Usando uma injeção de rastreador de células para investigar a origem de células formadoras de neointima em um modelo de parede lateral saccular de rato

Usando uma aplicação direta intra-aortal de rastreador de células, podemos analisar o papel das células endoteliais originárias da artéria parental na formação de neointima em dois pontos de tempo diferentes. Uma grande vantagem dessa técnica é uma injeção direta, de um ponto, interpretativa in vivo, que torna este modelo uma técnica robusta e reprodutível. Antes da cirurgia, incubar os malotes arteriais de ratos doadores em sulfato de dodecim de 0,1% sódio por 10 horas a 37 graus Celsius para obter aneurismas descelularizados.

Pegue esses malotes de animais doadores alguns dias antes da cirurgia. Para começar, analise o comportamento do animal e inspecione as membranas mucosas e turgor como parte do exame clínico pré-operatório. Regissuor de cada animal.

Para indução de anestesia, coloque todos os ratos em uma caixa limpa fornecida com oxigênio até a perda de consciência após cinco a 10 minutos. Verifique a profundidade da anestesia pela ausência do reflexo de retirada do pedal. Coloque os ratos em uma posição supina e raspe a área toracoabdominal com uma máquina de barbear elétrica.

Usando fita, fixar as patas do rato em uma placa coberta por uma almofada de aquecimento conectada a uma sonda retatal de regulação automática. Insira a sonda retal no ânus do rato para manter a temperatura desejada de 37 graus Celsius com a ajuda de uma almofada de aquecimento. Em seguida, instale um sensor na perna traseira direita conectado a um sistema informatizado para verificar sinais vitais intraoperatóriamente.

Para cuidados perianestésicos, aplique um lubrificante oftálmico estéril nos olhos e cubra-os com uma máscara de papel alumínio opaca para evitar a secagem e danos causados pela lâmpada cirúrgica. Desinfete o campo cirúrgico com iodo povidone, e coloque o campo cirúrgico de forma estéril. Coloque um micro cotonete com estofamento roxo sob as partes proximal e distal da aorta para visualizar melhor a artéria assim que for separada da veia caval.

Em seguida, proteja o abdômen com gaze branca. No dia da operação, dissolva dois microlitres do rastreador celular por tubulação em um mililitro de PBS. Transfira a mistura para uma seringa de um mililitro equipada com uma cânula.

Desligue a luz na sala de cirurgia. Usando um microscópio, realize a injeção de um ponto na parte ventral média da aorta com micro fórceps, e injete cuidadosamente um mililitro de solução salina heparinizada de 0,9%. Injete cuidadosamente o rastreador de células e desligue imediatamente o microscópio operacional também.

Proteja o abdômen com gaze molhada novamente. Deixe o corante incubar por pelo menos 15 minutos. Em seguida, acenda o microscópio e as luzes da sala de cirurgia.

Use micro fórceps e micro tesouras para realizar a arteriotomia longitudinal para que seu comprimento tenha uma média do diâmetro do aneurisma colhido. Coloque o aneurisma ao lado da aorta antes de realizar a arteriotomia para garantir o comprimento correto. Sutura o aneurisma com oito a dez pontos individuais usando uma sutura 10-0 não absorvível.

Antes do ponto final, entregue a bobina com uma densidade de embalagem de um centímetro. O tratamento da bobina ou do stent pode ser realizado neste modelo. Em seguida, remova cuidadosamente os grampos temporários, começando de forma distral, sob irrigação contínua com soro fisiológico heparinizado.

Feche a ferida de forma em camadas. No final da cirurgia, inverta a anestesia com uma injeção subcutânea. Deixe cada animal operado se recuperar em uma gaiola limpa até que esteja totalmente acordado e quente conforme necessário com uma lâmpada de aquecimento.

Os volumes de aneurisma puxados para o sétimo e o dia 21 não diferem significativamente para aneurismas descelularizados ou vitais entre os grupos de tratamento da bobina ou do stent. Os volumes de FU puxados para aneurismas descelularizados apresentaram um crescimento não significativo de aneurismas em enrolados em comparação com os aneurismas stented. O volume de FU puxado foi significativamente maior no enrolado vital do que no grupo stented.

As quantidades de células positivas no neointima de aneurismas descelularizados não diferem significativamente entre os grupos de stent ou tratados enrolados no sétimo dia de FU, mas foram significativamente maiores em ratos stents em dia 21 FU.No diferenças significativas foram notadas em ratos suturados de aneurisma vital em sete dias ou 21 dias FU.In aneurismas descelularizados em sete dias DEFU, significativamente mais células positivas rastreadas por células permaneceram no trombo do stent tratado em comparação com o grupo tratado com bobina. Essa diferença não foi observada em aneurismas vitais aos sete dias de FU. Lembre-se de sempre desligar as luzes na sala de cirurgia antes de injetar o rastreador de células para evitar o desbotamento. Além disso, deixe incubar o corante por pelo menos 15 minutos.