Name: Transplante de pele murinos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-01-16T10:34:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Aprenda o procedimento de transplante de pele murino entre as linhagens BALB/c e C57BL/6 para estudar rejeição de enxertos e respostas imunológicas alogênicas. Este modelo é essencial para pesquisas em imunologia e biologia de transplantes.

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NIH Imunologia Training Grant T32 AI 60573 (KRG) e NIH conceder GM 41514 (MDC)

Antes do início do experimento: <ul><li> Obter a aprovação IACUC </li><li> Esterilizar instrumentos cirúrgicos e Q-dicas </li></ul> I. tecido do doador Colheita <ol><li> Euthanize camundongo doador (de acordo com SOP instituição) </li><li> Trás os cabelos molhados da base da orelha com álcool </li><li> Colheita da pele de doadores cortando orelha fora na base </li><li> Tecido lugar na placa sobre o gelo </li><li> Ouvido Split: pinch lados ventral e dorsal do tecido na base da orelha com dente-de-rato fórceps; puxe suavemente o tecido, tecido de flutuação dorsal, superfície interna para baixo, na PBS sobre o gelo; descartar flap ventral colágenas </li></ol> II. Prepare Recipiente para Transplante <ol><li> Rato anestesiar usando procedimento aprovado </li><li> Administrar analgésico para pós-operatório o alívio da dor (ou seja, 0,05-0,1 mg / g ip Bupernex) </li><li> Rato lugar na posição lateral </li><li> Executar pitada dedo para garantir animal é suficientemente sedado </li><li> Cabelos molhados com álcool e shave tórax </li><li> Limpe área limpa com algodão embebido em álcool </li></ol> III. Transplante de pele <ol><li> ~ Fazer incisão de 1 cm: pele tenda com ratos dente-forceps e cortar ~ 0,25-0,5 cm abaixo forceps </li><li> Remover a pele de doadores de PBS, coloque em cima de cama de enxerto (com a superfície interna da pele da orelha enfrentando leito do enxerto) e remova o excesso com PBS estéril Q-Tip </li><li> Cuidadosamente aparar a pele do doador, para que o excesso de transplante está terminantemente dentro leito do enxerto (certificando-se que as bordas do enxerto não são enroladas por baixo e que o enxerto não ressaca na pele destinatário tronco) </li><li> Enrole destinatário no curativo estéril (com o segmento de gaze não-adesivo colocado sobre o enxerto de pele) </li><li> Garantir que bandagem não está muito apertado (avaliar a respiração animal) e que as armas são livremente móveis </li><li> Bandage seguro com um único fio de seda 2-0 </li><li> Coloque o animal em gaiola limpa (com lâmpada de aquecimento até animal tem suficientemente recuperado da anestesia) </li><li> Monitorar destinatário 1-2/day para sinais de sofrimento e administrar analgésicos, conforme necessário para o alívio da dor </li></ol> IV. Remoção de bandagem (6-7 dias após o transplante) <ol><li> Rato anestesiar usando procedimento aprovado </li><li> Corte e retire fio de seda </li><li> Com uma tesoura sem corte final, corte cuidadosamente através de bandagem (tomando cuidado para não perturbar enxerto) e remova cuidadosamente </li><li> Retorno do mouse para gaiola limpa </li><li> Verifique enxerto ~ 8 horas após a remoção do curativo de sinais de scabbing ou contração. Se presente, enxerto pode ter falhado a irrigar e deve ser considerada uma falha técnica. </li><li> Monitorar diariamente para sinais de rejeição (normalmente definido como ~ 80% de necrose do tecido do doador) </li><li> Transplantes alogênicos de pele geralmente rejeitam entre d8-12 pós-operatório </li></ol> Dicas úteis V. <ol><li> A colheita de tecidos de doadores perto da base da orelha vai: 1) maximizar o tamanho do enxerto, e 2) fornecer uma saliência ventral desigual que irá facilitar a divisão </li><li> Sempre use uma lâmina nova para barbear destinatário </li><li> Se analgésico deve ser dado ip, administrar antes do transplante procedimento para minimizar pós-operatório de manipulação (minimizar chance de interromper o enxerto) </li><li> Se possível, retire as luvas antes de aplicar o curativo. Luvas tendem a se ater a atadura e complicar a aplicação </li><li> Colocação de uma sutura única no final bandage irá minimizar a remoção prematura </li><li> Bandagem wrap tão apertado como permitido e avaliar a respiração ANTES de colocar sutura. Se bandage é muito apertado, animal vai parar de respirar. Se bandage é muito solta, animal irá removê-lo. </li></ol>

Os autores não têm nada a declarar.

