Name: Dissecção de ovário planário para análise ultraestrutural e coloração de anticorpos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 8 s
Description: Aprenda a dissecção de ovários em planárias Schmidtea mediterranea para análise ultraestrutural e imunocoloração. Este método permite imagens de alta qualidade da biologia celular e subcelular dos oócitos.

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<ol><li>Brubacher, J. L., Vieira, A. P., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+the+planarian+Schmidtea+mediterranea+for+high-resolution+histology+and+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Preparation of the planarian Schmidtea mediterranea for high-resolution histology and transmission electron microscopy.</a> Nature Protocols. 9 (3), 661-673 (2014).</li>
<li>Carpenter, K. S., Morita, M., Best, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+of+the+photoreceptor+of+the+planarian+Dugesia+dorotocephala.+I.+Normal+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure of the photoreceptor of the planarian Dugesia dorotocephala. I. Normal eye.</a> Cell Tissue Research. 148 (2), 143-158 (1974).</li>
<li>Ishii, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+the+protonephridial+flame+cell+of+the+freshwater+planarian+Bdellocephala+brunnea%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of the protonephridial flame cell of the freshwater planarian Bdellocephala brunnea.</a> Cell Tissue Research. 206 (3), 441-449 (1980).</li>
<li>Morita, M., Best, J. B., Noel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopic+studies+of+planarian+regeneration%3A+I.+Fine+structure+of+neoblasts+in+Dugesia+dorotocephala%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ultrastructure+Research%22%5BJournal%5D)">Electron microscopic studies of planarian regeneration: I. Fine structure of neoblasts in Dugesia dorotocephala.</a> Journal of Ultrastructure Research. 27 (1), 7-23 (1969).</li>
<li>Hyman, L. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHyman%2C+LH+%22The+invertebrates%3A+Platyhelminthes+and+Rhynchocoela%2C+the+acoelomate+Bilateria%22">The invertebrates: Platyhelminthes and Rhynchocoela, the acoelomate Bilateria</a>. 2, 550(1951).</li>
<li>Higuchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+categorization+of+fluorescence+activated+cell+sorted+planarian+stem+cells+by+ultrastructural+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Characterization and categorization of fluorescence activated cell sorted planarian stem cells by ultrastructural analysis.</a> Development, Growth & Differentiation. 49 (7), 571-581 (2007).</li>
<li>Chong, T., Stary, J. M., Wang, Y., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+markers+to+characterize+the+hermaphroditic+reproductive+system+of+the+planarian+Schmidtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Molecular markers to characterize the hermaphroditic reproductive system of the planarian Schmidtea mediterranea.</a> BMC Developmental Biology. 11, 69(2011).</li>
<li>Handberg-Thorsager, M., Salo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+planarian+nanos-like+gene+Smednos+is+expressed+in+germline+and+eye+precursor+cells+during+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Genes+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">The planarian nanos-like gene Smednos is expressed in germline and eye precursor cells during development and regeneration.</a> Development Genes and Evolution. 217 (5), 403-411 (2007).</li>
<li>Kobayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+of+D-tryptophan+as+a+bioactive+substance+for+postembryonic+ovarian+development+in+the+planarian+Dugesia+ryukyuensis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The identification of D-tryptophan as a bioactive substance for postembryonic ovarian development in the planarian Dugesia ryukyuensis.</a> Scientific Reports. 7, 45175(2017).</li>
<li>Maezawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Planarian+D-amino+acid+oxidase+is+involved+in+ovarian+development+during+sexual+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">Planarian D-amino acid oxidase is involved in ovarian development during sexual induction.</a> Mechanisms of Development. 132, 69-78 (2014).</li>
<li>Rouhana, L., Tasaki, J., Saberi, A., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+the+planarian+reproductive+system+through+characterization+of+Schmidtea+mediterranea+CPEB+homologs%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of the planarian reproductive system through characterization of Schmidtea mediterranea CPEB homologs.</a> Developmental Biology. 426 (1), 43-55 (2017).</li>
<li>Sato, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+origin+of+the+germline+stem+cells+as+revealed+by+the+expression+of+nanos-related+gene+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Identification and origin of the germline stem cells as revealed by the expression of nanos-related gene in planarians.</a> Development, Growth & Differentiation. 48 (9), 615-628 (2006).</li>
<li>Tharp, M. E., Collins, J. J., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lophotrochozoan-specific+nuclear+hormone+receptor+is+required+for+reproductive+system+development+in+the+planarian%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">A lophotrochozoan-specific nuclear hormone receptor is required for reproductive system development in the planarian.</a> Developmental Biology. 396 (1), 150-157 (2014).</li>
<li>Wang, Y., Zayas, R. M., Guo, T., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((nanos+function+is+essential+for+development+and+regeneration+of+planarian+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">nanos function is essential for development and regeneration of planarian germ cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (14), 5901-5906 (2007).</li>
<li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nuclear+hormone+receptor+and+lipid+metabolism+axis+are+required+for+the+maintenance+and+regeneration+of+reproductive+organs%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">A nuclear hormone receptor and lipid metabolism axis are required for the maintenance and regeneration of reproductive organs.</a> bioRxiv. , 279364(2018).</li>
<li>Saberi, A., Jamal, A., Beets, I., Schoofs, L., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPCRs+direct+germline+development+and+somatic+gonad+function+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">GPCRs direct germline development and somatic gonad function in planarians.</a> PLoS Biology. 14, 1002457(2016).</li>
