Alavancando a Turbidez e a Tromboelastografia para Caracterização Complementar do Coágulo

Os ensaios de tromboelastografia e turbidez são dois métodos simples e distintos para caracterização de coágulos. Essas técnicas em conjunto oferecem uma compreensão mais abrangente de como as variáveis de coagulação impactam as características do coágulo. Ambos os ensaios, não só oferecem análise de coágulos de ponto final, mas também atraem a formação de coágulos fibrinos ao longo do tempo, ao contrário de muitas outras ferramentas de caracterização de coágulos Essas técnicas podem ajudar a desenvolver uma plataforma de coágulos sintéticos fisiologicamente relevante que pode fornecer um diagnóstico confiável do estado fibrinolítico dos pacientes com trombose Para monitorar a turbidez do coágulo ao longo do tempo, use qualquer espectrômetro comercialmente disponível que tenha uma faixa de absorção de 350 a 700 nanômetros.

Ligue o espectrômetro e abra o software de análise correspondente. Em seguida, selecione a placa um e abra a guia de configurações da placa. Clique em ABS e cinética para monitorar uma absorção dinâmica ao longo do tempo.

Selecione 550 nanômetros na guia de comprimento de onda e, em seguida, mude para a guia de tempo e ajuste o tempo total de execução para 60 minutos com um intervalo de 30 segundos, selecione os poços de interesse destacando-os. Pipeta 140 microliters de PBS em um poço de uma placa UV transparente 96 bem. Em seguida, adicione 10 microliters de trombina e misture, imediatamente inicie a coagulação adicionando 50 microliters de fibrinogênio ao poço e pipeta para cima e para baixo cinco vezes usando apenas a primeira parada da pipeta tomando cuidado para evitar criar bolhas.

Coloque a placa no porta-placas e clique em ler no software para iniciar a leitura de turbidez. Quando a leitura terminar de recuperar os dados de turbidez e obter uma curva de rastreamento de turbidez, plotando a mudança dos absorventes ao longo do tempo, derivar a turbidez máxima tomando o valor máximo de absorção da curva ao longo do tempo, em seguida, calcular 90% de turbidez máxima multiplicando a turbidez máxima por 0,9. Derivar o tempo para a turbidez máxima calculando o tempo desde o início do coágulo até a turbidez máxima de 90%.

Ligue a tromboelastografia ou analisador TEG e aguarde que a temperatura se estabilize a 37 graus Celsius, depois abra o software TEG e crie um nome de experimento sob a seção ID. Clique na guia TEG e siga as instruções na tela para realizar um teste eTest para todos os canais. Em seguida, coloque a alavanca de volta à posição de carga assim que todas as verificações estiverem completas.

Clique feito na página de informações e insira informações de amostra para canais que serão usados. Coloque um copo TEG claro e não revestido em seu canal correspondente. Deslize o porta-aviões até a parte superior e pressione o copo para baixo cinco vezes para fixar o pino na haste de torção e, em seguida, baixe o porta-aviões e pressione o copo para baixo na base até que ele clique.

Pipeta 20 microliters de solução de trombina no copo TEG, em seguida, iniciar a coagulação adicionando 340 microliters de fibrinogênio no copo para obter uma solução de coagulação de 360 microliteres. Misture o conteúdo do copo por pipetting para cima e para baixo cinco vezes. Deslize o porta-copo carregado para cima mova a alavanca para a posição de leitura e clique em iniciar no software para iniciar a leitura TEG.

Uma vez concluída a leitura, recupere os parâmetros e obtenha uma curva de rastreamento TEG, plotando amplitude ao longo do tempo. Eleger MA como amplitude máxima, o que é indicativo de cepa de coágulo e TMA como tempo para máxima amplitude do software. A turbidez representativa e as curvas de rastreamento TEG de coágulos de fibrina humana e bovina em diferentes níveis de fibrinogênio são mostrados aqui.

As curvas de rastreamento demonstram que após um período de defasagem após a iniciação do coágulo, a turbidez do coágulo ou a amplitude do coágulo aumentam ao longo do tempo e os níveis estão fora no final da formação do coágulo. A turbidez máxima e o tempo para a turbidez máxima são os dois parâmetros derivados da turbidez, enquanto a amplitude máxima e o tempo de amplitude máxima são derivados do TEG. Em um nível mais elevado de fibrinogênio na solução de coagulação todos os quatro valores aumentam.

A turbidez máxima é uma medida óptica da estrutura do coágulo, que é indicativa da espessura da fibra fibrina e densidade da rede fibrina. Enquanto a amplitude máxima é uma medida mecânica que reflete a tensão absoluta do coágulo, tomadas em conjunto os dois valores fornecem uma visão complementar sobre as micro estruturas do coágulo. Este procedimento demonstra um modelo simplificado de coagulação para examinar variáveis que afetam principalmente a polimerização de fibrinas.

Este modelo pode ser personalizado pela inclusão de fatores adicionais de coagulação para estudar outros parâmetros. O modelo de coagulação pode ser facilmente modificado usando amostras clínicas de plasma para monitorar a formação de coágulos e desilusão na presença de drogas antitrombóticas. Os resultados podem orientar o manejo terapêutico em pacientes.