Name: Extração e Dissecção do Cérebro de Suínos Domesticados (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: Aprenda a extrair e dissecar o cérebro de suínos para neuroanatomia, utilizando técnicas precisas de remoção do crânio e preservação de tecidos. Este método facilita estudos comparativos em neurociência.

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Os autores gostariam de reconhecer Jim Knoblauch e Martin-Booth Hodges da Faculdade de Serviços de Tecnologia da Informação e Comunicação agrícola, de consumo e de ciências ambientais por sua experiência em fotografar, gravar e editar áudio e vídeo.

Procedimentos envolvendo matérias animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade de Illinois em Urbana-Champaign
NOTA: Antes da eutanásia, o porco foi anestesiado via injeção intramuscular com uma combinação de telazol:cetamina:xilazina (50,0 mg de tiletamina HCl mais 50,0 mgs de zolazepam HCl reconstituído com 2,50 mL de cetamina HCl (100 g/L) e 2,50 mL de xilazina (100 g/L) e administrada a 0,06 mg/kg BW). Uma vez anestesiado, o suíno foi eutanizado através da administração intracardiac de pentobarbital de sódio (390 mg/mL administrado a 1 mL/5 kg BW). Para dissecção cerebral, recomenda-se que o método de eutanásia seja escolhido com base no procedimento analítico desejado do tecido. O método de eutanásia deve causar o mínimo de danos ao cérebro possível.
1. Extração do cérebro de porco
<ol><li>Seguindo a eutanásia humana, decapite o porco cortando acima da nuca, entre a primeira e a segunda vértebra (atlas e eixo, respectivamente).</li>
	<li>Fixar a cabeça em um torno de banco imobilizado modificado para incluir picos. Certifique-se de que a cabeça está completamente imobilizada antes de prosseguir.<ol>
<li>Usando um bisturi, faça um corte sagital ao longo da linha média do crânio que continua até o posterior da cabeça.</li>
		<li>Faça um segundo (transversal) corte na parte posterior da cabeça.</li>
		<li>Faça um terceiro (transverso) corte na extremidade posterior do focinho e em linha com os olhos. Corte a pele o mais longe possível do crânio para garantir fácil acesso ao crânio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Usando uma serra óssea, faça dois cortes anteriores a posteriores laterais até a linha média, estendendo-se dos olhos até o ápice da curvatura do crânio. Bevel a serra em direção à linha média e corte fundo o suficiente para penetrar o crânio.<ol>
<li>Repita o processo acima nas laterais perpendiculares, criando uma "janela" retangular no crânio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Usando um gancho de carne, tire a seção retangular do crânio. Comece colocando o gancho em um dos cantos da seção e aplique pressão para cima para soltar a peça do crânio. Tome cuidado para colocar o gancho de carne apenas no nível do crânio para evitar penetrar inadvertidamente o tecido cerebral.</li>
	<li>Se alguma camada meningeal permanecer no cérebro, use fórceps e tesouras sem cortes (ou, alternativamente, um bisturi) para remover suavemente as camadas sem cortar o cérebro.</li>
	<li>Use um bisturi para cortar músculo e gordura na parte posterior da cabeça, expondo a porção posterior do crânio.<ol>
<li>Faça dois cortes transversais ao longo da parte posterior do crânio. Certifique-se de não cortar o tecido cerebral.</li>
		<li>Segure a cabeça colocando uma mão firme no focinho e aplique uma pressão para trás para puxar a parte posterior do crânio, expondo o cerebelo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Retire a cabeça do vício do banco e coloque em um tapete cirúrgico.</li>