Como demonstrado neste vídeo-artigo, o modelo de transplante de pele é um método rápido e fácil para monitorar respostas de células T alogênicas. Transplante alogênico de pele tem uma vasta gama de aplicações e tem sido utilizada para ensaio da eficiência de uma variedade de agentes imunossupressores e protocolos de indução de tolerância, bem como para investigar os efeitos biológicos de vários anticorpos de bloqueio.

<table><tbody><tr><td>Pinça microcirúrgica (curva)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>Pinça dentada (1x2 dentes, reta)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td>n=2</td></tr><tr><td>Tesoura de estrabismo (ponta romba)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14074-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de íris (curva)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11065-07</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de mola (angulada)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulha micro Halsey</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Placas de 10 cm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Cellgro</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Bupernex (cloridrato de buprenorfina)</td><td>Reckitt Benckiser</td><td>517201</td><td></td></tr><tr><td>Seringas de insulina (29 Ga)</td><td>Monoject</td><td>8881 600145</td><td></td></tr><tr><td>Cotonetes</td><td>Solon Manufacturing Company</td><td>362</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de barbear de borda única (#9)</td><td>Smith &amp;amp; Nephew Inc.</td><td>67-0238</td><td></td></tr><tr><td>Fio de seda (2-0; PS-2)</td><td>Ethicon Inc.</td><td>583H</td><td></td></tr></tbody></table>

transplante de pele murinos

Murine Skin Transplantation

Como um dos modelos mais rigorosos e menos tecnicamente desafiador, transplante cutâneo é um método padrão para ensaio de anfitrião respostas das células T aos antígenos MHC-díspares doador. O objetivo deste vídeo-artigo é proporcionar ao espectador com uma demonstração passo a passo-visual do transplante de pele usando o modelo de mouse. O protocolo é dividido em cinco componentes principais: 1) a colheita da pele do doador; 2) preparar receptor para transplante; 3) transplante de pele; 4) remoção de curativo e rejeição do enxerto de monitoramento; 5) dicas úteis. Uma vez proficiente, o procedimento em si deve ter &lt;10 minutos para executar.

Transplante alogênico de pele é um modelo padrão para ensaio de anfitrião respostas das células T aos antígenos MHC-díspares doador. Este vídeo-artigo fornece um tutorial visual de cada etapa envolvida na realização de um transplante de BALB/c--&gt; C57BL / 6 da pele.

Transplante de pele murinos

Sendo um dos modelos mais rigorosos e tecnicamente menos desafiadores, o transplante de pele é um método padrão para analisar as respostas das células T do hospedeiro a...

Bem-vindo ao laboratório do Dr. Michael Kalen. Eu sou Kim Gard. Hoje demonstraremos um modelo de transplante de pele utilizando a combinação de linhagens aloenxêntica BC para black six, um dos modelos mais rigorosos e menos desafiadores tecnicamente de rejeição de enxerto de tecido.O transplante de pele é uma técnica padrão utilizada para avaliar respostas alogênicas e é comumente empregado para analisar a eficácia de diversas estratégias de indução de tolerância. Então, vamos começar. Este procedimento inicia-se com a coleta da pele do camundongo doador BAB.Primeiramente, eutanaziar o doador de acordo com o POP do IACUC. Em seguida, molhar os pelos na base com álcool, coletar a pele removendo a orelha o mais próximo possível da base e colocar sobre gelo. A seguir, cortar cada disco da orelha descartando a aba ventral colagenosa e flutuar o tecido sobre gelo.Agora a pele doadora está pronta para transplante. O procedimento de transplante começa anestesiando o animal receptor utilizando procedimentos aprovados. Uma vez que o receptor esteja suficientemente anestesiado, remova o animal da câmara e administre bup e next por via IP para alívio da dor.Coloque o receptor em posição later

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Neste relatório, nós descrevemos a pele tridimensional reconstruir modelo que imita a pele humana em arquitetura e composição. Fisiologia dos melanócitos, a progressão de melanoma eo destino de células-tronco dérmica foram investigados usando a pele reconstruir modelo. O modelo também é útil como uma ferramenta de pré-clínicos para avaliação de drogas.

A Pele Tridimensional Humanos Reconstruir Modelo: uma Ferramenta para o Estudo da Pele Normal e Progressão Melanoma

Tissue-specific análise de um modelo de regeneração do cabelo folicular usando lentivírus para mediar o ganho ou perda de função.

