Name: Denervação renal melhorada Hipertensão Mitigada Induzida por Infusão de Angiotensina II (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Aprenda a técnica de denervação renal simpática em camundongos com hipertensão induzida por angiotensina II. Este protocolo padronizado permite estudar mecanismos de controle da pressão arterial e hipertrofia cardíaca de forma reprodutível.

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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (81770420), Comissão de Ciência e Tecnologia do Município de Xangai (20140900600), Laboratório Chave de Medicina Geriátrica Clínica de Xangai (13dz2260700), Especialidade Clínica Chave Municipal de Xangai (shslczdzk02801) e Centro de Doença Arterial Coronária geriátrica, Hospital Huadong Afiliado à Universidade de Fudan.

Todos os procedimentos experimentais em animais cumpriram o Guia Ético relevante para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (NIH Publication no. 85-23, revisado em 2011) e foram aprovados pelos comitês de pesquisa animal do Hospital Huadong, afiliado à Universidade de Fudan. Camundongos C57BL/6 machos de quatorze semanas de idade (28-30g) foram divididos aleatoriamente em quatro grupos: grupo Sham, grupo Sham+Ang II, grupo RDN, grupo RDN+Ang II, n = 6 em cada grupo. Todos os animais foram mantidos sob condições específicas fechadas livres de patógenos em uma sala com temperatura controlada a 24 ± 1 °C com um ciclo claro/escuro de 12h e livre acesso à ração padrão de roedores e água ad libitum.
1. Preparação do campo de operação
<ol><li>Desinfete a mesa de operação com etanol a 70%. Ajustar a temperatura da almofada de aquecimento para 37 °C.</li>
	<li>Certifique-se de que todos os instrumentos cirúrgicos são esterilizados antes da cirurgia a 121 °C por 30 min ou por outros métodos. Este procedimento requer uma tesoura microcirúrgica, duas pinças finas e retas, duas pinças curvas finas, pinças hemostáticas, gazes estéreis e papéis de pesagem.</li>
</ol>2. Hipertensão induzida por angiotensina II
<ol><li>Fornecer meloxicam (0,5 mg/kg, SC) aos camundongos C57BL/6 pouco antes da indução anestésica. Em seguida, anestesiar os camundongos com injeção de pentobarbital sódico conforme descrito anteriormente20,21. O isoflurano também pode ser usado, se preferir. Confirme a profundidade da anestesia com um reflexo negativo de pinça do dedo do pé.</li>
	<li>Remova o cabelo nas costas com um barbeador. Aplique pomada veterinária nos olhos para evitar a secura durante a anestesia.</li>
	<li>Coloque o animal sobre uma mesa de operação na posição dorsal. Esfregue e limpe a área raspada com iodopovidona seguido de três toalhetes com etanol a 70%.</li>
	<li>Faça uma incisão de 1 cm usando uma lâmina de bisturi estéril, perpendicular à cauda, atrás da orelha sobre a omoplata da perna dianteira.</li>
	<li>Utilizar um hemostato estéril para fazer um túnel subcutâneo sob a pele e criar uma bolsa para a bomba22. Insira uma bomba osmótica cheia de angiotensina II (1.000 ng/kg/min) no bolso suavemente. Certifique-se de que há espaço livre suficiente para suturar a ferida sem esticar a pele.</li>
	<li>Suture o músculo com suturas de Vicryl 6-0 interrompidas e feche a pele com suturas de nylon 4-0 interrompidas. Swab e limpar o local da ferida com povidona-iodo. Realizar a mesma cirurgia com igual volume de soro fisiológico para o grupo controle.</li>
	<li>Coloque todos os instrumentos cirúrgicos em um esterilizador por 10 s e substitua as luvas estéreis entre as cirurgias. Monitore todos os ratos até que estejam totalmente recuperados.</li>