	<li>Use uma ferramenta longa e esbelta, como a extremidade cega de um bisturi, para remover o cérebro. Inverta a cabeça e use um movimento suave para persuadir o cérebro para fora da cavidade do crânio sem danificar a superfície do cérebro. NOTA: Será necessário cortar nervos cranianos para remover o cérebro. Faça isso suavemente e não tente puxar o cérebro com força para fora. O cérebro cairá por conta própria quando estiver devidamente e completamente separado do crânio e coluna.</li>
</ol>2. Dissecção do cérebro de porco
NOTA: Pode ser útil usar um atlas cerebral ou guia de dissecção defibras 14 como representação visual durante os procedimentos de dissecção. Certifique-se de que as amostras de tecido dissecadas sejam armazenadas adequadamente de acordo com as necessidades específicas do projeto após a remoção de cada amostra (descritas com mais detalhes abaixo). Além disso, observe que, para efeitos deste vídeo, todas as regiões cerebrais mostradas foram dissecadas do hemisfério direito, mas isso pode diferir por laboratório com base em objetivos experimentais.
<ol><li>Para remover o tronco cerebral (predominantemente a medula), faça um corte coronal caudal ao cerebelo.</li>
	<li>Para remover o cerebelo, faça um corte coronal posterior ao córtex. Isolar as regiões desejadas (por exemplo, vermis, flocculus, etc.) do cerebelo desta amostra. Certifique-se de não incluir nenhuma parte do tronco cerebral nesta amostra.</li>
	<li>Separe os dois hemisférios do cérebro fazendo um corte sagital ao longo da fissura longitudinal. Faça este corte como um movimento contínuo para evitar causar danos ao córtex.</li>
	<li>Para remover o cérebro médio, dissecar uma quantidade desejada de tecido apenas ventral para o coliculi superior e inferior.</li>
	<li>Para remover o hipocampo, coloque a extremidade contundente de um bisturi na parte posterior do caloso corpus e role suavemente o hipocampo para fora, usando um movimento "J" a partir da parte posterior do caloso corpus; um chifre hipocampal inteiro é "em forma de feijão".</li>
	<li>O estriato (núcleo caudado é mostrado principalmente) é uma região listrada de matéria cinza e branca logo abaixo do caloso corpus e anterior ao hipocampo. Desenale o bisturi e remova esta região, revelando tecido estriado após a remoção.</li>
	<li>Para remover o córtex pré-frontal medial, disseque o tecido do giro frontal até o caloso corpus, removendo a porção mais medial dessa seção. O córtex direito deve permanecer após a remoção do córtex pré-frontal medial.</li>
	<li>Para remover o tálamo, remova a estrutura semelhante à lâmpada no centro da superfície midsagittal do cérebro e rostral até o cérebro médio. O tálamo tem uma forma esférica e vai parecer um pouco mais escuro do que o tecido circundante.</li>
</ol>3. Pós-dissecção
<ol><li>Após a conclusão da dissecção, preserve as amostras de tecido adequadamente para análises subsequentes. A omissão desta etapa resultará em uma autolise e degradação significativas em até 20 minutos.</li>
	<li>Deixe cada região cerebral intacta no momento da dissecação se forem realizadas análises estruturais, ou pica-se os tecidos para criar uma amostra de tecido homogênea antes da preservação. Os métodos comuns de preservação da amostra para tecidos cerebrais incluem criopreservação e fixação química utilizando agentes de crosslinking15.</li>
	<li>Para ensaios de laboratório padrão (por exemplo, expressão genética ou proteica), mergulhe em nitrogênio líquido ou soluções que estabilizem o material genético antes do armazenamento a longo prazo a -80 °C para fornecer métodos de preservação convenientes e econômicos.</li>
	<li>Se manter a estrutura tecidual é uma prioridade, preserve os tecidos cerebrais através de métodos tradicionais de fixação (por exemplo, usando fixações à base de aldeído para cruzar proteínas), sem ou com perfusão do animal ou órgão de interesse antes da dissecação tecidual.</li>
</ol>

