Name: Classificação do estado de ativação de células-tronco neurais in vitro usando autofluorescência (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: Aprenda a classificar estados de ativação de células-tronco neurais de camundongos adultos usando autofluorescência e microscopia confocal. Este método permite análise sem marcadores em células vivas para estudar neurogênese adulta.

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<ol><li>Goncalves, J. T., Schafer, S. T., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+neurogenesis+in+the+hippocampus%3A+From+stem+cells+to+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Adult neurogenesis in the hippocampus: From stem cells to behavior.</a> Cell. 167 (4), 897-914 (2016).</li>
<li>Kuhn, H. G., Dickinson-Anson, H., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+in+the+dentate+gyrus+of+the+adult+rat%3A+age-related+decrease+of+neuronal+progenitor+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis in the dentate gyrus of the adult rat: age-related decrease of neuronal progenitor proliferation.</a> J Neurosci. 16 (6), 2027-2033 (1996).</li>
<li>Silva-Vargas, V., Maldonado-Soto, A. R., Mizrak, D., Codega, P., Doetsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+niche+signals+from+the+choroid+plexus+regulate+adult+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Age-dependent niche signals from the choroid plexus regulate adult neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 19 (5), 643-652 (2016).</li>
<li>Urban, N., Blomfield, I. M., Guillemot, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quiescence+of+adult+mammalian+neural+stem+cells%3A+A+highly+regulated+rest%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Quiescence of adult mammalian neural stem cells: A highly regulated rest.</a> Neuron. 104 (5), 834-848 (2019).</li>
<li>Urban, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Return+to+quiescence+of+mouse+neural+stem+cells+by+degradation+of+a+proactivation+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Return to quiescence of mouse neural stem cells by degradation of a proactivation protein.</a> Science. 353 (6296), 292-295 (2016).</li>
<li>Kalamakis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quiescence+modulates+stem+cell+maintenance+and+regenerative+capacity+in+the+aging+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Quiescence modulates stem cell maintenance and regenerative capacity in the aging brain.</a> Cell. 176 (6), 1407-1419 (2019).</li>
<li>Walsh, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+T-cell+activation+via+autofluorescence+lifetime+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Classification of T-cell activation via autofluorescence lifetime imaging.</a> Nat Biomed Eng. 5 (1), 77-88 (2021).</li>
<li>Sagar, M. A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+activation+visualization+via+fluorescence+lifetime+imaging+microscopy+of+intrinsically+fluorescent+metabolic+cofactors%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophotonics%22%5BJournal%5D)">Microglia activation visualization via fluorescence lifetime imaging microscopy of intrinsically fluorescent metabolic cofactors.</a> Neurophotonics. 7 (3), 035003(2020).</li>
<li>Knobloch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+control+of+adult+neural+stem+cell+activity+by+Fasn-dependent+lipogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Metabolic control of adult neural stem cell activity by Fasn-dependent lipogenesis.</a> Nature. 493 (7431), 226-230 (2013).</li>
<li>Knobloch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fatty+acid+oxidation-dependent+metabolic+shift+regulates+adult+neural+stem+cell+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A fatty acid oxidation-dependent metabolic shift regulates adult neural stem cell activity.</a> Cell Rep. 20 (9), 2144-2155 (2017).</li>
<li>Knobloch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SPOT14-positive+neural+stem%2Fprogenitor+cells+in+the+hippocampus+respond+dynamically+to+neurogenic+regulators%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">SPOT14-positive neural stem/progenitor cells in the hippocampus respond dynamically to neurogenic regulators.</a> Stem Cell Reports. 3 (5), 735-742 (2014).</li>
<li>Shin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA-Seq+with+waterfall+reveals+molecular+cascades+underlying+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA-Seq with waterfall reveals molecular cascades underlying adult neurogenesis.</a> Cell Stem Cell. 17 (3), 360-372 (2015).</li>