<li>Steiner, J. K., Tasaki, J., Rouhana, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+defects+caused+by+Smed-boule+RNA-interference+reveal+that+egg+capsule+deposition+occurs+independently+of+fertilization%2C+ovulation%2C+mating%2C+or+the+presence+of+gametes+in+planarian+flatworms%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Germline defects caused by Smed-boule RNA-interference reveal that egg capsule deposition occurs independently of fertilization, ovulation, mating, or the presence of gametes in planarian flatworms.</a> PLoS Genetics. 12, 1006030(2016).</li>
<li>Iyer, H., Issigonis, M., Sharma, P. P., Extavour, C. G., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+premeiotic+function+for+boule+in+the+planarian+Schmidtea+mediterranea%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A premeiotic function for boule in the planarian Schmidtea mediterranea.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (25), 3509-3518 (2016).</li>
<li>Rouhana, L., Vieira, A. P., Roberts-Galbraith, R. H., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PRMT5+and+the+role+of+symmetrical+dimethylarginine+in+chromatoid+bodies+of+planarian+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">PRMT5 and the role of symmetrical dimethylarginine in chromatoid bodies of planarian stem cells.</a> Development. 139 (6), 1083-1094 (2012).</li>
<li>Wang, Y., Stary, J. M., Wilhelm, J. E., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+genomic+screen+in+planarians+identifies+novel+regulators+of+germ+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">A functional genomic screen in planarians identifies novel regulators of germ cell development.</a> Genes & Development. 24 (18), 2081-2092 (2010).</li>
<li>Guo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcellular+analyses+of+planarian+meiosis+implicates+a+novel%2C+double-membraned+vesiculation+process+in+nuclear+envelope+breakdown%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Subcellular analyses of planarian meiosis implicates a novel, double-membraned vesiculation process in nuclear envelope breakdown.</a> bioRxiv. , 620609(2019).</li>
<li>Grudniewska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+signatures+of+somatic+neoblasts+and+germline+cells+in+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Transcriptional signatures of somatic neoblasts and germline cells in Macrostomum lignano.</a> Elife. 5, 20607(2016).</li>
<li>Wudarski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+free-living+flatworm+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Evodevo%22%5BJournal%5D)">The free-living flatworm Macrostomum lignano.</a> Evodevo. 11, 5(2020).</li>
<li>Wudarski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+transgenesis+and+annotated+genome+sequence+of+the+regenerative+flatworm+model+Macrostomum+lignano%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Efficient transgenesis and annotated genome sequence of the regenerative flatworm model Macrostomum lignano.</a> Nature Communications. 8 (1), 2120(2017).</li>
<li>Maezawa, T., Sekii, K., Ishikawa, M., Okamoto, H., Kobayashi, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMaezawa%2C+T+%22Reproductive+and+Developmental+Strategies%3A+The+Continuity+of+Life%22">Reproductive and Developmental Strategies: The Continuity of Life</a>. Kobayashi, K., Kitano, T., Iwao, Y., Kondo, M. , Springer. Japan, Tokyo. 175-201 (2018).</li>
<li>Newmark, P. A., Reddien, P. W., Cebria, F., Sanchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ingestion+of+bacterially+expressed+double-stranded+RNA+inhibits+gene+expression+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Ingestion of bacterially expressed double-stranded RNA inhibits gene expression in planarians.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, Suppl 1 11861-11865 (2003).</li>
<li>Orii, H., Mochii, M., Watanabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+%22soaking+method%22+for+RNA+interference+in+the+planarian+Dugesia+japonica%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Genes+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">A simple "soaking method" for RNA interference in the planarian Dugesia japonica.</a> Development Genes and Evolution. 213 (3), 138-141 (2003).</li>
<li>Rouhana, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+by+feeding+in+vitro-synthesized+double-stranded+RNA+to+planarians%3A+methodology+and+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">RNA interference by feeding in vitro-synthesized double-stranded RNA to planarians: methodology and dynamics.</a> Developmental Dynamics. 242 (6), 718-730 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>16% de paraformaldeído Ciências de</td><td>Microscopia Eletrônica</td><td>15710</td><td>EM grau</td></tr><tr><td>2% aquoso OsO4</td><td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>19152</td><td></td></tr><tr><td>50% glutaraldeído</td><td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>16320</td><td>EM grau</td></tr><tr><td>Digital Micrografia</td><td>Gatan Inc.</td><td></td><td>Versão 2.33.97.1, coleta de dados TEM</td></tr><tr><td>Resina Epon</td><td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>14120</td><td>Embed 812 Kit, líquido, resina epóxi</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Ted Pella</td><td>19207</td><td>Desnaturado</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td></td></tr><tr><td>Soro de cavalo</td><td>Sigma</td><td>H1138</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de chumbo</td><td>Microscopia eletrônica Ciências</td><td></td><td>Água tratada com</td></tr><tr><td>osmose reversa</td>de<td>água</td><td></td><td></td></tr> 6080564 <tr><td>MilliQ N-acetil-L-cisteína</td><td>Sigma</td><td>A7250</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>sigma</td><td>P7793</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Diamond Antifade Mountant</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36965</td><td></td></tr><tr><td>Óxido de propileno</td><td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>75569</td><td>Grau EM</td></tr><tr><td>&nbsp; Proteinase K</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25530049</td><td></td></tr><tr><td>Toluidine blue O</td><td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>92319</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio Eletrônico de Transmissão</td><td>FEI</td><td></td><td>Tecnai G2 Spirit BioTWIN</td></tr><tr><td>Acetato de uranila</td><td>Ciências de Microscopia</td><td>Eletrônica 541093</td><td></td></tr></tbody></table>

