Name: Hepatectomia Parcial em Zebrafish Adulto (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: Aprenda a realizar hepatectomia parcial em zebrafish adulto para estudar regeneração hepática. Este protocolo reprodutível permite investigar mecanismos celulares e moleculares da regeneração do fígado em Danio rerio.

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I.M.O. é apoiado pela NIAAA (F32AA027135). W.G. é suportado por R01DK090311, R01DK105198, R24OD017870 e pelo Programa Claudia Adams Barr de Excelência em Pesquisa do Câncer. W.G. é um estudioso de Ciências Biomédicas.

Os zebrafish foram criados e criados de acordo com os procedimentos padrão. Os experimentos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Hospital Brigham e da Mulher (2016N000405). Os zebrafish adultos foram jejuados por 24 horas antes do início do protocolo. A água do sistema refere-se à água em tanques de carcaça de zebrafish na instalação aquática.
1. Preparação e anestesia
<ol><li>Prepare 0,016% solução tricaine em água do sistema. ATENÇÃO: Tricaine é um irritante se entrar em contato com os olhos, pele ou trato respiratório.</li>
	<li>Prepare uma esponja para segurar zebrafish anestesiado durante o protocolo de dissecção. Corte uma esponja completa em moedas. Usando uma lâmina de barbear, remova uma fina cunha de esponja que corre paralelamente ao longo eixo do quarto da esponja.<ol>
<li>A fenda deve ser longa o suficiente para acomodar um peixe adulto (isso vai variar entre diferentes tamanhos de peixe). Por exemplo, para um peixe adulto com 35 mm de comprimento, o comprimento da fenda deve ser de 20 mm. A cabeça e o corpo são snugly mantidos na esponja, mas a cauda passa pela borda da esponja(Figura 1B).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Mergulhe a esponja em solução tricaine 0,016%.</li>
	<li>Coloque o zebrafish adulto (masculino ou feminino) em 625 mL de solução tricaine de 0,016%.</li>
	<li>Incubar por 6 minutos ou até que o peixe não responda ao toque.</li>
	<li>Usando fórceps, retire cuidadosamente o peixe do tanque Tricaine e coloque o lado ventral do peixe para cima na ranhura da esponja(Figura 1A - B).</li>
	<li>Coloque a esponja sob um microscópio dissecando com iluminação de cima para baixo.</li>
</ol>2. Cirurgia
<ol><li>Usando fórceps finos, belisque a pele e escamas mediadamente, apenas posterior ao coração(Figura 1B).</li>
	<li>Usando uma tesoura carregada de mola, faça um corte sob as fórceps para criar um buraco na cavidade corporal (Figura 1C - D). Tome cuidado para não ferir o coração ou um vaso sanguíneo importante, pois isso resultará em aumento da mortalidade.</li>
	<li>Utilizando uma tesoura carregada de mola, faça uma incisão de 3-4 mm ao longo do abdômen, processando posteriormente até que a incisão chegue às aletas pélvicas(Figura 1D - E). A essa altura, o lobo ventral do fígado pode ser visível através da incisão.</li>
	<li>Aperte os lados da esponja com uma mão para forçar os órgãos viscerais a saírem da cavidade corporal. O lobo ventral do fígado será visível em cima do intestino (Figuras 1F,2A-B). O fígado aparecerá como uma estrutura rosa ou laranja espalhada sobre o intestino marrom-dourado. Animais designados como controles falsos são recuperados neste momento.</li>
	<li>Aperte os fórceps finos para que as duas latas toquem. Mantendo a pressão sobre a esponja, deslize as latas dos fórceps finos entre o fígado e o intestino(Figura 1G). Tome cuidado para não perfurar o intestino, pois isso resultará em aumento da mortalidade.</li>
