Quadruplicar-Checkerboard: Uma modificação do tabuleiro de xadrez tridimensional para estudar combinações de medicamentos

O tabuleiro de xadrez quádruplo é uma técnica que estuda todas as combinações possíveis que podem ser obtidas pela combinação de quatro medicamentos, e é importante encontrar um tratamento para microrganismos resistentes, principalmente MDRs ou também conhecidos como microrganismos multirresistentes. Esta técnica não é trabalhosa e os resultados podem ser obtidos no dia seguinte ou após o término do período de incubação. Além disso, pode estudar todas as combinações possíveis e não apenas combinações específicas e muito limitadas que podem ser obtidas combinando esses quatro medicamentos e tudo, tudo em um experimento.

Além disso, essa técnica pode ser utilizada em múltiplas disciplinas e não apenas em microbiologia e até mesmo em microbiologia. Ele pode estudar todas as combinações possíveis entre diferentes agentes antimicrobianos e não apenas agentes antibacterianos. Além da parte microbiológica, pode ser usado para estudar combinações entre medicamentos anticâncer, entre extratos vegetais e medicamentos, e até mesmo entre painéis de tratamentos moleculares eficazes moleculares.

Preparação coloque 4 96, bem placas próximas umas das outras para formar um quadrado usando uma fita, prenda o fundo com fita adesiva. Repita esta etapa para obter quatro painéis, cada um contendo quatro placas, e nomeie-os um, A dois, A três e um Quatro. Adicione 50 microlitros Mueller.

Dica e caldo para os poços entre a coluna dois e a coluna 11 no 1696, placas de poço dos quatro painéis adicionam 200 microlitros de caldo Mueller Hinton ao poço H 12 servindo como controle negativo. Bem, nas placas de poços de 1696 dos quatro painéis, adicione um caldo Mueller Hinton de 50 microlitros aos poços A um e H um servindo como poços de controle positivo nas placas de poços de 1696 dos quatro painéis droga uma diluição serial de cefotaxima para um tubo cônico a 15 ml. Água destilada estéril.

Calcule o volume a ser removido da solução estoque do medicamento seguindo a fórmula C um V um é igual a C dois V dois. Remova o volume calculado dos 15 ml de água destilada estéril e adicione o mesmo volume da solução estoque do medicamento Para a pipeta de tubo cônico 50 microlitros da solução preparada do medicamento em cada poço na coluna 11 e na coluna 12, exceto para o poço H 12, inicie a diluição em série removendo 50 microlitros da coluna 11 e colocando-os nos poços correspondentes na coluna 10, e depois de 10 até chegar à coluna dois, onde os 50 microlitros retirados da coluna dois serão descartados. Repita a diluição em série para cada uma das placas de 1696 poços dos quatro painéis.

Diluição seriada do medicamento dois amika para um tubo cônico a 10 ml. Água destilada estéril. Calcule o volume a ser removido da solução estoque do medicamento.

Remova o volume calculado da água destilada estéril de 10 ml e adicione o mesmo volume da solução estoque do medicamento ao tubo cônico. Pegue uma placa separada de 96 poços, adicione cem microlitros de caldo Mueller Hinton estéril aos poços entre a rosa G e B.In esta placa, adicione cem microlitros do medicamento previamente preparado. Dois, solução para os poços da linha G.Diluir em série da linha G para a linha B, retirando cem microlitros de cada poço em RO G.E finalmente descartando os cem microlitros dos poços da linha B.Repita essas etapas para preparar oito placas separadas de 96 poços transferência de droga dois para os quatro painéis pipeta 50 microlitros de droga dois dos poços entre as linhas G e B para o poços correspondentes em cada placa nos quatro painéis, uma placa de 96 poços preparada contém cem microlitros de medicamento dois.

Isso é suficiente para duas placas em um medicamento de painel. Três vivos de lombo, além de quatro tubos cônicos diferentes a 14 ml de água destilada estéril. Calcule o volume a ser removido da solução estoque do medicamento.

