Name: Um método eficaz de inoculação para Phytophthora capsici em plantas de pimenta preta (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-16T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Aprenda um método eficaz de inoculação de Phytophthora capsici em plantas de pimenta-preta para estudar interações planta-patógeno. Esta técnica oferece maior estabilidade e precisão comparada aos métodos tradicionais.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabalho foi apoiado financeiramente pelo Programa Nacional de P&D da China (2020YFD1001200), o Sistema de Pesquisa agrícola da China (CARS-11), o fundo de pesquisa específico da Plataforma de Inovação para Acadêmicos da Província de Hainan (YSPTZX202154), a Fundação de Ciência Natural da Província de Hainan da China (321RC652) e a Natural Science Foundation of China (No. 31601626).

1. Preparação de plantas de corte de pimenta preta para infecção
<ol><li>Tome um corte de cinco nódulos, aproximadamente 40 cm de comprimento com um diâmetro de 0,5 cm, de um ramo ortotrópico saudável e vigorosamente crescente de pimenta preta usando uma faca de poda desinfetada ou secateurs. Podar os três nódulos inferiores dos ramos plagiotrópicos, com os dois nódulos superiores deixados com aproximadamente 10 folhas intactas.</li>
	<li>Prepare o substrato de raiz contendo solo e estrume animal (esterco de vaca ou esterco de ovelha) a uma proporção de 1:1. Autoclave o substrato de raiz a 121 °C por 20 min.</li>
	<li>Insira as estacas no substrato de raiz em um ângulo de aproximadamente 50°, com o terceiro nó apenas tocando a superfície do substrato e o broto axilar neste nó acima do substrato. NOTA: A bolsa utilizada aqui tem as seguintes dimensões: altura de 40-60 cm, diâmetro de 25-30 cm.</li>
	<li>Despeje 10-20 L de água sobre as raízes da planta. Coloque as estacas em uma estufa com 90% de sombra a uma temperatura de 25-30 °C para enraizar e crescer.</li>
</ol>2. Propagação de Fitohthora capsici (P. capsici)
NOTA: Um estoque da cultura Phytophthora capsici é mantido no laboratório de proteção vegetal do Spice and Beverage Research Institute, Academia Chinesa de Ciências Agrícolas Tropicais7.
<ol><li>Escove e limpe os tubérculos de batata sob água da torneira e, em seguida, corte 200 g de batatas em cubos de 1 cm3. Coloque alguns dos cubos em um béquer contendo 800 mL de água dupla destilada (ddH2O) e ferva por 20 minutos.</li>
	<li>Filtre o caldo através de gaze dupla usando filtragem de gravidade. Prepare o ágar de dextrose de batata (PDA) adicionando 20 g de dextrose e 15 g de ágar ao filtrado e superando o volume até 1 L com ddH2O. Autoclave a mistura a 121 °C por 20 min8.</li>
	<li>Despeje 20 mL do PDA esterilizado em forma líquida em uma placa de Petri redonda de 9 cm de diâmetro dentro de uma capa de fluxo de ar laminar. Deixe as placas PDA abertas dentro do capô de fluxo de ar laminar durante a noite como forma de evitar a condensação.</li>
	<li>Use um laço de inoculação para pegar mycelia de Phytophthora capsici estoque dentro de um tubo de ensaio. Coloque o inóculo com o lado mycelial em contato com o PDA em uma placa de Petri.</li>
</ol>3. Infecção por pimenta preta
<ol><li>Incubação<ol>
<li>Identifique uma área 5 cm acima da superfície do substrato e perto das raízes na haste para a inoculação.</li>
		<li>Core out um disco de mycelia 0,5 cm de diâmetro na borda crescente da cultura Phytophthora capsici em PDA em uma placa de Petri usando um borer de rolha.</li>
		<li>Danifique a haste usando uma agulha de seringa e faça três furos em um padrão triangular na área de inoculação selecionada. Cubra cada orifício com um disco mycelial. Posicione os orifícios próximos um do outro para garantir que a área ferida esteja totalmente coberta com os discos mycelial.</li>
		<li>Cubra os discos micelial com almofadas de algodão umedecido esterilizadas como forma de evitar a secagem. Amarre a almofada na haste com uma tira de polietileno para manter a posição dos discos inoculantes. NOTA: Às 8h após a inoculação, os orifícios inoculados ficaram pretos e a lesão se estendeu com o passar do tempo. As folhas ficaram amarelas e caíram, e a planta inoculada morreu 7-10 dias após a inoculação. Não foram desenvolvidas lesões nas plantas de controle. A maioria dos genes expressou-se de forma diferente após a inoculação com Phytophthora capsici em comparação com o grupo controle. A análise histopatológica dos tecidos infectados demonstrou que Phytophthora capsici colonizou no xilema.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Prove os materiais vegetais de interesse e armazene a -80 °C em nitrogênio líquido para uso em estudos subsequentes. NOTA: Nitrogênio líquido, sacos plásticos, canetas marcadoras, tesouras de galhos e outros materiais foram preparados antes dos experimentos.</li>
	<li>Após a amostra de materiais vegetais específicos para uso, autoclave todos os materiais vegetais restantes, a cultura e o meio de cultura Phytophthora capsici , e todos os instrumentos e labware utilizados neste trabalho de inoculação.</li>
</ol>