	<li>Monitore de perto e observe a cicatrização de feridas em camundongos pelo menos duas vezes por dia durante a primeira semana e uma vez por dia posteriormente, incluindo vermelhidão, inchaço e infecção. Efectuar a dissecção imediatamente se os ratinhos morrerem durante a perfusão de Ang II.</li>
	<li>Medir a pressão arterial no início do estudo e todas as semanas após a perfusão de Ang II com o método de pletismografia do manguito caudal23 em ratinhos conscientes. Certifique-se de que os experimentos de medição da pressão arterial sejam conduzidos em uma área silenciosa, a 22 ± 2 °C, onde os camundongos sejam aclimatados por 1 h antes do início do experimento. Habituar camundongos por pelo menos 5 dias consecutivos antes das medidas basais da pressão arterial23,24.</li>
</ol>3. Denervação renal bilateral
<ol><li>Selecione os camundongos com pressão arterial (PA) elevada ≥140/90mmHg ou aumento de 25% na PA sistólica/PA diastólica, 1 semana após a infusão de Ang II.</li>
	<li>Registrar o peso do animal antes da cirurgia e escolher animais com peso mínimo de 24 g para cirurgia de desnervação renal.</li>
	<li>Anestesiar os ratos usando pentobarbital sódico. Confirme a profundidade da anestesia com um reflexo negativo de pinça do dedo do pé.</li>
	<li>Remova o cabelo no abdômen com um barbeador. Realize este procedimento com cuidado e minuciosamente para evitar qualquer contaminação cirúrgica.</li>
	<li>Coloque os ratos na mesa de operação, mantendo o abdômen para cima e fixe seus membros com fita adesiva. Desinfetar a pele abdominal com iodopovidona seguido de três toalhetes com etanol a 70%.</li>
	<li>Faça uma incisão abdominal ventral de 2 cm na linha média usando uma lâmina de bisturi. Puxe o intestino para trás com gaze embebida em solução salina de 37 °C para expor a artéria renal esquerda. Cuidadosamente, mas sem rodeios, disseque a gordura para longe da artéria renal usando pinças curvas. (Figura 1A-C).</li>
	<li>Corte o papel de pesagem em um retângulo do mesmo tamanho que a artéria renal com uma tesoura afiada estéril. Para referência, corte o papel de pesagem no mesmo tamanho mostrado pela linha pontilhada na Figura 1C. NOTA: É uma parte crítica da cirurgia, tente cortar vários pedaços do papel de pesagem de cada vez para manter a mesma forma.</li>
	<li>Mergulhe o papel de pesagem em solução de fenol/etanol a 10% por pelo menos 30 s. Cobrir a superfície da artéria renal esquerda e envolver o vaso com o papel de pesagem, manter por 2 min (Figura 1D). Use gaze para proteger os tecidos circundantes para evitar que o papel de pesagem toque o rim e o intestino circundantes. NOTA: A solução de fenol é estável em tubos de plástico, mas não em frascos para injetáveis de vidro. Portanto, a solução deve ser preparada na hora para cada experimento18.</li>
	<li>Realizar o mesmo procedimento para a artéria renal direita. Realize a cirurgia simulada com papel de pesagem imerso em solução salina.</li>
	<li>Reposicione os músculos em sua posição inicial e feche o peritônio com suturas de Vicryl 6-0 em uma sutura interrompida. Em seguida, feche a pele com suturas de nylon 4-0 interrompidas. Monitore todos os ratos até que estejam totalmente recuperados.</li>
</ol>4. Cuidados pós-operatórios
<ol><li>Aplique iodopovidona na incisão e coloque o animal em um cobertor elétrico aquecido para recuperação e monitoramento pós-operatório.</li>
	<li>Monitore os ratos duas vezes ao dia para avaliar se há vermelhidão, inchaço e dor ou infecção abdominal. Fornecer meloxicam (0,5 mg/kg, SC) a todos os ratinhos cerca de 1 h antes e 24 h após o procedimento RDN.</li>
</ol>

