Name: Preparação de Microambientes de Matriz Extracelular Incapaz para avaliar especificação de fenótipo celular schwann (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-02T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: Aprenda a preparar microambientes de matriz extracelular para avaliar a especificação do fenótipo de células de Schwann. Este método controla rigidez, composição proteica e morfologia celular de forma económica.

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Os autores agradecem o apoio ao financiamento da Universidade de Cincinnati. Os autores também agradecem a Ron Flenniken, do laboratório de Caracterização de Materiais Avançados da Universidade de Cincinnati, pelo apoio.

Nenhum potencial conflito de interesses foi relatado pelos autores.

As SCs podem promover a regeneração nervosa devido à sua transformação fenotípica e potencial regenerativo após lesão nervosa. No entanto, a forma como as sugestões de ECM regulam essa capacidade regenerativa permanece em sua maioria incerta, potencialmente dificultando não apenas o desenvolvimento de biomateriais que visam promover a regeneração nervosa, mas também a compreensão dos mecanismos envolvidos na regeneração nervosa. Para começar a examinar essa interação, substratos de cultura celular foram criados onde pist...

As lesões do sistema nervoso periférico (PNS) continuam sendo um grande desafio clínico na saúde, comprometendo a qualidade de vida dos pacientes e criando um impacto significativo através de uma infinidade de fatores socioeconômicos1,2. As células schwann (SC), como as principais células gliais da PNS, fornecem sinais moleculares e físicos necessários para induzir a regeneração da PNS e auxiliar em recuperações funcionais em lesões de curto espaço. Isso se deve à notável capacidade dos SCs de dediferentes em um fenótipo celular de "reparação" de um fenótipo de mieliagem ou remak3. O reparo SC é um fenótipo celular distinto de várias maneiras. Após a lesão, as SCs aumentam sua taxa de proliferação reentrando no ciclo celular e iniciam a expressão de vários fatores transcricionais para facilitar a reinervação. Esses fatores, como c-Jun e p75 NTR, são regulados, enquanto os marcadores de SC de mielin, como a proteína básica de mielina (MBP), estão abaixo da regulação4,,5. Além disso, os SCs mudam a morfologia para se alongarem e se alinharem entre si para formar bandas de Büngner em todo o local da lesão6. Isso fornece um mecanismo de orientação física para que os axônios se estendam até o alvo distal correto7. No entanto, apesar da capacidade que as SCs possuem para promover a regeneração nervosa em lesões de curto espaço de espaço, o resultado da recuperação funcional permanece ruim em lesões graves. Isso se deve, em parte, à perda de pistas de orientação da matriz extracelular (ECM), bem como à incapacidade das SCs de manter o fenótipo regenerativo por longos períodos de tempo8.
O processo de regeneração nervosa e recuperação estão intimamente ligados ao estado da lamina basal após lesão. A lamina basal é uma camada de ECM em torno do nervo que facilita a orientação e fornece pistas vinculadas ao ECM para axônios e SCs nos casos em que permanece intacta após a lesão9. O estado do ECM e sua capacidade de entregar pistas ligadas à matriz às células é de vital importância e já foi explorado anteriormente em uma variedade de diferentes contextos10,11,,12,,13,14. Por exemplo, foi demonstrado que a rigidez do ECM pode orientar funções celulares como proliferação e diferenciação11,,15,,16. A composição do ECM também pode levar a uma resposta celular distinta e regular comportamentos celulares como migração e diferenciação através de vias de sinalização intracelular17,18. Além disso, a morfologia celular, incluindo a expansão da área e o alongamento celular, desempenham um papel importante na regulação da função e podem ser regidas pelas pistas vinculadas ao ECM19,,20. Muitos estudos anteriores se concentraram em células-tronco que se diferenciam em linhagens definidas, mas as SCs possuem uma capacidade semelhante de alterar o fenótipo de um HOMEOSTático, adulto SC dentro de um nervo saudável, para um SC reparador capaz de segregar proteínas e fatores de crescimento enquanto remodelam o ECM após lesão nervosa5,,21. Portanto, é especialmente crucial identificar mecanismos subjacentes à relação entre a capacidade regenerativa de SC inata e as pistas vinculadas ao ECM para que a percepção exaia essa capacidade de regeneração nervosa.
Para lidar com isso, desenvolvemos uma metodologia detalhada para produzir um substrato de cultura celular onde rigidez mecânica e tipo de ligante podem ser facilmente sintonizados em faixas fisiologicamente relevantes. O siloxano de polidimtil (PDMS) foi escolhido como substrato devido à sua mecânica altamente tíclica em comparação com o gel de poliacrilamida, onde o módulo máximo de Young é em torno de 12 kPa contrastado com PDMS em torno de 1000 kPa22,23,,24. Isso é benéfico para o trabalho em questão, pois estudos recentes mostraram que o módulo de um nervo ciático de coelho pode exceder 50 kPa durante o desenvolvimento, sugerindo assim que a gama de rigidez dos nervos dentro da PNS é maior do que o examinado anteriormente. Diferentes proteínas são capazes de adsorção em substratos PDMS para analisar a regulação combinatória de mecânica e ligantes sobre o comportamento de SC. Isso permite a investigação de múltiplas pistas microambientais presentes no processo de regeneração da PNS e comparação de um alto grau de sintonia com o trabalho com foco apenas na rigidez do substrato25. Além disso, esses substratos de cultura celular projetada são compatíveis com uma infinidade de métodos de análise quantitativa, como imunohistoquímica, mancha ocidental e reação quantitativa em cadeia de polimerase (q-PCR).
Esta plataforma de cultura celular projetada é altamente adequada para analisar caminhos mecanicistas devido ao alto nível de sintonia individual de cada sinal vinculado ao ECM. Além disso, métodos populares para micropatterning celular, incluindo impressão de microcontatos, podem ser alcançados nos substratos para permitir a adesão celular controlada para analisar a forma celular em relação a outras pistas ligadas ao ECM24. Isso é fundamental porque substratos padronizados de linha, que promovem o alongamento em populações celulares, fornecem uma ferramenta para imitar e estudar SCs alongados e regenerativos dentro de bandas Büngner durante a regeneração nervosa. Além disso, a morfologia celular é um potente regulador de múltiplas funções celulares e pode potencialmente introduzir resultados experimentais confusos se não for controlada26,27. Atenção significativa está sendo dada aos mecanismos que regem o fenótipo regenerativo de SC, conforme regulado pelas sugestões ECM28,,29,,30. Isso é essencial para fornecer uma visão sobre o desenho de biomateriais que podem ser aplicados como conduítes de orientação nervosa para auxiliar na regeneração nervosa da PNS. Esses protocolos detalhados podem, em última análise, ser aplicados como uma ferramenta potencial para decifrar os mecanismos de SC e outros tipos de células funcionam conforme regulado por pistas vinculadas ao ECM.