<ol><li>Gordo, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+sequencing+of+black+pepper+root+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">High-throughput sequencing of black pepper root transcriptome.</a> BMC Plant Biology. 12 (1), (2012).</li>
<li>Leonian, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+and+fruit+blight+of+Peppers+caused+by+Phytophthora+capsici+sp.+Nov%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Stem and fruit blight of Peppers caused by Phytophthora capsici sp. Nov.</a> Phytopathology. 12 (9), 401-408 (1922).</li>
<li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priming+maize+resistance+by+its+neighbors%3A+Activating+1%2C4-benzoxazine-3-ones+synthesis+and+defense+gene+expression+to+alleviate+leaf+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Plant+Science%22%5BJournal%5D)">Priming maize resistance by its neighbors: Activating 1,4-benzoxazine-3-ones synthesis and defense gene expression to alleviate leaf disease.</a> Frontiers in Plant Science. 6, 830(2015).</li>
<li>Fonseca, C. E. L., Vianda, D. R., Hansen, J. L., Pell, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associations+among+forage+quality+traits%2C+vigor%2C+and+disease+resistance+in+alfalfa%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+Science%22%5BJournal%5D)">Associations among forage quality traits, vigor, and disease resistance in alfalfa.</a> Crop Science. 39 (5), 1271-1276 (1999).</li>
<li>Altier, N. A., Thies, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+resistance+to+Pythium+seedling+disease+in+Alfalfa+using+a+culture+plate+method%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Identification of resistance to Pythium seedling disease in Alfalfa using a culture plate method.</a> Plant Disease. 79 (4), 341-345 (1995).</li>
<li>Pratt, R. G., Rowe, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+simplified+leaf+inoculation+procedures+for+identification+of+quantitative+resistance+to+Sclerotinia+trifoliorum+in+Alfalfa+seedling%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Disease%22%5BJournal%5D)">Evaluation of simplified leaf inoculation procedures for identification of quantitative resistance to Sclerotinia trifoliorum in Alfalfa seedling.</a> Plant Disease. 82 (10), 1161-1164 (1998).</li>
<li>Hao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+transcriptome+sequencing+of+black+pepper+%28Piper+nigrum+L.%29+and+an+analysis+of+genes+involved+in+phenylpropanoid+metabolism+in+response+to+Phytophthora+capsici%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">De novo transcriptome sequencing of black pepper (Piper nigrum L.) and an analysis of genes involved in phenylpropanoid metabolism in response to Phytophthora capsici.</a> BMC Genomics. 17 (1), 1-14 (2016).</li>
<li>Dong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+inoculation+and+classification+of+maize+ear+rot+caused+by+Fusarium+verticillioides%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Field inoculation and classification of maize ear rot caused by Fusarium verticillioides.</a> Bio-protocol. 8 (23), 3099(2018).</li>
<li>English, J. T., Laday, M., Bakonyi, J., Schoelz, J. E., Érsek, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+molecular+characterization+of+species+hybrids+derived+from+induced+fusion+of+zoospores+of+Phytophthora+capsica+and+Phytophthora+nicotianae%5BTitle%5D)+AND+%22Mycological+Research%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and molecular characterization of species hybrids derived from induced fusion of zoospores of Phytophthora capsica and Phytophthora nicotianae.</a> Mycological Research. 103 (8), 1003-1008 (1999).</li>
<li>Chatterjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidant+activity+of+some+phenolic+constituents+from+green+pepper+%28Piper+nigrum+L.%29+and+fresh+nutmeg+mace+%28Myristica+fragrans%29%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Antioxidant activity of some phenolic constituents from green pepper (Piper nigrum L.) and fresh nutmeg mace (Myristica fragrans).</a> Food Chemistry. 101 (2), 515-523 (2007).</li>
<li>Pfender, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+sporangia+and+release+of+zoospores+by+Phytophthora+megasperma+in+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Production of sporangia and release of zoospores by Phytophthora megasperma in soil.</a> Phytopathology. 67 (5), 657-663 (1977).</li>
<li>Nagila, A., Schutte, B. J., Sanogo, S., Idowu, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chile+pepper+sensitivity+to+mustard+seed+meal+applied+after+crop+emergence%5BTitle%5D)+AND+%22HortScience%22%5BJournal%5D)">Chile pepper sensitivity to mustard seed meal applied after crop emergence.</a> HortScience. 56 (2), 1-7 (2021).</li>
<li>Lamour, K. H., Stam, R., Jupe, J., Huitema, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oomycete+broad-host-range+pathogen+Phytophthora+capsica%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant+Pathology%22%5BJournal%5D)">The oomycete broad-host-range pathogen Phytophthora capsica.</a> Molecular Plant Pathology. 13 (4), 329-337 (2012).</li>
<li>Hardham, A., Gubler, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarity+of+attachment+of+zoospores+of+a+root+pathogen+and+pre-alignment+of+the+emerging+germ+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biology+International+Reports%22%5BJournal%5D)">Polarity of attachment of zoospores of a root pathogen and pre-alignment of the emerging germ tube.</a> Cell Biology International Reports. 14 (11), 947-956 (1990).</li>
</ol>