Remova o volume calculado da água destilada estéril de 14 ml de cada tubo e adicione o volume correspondente do medicamento. Depois de preparar as concentrações necessárias do terceiro medicamento, pegue 50 microlitros e adicione-o aos poços correspondentes entre as linhas B e G e as colunas dois e 12 na placa correspondente. Em cada painel, onde C um corresponde aos quatro P, uma placa e os quatro painéis, C dois corresponde aos quatro, P duas placas e os quatro painéis, C3 corresponde aos quatro, P três placas e os quatro painéis e C quatro corresponde aos quatro, P quatro placas e os quatro painéis drogam quatro sulfametoxazol trimetoprima, adição a um tubo cônico, adicionar 14 ml.

Esforce-se com água destilada. Calcule o volume a ser removido da solução estoque do medicamento. Remova o volume calculado da água destilada estéril de 14 ml de cada tubo e adicione o volume necessário do medicamento.

Depois de preparar as concentrações necessárias do quarto medicamento, pegue 50 microlitros e adicione-os aos poços correspondentes entre as linhas B e G e as colunas dois e 12. Nas quatro placas do painel correspondente, onde C um corresponde ao painel um, C dois corresponde ao painel dois, C3, corresponde ao painel três e C quatro corresponde ao painel quatro. Preparação e adição de inóculo bacteriano igual I-E-S-B-L usando uma transferência de alça estéril.

Uma colônia do isolado bacteriano é igual a previamente cultivada em um prato em dois ml de caldo Mueller Hinton estéril e vórtice Verifique a turbidez onde deveria ser 0,5 McFarland usando uma densidade adicionar um caldo Mueller Hinton estéril TML ao copo de urina estéril adicione inóculo bacteriano do inóculo de 0,5 McFarland ao copo de urina seguindo a fórmula C um V um é igual a C dois V dois onde V um é igual a 800 microlitros pipeta de tubo 50 microlitros da solução de inóculo e para cada poço, exceto H 12, que é o controle de esterilidade, incube bem os painéis a 37 graus Celsius durante a noite. Esta figura representa o painel A. As moradas coloridas são os poços que contêm o crescimento bacteriano, e as setas pretas representam os poços no crescimento.

Sem interface de crescimento na placa um, placa dois e placa três. Podemos ver que há inibição na linha D contendo uma CIM sobre oito de Amicacina, além de várias submicas de cefotaxima e Levofloxacina, além de uma CIM sobre oito de sulfametoxazol trimetoprima na placa quatro. Notamos que nenhum crescimento bacteriano é visto no quadrante que contém a combinação.

Isso ocorre porque nesta placa temos o CIM de Levofloxacina que inibirá totalmente o crescimento. A Figura um B representa o painel dois. Neste painel, podemos ver que a inibição do crescimento bacteriano também é observada no RD, que contém sub ics de cefotaxima e levofloxacina, além de um sobre oito MIC de amicacina e um sobre quatro MIC de sulfametoxazol trimetoprima, a figura um C representa o painel A três.

Nesta figura, podemos ver que a inibição do crescimento bacteriano é observada nas fileiras C e D contendo vários submics de cefotaxima e levofloxacina, e adição a metade da CIM de sulfametoxazol trimetoprima, e uma sobre quatro CIM de amicacina na fileira C e uma sobre duas CIM de amicacina na fileira D a figura 1D representa o painel A quatro. Neste painel, temos um CIM de sulfametoxazol trimetoprima em combinação com várias concentrações de cefotaxima, amicacina e levofloxacina. Nesta figura, podemos ver que o crescimento bacteriano é totalmente inibido no quadrante que contém a combinação onde esta inibição é o efeito de um CIM de sulfametoxazol trimetoprima na folha FIC, tudo no arquivo Excel.

A tabela mostrará o som final FIC, com a interpretação do valor obtido. Em conclusão, a técnica quadriculada Q estuda todas as combinações possíveis entre quatro drogas em um único experimento. Os resultados são obtidos no dia seguinte e são interpretados de forma fácil e rápida usando um modelo do Excel.