Um modelo de transplante renal ortotópico de rato para rejeição de aoenerxerto renal

O modelo de transplante renal ortotópico de rato contribui para investigar o mecanismo de rejeição de aoenxerto renal. O modelo atual aumenta a sobrevivência dos receptores sem interferência com o suprimento de sangue e refluxo venoso da parte inferior do corpo usando uma anastomose de ponta a ponta da implantação renal e um método de "túnel" de ponta a ponta de anastomose ureter-bexiga.

O transplante renal ortotópico de ratos é um modelo importante para investigar o mecanismo de rejeição de aoenxerto renal em estudos pré-clínicos e poderia ajudar no desenvolvimento de uma nova abordagem para melhorar a sobrevivência a longo prazo de aoentratores renais. A anastomose de ponta a ponta dos vasos renais nesta cirurgia evita isquemia da parte inferior do corpo e a trombose da veia cava inferior, enquanto a anastomose do ureter em um método de túnel de ponta a ponta reduz o vazamento de urina pós-operatório e a torção do ureter. Este método fornece uma visão sobre a investigação dos mecanismos de rejeição imunológica e lesão de aoenxertos renais após o transplante renal.

Comece incisando o abdômen usando uma tesoura cirúrgica ao longo da linha média da púbis de sífilis ao subxifóide. Em seguida, puxe a incisão usando um retrátil. Retire os intestinos do lado direito da incisão e enrole-os com gaze umedecido para evitar que eles sequem.

Então exponha o rim esquerdo. Dissociar a artéria renal esquerda e a veia usando micro-fórceps e cotonetes de algodão com menos de 20 vezes a ampliação. Ligate e transecte a veia adrenal e veia genital, se necessário.

Dissociar o ureter com a ajuda de micro-fórceps, preservando os tecidos conjuntivos periféricos para garantir o suprimento de sangue ao ureter. Dissociar e cortar ou ligar a aorta aproximadamente cinco milímetros acima da artéria renal esquerda com um grampo vascular ou sutura de monofilamento de poliamida 4-0. Em seguida, transecte a veia renal esquerda distal para a conjunção da veia genital esquerda e veia adrenal.

Usando uma agulha de bisturi de calibre 24, lave o rim da aorta abaixo da artéria renal esquerda com solução UW gelada complementada com 100 unidades por mililitro Heparin até que o sangue desapareça em cores. Transecte a artéria renal esquerda ao lado da aorta, depois transcee o ureter ao lado da bexiga e dissocia o rim com a ajuda de micro-fórceps e tesouras. Preservar o doador deixou o rim em solução gelada da UW.

Sob 20 vezes a ampliação, dissociar a artéria renal esquerda e a veia renal do rato receptor usando cotonetes e micro-fórceps. Ligate a veia supra-trennal e a veia genital, se necessário. Corte a artéria renal esquerda e a veia renal na raiz usando grampos microvasculares, em seguida, transecte a artéria renal e veia renal a três milímetros do grampo microvascular.

Dissociar e ligar o ureter esquerdo aproximadamente dois a três centímetros abaixo do rim com um 8-0 sutura de monofilamento de poliamida e transectá-la na ligadura. Ressecção dos receptores nativos do rim esquerdo, dissociando o rim com a ajuda de micro-fórceps e tesouras. Implante o rim doador na fossa renal esquerda do rato receptor e coloque gelo ao redor do rim doador implantado.

Mude para 45 vezes a ampliação, depois anastomose os doadores artéria renal e veia renal para os receptores artéria renal e veia renal em um padrão de ponta a ponta usando suturas de monofilamento de poliamida 10-0. Para anastomose a artéria renal com suturas interrompidas, coloque as suturas de permanência às 12 e seis horas de anastomose. Suturada de um lado da anastomose entre as duas permanecem suturas com dois a três pontos.

Vire as suturas de permanência e sutura do outro lado da anastomose entre as duas permanecem suturas com dois a três pontos. Para anastomose a veia renal com suturas contínuas, coloque as suturas de permanência nas posições das seis e 12 horas da anastomose. Sutura um lado da anastomose da posição das 12 horas com quatro a cinco pontos usando as suturas de corrida.

Vire as suturas de permanência e, da mesma forma, sutura o outro lado da anastomose a partir da posição das seis horas. Reperfuse o rim doador liberando o grampo microvascular não invasivo da veia renal, identifique os locais de sangramento e faça pontos adicionais, se necessário. Em seguida, solte o grampo microvascular não invasivo da artéria renal, identifique os locais de sangramento e faça pontos adicionais, se necessário.

Sob 20 vezes a ampliação, ligante ou costure a extremidade do ureter doador com uma sutura de monofilamento de poliamida 4-0 como reboque para arrastar o fim através do túnel da bexiga dos receptores. Fixar o ureter doador com a bexiga receptora costurando a adventitia do ureter doador com a camada muscular da bexiga receptora fora em quatro posições equidistantes usando um 8-0 sutura de monofilamento de poliamida. Posteriormente, transecte a extremidade do ureter doador com a sutura fora da bexiga dos receptores e permita que o doador volte para a bexiga dos receptores.

Coloque os intestinos de volta na cavidade abdominal e feche a incisão abdominal com suturas contínuas na camada muscular e, em seguida, a camada de pele com uma sutura de monofilamento de poliamida 4-0. A dez semanas após o transplante, a coloração de hematoxilina e eosina e a coloração periódica do deslocamento do ácido revelaram esclerose glomerular, fibrose intersticial, atrofia tubular e esclerose arterial intersticial no aloenxerto renal em contraste com o rim isoento. A coloração de prata mostrou o espessamento da membrana glomerular do porão no rim aoenerxerto quando comparado com o rim isoentor, indicando o sucesso do modelo de transplante renal ortotópico de rato.

Como o buraco vascular do renal é muito fino, para evitar a sutura errada, lembre-se de realizar a anastomose no campo de alta ampliação.