Neste estudo, a cabeça basal foi picada para danificar e fornecer um sistema de inoculação eficaz na planta de pimenta preta. As pelotas mycelial então cobriram os três orifícios para reter a umidade e permitir que o patógeno infectasse bem a planta. Após a inoculação, as folhas ficaram amarelas e caíram e as plantas inoculadas morreram. Não foram desenvolvidas lesões nas plantas de controle. A maioria dos genes expressou-se de forma diferente após a inoculação com Phytophthora capsici em comparação com o grupo ...

A pimenta-do-reino (Piper nigrum L.) é uma alpinista amadeirada e uma das culturas de especiarias mais importantes. É conhecido como o "Rei das Especiarias"1 e é cultivado em mais de 40 países e regiões da Ásia, África e América Latina. A podridão da raiz de Phytophthora é a doença mais devastadora da pimenta preta, e é causada pelo oomycete Phytophthora capsici. Este patógeno também infecta cucurbits, berinjelas, pimentão e tomate 2,3. Com pimenta-do-reino, uma cultura inteira às vezes pode ser dizimada por esta doença. A expansão das áreas de plantio de pimenta é restrita como resultado da indisponibilidade de variedades resistentes, o que tem dificultado significativamente o desenvolvimento da indústria chinesa de pimenta-do-reino. Uma inoculação eficaz e um sistema de amostragem preciso para Phytophthora capsici em plantas de pimenta preta são essenciais para estudar esta interação planta-patógeno.
A identificação e triagem da resistência nos recursos do germoplasma é o requisito básico para pesquisar a patogenicidade do patógeno e a criação e utilização de variedades resistentes. Uma abordagem amplamente utilizada é usar uma variedade de métodos de identificação baseados em espécies vegetais e grupos de patógenos. Os métodos atuais de identificação incluem identificação populacional, identificação individual, identificação de órgãos, identificação de tecidos, identificação celular, identificação bioquímica e identificação molecular, que foram desenvolvidos nos últimos anos 4,5. Houve sucesso nessas áreas, mas também há muitos problemas. Não importa qual método seja escolhido, os requisitos básicos de identificação de resistência à planta são consistentes, incluindo objetivos claros, resultados confiáveis e métodos simples, rápidos e fáceis de padronizar. Este princípio também deve ser seguido na identificação da resistência à pimenta-do-reino.
Em condições naturais de campo, a identificação da resistência à doença pode ser influenciada por muitos fatores ambientais. Assim, foi proposto que folhas separadas e raízes irrigadas sejam utilizadas em laboratório para identificar a resistência à doença. As folhas jovens de plantas saudáveis foram inoculadas in vitro em laboratório, e a área de folhas doentes foi medida pela inoculação do patógeno, a fim de identificar a resistência à doença das plantas6. No entanto, a inoculação de folhas in vitro só pode ser usada para identificação geral de resistência e não para estudos de interação molecular. Apesar disso, o status resistente à doença frequentemente se apresenta na inoculação radicular irrigada, causando incerteza no estudo de acompanhamento da reprodução molecular para resistência à doença. Portanto, métodos rápidos e simples de detecção interna são essenciais. Este estudo tem como objetivo fornecer um método de identificação de resistência em laboratório.

<table><tbody><tr><td>Ágar em pó</td><td>Solarbio</td><td>A8190</td><td></td></tr><tr><td>Bancada limpa</td><td>Haier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dextrose</td><td>Xilong Scientific</td><td>15700501</td><td></td></tr><tr><td>Forno de esterilização de alta temperatura</td><td>Zaelway</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placas de placa de Petri</td><td>Biosharp</td><td>BS-90-D</td><td></td></tr></tbody></table>

um método eficaz de inoculação para phytophthora capsici em plantas de pimenta preta

An Effective Inoculation Method for Phytophthora capsici on Black Pepper Plants

Piper nigrum L. (pimenta preta) é uma típica videira amadeirada que é uma cultura de especiarias economicamente importante em todo o mundo. A produção de pimenta preta é significativamente impactada pela doença da podridão radicular causada pelo Phytophthora capsici, que influenciou seriamente o desenvolvimento da indústria como um problema de "ponto de estrangulamento". No entanto, o mecanismo genético molecular de resistência na pimenta preta não é claro, levando a um lento progresso no desenvolvimento de novas variedades de pimenta preta. Um sistema eficaz de inoculação e amostragem precisa para Phytophthora capsici em plantas de pimenta preta é essencial para estudar esta interação planta-patógeno. O principal objetivo deste estudo é demonstrar uma metodologia detalhada onde a cabeça basal de pimenta preta é inoculada com Phytophthora capsici, ao mesmo tempo em que fornece referência para a inoculação de plantas de videiras amadeiradas. A cabeça basal da planta de pimenta preta foi picada para danificá-la, e as pelotas mycelial cobriram os três orifícios para reter a umidade para que o patógeno pudesse infectar bem a planta. Este método fornece uma melhor maneira de resolver a instabilidade causada pelos métodos tradicionais de inoculação, incluindo o encharcado de solo ou o mergulho de raízes. Também fornece um meio promissor para estudar o modo de ação entre plantas e outros patógenos vegetais transportados pelo solo na reprodução de precisão agrícola.

A Figura 1 apresenta os sintomas das folhas de pimenta preta após a inoculação de P. capsici . A Figura 2 apresenta os sintomas das hastes de pimenta-do-reino após a inoculação de P. capsici . O patógeno infectou a pimenta-do-reino na haste basal; sintomas incluindo amarelamento de folhas, murchas aparecendo, browning xilema e o envelhecimento do vaso gradualmente aparecendo. A Figura 3 mostra a maioria dos genes e...