<li>Leeman, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysosome+activation+clears+aggregates+and+enhances+quiescent+neural+stem+cell+activation+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Lysosome activation clears aggregates and enhances quiescent neural stem cell activation during aging.</a> Science. 359 (6381), 1277-1283 (2018).</li>
<li>Beckervordersandforth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+metabolism-mediated+regulation+of+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Plast%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial metabolism-mediated regulation of adult neurogenesis.</a> Brain Plast. 3 (1), 73-87 (2017).</li>
<li>Morrow, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autofluorescence+is+a+biomarker+of+neural+stem+cell+activation+state%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Autofluorescence is a biomarker of neural stem cell activation state.</a> Cell Stem Cell. , (2024).</li>
<li>Kolenc, O. I., Quinn, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+cell+metabolism+through+autofluorescence+imaging+of+NAD%28P%29H+and+FAD%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Evaluating cell metabolism through autofluorescence imaging of NAD(P)H and FAD.</a> Antioxid Redox Signal. 30 (6), 875-889 (2019).</li>
<li>Mira, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+through+BMPR-IA+regulates+quiescence+and+long-term+activity+of+neural+stem+cells+in+the+adult+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Signaling through BMPR-IA regulates quiescence and long-term activity of neural stem cells in the adult hippocampus.</a> Cell Stem Cell. 7 (1), 78-89 (2010).</li>
<li>Morrow, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vimentin+coordinates+protein+turnover+at+the+aggresome+during+neural+stem+cell+quiescence+exit%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Vimentin coordinates protein turnover at the aggresome during neural stem cell quiescence exit.</a> Cell Stem Cell. 26 (4), 558-568 (2020).</li>
<li>Martynoga, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenomic+enhancer+annotation+reveals+a+key+role+for+NFIX+in+neural+stem+cell+quiescence%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Epigenomic enhancer annotation reveals a key role for NFIX in neural stem cell quiescence.</a> Genes Dev. 27 (16), 1769-1786 (2013).</li>
<li>Bin Imtiaz, M. K., Jessberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+adult+mouse+hippocampal+neural+stem+cells+for+fluorescence+loss+in+photobleaching+assays%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of adult mouse hippocampal neural stem cells for fluorescence loss in photobleaching assays.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100695(2021).</li>
<li>Guo, W., Patzlaff, N. E., Jobe, E. M., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+multipotent+neural+stem+or+progenitor+cells+from+both+the+dentate+gyrus+and+subventricular+zone+of+a+single+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of multipotent neural stem or progenitor cells from both the dentate gyrus and subventricular zone of a single adult mouse.</a> Nat Protoc. 7 (11), 2005-2012 (2012).</li>
<li>Lakowicz, J. R., Szmacinski, H., Nowaczyk, K., Johnson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+lifetime+imaging+of+free+and+protein-bound+NADH%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fluorescence lifetime imaging of free and protein-bound NADH.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89 (4), 1271-1275 (1992).</li>
<li>Blacker, T. S., Duchen, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+mitochondrial+redox+state+using+NADH+and+NADPH+autofluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radic+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Investigating mitochondrial redox state using NADH and NADPH autofluorescence.</a> Free Radic Biol Med. 100, 53-65 (2016).</li>
<li>Datta, R., Heaster, T. M., Sharick, J. T., Gillette, A. A., Skala, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+lifetime+imaging+microscopy%3A+fundamentals+and+advances+in+instrumentation%2C+analysis%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Fluorescence lifetime imaging microscopy: fundamentals and advances in instrumentation, analysis, and applications.</a> J Biomed Opt. 25 (7), 1-43 (2020).</li>