<ol><li>Hughes, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Swine in cardiovascular research.</a> Laboratory Animal Science. 36 (4), 348-350 (1986).</li>
<li>Yen, J. Anatomy of the Digestive System and Nutritional Physiology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYen%2C+J+%22Biology+of+the+Domestic+Pig%22">Biology of the Domestic Pig</a>. , 31-63 (2001).</li>
<li>Pond, W. G. Of Pigs and People. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPond%2C+WG+%22Swine+Nutrition%22">Swine Nutrition</a>. , 3-24 (2001).</li>
<li>Odle, J., Lin, X., Jacobi, S. K., Kim, S. W., Stahl, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Suckling+Piglet+as+an+Agrimedical+Model+for+the+Study+of+Pediatric+Nutrition+and+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Animal+Biosciences%22%5BJournal%5D)">The Suckling Piglet as an Agrimedical Model for the Study of Pediatric Nutrition and Metabolism.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 2 (1), 419-444 (2014).</li>
<li>Larsen, M. O., Rolin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+G%C3%B6ttingen+minipig+as+a+model+of+diabetes%2C+with+special+focus+on+type+1+diabetes+research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Use of the Göttingen minipig as a model of diabetes, with special focus on type 1 diabetes research.</a> ILAR Journal. 45 (3), 303-313 (2004).</li>
<li>Lehmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+minipig+in+general+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">The minipig in general toxicology.</a> Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. 25, 59-62 (1998).</li>
<li>Richer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sacrococcygeal+and+transsacral+epidural+anesthesia+in+the+laboratory+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Radiologic+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Sacrococcygeal and transsacral epidural anesthesia in the laboratory pig.</a> Surgical Radiologic Anatomy. 20, 431-435 (1998).</li>
<li>Lind, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+pigs+in+neuroscience%3A+Modeling+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 31 (5), 728-751 (2007).</li>
<li>Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+model+in+brain+imaging+and+neurosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">The pig model in brain imaging and neurosurgery.</a> Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Human+Development%22%5BJournal%5D)">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 311, 79-83 (1979).</li>
<li>Aurich, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microsurgical+training+model+with+nonliving+swine+head.+Alternative+for+neurosurgical+education%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cirurgica+Brasileira%22%5BJournal%5D)">Microsurgical training model with nonliving swine head. Alternative for neurosurgical education.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 29 (6), 405-409 (2014).</li>
<li>Bassi, T., Rohrs, E., Fernandez, K., Ornowska, M., Reynolds, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+brain+excision%3A+An+easier+method+to+harvest+the+pig%27s+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Interdisciplinary+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Direct brain excision: An easier method to harvest the pig's brain.</a> Interdisciplinary Neurosurgery. 14, 37-38 (2018).</li>
<li>Bjarkam, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+the+pig+CNS+for+histological+analysis%3A+A+manual+for+decapitation%2C+skull+opening%2C+and+brain+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Exposure of the pig CNS for histological analysis: A manual for decapitation, skull opening, and brain removal.</a> Journal of Visualized Experiments. 122, e55511(2017).</li>
<li>Pascalau, R., Szabo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibre+dissection+and+sectional+study+of+the+major+porcine+cerebral+white+matter+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomia%2C+Histologia%2C+Embryologia%22%5BJournal%5D)">Fibre dissection and sectional study of the major porcine cerebral white matter tracts.</a> Anatomia, Histologia, Embryologia. 46, 378-390 (2017).</li>
<li>McFadden, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+in+brain+banking%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica+Communications%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation in brain banking: a systematic review.</a> Acta Neuropathologica Communications. 7, 146(2019).</li>
<li>Félix, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+atlas+of+the+pig+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic atlas of the pig brain.</a> Brain Research Bulletin. 49, 1(1999).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