A pinça da cabeça basal da planta de pimenta preta é um método breve e de economia de tempo para danificá-la. Aqui, fornecemos passos detalhados com um vídeo para infectar plantas de pimenta preta.

Um método eficaz de inoculação para Phytophthora capsici em plantas de pimenta preta

Piper nigrum L. (black pepper) is a typical woody vine that is an economically important spice crop across the world. Black pepper production is ...

O experimento a seguir introduz uma inoculação eficaz e um método de amostragem preciso para Phytophthora capsici em plantas de pimenta preta. A pimenta-do-reino, que é uma videira amadeirada típica, é uma cultura de especiarias economicamente importante. A produção de pimenta-do-reino é afetada principalmente pela doença da podridão radicular causada pelo Phytophthora capsici, e influenciou seriamente o desenvolvimento industrial.Uma inoculação eficaz e um sistema de amostragem preciso para Phytophthora capsici em plantas de pimenta preta é importante para o estudo da interação planta-patógeno. O principal objetivo deste estudo é demonstrar uma metodologia detalhada na qual a cabeça basal de pimenta preta foi inoculada com Phytophthora capsici, e também fornecer uma referência para a inoculação de plantas de videiras lenhosas. Este método fornece uma melhor maneira de resolver a instabilidade trazida pelo método tradicional de inoculação, como o encharcado de solo ou o mergulho de raízes.Procedimentos experimentais. As estacas de pimentas-do-reino são plantadas no ambiente controlado por dois meses. Subcultura o Phytophthora capsici, e incubar por cinco dias abaixo de 25 graus Celsius.No dia da infecção, os blocos de ágar estão cobertos pelos três buracos enfiados pela agulha. E, finalmente, caracterizar sintomas da doença. Preparação de plantas de corte de pimenta preta para infecção.Corte os ramos ortotrópicos em comprimentos de 40 centímetros e 0,5 centímetro de diâmetro, e remova os ramos plagiotrópicos nos nódulos inferiores por faca estéril e secateur. O ramo cortado deve conter dois nós e cinco folhas na parte superior para reduzir a perda de água. Corte a parte superior a um corte plano e a parte inferior a um corte oblíquo.O substrato de raiz do corte de pimenta preta foi preparado em uma mistura, contendo solo e estrume animal, como esterco de vaca, esterco de ovelha, etc, em uma proporção de um para um. O solo foi autoclavado a cerca de 121 graus Celsius por 20 minutos. Use os sacos de reprodução de 30 centímetros de diâmetro e 50 centímetros de altura para colocar os substratos de raiz.Prepare uma inclinação de 50 graus para encher os substratos. As estacas foram colocadas em um ângulo de 50 graus, com mais de três nós abaixo do substrato. Foram cobertos com o meio de enraizamento e a parte auxiliar deve ficar gruda no meio.Finalmente, as estacas foram totalmente infiltradas. O corte reto foi adotado para inserir o corte. Preparação das culturas Phytophthora capsici.Escolha batatas livres de doenças. Limpe as batatas e corte em pequenos quadrados. Coloque 200 gramas de batatas em 800 mililitros de água dupla destilada, e fervido por 20 minutos.Em seguida, filtre