	<li>Relaxe lentamente a pressão sobre os fórceps para que as latas se afastem umas das outras(Figura 1H). Esta ação deslizante rompe os numerosos anexos de veia portal entre o lobo ventral e o intestino(Figura 2B),e é necessário remover limpamente o lobo ventral. Repita este processo até que todas as conexões do portal entre o fígado e o intestino tenham sido cortadas.</li>
	<li>Retire o lobo ventral do intestino usando fórceps finos e corte o lobo ventral livre do resto do fígado(Figura 1I).</li>
	<li>Este procedimento resulta em uma hepatectomia parcial de um terço (Figura 1J).</li>
</ol>3. Recuperação
<ol><li>Retire cuidadosamente o peixe da esponja e coloque-o em um tanque de água do sistema.</li>
	<li>Pipeta sistema água sobre as brânquias por alguns minutos até que o peixe está nadando por conta própria(Figura 1K).</li>
	<li>Monitore os peixes por 2-4 horas antes de colocá-los de volta no sistema. Não alimente o peixe por 24 horas após a cirurgia.</li>
	<li>Monitore os peixes diariamente durante a duração do experimento.</li>
	<li>Com o tempo, a incisão na parede do corpo cicatrizará naturalmente sem a necessidade de suturas (Figura 1L,2C).</li>
</ol>4. Lóbulo ventral para análise do comprimento do intestino
<ol><li>Eutanize todos os animais destinados à análise em água gelada por 10 minutos até que todos os movimentos operculares cessem.</li>
	<li>Retire o peixe da água gelada e coloque-o do lado ventral para cima na ranhura de uma esponja.</li>
	<li>Usando uma tesoura carregada de mola, faça uma incisão na parede do corpo ventral na posição anterior-posterior do coração. Em seguida, faça mais duas incisões que correm ao longo do eixo anterior-posterior desde a primeira incisão até as barbatanas pélvicas. (Figura 2A).</li>
	<li>Retire a pele e o músculo para revelar os órgãos viscerais (Figura 2A).</li>
	<li>Adquira imagens de campo brilhante e fluorescentes dos órgãos viscerais usando um microscópio de epifluorescência. Este campo de visão incluirá a área onde o lobo ventral foi ressecado. Como os animais são eutanizados antes da análise, esse tipo de análise impede a imagem a longo prazo do mesmo peixe.</li>
</ol>5. Análise da razão de peso do fígado para o corpo
<ol><li>Eutanize todos os animais destinados à análise em água gelada por 10 minutos até que todos os movimentos operculares cessem.</li>
	<li>Coloque os peixes em um tubo cônico de 50 mL.</li>
	<li>Adicione 25 mL de paraformaldeído em 1x PBS e 0,3% Tween ao tubo. ATENÇÃO: O formaldeído é tóxico, e as soluções que contenham formaldeído devem ser sempre processadas em uma capa química.</li>
	<li>Nutate por 48 h a 4 °C.</li>
	<li>Realizar quatro lavagens de 10 min em 1x PBS e 0,3% Tween.</li>
	<li>Recupere peixes com fórceps, e seque em uma toalha de papel.</li>
	<li>Grave o peso de todo o peixe.</li>
	<li>Usando uma tesoura carregada de mola, faça uma incisão na parede do corpo ventral na posição anterior-posterior do coração. Em seguida, faça mais duas incisões que correm ao longo do eixo anterior-posterior desde a primeira incisão até as aletas pélvicas. (Figura 2A).</li>
	<li>Retire a pele e o músculo para revelar os órgãos viscerais (Figura 2A).</li>
	<li>Adquira imagens de campo brilhante do fígado usando um microscópio de epifluorescência.</li>
	<li>Disseque o fígado, colocando os pedaços de fígado em um barco de pesagem.</li>
	<li>Grave o peso do fígado.</li>
</ol>