<ol><li>Messerli, F. H., Rimoldi, S. F., Bangalore, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transition+from+hypertension+to+heart+failure%3A+Contemporary+update%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">The transition from hypertension to heart failure: Contemporary update.</a> JACC Heart Failure. 5 (8), 543-551 (2017).</li>
<li>Lackland, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+recent+clinical+trials+and+hypertension+guidelines+on+stroke+and+future+cerebrovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Implications of recent clinical trials and hypertension guidelines on stroke and future cerebrovascular research.</a> Stroke. 49 (3), 772-779 (2018).</li>
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<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+mitigates+atherosclerosis+in+ApoE-%2F-+mice+via+the+suppression+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Renal denervation mitigates atherosclerosis in ApoE-/- mice via the suppression of inflammation.</a> American Journal of Translational Research. 12 (9), 5362-5380 (2020).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+promotes+atherosclerosis+in+hypertensive+apolipoprotein+E-deficient+mice+infused+with+Angiotensin+II%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Renal denervation promotes atherosclerosis in hypertensive apolipoprotein E-deficient mice infused with Angiotensin II.</a> Frontiers in Physiology. 8, 215(2017).</li>
<li>Eriguchi, M., Tsuruya, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+sympathetic+denervation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Renal sympathetic denervation in rats.</a> Methods in Molecular Biology. 1397, 45-52 (2016).</li>
<li>Thukkani, A. K., Bhatt, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+denervation+therapy+for+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Renal denervation therapy for hypertension.</a> Circulation. 128 (20), 2251-2254 (2013).</li>
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<li>Han, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+safety+of+renal+denervation+as+assessed+by+optical+coherence+tomography%3A+pre-+and+post-procedure+comparison+with+multi-electrode+ablation+catheter+in+animal+experiment%5BTitle%5D)+AND+%22Hellenic+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The safety of renal denervation as assessed by optical coherence tomography: pre- and post-procedure comparison with multi-electrode ablation catheter in animal experiment.</a> Hellenic Journal of Cardiology. 61 (3), 190-196 (2020).</li>
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</ol>

Não há conflitos de interesse, financeiros ou não, conforme declarado pelos autores.

Se a RDN poderia reduzir a pressão arterial tornou-se controversa desde a publicação do resultado negativo do estudo de simplicidade HTN-3 7,25. No entanto, os diversos ensaios clínicos e experimentos com animais têm demonstrado resultados positivos e efetivos da RDN em humanos e animais hipertensos 9,10,11,12,13,14,15,16,17....

A hipertensão é uma importante doença cardiovascular crônica em todo o mundo. A hipertensão não controlada pode danificar órgãos-alvo e contribuir para insuficiência cardíaca, acidente vascular cerebral e doenças renais crônicas 1,2,3. A prevalência de hipertensão aumentou de 20% para 31% entre 1991 e 2007 na China. O número de adultos com hipertensão na China pode dobrar após uma recente revisão dos critérios diagnósticos para hipertensão (130/80 mmHg)4. A hipertensão pode ser controlada por medicamentos, no entanto, aproximadamente 20% dos pacientes são incapazes de controlar sua hipertensão, mesmo quando recebem pelo menos três medicamentos anti-hipertensivos (incluindo um diurético) na dose máxima tolerada, o que pode levar ao desenvolvimento de hipertensão resistente a medicamentos5.
A denervação simpática renal (RDN) provou ser um tratamento potencial para a hipertensão. Em 2009, Krum e seus colegas relataram tratamento de hipertensão resistente usando RDN pela primeira vez. Verificou-se que a ablação percutânea da artéria renal pode efetivamente causar redução persistente da pressão arterial em pacientes6. No entanto, o fracasso do estudo Symplicity Hypertension 3 (HTN-3) impediu a aplicação do RDN7, transformando o RDN em uma terapia controversa. No entanto, a perspectiva de RDN ainda não foi descartada. Ensaios clínicos recentes, incluindo RADIANCE-HTN SOLO, SPYRAL HTN-OFF MED/ON MED e SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal confirmaram a eficácia do RDN na hipertensão 8,9,10,11,12. Assim, pesquisas mecanicistas mais detalhadas precisam ser realizadas para explorar os efeitos da RDN.
O objetivo geral deste estudo é demonstrar como a RDN em camundongos pode ser modificada para produzir uma cirurgia mais simples e estável. Um grande número de experimentos tem estudado várias abordagens da RDN, como crioablação intravascular, ultrassonografia extracorpórea e aplicação local de uma substância química ou neurotoxina em diferentes modelos animais 13,14,15,16,17. O modelo RDN gerado por ablação química com fenol é um modelo experimental bem estabelecido para estudar a patogênese da ativação simpática na hipertensão. Este modelo é gerado pela corrosão química dos nervos simpáticos renais com solução de fenol/etanol a 10% utilizando um cotonete18. Por um lado, o RDN convencional potencialmente inibe a atividade simpática renal, o que diminui a secreção de renina e a reabsorção de sódio e aumenta o fluxo sanguíneo renal. Por outro lado, suprime o sistema renina-angiotensina-aldosterona19. Assim, RDN tem um efeito benéfico sobre a hipertensão. No entanto, o modelo RDN gerado pela ablação química carece de critérios de ablação e tempo de ablação e os detalhes do procedimento experimental ainda não estão claros. Além disso, não há relatórios técnicos disponíveis. Neste relato, descrevemos um protocolo cirúrgico para a geração de modelo RDN com fenol utilizando papel de pesagem na hipertensão induzida por Angiotensina II (Ang II) em camundongos C57BL/6. Envolvemos a artéria renal com papel de pesagem contendo fenol e unificamos o tempo de ablação, o que ajuda a estabelecer um modelo RDN mais reprodutível e confiável. Este modelo experimental tem como objetivo avaliar o efeito da RDN sobre a hipertensão.