<li>ImageJ. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/">https://imagej.nih.gov/ij/</a> (2021).</li>
<li>Becker & Hichl Handbooks. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/">https://imagej.nih.gov/ij/</a> (2024).</li>
<li>GitHub Materials. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://github.com/chrismorrow5/Neural-Stem-Cell-Autofluorescence-Analysis/">https://github.com/chrismorrow5/Neural-Stem-Cell-Autofluorescence-Analysis/</a> (2024).</li>
<li>Codega, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+and+purification+of+quiescent+adult+neural+stem+cells+from+their+in+vivo+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Prospective identification and purification of quiescent adult neural stem cells from their in vivo niche.</a> Neuron. 82 (3), 545-559 (2014).</li>
<li>Llorens-Bobadilla, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+transcriptomics+reveals+a+population+of+dormant+neural+stem+cells+that+become+activated+upon+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-cell transcriptomics reveals a population of dormant neural stem cells that become activated upon brain injury.</a> Cell Stem Cell. 17 (3), 329-340 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Lente objetiva de água 40x</td><td>Nikon</td><td>MRD77410</td><td>Lente objetiva usada em microscópio multifotônico na Parte 3</td></tr><tr><td>Cubeta de 8 poços</td><td>Ibidi</td><td>80826-90</td><td>Para imagem de aNSCs/qNSCs</td></tr><tr><td>Medidor de potência analógica</td><td>Thorlabs</td><td>PM100A</td><td>Usado em microscópio multifotônico na Parte 3</td></tr><tr><td>Antibiótico-Antimicótico (100X) (PSF)</td> <td>Antibiótico Thermo Fisher</td><td>15240062</td><td>para mídia NSC</td></tr><tr><td>B-27</td><td>Invitrogen</td><td>17504044</td><td>Suplemento nutriente para mídia NSC</td></tr><tr><td>BMP4</td><td>Fisher Scientific</td><td>5020BP010</td><td>Fator para induzir quiescência</td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino</td><td>Sigma</td><td>A4919-25G</td><td>Para fazer BMP4</td></tr><tr><td>Chameleon laser ultrafast</td><td>Laser Coherent</td><td>N / A</td><td>usado em microscópio multifotônico na Parte 3</td></tr><tr><td>Microscópio</td> <td>confocalMicroscópio Nikon</td><td>C2</td><td>usado para a Parte 1</td></tr><tr><td>DMEM/F-12 (sem GlutaMAX)</td><td>Invitrogen</td><td>11320033</td><td>Mídia de base para NSCs</td></tr><tr><td>DNAse</td><td>Sigma</td><td>D5025-15KU</td><td>Adicionado ao kit de ensaio EdU inibidor de tripsina</td></tr><tr><td></td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>Ensaio de proliferação para cultura de células</td></tr><tr><td>EGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-100-15-500UG Fator de</td><td>crescimento para mídia NSC</td></tr><tr><td>FGF</td><td>PeproTech</td><td>100-18B</td><td>Fator de crescimento para mídia NSC</td></tr><tr><td>Classificador de células ativadas fluorescentes</td><td>BD</td><td>FACSAria</td><td>Classificador de células ativadas fluorescentes usado para a Parte 2</td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Sigma</td><td>H3149-50KU</td><td>Aditivo para mídia NSC</td></tr><tr><td>L-15</td><td>Invitrogen</td><td>21083027</td><td>Para preparar solução inibidora de tripsina</td></tr><tr><td>Laminina</td><td>Sigma</td><td>L2020-1MG</td><td>Para revestimento de vidraria</td></tr><tr><td>Nikon TiE microscópio invertido</td><td>Nikon</td><td>N / A</td><td>Estrutura do microscópio Usado para a Parte 3</td></tr><tr><td>PLO</td><td>Sigma</td><td>P3655-100MG</td><td>Para revestimento de vidraria</td></tr><tr><td>SPC-150 Eletrônica de contagem de fótons únicos</td><td>Becker e Hickl</td><td>N / A</td><td>Usado em microscópio multifotônico na Parte 3</td></tr><tr><td>Tripsina (para tripsinizar pellets de aNSCs que estavam crescendo como esferas ou monocamadas)</td><td>Gibco</td><td>15090046</td><td>Para tripsinizar neuroesferas ou aNSCs aderentes</td></tr><tr><td>Tripsina (para tripsinizar qNSCs)</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td>Para tripsinizar qNSCs aderentes</td></tr><tr><td>Inibidor de tripsina</td><td>Sigma</td><td>T6522-100MG</td><td>Para inibir a tripsinização de aNSCs</td></tr><tr><td>Cristais de ureia</td><td>Sigma</td><td>U5128-5G</td><td>Usado para coletar um IRF</td></tr><tr><td>Versene</td><td>Thermo Fisher</td><td>15040066</td><td>Para preparar tripsina</td></tr></tbody></table>

