Preparação amostral para visualização tridimensional baseada em tomografia computadorizada de vasos de membros traseiros murinos

É possível tirar imagens de tomografia dos vasos sanguíneos nos membros inferiores e nos órgãos abdominais usando o protocolo de passo. O método permite a avaliação de todos os vasos sanguíneos de forma abrangente. Além disso, é possível avaliar apenas artérias ou, ao mesmo tempo, artérias e veias.

É muito importante prevenir coágulos sanguíneos, vazamento ou sangue bem, e evitar bolhas de ar. Antes da operação, injete 1 unidade/grama de heparina em PBS na cavidade intraperitoneal do camundongo. Após 30 minutos, faça uma incisão no esterno do rato eutanizado e fixe o tórax aberto com pinos.

Corte a aorta ascendente antes de remover o coração, e depois remova o pulmão para expor a aorta descendente. Corte a aorta descendente diagonalmente para revelar a seção transversal do vaso. Em seguida, insira um cateter de calibre 22 na aorta descendente enquanto executa o tampão de vasodilatação.

Fixar a raiz do cateter e fazer um nó para evitar vazamentos devido ao fluxo de volta. Uma vez feito, inicie a perfusão com uma solução vasodilatante aquecida a uma pressão fixa entre 13 a 15 quilopascals. Após três minutos, perfunda uma solução de 4% paraformaldeído em PBS por 3 min.

Pare a perfusão e encha o tubo de extensão conectado ao cateter com 2 mL do meio de contraste recém-preparado diluído na razão 1:1 para perfuuse em um fixo entre 13 a 15 quilopascals. Para visualizar as artérias, verifique a unha do pé da boca para confirmar que o meio de contraste atingiu a artéria. Da mesma forma, verifique a veia cava inferior do diafragma para confirmar a circulação completa do meio de contraste e visualize todos os vasos.

Se a circulação do meio de contraste estiver completa, feche a torneira de três vias e remova o tubo. Incubar a amostra durante a noite a 4 graus Celsius. Neste protocolo, todos os vasos nas extremidades inferiores do mouse foram visualizados.

Os resultados de um modelo de isquemia de membros traseiros confirmaram que a artéria femoral não ligada estava correndo paralelamente à veia femoral. Além disso, a interrupção nos meios de contraste facilitou a visualização de uma artéria femoral ligada e o desenvolvimento de embarcações colaterais. Alguns vasos cheios com o meio de contraste poderiam ser vistos.

Por outro lado, também foi notada a interrupção nos meios de contraste devido à mistura de mídia não-contrária, ou perfusão insuficiente. Era impossível visualizar as artérias na superfície do corpo por observação microscópica do meio de contraste, o que facilitou a avaliação de defeitos na vasculatura. É muito importante evitar bolhas de ar ao inserir o cateter.

Como seus órgãos abdominais também estão relaxados, é possível retirar os órgãos e fazer uma tomografia. Usando este método, conseguimos identificar um novo quarto de saturação.