<table><tbody><tr><td>Angiotensina II</td><td>Sangon Biotech</td><td>CAS: 4474-91-3</td><td>Para fazer um modelo de animol hipertensivo</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-tirosina hidroxilase</td><td>Abcam</td><td>ab137869</td><td>Para avaliar a expressão de TH dos nervos renais</td></tr><tr><td>Análise da pressão arterial</td><td>Visitech Systems</td><td>BP-2000</td><td>Meça a pressão arterial de camundongos</td></tr><tr><td>Bomba mini-osmótica</td><td>DURECT Corporation</td><td>CA 95014</td><td>Para preencher com Angiotensina II</td></tr><tr><td>Norepinefrina ELISA Kit</td><td>Abcam</td><td>ab287789</td><td>para medir os níveis renais de norepinefrina</td></tr><tr><td></td><td>Fenol Sangon Biotech</td><td>CAS:108-95-2</td><td>Danificar o nervo simpático renal</td></tr><tr><td>Papel de pesagem</td><td>Sangon Biotech</td><td>F512112</td><td>Para destruir o nervo renal com papel de pesagem imerso em fenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

denervação renal melhorada hipertensão mitigada induzida por infusão de angiotensina ii

Improved Renal Denervation Mitigated Hypertension Induced by Angiotensin II Infusion

Os benefícios da denervação simpática renal (RDN) sobre a pressão arterial foram comprovados em um grande número de ensaios clínicos nos últimos anos. No entanto, o mecanismo regulador da RDN na hipertensão permanece indefinido. Assim, é essencial estabelecer um modelo RDN mais simples em camundongos. Neste estudo, minibombas osmóticas cheias de angiotensina II foram implantadas em camundongos C57BL/6 de 14 semanas de idade. Uma semana após o implante da bomba mini-osmótica, um procedimento RDN modificado foi realizado nas artérias renais bilaterais dos camundongos usando fenol. Camundongos pareados por idade-sexo receberam soro fisiológico e serviram como grupo simulado. A pressão arterial foi medida no início do estudo e a cada semana subsequentemente durante 21 dias. Em seguida, artéria renal, aorta abdominal e coração foram coletados para exame histológico com coloração H&E e Masson. Neste estudo, apresentamos um modelo de RDN simples, prático, repetível e padronizado, que pode controlar a hipertensão e aliviar a hipertrofia cardíaca. A técnica pode desnervar os nervos simpáticos renais periféricos sem danos na artéria renal. Em comparação com os modelos anteriores, o RDN modificado facilita o estudo da patobiologia e fisiopatologia da hipertensão.

Estatística Todos os dados são expressos como média ± desvio padrão. A ANOVA one-way foi utilizada para experimentos com três ou mais condições, seguida de testes post-hoc de Bonferroni para comparações entre grupos individuais. Considere um valor de p igual ou menor que 0,05 como significativo. Um software comercial foi utilizado para realizar todas as análises estatísticas.
O aumento da pressão arterial induzido por Ang II foi atenuado após a RDN Obser...