a mistura. Adicione 20 gramas de dextrose. Encha a mistura em um litro com água destilada dupla.Adicione 15 gramas de ágar em pó no filtrado. Distribua o meio em frascos e veda usando Parafilm. Autoclave o meio a 121 graus Celsius por 20 minutos.O meio calculado de ágar de batata foi dispensado nas placas da placa de Petri, e resfriamento no banco estéril para solidificação. A agulha de inoculação foi higienizada pelo aquecimento usando lâmpada de queima de álcool, e resfriamento por vários segundos. Pegue pequenos pedaços de amostras de fungos usando inoculação estéril e coloque em PDA.O micélio cobre cerca de três quartos da placa. As culturas estão prontas para mais experimentos. Infecção por pimentões negros.A localização de cinco centímetros de distância da superfície do substrato foi considerada como o ponto de incubação. O local de incubação não deve estar longe da raiz, com o objetivo de evitar prolongar o tempo infeccioso. Passos detalhados de pinpricking são os seguintes.Uma pelota de micélio de Phytophthora capsici foi coletada usando um borer de rolha. Notavelmente, as pelotas de micélio recém-desenvolvidas na borda da placa foram preferencialmente selecionadas por causa de suas atividades infecciosas mais elevadas. Esterilize uma haste usando 75% de etanol e tome três poros triangulares na posição esterilizada usando a agulha de inoculação.Três poros triangulares no local da inoculação foram presos usando a agulha de inoculação, e pelotas micelias foram cobertas nos três poros. Depois de oito horas, os poros ficaram pretos em geral. A dilatação foi ampliada com o prolongamento da incubação.Depois de sete a dez dias, as folhas ficaram amarelas e cairam, até que a pimenta-do-reino morresse. Os resultados apresentados são os seguintes. Após a infecção, os sintomas aparecem nas plantas de pimenta preta, incluindo amarelamento e murcha de folhas, browning xilema e blacking de vasos.A maioria dos genes expressou de forma diferente após a inoculação com Phytophthora capsici, em comparação com o grupo controle. A análise histopatológica dos tecidos infectados demonstrou Phytophthora capsici colonizada no xilema. Conclusão. Neste estudo, a pinpricking da cabeça basal foi usada para torná-la danificada para fornecer uma inoculação eficaz, e o sistema de duplicação em pimenta preta.Enquanto isso, este protocolo também representa uma maneira mais eficiente de fornecer uma referência para incubar com -Nosso método pode dar mais tempo e operar mais brevemente. Este protocolo proporciona melhor resultado, o que permite uma forte interação entre uma planta e o patógeno transportado pelo solo. O que é visível e conveniente para detectar o processo dinâmico entre plantas e seus patógenos.Em nosso método que começamos a alfinetar a cabeça basal da planta de pimenta preta para torná-la danificada. Em seguida, a área danificada é coberta diretamente com o Phytophthora capsici, e manteve a umidade. Para que o patógeno infectasse a planta.Também fornece uma maneira promissora para o estudo do modo de ação entre plantas e outros patógenos vegetais transportados pelo solo na reprodução de precisão agrícola.