As técnicas aqui descritas foram projetadas para suínos com aproximadamente 4 semanas de idade. É fundamental realizar essas etapas imediatamente após o suíno ter sido humanamente eutanizado para garantir que a integridade da estrutura do tecido cerebral seja mantida, especialmente quando se considera ensaios bioquímicos subsequentes. É útil usar um atlas ou guias de dissecção de fibras16 ao aprender as técnicas pela primeira vez. Recomenda-se que o experimentador pratique várias extrações cerebra...

O suíno foi bem documentado e aceito como modelo animal translacionável para pesquisa em sistemas cardiovasculares1, sistemas gastrointestinais2,nutrição3,4, diabetes5,toxicologia6, e técnicas cirúrgicas7. O uso do suíno na neurociência está começando a aumentar, à medida que as pesquisas do PubMed para as palavras-chave "modelo animal cérebro suíno" resultam em quatro vezes mais resultados de 1996-2005 do que no período anterior de 10 anos8, e ainda mais resultados no momento. Uma das principais razões pelas quais a popularidade do modelo suíno está se expandindo é devido às suas semelhanças em crescimento, estrutura e função do cérebro quando comparado com os humanos. Em comparação com o cérebro humano, o cérebro de porco apresenta padronagem giroscraca semelhante, vascularização e distribuição de matéria cinza e branca9. Além disso, o cérebro de porco tem sido usado em procedimentos de neuroimagem, evocado potencial de gravação e no estabelecimento de técnicas de neurocirurgia8,9. Ao contrário de outros modelos animais, no entanto, a experiência suína e humana de crescimento cerebral perinatal, em oposição aos surtos de crescimento pré ou pós-natal. Ao nascer, o cérebro humano e suíno pesa aproximadamente 27 e 25% de seu peso cerebral adulto, respectivamente, em comparação com o cérebro de rato que pesa 12% de seu peso cerebral adulto e o cérebro de macaco resus em 76% do peso adulto10.
Uma das razões pelas quais o porco só foi adotado lentamente como modelo animal para a neurociência é porque muitos pesquisadores não estão familiarizados com o animal neste contexto. Os pesquisadores podem não estar cientes de seus potenciais usos no campo ou podem não saber as técnicas adequadas necessárias para usar tal modelo. Como o uso do suíno como modelo biomédico e pré-clínico ganha atenção e uso na neurociência, é necessário estabelecer procedimentos padronizados de remoção de tecidos para garantir a comparação precisa dos dados entre os estudos. Embora as técnicas cirúrgicas e dissecção envolvendo o cérebro de suíno tenham sido publicadas em outros lugares11,12,13, há a necessidade de protocolos simples e padronizados para coletar tecido cerebral suíno, especialmente para uso em ensaios bioquímicos. Como tal, o objetivo deste vídeo é fornecer o conhecimento necessário para permitir que os pesquisadores realizem uma extração e dissecção cerebral padronizada. Este vídeo ilustra uma técnica adequada para remover o cérebro de porco, mantendo o córtex e o tronco cerebral intactos, e posteriormente revisar métodos para dissecar várias regiões cerebrais chave.

<table><tbody><tr><td>#22 Lâminas de bisturi para alças #4</td><td>Ted Pella, inc.</td><td>549-4S-22</td><td></td></tr><tr><td>Serra de osso Satterlee de 11 1/2" Leica</td><td>Biosystems</td><td>38DI13425</td><td></td></tr><tr><td>5 1/2" Quebra-crânio com extremidade de cinzel (gancho de carne)</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI37636</td><td></td></tr><tr><td>Morsa de bancada de oficina resistente de 5 polegadas</td><td>Pony</td><td>29050</td><td></td></tr><tr><td>Faca de açougueiro 25cm</td><td>Victorinox</td><td>5.7403.25</td><td>Afie antes de usar</td></tr><tr><td>CM40 Light Duty Drop Grampos C Forjados</td><td>Bessey</td><td>00655BC3120</td><td></td></tr><tr><td>Diamante Hone Faca Shaper</td><td>Chef' s Choice</td><td>436-3</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina de Bisturi de Aço Inoxidável Shandon Cabo #4</td> Pinça de Tecido <td>ThermoScientific</td><td>5334</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Henry Schein</td><td>101-5132</td><td></td></tr><tr><td>Almofada de Dissecação de Vinil</td><td>Carolina</td><td>629006</td><td></td></tr></tbody></table>

extração e dissecção do cérebro de suínos domesticados

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

O uso do porco como modelo animal pré-clínico e traduzível tem sido bem documentado e aceito por campos de pesquisa que investigam sistemas cardiovasculares, sistemas gastrointestinais e nutrição, e o suíno está sendo cada vez mais usado como um grande modelo animal na neurociência. Além disso, o suíno é um modelo aceito para estudar o neurodesenvolvimento, pois exibe padrões de crescimento e desenvolvimento cerebral semelhantes ao que ocorre em humanos. Como um modelo animal menos comum na neurociência, procedimentos cirúrgicos e de dissecção em suínos podem não ser tão familiares ou bem praticados entre os pesquisadores. Portanto, um protocolo visual padronizado detalhando métodos consistentes de extração e dissecção pode ser valioso para pesquisadores que trabalham com o porco. O vídeo a seguir mostra uma técnica para remover o cérebro de porco, mantendo o córtex e o tronco cerebral intactos e revisa métodos para dissecar várias regiões cerebrais comumente investigadas, incluindo o tronco cerebral, cerebelo, cérebro médio, hipocampo, estrito, tálamo e córtex pré-frontal medial. O objetivo deste vídeo é fornecer aos pesquisadores as ferramentas e conhecimentos necessários para realizar consistentemente uma extração e dissecção cerebral no porco de quatro semanas de idade.