<ol><li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+liver+regeneration+and+growth+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Principles of liver regeneration and growth homeostasis.</a> Comprehensive Physiology. 3, 485-513 (2013).</li>
<li>Wang, S., Miller, S. R., Ober, E. A., Sadler, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+it+new+again%3A+insight+into+liver+development%2C+regeneration%2C+and+disease+from+zebrafish+research%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Making it new again: insight into liver development, regeneration, and disease from zebrafish research.</a> Current Topics in Developmental Biology. 124, (2017).</li>
<li>Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%3A+biological+and+pathological+mechanisms+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration: biological and pathological mechanisms and implications.</a> Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. , (2020).</li>
<li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends in Genetics. 29, 611-620 (2013).</li>
<li>Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+growth+in+the+embryo+and+during+liver+regeneration+in+zebrafish+requires+the+cell+cycle+regulator+uhrf1%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator uhrf1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).</li>
<li>Goessling, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((APC+mutant+zebrafish+uncover+a+changing+temporal+requirement+for+wnt+signaling+in+liver+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development.</a> Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).</li>
<li>Dovey, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topoisomerase+II+is+required+for+embryonic+development+and+liver+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Topoisomerase II is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish.</a> Molecular and Cellular Biology. 29, 3746-3753 (2009).</li>
<li>Kan, N. G., Junghans, D., Belmonte, J. C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensatory+growth+mechanisms+regulated+by+BMP+and+FGF+signaling+mediate+liver+regeneration+in+zebrafish+after+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Compensatory growth mechanisms regulated by BMP and FGF signaling mediate liver regeneration in zebrafish after partial hepatectomy.</a> The FASEB Journal. 23, 3516-3525 (2009).</li>
<li>Zhu, Z., Chen, J., Xiong, J. W., Peng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haploinsufficiency+of+Def+activates+p53-dependent+TGF%CE%B2+signalling+and+causes+scar+formation+after+partial+hepatectomy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Haploinsufficiency of Def activates p53-dependent TGFβ signalling and causes scar formation after partial hepatectomy.</a> PLoS One. 9, (2014).</li>
<li>Feng, G., Long, Y., Peng, J., Li, Q., Cui, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+characterization+of+the+dorsal+lobes+after+hepatectomy+of+the+ventral+lobe+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic characterization of the dorsal lobes after hepatectomy of the ventral lobe in zebrafish.</a> BMC Genomics. 16, 979(2015).</li>
<li>Michalopoulos, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Liver regeneration.</a> Journal of Cellular Physiology. 213, 286-300 (2007).</li>
<li>Grisham, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organizational+principles+of+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22The+Liver%3A+Biology+and+Pathobiology%3A+Fifth+Edition%22%5BJournal%5D)">Organizational principles of the liver.</a> The Liver: Biology and Pathobiology: Fifth Edition. , 1-15 (2009).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

As diferenças anatômicas entre zebrafish e modelos mamíferos para regeneração hepática apresentam desafios únicos à ressecção hepática. O fígado em zebrafish está próximo do coração e do intestino; inadvertidamente danificar qualquer órgão resulta em aumento da mortalidade. O fígado de zebrafish não é encapsulado, tornando mais difícil separar-se do intestino. O fígado recebe sangue rico em nutrientes do intestino através de veias portal. Nos mamíferos, veias que saem do intestino convergem em uma veia portal primária qu...