an-effective-inoculation-method-for-phytophthora-capsici-on-black

Research

JoVE Journal

Genetics

Genética

Fonte: Rufián, J. S., et.al. Análise de célula única da expressão dos genes de Pseudomonas syringae no tecido vegetal. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra um método de infiltração a vácuo para introduzir um patógeno bacteriano nas folhas das plantas de Arabidopsis . A abordagem utiliza uma suspensão bacteriana preparada e pulsos de vácuo para permitir uma entrada uniforme através dos estomas, resultando em infecção controlada nas folhas.

Inoculação de um patógeno bacteriano nas folhas de Arabidopsis por infiltração a vácuo

Este vídeo demonstra o ensaio de inibição do crescimento de plântulas na planta Arabidopsis thaliana. O impacto do aumento da concentração de peptídeo imune elicitor no crescimento das mudas é determinado.

Medindo a inibição induzida imunologicamente do crescimento de mudas

Este protocolo demonstra dois métodos de inoculação de introduzir o entomopatógeno...

Estabelecer Entomopatógenos fúngicas como endófitos: Rumo Controle Biológico endofítico

Descreve-se o uso de um método de injeção de agulha para inocular plantas de milho e teosinto com o pato patogênico biotrófico Ustilago maydis.  O método de inoculação da injeção de agulha facilita a entrega controlada do patógeno fúngico entre as folhas da planta onde o patógeno entra na planta através da formação de appresoria. Este método é altamente eficiente, permitindo inoculações reprodutíveis com u. maydis.