Esta seção descreve exemplos de resultados obtidos após a extração correta e dissecção de um cérebro de porco de 4 semanas de idade. A Figura 1 descreve a forma de cada região cerebral para uso como guia durante a dissecção. Parte do tronco cerebral pode permanecer no crânio após a remoção do cerebelo(Figura 1B). Isso pode ser removido enquanto isola a região desejada do cerebelo. A Tabela 1 exibe o peso médio (erro médio ± padrão da média) para...

Este protocolo detalha a técnica de remoção do cérebro de porco em sua totalidade e dissecção de várias regiões cerebrais comumente estudadas na neurociência.

Extração e Dissecção do Cérebro de Suínos Domesticados

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...

O vídeo a seguir é uma demonstração de remoção e dissecção do cérebro de porco. Pode ser útil consultar um atlas ou guia de dissecção de fibras antes ou durante o procedimento. Uma grande faca de açougueiro é melhor para decapitação, pois permitirá um corte limpo entre o atlas e o eixo.Certifique-se de que a faca está afiada antes de começar com um novo assunto. Um gancho de carne é usado para remover o crânio. Uma ferramenta longa e esbelta, como uma alça de bisturi, é usada para remover o cérebro do crânio.Um vício com parafusos ou saliências é necessário para fixar a cabeça enquanto corta o crânio. Uma vez que o animal tenha sido humanamente eutanizado de acordo com os protocolos estabelecidos proceda da seguinte forma. Corte logo acima da nuca, entre os ombros e a parte superior da cabeça.Proteja o porco e tire os anos do caminho durante a decapitação. Use um bisturi para fazer incisões para separar a pele do crânio. Faça um corte inicial no meio do crânio que continua até o posterior da cabeça.O segundo corte transversal deve estar na parte posterior da cabeça. O terceiro corte também transversal começará na parte posterior deste focinho, e em linha com os olhos para garantir fácil acesso ao crânio. Use uma serra óssea para fazer cortes anteriores para posteriores laterais para a linha média.Comece marcando levemente a área para o corte com a serra, e então comece a serrar até encontrar menos resistência do crânio. Ligeiramente chanfrar a serra em direção à linha média enquanto corta, pois isso garantirá que você está cortando a parte mais fina do crânio. Se o corte estiver muito perto da orelha será difícil remover o crânio.Mas se o corte estiver muito perto da linha média a abertura será muito pequena para remover o cérebro. Repita este processo nas laterais perpendiculares para criar uma janela retangular. Certifique-se de que cada canto da janela está completamente cortado, para que parte do crânio possa ser removida para revelar o cérebro abaixo.Em seguida, use um gancho de carne ou instrumento curvo para tirar a seção retangular do crânio fora de posição. Comece colocando o gancho em um dos cantos, e aplicando pressão para estourar a tampa do crânio. Em alguns casos, as meninges permanecerão no cérebro.E se isso ocorrer cuidadosamente use fórceps e tesouras sem cortes, ou alternativamente um bisturi para remover as meninges sem cortar o cérebro. Para referência, o cérebro deve parecer o seguinte antes e depois que as camadas meningeais foram removidas. Corte o músculo e a gordura na parte posterior da cabeça para se preparar para a exposição do cerebelo.Para expor o cerebelo faça dois cortes transversais ao longo da parte posterior do crânio. Ao fazer esses cortes tome cuidado para não cortar no cérebro exposto. Uma vez que os cortes tenham sido feitos coloque uma mão no focinho, e uma no crânio, e aplique pressão para trás para puxar a parte posterior do crânio para longe do resto da cabeça.Como destacado aqui, o cerebelo está escondido atrás das camadas meningeais restantes. Use a ponta de um instrumento contundente como uma alça de bisturi para separar cuidadosamente o cérebro do