classificação do estado de ativação de células-tronco neurais in vitro usando autofluorescência

Classification of Neural Stem Cell Activation State In Vitro Using Autofluorescence

Imagem de autofluorescência confocal para separar o estado da célula NSC (Figura 1) Para usar a microscopia confocal para resolver o estado de ativação do NSC, qNSCs e aNSCs foram gerados in vitro usando um meio de ativação ou meio de quiescência, conforme descrito anteriormente 10,13,17,18. Para detectar PAF em NSCs, qNSCs e aNSCs vivos foram fotografados usando a mesma exposição em um microscópio confocal (Ex: 405 nm, Em: 580-620 nm). Os qNSCs exibiram um número maior de PAF em comparação com os aNSCs (Figura 1A, B). Esse achado ilustra como as propriedades de autofluorescência podem ser usadas como marcadores para identificar o estado celular de qNSCs e aNSCs.
Enriquecimento FACS do estado da célula NSC usando autofluorescência (Figura 2) Para enriquecer o estado do ciclo celular usando FACS, qNSCs e aNSCs foram gerados in vitro 10,13,17,18,19 conforme descrito neste protocolo e pré-marcados com EdU por 1 h antes da tripsinização e análise no citômetro de fluxo para marcar células progredindo através da fase S. qNSCs e aNSCs foram então analisados por citometria de fluxo separadamente ou misturados na proporção de 1 qNSC:1 aNSC (Figura 2 <img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63110/63110fig01.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/63110fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63110/63110fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/63110fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63110/63110fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/63110fig03large.jpg" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Table%201%20-%20Solution%20Recipes.xlsx" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Table%202%20-%20Example%20Data.xlsx" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%201.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%202.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%203.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%204.zip" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63110/Supplementary%20File%205.zip" target="_blank"></a>

Classificação do estado de ativação de células-tronco neurais in vitro usando autofluorescência

Neural stem cells (NSCs) divide and produce newborn neurons in the adult brain through a process called adult neurogenesis. Adult NSCs are primarily ...

classification-neural-stem-cell-activation-state-vitro-using

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este vídeo mostra as técnicas para a rotulagem de células-tronco embrionárias e células-tronco mesenquimais com corantes fluorescentes. Esta técnica pode ser usada para um monitoramento in vivo de células-tronco transplantadas com imagens ópticas e para as correlações histopatológico com microscopia de fluorescência.

Rotulagem células-tronco com corantes fluorescentes para detecção não invasiva com imagens ópticas

Com o crescente interesse em terapias com células-tronco, técnicas de imagem molecular são ideais para monitorar o comportamento de células-tronco após o transplante. Genes repórter luciferase permitiram não-invasivo de avaliação, repetitiva de sobrevivência da célula, localização e proliferação in vivo. Este vídeo vai demonstrar como controlar a proliferação CTEh em um rato vivo.

In vitro e in vivo de imagens Gene Reporter bioluminescência de células estaminais embrionárias humanas

Este protocolo de vídeo demonstra um novo método para a geração e subsequente purificação de células progenitoras neuronais a partir de uma fonte renovável de células estaminais neurais (NSCs) com base na sua (granulosidade tamanho e interno) física e propriedades fluorescentes usando tecnologia de citometria de fluxo.