<table><tbody><tr><td>Albumina do soro bovino (BSA), conjugado vermelho do Texas</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A23017</td><td>Coloração BSA para mostrar micropadrões</td></tr><tr><td>IgG anti-camundongo, tecnologia de sinalização celular de anticorpo ligada a HRP</td><td></td><td>7076S</td><td>Anticorpo usado para análise de western blot</td></tr><tr><td>IgG anti-coelho, tecnologia de sinalização celular de anticorpo ligada a HRP</td><td></td><td>7074S</td><td>Anticorpo usado para análise</td></tr> <tr><td>de western blotReagente BrdU</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B23151</td><td>usado para medir a proliferação celular</td></tr><tr><td>Anticorpo primário BrdU conjugado com Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B35130</td><td>Usado para visualizar BrdU em ensaios de proliferação celular</td></tr><tr><td>Colágeno I</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A10483-01</td><td>Proteína usada para revestir lamínulas</td></tr><tr><td>Máquina de teste de força de compressão</td><td>TestResources</td><td></td><td>Instrumento para quantificar as propriedades mecânicas de polímeros</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11965092</td><td>Cell culture medium</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum Thermo</td><td>Fisher</td><td>Scientific 16000044</td><td>Cell culture medium suplementar</td></tr><tr><td>Fibronectina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>33010-018</td><td>Proteína usada para revestir lamínulas</td></tr><tr><td>Fluorescência microscópio</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti2</td><td>Microscópio de fluorescência</td></tr><tr><td>Halt Protease e Inibidor de Fosfatase Coquetel (100X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>78440</td><td>Inibidor de Protease e Fosfatase</td></tr><tr><td>Laminina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23017015</td><td>Proteína usada para revestir lamínulas Meio de</td></tr><tr><td>montagem com DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36971</td><td>Montagem de lamínula e coloração de núcleos</td></tr><tr><td>Anticorpo primário c-Jun de camundongo</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>711202</td><td>Anticorpo primário para visualizar a proteína c-Jun</td></tr><tr><td>Anticorpo primário de camundongo &beta;-actina</td><td>Tecnologia de sinalização celular</td><td>3700S</td><td>Controle de carga para experimentos de western blot</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>Meio de cultura de células suplementar</td></tr><tr><td>Photoresist SU 2010</td><td>KAYAKU</td><td>SU8-2010</td><td>Photoresist</td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P-2443</td><td>Bloco de ligação a proteínas não específicas</td></tr><tr><td>Anticorpo primário c-Jun de coelho</td><td>Tecnologia de sinalização</td> celular <td>9165S</td><td>Anticorpo primário para visualização da proteína c-Jun</td></tr><tr><td>Anticorpo primário da proteína básica de mielina de coelho</td><td>Abcam</td><td>ab40390</td><td>Anticorpo primário para visualização de </td></tr><tr>Tecnologia preliminar <td>8238S</td><td>da sinalização de pilha</td> do<td>anticorpo do coelho p75NTR</td> de MBP <td>Anticorpo preliminar para a visualização da faloidina da rodamina de p75NTR</td></tr><tr><td></td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R415</td><td>Visualização do</td></tr><tr><td>amortecedor de</td><td>Abcam abcam</td><td>ab156034</td> da <td>lise da pilha do amortecedor</td></tr><tr><td>RT4-D6P2T Schwann da linha celular</td><td>ATCC</td><td>CRL-2768</td> da lise da pilha <td>usada dentro experimentos</td></tr><tr><td>SYLGARD 184 PDMS base e agente de cura</td><td>Sigma Aldrich</td><td>761036</td><td>Polímero ajustável usado para revestir lamínulas</td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15090-046</td><td>Reagente de dissociação celular</td></tr><tr><td>UV-Ozônio limpador</td><td>Novascan</td><td></td><td>Aumentar a hidrofilia do PDMS</td></tr><tr><td>Versene (1x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15040066</td><td>Dissociação celular Reagente</td></tr></tbody></table>