crânio, tomando cuidado para evitar danificar o cérebro no processo. Inverter ligeiramente a cabeça para ajudar a persuadir o cérebro para fora do crânio, e usar um movimento suave de colher para cortar os nervos cranianos e remover o cérebro.Este processo requer paciência e prática para eliminar todas as conexões restantes entre o cérebro e a cavidade craniana. Inverter a cabeça do porco pode ser útil durante esse processo. Continue usando movimentos de varredura com o instrumento contundente para libertar o cérebro.Como destacado aqui, o cerebelo e o tronco cerebral podem ser difíceis de remover, pois estão enfiados na cavidade do crânio. Tome cuidado ao remover o cerebelo e a medula, ou tronco cerebral. O cérebro deve cair por conta própria quando está completamente separado do crânio.A cavidade do crânio deve parecer como mostrado após a remoção do cérebro. Em preparação para dissecção da região cerebral, assegure-se de recipientes pré-rotulados e próximos. Os métodos de preservação de exemplo incluem amostras de congelamento de encaixe em nitrogênio líquido, ou submergir-as em uma solução conservante.Uma vez extraído da cavidade craniana, todo o cérebro deve parecer o seguinte. Para remover a medula ou o tronco cerebral, faça um corte coronal caudal ao cerebelo. Para remover o cerebelo, faça um corte coronal posterior ao córtex.Para separar os hemisférios faça um corte midsagittal ao longo da fissura longitudinal usando um movimento contínuo para evitar danos. Para os propósitos deste vídeo, só mostraremos dissecções do hemisfério direito. Para remover o olhar de cérebro médio para o superior, e coloiculi inferior que são dois solavancos na parte posterior do cérebro.Remova a quantidade desejada de tecido cerebral apenas ventral para essas regiões. Para remover o hipocampo posicione a alça do bisturi na parte posterior do caloso corpus, e role suavemente o hipocampo para fora. Todo o chifre de hipocampo será moldado por feijão.O hipocampo deve facilmente rolar para fora ao colher o dedo em um j-motion, começando a partir do caloso corpus posterior. Para remover o estriado ou núcleo caudado limpe a porção anterior do corpo caloso. O núcleo caudado é a região estriada ou listrada que é colorida cinza e branco e localizada logo abaixo do corpus calosum.Com a alça do bisturi em ângulo remova esta região que inclui predominantemente o núcleo caudado. Depois de remover este tecido você deve ser capaz de ver um padrão estriado onde a região cerebral tinha sido localizada. Para remover o córtex pré-frontal medial dissecado tecido do giro frontal para o corpus calosum tomando a porção mais medial dessa seção.O córtex direito deve permanecer após a remoção do córtex pré-frontal medial. Para remover o tálamo, remova a lâmpada como estrutura no centro da superfície de midsagittal. O tálamo tem uma forma esférica óbvia, e vai parecer um pouco mais escuro do que o tecido circundante.Após a conclusão das amostras de tecido de dissecção devem ser preservadas adequadamente com base em desfechos experimentais específicos. Aqui são mostradas as regiões cerebrais dissecadas, incluindo o tamanho e a forma relativos esperados ao trabalhar com jovens porcos. Ao dominar essas técnicas, todo o procedimento de extração e dissecção cerebral levará menos de 15 minutos por indivíduo, e produzirá resultados consistentes.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Nós descrevemos um modelo de rato do transtorno de estresse pós-traumático (TEPT), que revela as alterações persistentes na função neuroendócrina eo atraso de longo prazo, resposta de medo exagerado, característico de pacientes com TEPT. O modelo animal e os métodos descritos aqui são úteis para correlacionar biomarcadores em núcleos do cérebro, que são mecanicista, mas não pode ser medido em pacientes com biomarcadores em células brancas do sangue periférico, os quais podem.