Entre os órgãos sólidos em humanos, o fígado é o único órgão capaz de regenerar1. Isso é crítico, pois o fígado é um órgão essencial, responsável pelas principais funções metabólicas, armazenamento de energia, desintoxicação sanguínea, secreção de proteínas plasmáticas e produção de bile2. Hepatócitos perdidos devido a danos tóxicos ou inflamatórios são substituídos principalmente por divisão dos hepatócitos restantes1. Um modelo experimental clássico para estudar a regeneração hepática é a hepatectomia parcial, onde os lobos individuais do fígado são removidos, deixando os lóbulos restantes intactos3. Este procedimento foi inicialmente desenvolvido em ratos, nos quais aproximadamente dois terços da massa hepática é removida. Após hepatectomia parcial em mamíferos, a regeneração compensatória ocorre nos lóbulos restantes até que o fígado recupere sua massa inicial. Notavelmente, o fígado mamífero não substitui os lóbulos perdidos.
O zebrafish (Danio rerio) representa um modelo tratável para estudar a regeneração de órgãosadultos 4. O fígado de zebrafish, embora estruturalmente diferente do fígado mamífero, é composto pelos mesmos tipos de células e serve a mesma função dos mamíferos2. É composto por três lóbulos, com dois lobos dorsais e um único lobo ventral que são achatados ao longo do intestino. A hepatectomia parcial já foi realizada anteriormente em zebrafish, com relatos conflitantes quanto ao modo preciso de regeneração. Normalmente, uma hepatectomia parcial de um terço é realizada pela remoção de todo o lobo ventral. Relatórios iniciais indicaram que, após a remoção do lobo ventral, ele foi totalmente regenerado dentro de uma semana5,6,7, sugerindo que, em contraste com o fígado mamífero, o fígado de zebrafish é capaz de regeneração epimórfica. Estudos subsequentes demonstraram que a remoção do lobo ventral resultou em regeneração compensatória nos lobos dorsais, em vez da regeneração do lobo ventral perdido, e, finalmente, a recuperação da massa hepática dentro de uma semana8,9. O perfil transcriômico dos lobos dorsais após a ressecção do lobo ventral revelou alterações significativas associadas à regeneração compensatória10. Dado que o modo de regeneração hepática pode variar com a extensão da lesão8,especulamos que as discrepâncias nos resultados podem ser devido à variação técnica no protocolo de hepatectomia parcial entre grupos de pesquisa.
Este protocolo descreve um procedimento para a realização de uma hepatectomia parcial de um terço em zebrafish adulto, removendo o lobo ventral. Esta técnica será valiosa para avaliar mecanismos de regeneração hepática.

<table><tbody><tr><td>Solução aquosa de paraformaldeído a 16%, ciências de</td><td>microscopia eletrônica</td> de grau EM <td>15700</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga Falcon de 50 mL, polipropileno,</td><td>Corning</td><td>estéril 352098</td><td></td></tr><tr><td>AS 82/220.R2 PLUS Balança Analítica</td><td>Bay State Scale & Sistemas, INC.</td><td>WL-104-1051</td><td></td></tr><tr><td>Dumont # 55 Fórceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>EMS Kuehne Coverglass / Espécime Fórceps</td><td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>72997-07</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de epifluorescência</td><td>Zeiss</td><td>Discovery.V8</td><td></td></tr><tr><td>Mastertop Esponja de limpeza de celulose</td><td>Amazon</td><td>B07CBSM53Z</td><td></td></tr><tr><td>PBS10X Liquid Conc 4L</td>Tesoura Micro Fina Super <td>EMD Millipore</td><td>6505-4L</td><td></td></tr><tr><td>, 3 1/4" retos</td><td>Instrumentos de Pesquisa Biomédica</td><td>11-1020</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine metanossulfonato</td><td>Syndel</td><td>TRIC-M-GR-0010</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20, Fisher BioReagents</td><td>Fischer Scientific</td><td>BP337-500</td><td></td></tr></tbody></table>

hepatectomia parcial em zebrafish adulto

Partial Hepatectomy in Adult Zebrafish

A insuficiência hepática é uma das principais causas de morte em todo o mundo, e a mortalidade por doença hepática crônica está aumentando acentuadamente nos Estados Unidos. Fígados saudáveis são capazes de se regenerar de danos tóxicos, mas em doença hepática avançada, a capacidade natural do fígado de se regenerar é prejudicada. Os zebrafish emergiram como um poderoso sistema experimental para estudar a regeneração. São um modelo ideal para estudar a regeneração hepática a partir da hepatectomia parcial, procedimento com relevância clínica direta em que parte do fígado é removida cirurgicamente, deixando o resto intacto. Não há protocolo padrão para hepatectomia parcial; estudos anteriores utilizando este modelo têm usado protocolos ligeiramente diferentes e relatado resultados diferentes. Descrito aqui é um protocolo eficiente e reprodutível para a realização de uma hepatectomia parcial em zebrafish adulto. Usamos esta técnica para demonstrar que os zebrafish são capazes de regeneração epimórfica do lobo ressecado. Este protocolo pode ser usado para interrogar ainda mais os mecanismos necessários para a regeneração hepática em zebrafish.