preparação de microambientes de matriz extracelular incapaz para avaliar especificação de fenótipo celular schwann

Preparation of Tunable Extracellular Matrix Microenvironments to Evaluate Schwann Cell Phenotype Specification

Atualmente, as lesões traumáticas do sistema nervoso periférico (PNS) não possuem tratamentos adequados para recuperar a recuperação funcional completa. As células schwann (SCs), como as principais células gliais da PNS, desempenham um papel vital na promoção da regeneração da PNS, dediferindo-se em um fenótipo celular regenerativo após a lesão. No entanto, o estado dediferenciado das SCs é desafiador para manter-se durante o período de tempo necessário para a regeneração e é impactado por mudanças na matriz extracelular circundante (ECM). Portanto, determinar a interação complexa entre SCs e ECM diferente para fornecer pistas de potencial regenerativo das SCs é essencial. Para lidar com isso, foi criada uma estratégia onde diferentes proteínas ECM foram adsorvidas em um substrato de polidimetilatilaxitano (PDMS) que forneceu uma plataforma onde a rigidez e a composição proteica podem ser moduladas. As SCs foram semeadas nos substratos tunable e foram medidas funções celulares críticas que representam a dinâmica do fenótipo de SC. Para ilustrar a interação entre a expressão proteica SC e a morfologia celular, foram utilizadas diferentes densidades de semeadura de SCs, além de padrões celulares impressos em microcontatos individuais e caracterizados pela coloração da imunofluorescência e mancha ocidental. Os resultados mostraram que as células com menor área de disseminação e maior extensão do alongamento celular promoveram níveis mais elevados de marcadores fenotípicos regenerativos de SC. Essa metodologia não só começa a desvendar a relação significativa entre o ECM e a função celular das SCs, mas também fornece diretrizes para a otimização futura de biomateriais na reparação do nervo periférico.