Biomarcadores em um modelo animal para Revelando correlatos neurais, hematológica e Comportamental do TEPT

Este vídeo demonstra um método para preparar culturas organotípicas de fatias de hipocampo a partir do cérebro de um filhote de rato. Ele descreve as etapas envolvidas na dissecação do hipocampo, fatiamento e condições de cultura necessárias para promover a viabilidade celular e o crescimento nas fatias do hipocampo, gerando culturas de fatias organotípicas.

Preparação de culturas organotípicas de fatias do hipocampo de um filhote de rato

Este vídeo demonstra o processo de formação da neuroesfera e sua expansão a partir do tecido do hipocampo. As células-tronco neurais e progenitoras do tecido do giro dentado do camundongo pós-natal proliferam e formam neuroesferas primárias, que são então replantadas para formar neuroesferas secundárias.

Formação e expansão de neuroesferas a partir de um tecido hipocampal

A pesquisa de neurotoxicidade do desenvolvimento induzida por anestesia (AIDN) focalizou os roedores, que não são amplamente aplicáveis ​​aos seres humanos. Os modelos de primatas não humanos são mais relevantes, mas são custo-proibitivos e difíceis de usar para a experimentação. O leitão, ao contrário, é um modelo animal clinicamente relevante, prático, ideal para o estudo da neurotoxicidade anestésica.

Uso de um Modelo de Leitão para o Estudo da Neurotoxicidade de Desenvolvimento induzida por Anestesismo (AIDN): Uma Abordagem de Neurociências Translacionais

O objectivo deste trabalho e vídeo de instruções é descrever como a expor e remover o cérebro de porco e glândula pituitária pós-morte num estado intacto, adequado para análise macroscópica e histológica subsequente.

Exposição do SNC porco para análise histológica: A manual por decapitação, crânio de abertura, e Cérebro Remoção

Este artigo descreve uma metodologia detalhada para obter secções tangenciais achatadas de mamíferos córtices e Visualizar módulos corticais usando histochemical e métodos de imuno-histoquímica.

Visualização de módulos corticais em córtices mamíferos achatadas

Apresentamos um protocolo prático, passo a passo, rápido para remoção do cérebro do rato e dissecção de regiões discretas de tecido cerebral fresco. A obtenção de regiões cerebrais para análise molecular tornou-se rotina em muitos laboratórios de neurociência. Essas regiões cerebrais são imediatamente congeladas para obter dados transcriômicos de alta qualidade para análise de nível de sistema.

Microdisseção do Cérebro de Camundongos em Regiões Funcional e Anatomicamente Diferentes

Este artigo apresenta um protocolo passo-a-passo para a implantação direta de cânula na cisterna magna dos suínos.<br...

Implantação direta de cânula na Cisterna Magna dos Porcos

Aqui, apresentamos um método para avaliação de desempenho e segurança a longo prazo de arranjos de eletrodos subdurais moles em um modelo minipig, descrevendo método cirúrgico e ferramentas, ressonância magnética pós-operatória, eletrofisiologia do córtex auditivo, propriedades eletroquímicas do implante e imunoquímica post-mortem.

Implante de arranjo de eletrocorticografia mole subdural (ECoG) e registro cortical de longa duração em miniporcos

Este protocolo descreve a realização de uma craniectomia usando uma broca pneumática de alta velocidade em um porco dinamarquês Landrace de 3 meses. O acesso é feito através do osso frontal e revela a dura-máter ventral e os hemisférios cerebrais subjacentes. Este procedimento permite o acesso a uma grande parte do cérebro do porco.

Acessando o cérebro suíno por meio de craniectomia com broca pneumática de alta velocidade

Um método inovador para construir matrizes cerebrais expansíveis para cortar fatias coronais ou sagitais é descrito para aplicação em leitões neonatais. Essa abordagem econômica utiliza placas de acrílico esculpidas com moldes de gel de agarose, aplica-se a múltiplas espécies e permite a expansão para acomodar o crescimento cerebral.

Fabricação de uma matriz cerebral expansível personalizável em diferentes estágios de desenvolvimento

Aprenda a extrair e dissecar o cérebro de suínos para neuroanatomia, utilizando técnicas precisas de remoção do crânio e preservação de tecidos. Este método facilita estudos comparativos em neurociência.

Extração e Dissecção do Cérebro de Suínos Domesticados

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