O Ensaio neuroblasto: um ensaio para a Geração e Enriquecimento de células progenitoras neuronais de Diferenciando Progeny Neural Stem Cell utilizando citometria de fluxo

Este vídeo demonstra o procedimento para colorir células-tronco neurais recém-proliferadas em seções de tecido cerebral usando incorporação de EdU, seguida de imunofluorescência para visualizar proteínas específicas, melhorando a compreensão da dinâmica e proliferação celular.

Coloração por imunofluorescência para visualização de células-tronco neurais proliferadas em seções cerebrais de camundongos

Fonte: Daynac, M., et. al. Classificação celular de células-tronco neurais e progenitoras da zona subventricular de camundongos adultos e imagens ao vivo de sua dinâmica do ciclo celular. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra imagens de lapso de tempo de células-tronco neurais (NSCs) de um cérebro de camundongo transgênico usando um microscópio confocal de varredura a laser. Os NSCs fluorescem em vermelho durante a fase G1 e não são fluorescentes em outras fases do ciclo celular. Uma cultura...

Imagem de lapso de tempo da divisão de células-tronco neurais de camundongo usando microscopia confocal

Fonte: Sharma, A. D., et.al. Caracterização de alto rendimento de células-tronco adultas projetadas para entrega de fatores terapêuticos para estratégias neuroprotetoras. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demonstra o processo de caracterização de células-tronco mesenquimais transgênicas projetadas para expressar fatores neurotróficos terapêuticos. Ele descreve as etapas envolvidas na fixação, permeabilização e coloração das células com anticorpos primários e secundários direcionados a um marcador...

Caracterização de células-tronco mesenquimais geneticamente modificadas para aplicações neuroterapêuticas

Este protocolo descreve o desenvolvimento, a expansão, e in vivo de imagens de células NK derivadas de hESCs e iPSCs.

Desenvolvimento, expansão e<em&gt; In vivo</em&gt; Monitorização das células NK humanas de células estaminais embrionárias humanas (hESCs) e e induziu células-tronco pluripotentes (iPSCs)

Fornecemos uma descrição detalhada de um protocolo para análise de citometria de fluxo de antígenos de superfície e/ou antígenos intracelulares em tipos de células neurais. Aspectos críticos do planejamento experimental, procedimentos metodológicos passo a passo e princípios fundamentais da citometria de fluxo são explicados para permitir que os neurobiólogos explorem essa poderosa tecnologia.

Citometria de Fluxo protocolos para a superfície e intracelular Antigen análises de tipos de células neurais

Relatamos um método baseado em Classificação de Células Ativadas por Fluorescência (FACS) para isolar células-tronco neurais (NSCs) e sua progênie da zona subventricular (SVZ) do cérebro de camundongos adultos. Aplicado a camundongos transgênicos Fluorescence Ubiquitination Cell Cycle Indicator (FUCCI), permite o estudo da progressão do ciclo celular por imagens ao vivo.

Seleção de células-tronco neurais de células progenitoras e do rato adulto subventricular Zone e Live-imagem de seus Dynamics com o ciclo celular

células-tronco neurais (NCCC) referem-se a células que podem auto-renovar e diferenciar em três linhagens neurais. Aqui, descrevemos um protocolo para determinar a freqüência NSC em uma população de células determinado usando neurosphere formação e diferenciação em condições clonais.

Enumeração de células-tronco neurais Usando clonais Ensaios

A capacidade de marcar permanentemente células-tronco e sua prole com um fluoróforo usando uma linhagem transgênica indutível que traça a linhagem do mouse permite a análise espacial e temporal de ativação, proliferação, migração e/ou diferenciação in vivo. O rastreamento de linhagem pode revelar novas informações sobre o comprometimento da linhagem, a resposta à intervenção e a multipotência.

Rastreamento de linhagem de células-tronco fluorescentes indutíveis no cérebro do rato adulto

Aprenda a classificar estados de ativação de células-tronco neurais de camundongos adultos usando autofluorescência e microscopia confocal. Este método permite análise sem marcadores em células vivas para estudar neurogênese adulta.

Classificação do estado de ativação de células-tronco neurais in vitro usando autofluorescência

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