Para analisar e quantificar a interação entre rigidez do substrato e composição proteica no fenótipo de SC, foi desenvolvido um substrato de cultura celular PDMS tunable(Figura 1A). Testes de compressão do polímero em base diferente: foram utilizadas relações de agente de cura para quantificar o módulo do Jovem (E) do substrato(Figura 1B). A faixa resultante de valores de módulo representa condições de substrato fisiologicamente relevantes. Após a preparação dos...

Esta metodologia visa ilustrar os mecanismos pelos quais pistas de matriz extracelular, como rigidez do substrato, composição de proteínas e morfologia celular regulam o fenótipo de células schwann (SC).

Preparação de Microambientes de Matriz Extracelular Incapaz para avaliar especificação de fenótipo celular schwann

Traumatic peripheral nervous system (PNS) injuries currently lack suitable treatments to regain full functional recovery. Schwann cells (SCs), as the ...

Este protocolo fornece uma plataforma de cultura celular onde as propriedades da matriz extracelular, como rigidez, composição de proteínas e morfologia celular podem ser precisamente controladas de forma econômica e fácil. O método é econômico e não requer treinamento especial ou instalações. Também é compatível com múltiplos métodos de quantificação celular, como coloração imunofluorescente e mancha ocidental.Esta técnica fornece uma compreensão mecanicista da biologia celular de Schwann. Com informações adicionais sobre o projeto de biomateriais para a regeneração do sistema nervoso, ele pode ser aplicado a qualquer célula dependente de ancoragem. A parte mais desafiadora deste protocolo é a impressão de microcontatos.Antes do início do protocolo, a impressão de microcontato no substrato utilizando um florescente para marcar a proteína para verificar visualmente a impressão final ao padrão. Comece misturando vigorosamente o elastômero base PDMS e os agentes de cura com uma ponta de pipeta até que as bolhas sejam dispersas homogêneamente dentro da mistura. Em seguida, remova as bolhas com desiccação a vácuo.Coloque uma gota da mistura PDMS dessecada em um deslizamento de cobertura quadrado ou circular, e gire a tampa em um revestimento de giro a 2.500 rpm por 30 segundos. Incubar a tampa em um forno a 60 graus Celsius, por uma a duas horas, ou à temperatura ambiente durante a noite. Para preparar um substrato micro padronizado, coloque um wafer de silício padronizado dentro de um diâmetro circular de 150 milímetros por placa de Petri de 15 milímetros de altura e despeje PDMS desa gás no wafer.Solidificou o PDMS em um forno a 60 graus Celsius durante a noite. Deixe o PDMS esfriar até a temperatura ambiente. Em seguida, use um bisturi cirúrgico para cortar selos de 30 por 30 milímetros quadrados contendo os padrões corretos tomando cuidado para não danificar o wafer de silício.Esterilize os selos PDMS e os deslizamentos de cobertura ajustáveis, imergindo-os em 70% de etanol por 30 minutos. Para confirmar a eficácia do micropattern, seque a superfície dos selos PDMS usando um fluxo de ar filtrado e pipeta 15 microgramas por solução BSA mililitro para cobrir todo o lado padronizado do selo. Incubar os selos com a solução BSA por uma hora à temperatura ambiente para permitir a adsorção de proteínas e, em seguida, secar os selos para remover a solução BSA.Use o fluxo de ar filtrado para secar a superfície dos deslizamentos de cobertura ajustáveis. Coloque o lado padronizado do selo em contato conformal com o deslizamento de cobertura afinado para permitir a adsorção de BSA na superfície do deslizamento de cobertura e pressione suavemente o carimbo contra o deslizamento de tampas por cinco minutos. Examine o micropattern usando um microscópio de fluorescência com um filtro FITC.Para imprimir áreas adesivas celulares em vez de padrões fluorescentes substituem a laminina pela proteína BSA. Remova os selos dos deslizamentos de cobertura e transfira os deslizamentos de cobertura em uma placa de seis poços esterilizada. Adicione dois mililitros de solução F-127 plurônica de 0,2% em cada poço para cobrir a superfície do deslizamento de cobertura e incubar a placa por uma hora em temperatura ambiente.Aspirar a solução F-127 e lavar a tampa desliza cinco vezes com PBS, uma vez com o meio de cultura celular, em seguida, semeou as células Schwann a uma densidade de semeadura de 1000 células por centímetro quadrado. 