5 a um centímetro na virilha direita para abrir a pele e a fáscia subjacente e disseque e sonde o tecido até que a artéria femoral esquerda pulsante seja localizada. Usando uma pinça muito fina, remova suavemente o tecido conjuntivo ao redor da artéria e insira cuidadosamente a parte superior da pinça sob o vaso.Passe pedaços de sutura de seda 4-0 sob as partes distal e proximal da artéria para formar fundas e prenda as extremidades de cada uma das duas fundas de fios entre os ramos de uma pinça cirúrgica. Use as pinças cirúrgicas para controlar a artéria e estique e levante suavemente a artéria para interromper temporariamente o fluxo sanguíneo. Usando uma microtesoura afiada, execute rapidamente a arteriotomia no meio da artéria femoral e introduza um fio-guia na arteriotomia.Quando a tipoia do fio proximal for alcançada, mova a pinça cirúrgica para liberar a tensão do fio e avance o fio-guia em direção à aorta abdominal. Introduza um stent coronário de 2,25 por oito milímetros crimpado e montado em balão sobre o fio-guia na artéria femoral. Avance o stent para a aorta abdominal até que esteja logo acima da bifurcação aórtica, mas abaixo das artérias renais.Quando o stent estiver no lugar, use um sistema de seringa de insuflação para inflar o cateter de balão até sua pressão nominal. Após 15 segundos, esvazie o cateter-balão e mantenha a pressão negativa de acordo com as recomendações do fabricante para o stent em uso. Em seguida, retire lentamente o cateter desinflado, deixando o stent no lugar.Pouco antes de remover o fio-guia, use a pinça cirúrgica para criar tensão no laço rosqueado acima da incisão para interromper o fluxo sanguíneo e remover o fio-guia. Ligue diretamente o vaso proximalmente e amarre as alças de rosca proximal e distal para ligar a artéria femoral. Em seguida, confirme a hemostasia adequada da arteriotomia e use suturas não reabsorvíveis de 6-O para fechar o músculo que recobre a artéria e a incisão da pele.Nesta análise representativa, stents coronários de tamanho humano foram implantados com sucesso sem nenhum sinal de má aposição ou lesão do vaso. Ratos homozigotos knockout para apolipoproteína E desenvolveram hiperplasia neointimal acentuadamente elevada e reestenose intra-stent em comparação com ratos do tipo selvagem. Embora o fundo nocaute da apolipoproteína E torne os animais mais suscetíveis à aterosclerose, nenhuma placa aterosclerótica antecedente foi observada nesses ratos.Selecionar o tamanho adequado do stent para cada animal e usar ratos pesando mais de 500 gramas para o implante do stent coronário humano são fundamentais para o sucesso do procedimento.

implantation-human-sized-coronary-stents-into-rat-abdominal-aorta

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Aqui, descrevemos um procedimento de cirurgia cardíaca para implante de engenharia de tecidos na atrioventricular (AV)-groove de um rato Lewis adulto.

Implantação de engenharia de tecidos no coração de ratos

Este vídeo demonstra como usar um modelo pré-clínicos de baixo custo e confiável para o estudo de processos Pathobiological e fisiopatológicos da intra-stent desenvolvimento de reestenose. Longitudinal monitorização in vivo utilizando OCT (Optical Coherence Tomography) e análise de imagens de outubro também são demonstrados.

Reestenose imagem In-Stent: Um Barato, modelo confiável, rápida e pré-clínicos

Este vídeo demonstra o modelo de transplante ortotópico aórtica como um modelo simples para estudar o desenvolvimento de vasculopatia do transplante (TVP) em ratos.

Transplante ortotópico de aorta: um modelo de rato para estudar o desenvolvimento de vasculopatia crônica

Este vídeo mostra um modelo para estudar o desenvolvimento da hiperplasia intimal após a implantação stent utilizando um recipiente humano (IMA) em um modelo murino imunodeficientes.

Humanos da artéria mamária interna (IMA) Transplante e implante de stent: um modelo humano para estudar o desenvolvimento de reestenose intra-stent

Um modelo de implante de stent na artéria carótida do rato é descrito. Comparado com outros métodos similares, este procedimento é muito rápido, simples e acessível, oferecendo a possibilidade de estudar em uma forma conveniente a reação da parede vascular para diferentes stents farmacológicos e os mecanismos moleculares de reestenose.

Um modelo murino de implante de stent na artéria carótida para o Estudo da reestenose

Modificações histológicas e bioquímicas após aneurisma endograft exclusão ainda não são claras. Descreve-se um novo modelo de implantação de endoprótese em aneurisma murino. Através da análise de trombo com e sem circulação persistente interface de fluxo de sangue, e nova avaliação biomateriais endovascular, este modelo vai ajudar a entender melhor endovascular pathobiology exclusão do aneurisma.

Um novo modelo murino de reparação endovascular de aneurisma da aorta

Reproduzido de modelos animais experimentais são necessários para o teste de materiais de embolização de romance, que foi criadas para tratar de oclusão endovascular de aneurisma intracraniana (IA). O presente estudo tem como objetivo desenvolver uma técnica cirúrgica segura e padronizada para stent assistida embolização de aneurisma sacular em um modelo animal de rato.

Tratamento de Stent biodegradável magnésio de aneurisma sacular em um modelo do rato - introdução da técnica cirúrgica

Aqui, apresentamos um método eletrofiação modificado para fabricar enxertos vasculares PCL com fibras grossas e poros dilatados e descrever um protocolo para avaliar o desempenho na vivo em um modelo do rato de substituição da aorta abdominal.

Implantação de enxertos vasculares Electrospun com estrutura otimizada em um modelo do rato

Descrevemos uma técnica nova, econômica e eficiente para a entrega percutânea de implantes coronários impressos tridimensionalmente para criar modelos suínos de peito fechado de doenças cardíacas isquêmicas. Os implantes foram fixados no local usando um cateter de extensão mãe e filho com alta taxa de sucesso.

Nova abordagem percutânea para implantação de implantes de estenose coronária impressa 3D em modelos suínos de doença cardíaca isquêmica

Este trabalho apresenta um modelo animal de fibrose induzida pela transição endotelial-mesenquimal, como visto em defeitos cardíacos congênitos, como estenose aórtica crítica ou síndrome do coração esquerdo hipoplásico, que permite a avaliação histológica detalhada do tecido, a identificação de vias de sinalização regulatórias e o teste de opções de tratamento.

Modelo de Transplante Cardíaco Heterotópico Neonatal em Rato para Estudo da Transição Endotelial-Mesenquimal

Este protocolo descreve um procedimento cirúrgico minimamente invasivo para bandagem da aorta ascendente em suínos.

Modelo Minimamente Invasivo de Estenose Aórtica em Suínos

Aprenda a implantar stents coronários de tamanho humano na aorta abdominal de ratos por acesso trans-femoral. Este método minimamente invasivo é altamente reprodutível e acessível para pesquisadores com pouca experiência operatória.

Implantação de stents coronários de tamanho humano na aorta abdominal de rato usando um acesso trans-femoral

Explorar mais vídeos