Para examinar o potencial regenerativo do fígado de zebrafish adulto, realizamos hepatectomia parcial (PHX) em zebrafish adulto. Em geral, foram selecionados adultos grandes (30-40 mm de comprimento), variando de 1,5 a 2,5 anos. Dentro de experimentos individuais, os animais foram selecionados do mesmo tanque, e tinham idade e tamanho compatível. Como controle adequado, utilizamos cirurgias falsas nas quais o animal foi anestesiado e recebeu uma grande incisão na parede do corpo ventral, mas foi recuperado sem remover ne...

Este protocolo descreve o procedimento para remover o lobo ventral do fígado em zebrafish adulto para permitir o estudo da regeneração hepática.

Hepatectomia Parcial em Zebrafish Adulto

Liver failure is one of the leading causes of death worldwide, and mortality from chronic liver disease is rising sharply in the United States. Healthy ...

Este protocolo permitirá que os pesquisadores aproveitem as ferramentas químicas e genéticas disponíveis para estudar os mecanismos de regeneração hepática em zebrafish. A hepatectomia parcial permite a remoção precisa do tecido para estimular a regeneração hepática sem a necessidade dos efeitos em todo o corpo da lesão hepática tóxica. Somente entendendo os mecanismos moleculares e celulares da regeneração hepática podemos projetar novas terapias para tratar pacientes com doença hepática avançada.Para começar, remova o peixe do tanque tricaine usando fórceps e incorpore-os no sulco de uma esponja encharcada de Tricaine com o lado ventral para cima. Em seguida, coloque a esponja sob um microscópio dissecando com iluminação de cima para baixo. Aperte a pele e escamas apenas posteriormente ao coração com fórceps finos e crie um buraco na cavidade corporal fazendo um corte sob os fórceps com a tesoura carregada de mola.Gire a esponja e faça uma incisão de três a quatro milímetros ao longo do abdômen cortando posterialmente em direção às barbatanas pélvicas. Então gire a esponja de volta. Aperte os lados da esponja com uma mão para forçar os órgãos viscerais a saírem da cavidade corporal.O lobo ventral do fígado está presente em cima do intestino, e o fígado é uma estrutura rosa ou laranja espalhada sobre o intestino marrom dourado, e pode ser claramente visualizada com fluorescência CFP. Aperte os fórceps finos para que as latas se toquem e deslizem as latas entre o fígado e o intestino. Em seguida, separe lentamente as latas para quebrar os laços da veia portal entre o fígado e o intestino.Repita este processo até que todas as conexões do portal entre o fígado e o intestino tenham sido cortadas, e puxe o lobo ventral do intestino usando fórceps finos. Corte o lobo ventral livre do resto do fígado. O exame do animal com fluorescência cfp demonstra que o lobo ventral foi removido.Quando terminar, transfira cuidadosamente o peixe da esponja para o tanque contendo água do sistema e flua a água do sistema sobre as brânquias por alguns minutos até que o peixe se recupere e nade por conta própria. Depois de eutanásia do peixe, remova-o da água gelada. Coloque-a no sulco de uma esponja com o lado ventral para cima e faça uma incisão da parede do corpo ventral na posição posterior anterior do coração.Em seguida, faça mais duas incisões das bordas da primeira incisão que correm ao longo do eixo posterior anterior até as barbatanas pélvicas, e retire a pele e o músculo para revelar os órgãos viscerais. Os órgãos viscerais agora podem ser visualizados com microscopia de campo brilhante e fluorescência. A recuperação hepática após hepatectomia parcial foi estimada pelo cálculo da relação peso hepático/corporal, que foi de 1,8% para os homens e 3,3% para as mulheres.A relação peso hepático/corporal de ambos os sexos foi determinada no dia zero pós-cirurgia, e no sétimo dia em hepatectomia parcial e controles falsos. No dia zero pós-cirurgia, os animais falsos têm um lobo ventral visível, mas em animais de hepatectomia parcial, o lobo ventral estava completamente ausente, o que resultou em uma redução de 30% no sexo masculino e redução de 20% nas proporções de peso hepático/corporal. No sétimo dia de cirurgia em animais de hepatectomia parcial, o lobo ventral não foi regenerado, e as relações hepáticos e de peso corporal em hepatectomia parcial e controles falsos foram comparáveis, indicando a recuperação da massa hepática após hepatectomia parcial.O efeito do tempo na regeneração do lobo ventral foi determinado pela realização de uma hepatectomia parcial de 1/3 e medição do lobo ventral à razão do comprimento do intestino. O lobo ventral ocupou de 50 a 100% do comprimento do intestino em controles falsos, mas foi severamente reduzido em animais de hepatectomia parcial de 1/3. Os animais parciais de hepatectomia no dia 36 pós-cirurgia apresentaram maior relação ventral ao intestino em comparação com o primeiro dia pós-cirurgia.Observou-se aumento estatisticamente significativo do lóbulo ventral em animais que se recuperam de hepatectomia parcial no dia 36 pós-cirurgia em comparação com o primeiro dia, mas não em controles falsos. Alguns animais regeneraram o lobo ventral, mas outros não, indicando variação na resposta à cirurgia. A parte mais crítica deste protocolo é separar o fígado e o intestino para que o lobo ventral possa ser totalmente removido.Hepatectomia parcial em zebrafish pode ser realizada em linhas mutantes ou transgênicas para avaliar os requisitos genéticos para a regeneração hepática.