dissecção de ovário planário para análise ultraestrutural e coloração de anticorpos

Planarian Ovary Dissection for Ultrastructural Analysis and Antibody Staining

O método aqui apresentado foi descrito por Guo et al.21. A chave para uma dissecção bem-sucedida é identificar corretamente a pigmentação do ovário e as guias de posição. A estratégia do método é passar de posições amplas para um local específico. Primeiro, para conseguir isso, confie nos padrões de pigmentação dorsal e ventral (Figura 1A, B). A pigmentação ventral, onde residem os ovários, ficará branca após o tratamento com NAC a 5% e a fixação com ...

Dissecção de ovário planário para análise ultraestrutural e coloração de anticorpos

Accessibility to germ cells allows the study of germ cell development, meiosis, and recombination. The sexual biotype of the freshwater planarian, ...

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JoVE Journal

Biology

Biologia

Este protocolo descreve um procedimento para identificar e dissecar os órgãos do peixe-zebra adulto.

Dissecção de Órgãos do Zebrafish Adulto

Como nichos e células-tronco se formam durante o desenvolvimento é uma questão importante com implicações práticas.

Dissecção e coloração de Drosophila Larval Ovários

Aqui apresentamos uma adaptação do método de reconstrução 3D para visualização da vasculatura do ovário e capilares foliculares e clareza passiva em ovários intactos do mouse.

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O ovário de Drosophila é um sistema excelente modelo para estudar o desenvolvimento de nicho de células-tronco. Embora métodos para dissecando larvas e adultos ovários foram publicados, dissecções de ovário pupal requerem diferentes técnicas que não tenham sido publicadas em detalhe. Aqui nós esboçamos um protocolo para dissecar, coloração e montagem ovários pupal.

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Aqui, apresentamos um protocolo para quantificar os folículos nos ovários culturas de ratos jovens sem seccionamento serial. Usando a imunofluorescência todo órgão e tecido de compensação, seccionamento físico é substituído com seccionamento óptico. Este método de preparação da amostra e visualização mantém a integridade do órgão e facilita a quantificação automatizada de células específicas.

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Aqui, apresentamos um protocolo otimizado para imagens de ovários inteiros para análises quantitativas e qualitativas utilizando imunosscopia de montagem integral, microscopia multifotínica e visualização e análise 3D. Este protocolo acomoda um processamento de alto rendimento, confiável e repetível que é aplicável para toxicologia, diagnóstico clínico e ensaios genômicos da função ovariana.

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Um método de microdisseção do oviduto do camundongo que permite a coleta dos segmentos individuais, mantendo a integridade do RNA, é apresentado. Além disso, é descrito o procedimento de dissociação de células oviducais não enzimáticas. Os métodos são apropriados para análise genética e proteica subsequente dos segmentos oviductais funcionalmente diferentes e células oviductais dissociadas.

Microdisseção e Dissociação do Ovídeo Murine: Identificação do Segmento Individual e Isolamento de Célula Única

Este é um método comumente usado para a dissecção de gônadas de C. elegans seguida de quebra por congelamento, que produz amostras da linha germinativa para imunofluorescência via coloração de anticorpos ou para coloração DAPI simples para visualizar o DNA. Este protocolo tem sido bem sucedido para estudantes de graduação em um laboratório de pesquisa e em uma experiência de pesquisa de graduação baseada em curso.

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Este vídeo demonstra toda montagem imuno-histoquímica, um método pelo qual o padrão de expressão espacial e temporal de um antígeno pode ser visualizada em embriões de galinha jovens. Este método foi originalmente introduzido por Jane Dodd e Tom Jessell.

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