Análise Genética rápida de epitelial-mesenquimal sinalização durante a regeneração do cabelo

Este vídeo demonstra um método para enxertar pele humana em um camundongo imunodeficiente com uma resposta de neutrófilos suprimida. O método envolve a aplicação de pele humana de espessura dividida no leito do enxerto do camundongo, selando-o e cobrindo-o para recuperação. Eventualmente, a pele humana adere à pele do camundongo, estabelecendo vascularização e circulação, resultando em um xenoenxerto cutâneo bem-sucedido.

Uma técnica para enxerto de pele humana em um modelo de camundongo

Neisseria meningitidis é um patógeno específico humano que infecta os vasos sanguíneos. Neste protocolo microvasos humanos são introduzidos em um rato por enxertia de pele humana em ratos imunocomprometidos. As bactérias aderem extensivamente para os vasos humanos, levando a danos vasculares e desenvolvimento da erupção purpúrica normalmente observada em casos em humanos.

Humanizado mouse modelo para estudar Infecções Bacterianas Segmentação microvasculatura

O transplante de pele da cauda é um modelo poderoso para estudar a rejeição dependente de células T e a indução de tolerância durante respostas imunes alogênicas em camundongos. As vantagens deste protocolo são pequenas cirurgias invasivas e facilidade de monitoramento sem a necessidade de sacrificar o camundongo receptor.

O transplante de pele da cauda para estudar as respostas das células T CD4 alogênico em camundongos

Este novo modelo de transplante de membro posterior ortotópico em ratos, aplicando uma técnica manguito não sutura para a anastomose super-microvascular, fornece uma ferramenta poderosa para in vivo pesquisa imunológica mecanicista relacionadas com alotransplante composta vascularizado (VCA).

Ortotópico Hind Limb Transplantation no mouse

transplante de pele de espessura total murino é um modelo bem estabelecido para estudar a rejeição em um ambiente alloimmune. Aqui, nós fornecemos um tutorial de cada etapa envolvida na realização de um / c BALB -&gt; C57BL / 6 transplante de pele de espessura total.

Murino Transplante de pele de espessura total

Propomos um protocolo que mostra como diferenciar pluripotentes induzidas células-tronco derivadas de queratinócitos e fibroblastos e gerar uma pele 3D organoides, usando estes queratinócitos e fibroblastos. Este protocolo contém uma etapa adicional de gerar um modelo de ratos humanizados. A técnica aqui apresentada vai melhorar pesquisa dermatológica.

Geração de organoides pele 3D do cordão hemoderivados induzida por células-tronco pluripotentes

O objetivo deste estudo foi desenvolver um modelo murino de cicatrização de feridas queimadas. Uma queimadura térmica foi induzida na pele dorsal de camundongos usando um modelo de latão pré-aquecido. Tecido queimado foi desbridado e sobreposto com um enxerto de pele colhido da cauda de um rato doador geneticamente semelhante.

Um modelo murino de uma ferida de queimadura reconstruída com um enxerto de pele aogenética

O presente protocolo descreve como enxertar pele humana em camundongos diabéticos não obesos (NOD)-scid interleucina-2 receptor de cadeia gama (NSG) camundongos. Uma descrição detalhada da preparação da pele humana para transplante, preparação de camundongos para transplante, transplante de pele humana de espessura dividida e procedimento de recuperação pós-transplante estão incluídas no relatório.

Modelo de pele de xenoenxerto para manipular respostas imunes humanas in vivo

Apresentamos um modelo reprodutível de camundongo de alotransplante composto vascularizado de membros posteriores para pescoço, heterotópico. Esse protocolo supermicrocirúrgico, envolvendo anastomoses de vasos de 0,3 a 0,5 mm, integra guiagem com filamento de náilon e algemamento venoso. Ela oferece uma plataforma confiável para estudos translacionais sobre tolerância, lesões por isquemia-reperfusão e mecanismos imunológicos em alotransplante composto vascularizado.

Transplante Heterotópico de Membro Posterior para Pescoço no Camundongo: Um Modelo Supermicrocirúrgico de Alotransplante Composto Vascularizado

Aprenda o procedimento de transplante de pele murino entre as linhagens BALB/c e C57BL/6 para estudar rejeição de enxertos e respostas imunológicas alogênicas. Este modelo é essencial para pesquisas em imunologia e biologia de transplantes.

Transplante de pele murinos

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