Research

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Biology

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A fibrose sustentada com deposição de proteínas excessivas da matriz extracelular leva à cirrose. O abuso de álcool é uma das principais causas de doença hepática grave. Estabelecemos um modelo de fígado fibrótico de peixe-zebra induzido por etanol para estudar os mecanismos e estratégias de promoção da regeneração de hepatócitos após lesão induzida por álcool.

Desenvolvimento de um modelo de fígado fibrótica induzida por etanol no peixe-zebra para estudar Progenitor mediada por células de regeneração de hepatócitos

Este protocolo descreve análises histológicas dos fígados de larvas de peixe-zebra que foram tratadas com etanol a 2% durante 24 h. Tal tratamento com etanol agudo resulta em esteatose hepática e inchaço da vasculatura hepática.

Análises histológicas de lesão hepática alcoólica aguda em peixe-zebra

Continua a ser um grande desafio para desenvolver condicional gene nocaute ou eficaz knockdown do gene-em órgãos adultos do zebrafish. Aqui nós relatamos um protocolo para desempenho siRNA nanoparticle-mediada silenciamento no coração de adultos do zebrafish, proporcionando assim um novo método de perda-de-função para estudar órgãos adultos no zebrafish e outros organismos-modelo.

SiRNA Nanoparticle-mediada-silenciamento no coração de Zebrafish adulto

Aqui demonstramos um método para quantificar o tamanho do fígado em zebrafish larval, fornecendo uma maneira de avaliar os efeitos das manipulações genéticas e farmacológicas no crescimento e desenvolvimento do fígado.

Quantificando o tamanho do fígado em zebrafish larval usando microscopia de campo brilhante

Aqui, apresentamos como gerar um modelo de peixe-zebra associado ao Carcinoma Hepatocelular (CHC) associado à doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) para estudar o impacto do excedente de colesterol no microambiente hepático e na paisagem das células imunes.

Análise do Microambiente Hepático Durante a Progressão Precoce do Carcinoma Hepatocelular Associado à Doença Hepática Gordurosa Não Alcoólica em Peixe-Zebra.

Um novo método de injeção intraperitoneal (IP) em peixe-zebra adulto é descrito. Ao manusear compostos tóxicos como a doxorrubicina, esse procedimento é mais eficaz do que os dois métodos de IP relatados anteriormente. A técnica foi projetada para ser facilmente adotada por pesquisadores com experiência limitada no modelo de peixe-zebra.

Uma técnica de injeção intraperitoneal em peixe-zebra adulto que minimiza os danos corporais e a mortalidade associada

Aprenda a realizar hepatectomia parcial em zebrafish adulto para estudar regeneração hepática. Este protocolo reprodutível permite investigar mecanismos celulares e moleculares da regeneração do fígado em Danio rerio.

Hepatectomia Parcial em Zebrafish Adulto

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