Um método rápido e eficiente para avaliar a patogenicidade dos maydis ustilago nas linhas de milho e teosinte

Agroinfiltração e agroinfecção PVX são ensaios funcionais de rotina para expressão ectópica transitória de genes nas plantas. Esses métodos são ensaios eficientes em estratégias de efeitoomia (resistência rápida e descoberta genética de avirulência) e cruciais para pesquisas modernas em patologia molecular vegetal. Eles atendem à demanda por uma análise funcional robusta de alto rendimento nas plantas.

Agroinfiltração e Agroinfecção PVX em Batata e Nicotiana benthamiana

A quantificação do crescimento de patógenos é uma ferramenta poderosa para caracterizar várias respostas imunes de Arabidopsis thaliana (doravante: Arabidopsis). O método descrito aqui apresenta um ensaio otimizado de infiltração de seringa para quantificar a Pseudomonas syringae pv. maculicola ES4326 crescimento em folhas adultas de Arabidopsis.

Bacteriana Folha Infiltração Ensaio para Belas Caracterização das respostas de defesa da planta usando o<em&gt; Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae</em&gt; Patossistema

Aqui, apresentamos um protocolo para testar a virulência da planta com o patógeno vegetal Magnaporthe grisea. Este relatório contribuirá para o rastreio em larga escala das raças de isolados de fungos e servir como um excelente ponto de partida para a compreensão dos mecanismos resistentes de plantas durante reprodução molecular.

O teste de infecção da planta: Spray e inoculação mediada por ferimento com o de patógeno vegetal Magnaporthe Grisea

Apresentamos um protocolo para a construção de um sistema simples de distribuição de esporos constituído por uma caixa de inoculação com uma malha de ~50 μm e uma câmara de plástico transparente. Isso pode ser usado para inocular uniformemente plantas com esporos de oídio, permitindo assim uma avaliação precisa e reprodutível dos fenótipos de doenças das plantas em estudo.

Um método de inoculação fácil e flexível para avaliar com precisão os fenótipos de infecção por oídio de Arabidopsis e outras plantas

Este protocolo apresenta um resumo detalhado das estratégias para inocular raízes vegetais com micróbios transportados pelo solo. Exemplificados para os fungos Verticillium longisporum e Verticillium dahliae, três diferentes sistemas de infecção radicular são descritos. Potenciais aplicações e possíveis análises a jusante são destacadas, e vantagens ou desvantagens são discutidas para cada sistema.

Estratégias de inoculação para infectar raízes vegetais com microrganismos transportados pelo solo

Este protocolo apresenta um sistema otimizado de bioensaio foliar destacado para avaliar a eficácia de fungos entomopatogênicos (FPE) contra o pulgão mostarda (Lipaphis erysimi (Kalt.)), um inseto partenogenético. O método descreve o processo de coleta de dados durante os experimentos com placas de Petri, permitindo que os pesquisadores meçam consistentemente a virulência do PFE contra pulgões da mostarda e outros insetos partenogenéticos.

Avaliação do Efeito Afidicida de Fungos Entomopatogênicos Contra Insetos Partenogenéticos, Pulgão Mostarda, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Um protocolo de bioensaio de folhas destacadas foi estabelecido para tripes de pimenta de criação massal usando um método de folhas destacadas modificado em recipientes de vidro contendo ágar, garantindo alta sobrevivência e desenvolvimento sincronizado. Este sistema permite a triagem eficiente da virulência de fungos entomopatogênicos contra larvas de 2ºínstar e fornece um suprimento confiável de tripes para avaliações de laboratório, estufa e campo.

Estabelecimento de um sistema de criação de tripes de pimenta (Scirtothrips dorsalis Hood) para triagem de virulência de fungos entomopatogênicos

Aprenda um método eficaz de inoculação de Phytophthora capsici em plantas de pimenta-preta para estudar interações planta-patógeno. Esta técnica oferece maior estabilidade e precisão comparada aos métodos tradicionais.

Um método eficaz de inoculação para Phytophthora capsici em plantas de pimenta preta

Explorar mais vídeos