45 minutos após a semeadura celular, remova o meio de cultura celular e lave os deslizamentos de tampa duas vezes com PBS para evitar que várias células aderam ao mesmo padrão. Mantenha as células no ambiente de cultura celular desejada por 48 horas antes da quantificação.Para criar substratos de cultura celular padrão de linha para examinar células alinhadas, faça os selos de acordo com as instruções do manuscrito e corte-os para as dimensões desejadas. Prepare duas placas de Petri revestidas com uma superfície PDMS ajustável como descrito anteriormente, e realize a impressão de microcontatos para imprimir áreas adesivas de células com padrão de linha em um dos pratos. Depois de remover os selos, encha a placa de Petri com quatro mililitros de solução F-127 plurônica de 0,2% e incuba-a por uma hora.Enxágüe cada lado do selo PDMS três vezes com 70% de etanol e seque-o com ar. Gire os selos PDMS e imprima a área adesiva celular não despachada na segunda placa de Petri, como descrito anteriormente. Depois de incubar os pratos com a solução F-127, retire a solução e lave os pratos três vezes com PBS e uma vez com meio de cultura celular fresca.Em seguida, as células de sementes nos pratos, e mantê-las nas condições desejadas por 48 horas antes de preparar os lises. Para preparar os lises, lave as células com PBS gelado por dois minutos, depois adicione 80 microliters de solução RIPA, preparada de acordo com as instruções do manuscrito, em cada área adesiva celular, e incuba as células em um bloco de gelo por 25 minutos. Raspe as células Schwann com o raspador de células por cinco minutos e colete o lysate em um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro rotulado.Centrifugar o lysate por 15 minutos a 12 mil vezes G e quatro graus Celsius. Colete o supernatante e transfira-o para um tubo de microcentrifuuge limpo. Substratos revestidos de laminina resultaram em uma maior taxa de proliferação quando comparados com substratos revestidos de colágeno e fibronectina.Células schwann em substratos com revestimento de laminina e moduli diferente mostraram que substratos relativamente mais suaves diminuíram as taxas de proliferação celular. As células também foram analisadas para expressão proteica. O fator transcricional c-Jun foi regulado à medida que os substratos se tornaram mais suaves.No entanto, foi significativamente rebaixado nos substratos mais suaves. Em substratos rígidos, substratos revestidos de colágeno resultaram na maior expressão c-Jun, à medida que os substratos se tornaram mais macios, laminina mostrou os níveis mais altos de c-Jun. As células foram então manchadas com rhodamina-phalloidin para explorar o papel da expansão celular e área na expressão c-Jun.Quando linhas de adesivo celular foram criadas nos substratos da cultura celular, a proporção nuclear das células semeadas no substrato padrão aumentou em comparação com a das células em substratos não padronizados. A expressão do receptor de neurotropfina c-Jun e p75 foi regulada em células densas com uma área de expansão menor. Células com padrão de linha também resultaram em uma expressão mais elevada de c-Jun e p75 NTR quando comparadas com células não padronizadas.As geometrias adesivas de células impressas em microcontato foram criadas para controlar precisamente a área de expansão celular e o alongamento, eliminando as interações celular-célula. O aumento da proporção celular fez com que o alongamento nuclear aumentasse. A expressão de c-Jun foi regulada tanto pelo alongamento celular quanto pela inibição da propagação celular.A coloração da imunofluorescência para os núcleos e a actina confirmou que a área de disseminação celular e o alongamento foram precisamente controlados através deste método de micropatterning. Esta técnica abriu uma maneira de usar nossos substratos tunable como um método para analisar mecanicamente a biologia celular schwann e a sinalização no contexto de regeneração e câncer.

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Demonstramos como dissecar e cultura pinto gânglio statoacoustic E4 e E6 explantes medula espinhal. Explantes são cultivados sob condições sem soro em gel de colágeno 3D por 24 horas. Neuritos resposta é testado com o meio do fator de crescimento suplementado com proteína e revestido contas.

Dissecção e Cultura do Gânglio pintainho Statoacoustic e Explantes da Medula Espinhal em géis de colágeno para Ensaios crescimento de neuritos

Um método de triagem combinatória funcional para obtenção de conhecimentos sobre os impactos da composição molecular de microambientes sobre as funções celulares é descrito. O método tira partido de microarray existentes baseados em tecnologias para gerar matrizes de microambientes definidos combinatórias que suportam a adesão de células e análise funcional.

Fabricação e uso de microarranjos microambiente (MEArrays)

Este vídeo demonstra um método para obter células semelhantes a células de Schwann a partir de células estromais da medula óssea (BMSCs) multipotentes. Inicialmente, as BMSCs passam por tratamento de hipóxia, seguido de diferenciação direcionada em células progenitoras neuronais. Posteriormente, condições específicas de meio e cultura são empregadas para induzir a transformação dessas células progenitoras em células semelhantes a células de Schwann.

Geração de células semelhantes a células de Schwann a partir de células estromais da medula óssea

O vídeo demonstra a co-cultura de neurônios do gânglio da raiz dorsal (DRG) com células de Schwann. Os neurônios DRG são cultivados primeiro em uma membrana pré-esticada para o crescimento do axônio alinhado. As células de Schwann são então introduzidas, que se ligam aos axônios, isolando-os e promovendo a sobrevivência e a função das células neurais.

Co-cultura de células de Schwann com neurônios DRG em uma membrana pré-esticada

O vídeo descreve a preparação de um substrato micropadronizado para estudar a especificação do fenótipo celular. Um carimbo PDMS micropadronizado revestido de proteína é usado para transferir o micropadrão em uma lamínula revestida com PDMS. A lamínula é então tratada com um surfactante para impedir a adesão celular nas superfícies indesejadas. As células são então adicionadas para se estabelecer no padrão e incubadas para análise posterior.

Preparação de um substrato micropadronizado para estudar fenótipos de células de Schwann

Aqui descrevemos uma célula de Schwann (SC) ensaio de migração em que SCs são capazes de desenvolver ao longo dos axônios estendem.

Analisando o desenvolvimento de células de Schwann Murino Junto axônios em crescimento

A transição epitelial para mesenquimal (EMT) permite que os cânceres se tornem invasivos. Para investigar a EMT, é descrito um modelo in vitro baseado em células-tronco neurais (NSC) desprovido de soro e enzimas. Este sistema padronizado permite a avaliação quantitativa e qualitativa da migração celular, expressão gênica e proteica. O modelo é adequado para a descoberta de medicamentos.

Um Modelo de enzimas e Cultura de Células-Tronco Neural Serum-livre para EMT Investigation Adequado para Drug Discovery

Este protocolo descreve o isolamento de neurônios do gânglio da raiz dorsal (DRG) isolados de ratos e a cultura de neurônios DRG em um sistema estático de cultura de células pré-esticadas para melhorar o alinhamento dos axônios, com subsequente co-cultura de células de Schwann (SCs) para promover a mielinização.

Uma abordagem para reforçar Alinhamento e mielinização do gânglio de raiz dorsal neurônios

As células do estroma da marrow (MSCs) com potencial neural existem dentro da medula óssea. Nosso protocolo enriquece essa população de células por meio de pré-condicionamento hipóxico e, posteriormente, as direciona para se tornar células maduras de Schwann.

Pré-condicionamento hipóxico de células progenitoras derivadas da medula como fonte para a geração de células maduras de Schwann

Este artigo descreve a metodologia detalhada para preparar uma matriz multiplexado Artificial celular microambiente (MACME) para manipulação de alta produtividade de física e química sugestões imitando na vivo o microambiente celular e para Identifica o ambiente celular ideal para as células-tronco pluripotentes humanas (hPSCs) com perfis de célula única.

Fabricação de uma matriz de microambiente celular Artificial multiplexado

Aqui, fornecemos um método para analisar o comportamento dos axônios crescentes em matrizes 3D, imitando seu desenvolvimento natural.

Geração de hidrogéis com base em colágeno 3-D para analisar o crescimento e o comportamento axonal durante o desenvolvimento do sistema nervoso

Aprenda a preparar microambientes de matriz extracelular para avaliar a especificação do fenótipo de células de Schwann. Este método controla rigidez, composição proteica e morfologia celular de forma económica.

Preparação de Microambientes de Matriz Extracelular Incapaz para avaliar especificação de fenótipo celular schwann

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