Aqui, apresentamos um protocolo para denervação simpática renal (RDN) em camundongos com hipertensão induzida por infusão de Angiotensina II. O procedimento é repetível, conveniente e permite estudar os mecanismos regulatórios da RDN na hipertensão e hipertrofia cardíaca.

Denervação renal melhorada Hipertensão Mitigada Induzida por Infusão de Angiotensina II

The benefits of renal sympathetic denervation (RDN) on blood pressure have been proved in a large number of clinical trials in recent years. However, the ...

A denervação simpática renal é um tratamento potencial para a hipertensão, que foi comprovado por muitos ensaios clínicos. Esta técnica desnerva os nervos renais de fluxo livre sem danos na artéria renal. Além disso, é um modelo simples, crítico, repetível e padronizado.Demonstrando o procedimento estará Ming Wang, um assistente de laboratório do meu laboratório. Comece desinfetando a mesa de operação com etanol a 70% e, em seguida, ajuste a temperatura da almofada de aquecimento para 37 graus Celsius. Antes da cirurgia, esterilize todos os instrumentos cirúrgicos, incluindo tesouras microcirúrgicas, pinça reta fina, pinça curva fina, pinça hemostática, gazes estéreis e papel de pesagem a 121 graus Celsius por 30 minutos.Depois de anestesiar um rato C57BKL/6 macho de 14 semanas de idade, remova o cabelo nas costas com um barbeador e, em seguida, aplique pomada veterinária nos olhos para evitar o ressecamento. Coloque o rato sobre uma mesa de operação na posição dorsal. Passe o dedo e limpe a área raspada com iodopovidona, seguido de três toalhetes com etanol a 70%.Usando uma lâmina de bisturi estéril, faça uma incisão de um centímetro perpendicular à cauda atrás da orelha sobre a o

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Este vídeo demonstra um procedimento para denervação simpática da artéria renal em um modelo de camundongo hipertenso induzido por angiotensina II, usando fenol para interromper a função nervosa simpática e reduzir a pressão arterial.

Denervação simpática de artérias renais em um modelo de camundongo com hipertensão induzida por angiotensina II

Um método de duas fases para estabelecer a doença renal crónica (IRC) em ratos Lewis por remoção cirúrgica da massa renal 5/6th é descrito. Combinação do procedimento cirúrgico, NOS-inibição e uma dieta rica em sal leva a um modelo semelhante CKD humano, permitindo estudo dos mecanismos causais e desenvolvimento de intervenções terapêuticas.

5/6th Nephrectomy em combinação com uma dieta alta de sal e Óxido Nítrico Sintase inibição para induzir o Doença Renal Crônica no Rato Lewis

Ratos anestesiados exibem não-fisiológicos pressão arterial sistêmica, que impede a avaliação significativa do tônus autonômico, dada a íntima relação entre a pressão arterial e o sistema nervoso autônomo. Assim, um método novo para a atividade do nervo simpático renal simultaneamente recorde e a pressão arterial com infusão intravenosa em ratos conscientes é descrito.

Nova abordagem para gravação simultânea da atividade do nervo simpático Renal e pressão arterial com infusão intravenosa em consciente, ratos desenfreados.

Um modelo modificado de 2 rim 1 (2K1C) O modelo de rato Goldblatt foi desenvolvido usando tubos de poliuretano para iniciar a estenose da artéria renal, induzindo um aumento na expressão de renin e lesão renal. Aqui, descrevemos um procedimento detalhado de preparação e colocação da braçadeira na artéria renal para gerar um modelo de mouse 2K1C reprodutível e consistente.

Um modelo modificado de rato de dois rins um clipe de regulação de renin em estenose da artéria renal

Aqui, apresentamos um protocolo que descreve a farmacologia da rede e as técnicas de docking molecular para explorar o mecanismo de ação do Jiawei Shengjiang San (JWSJS) no tratamento da nefropatia diabética.

Efeito antagônico de Jiawei Shengjiang San em um modelo de nefropatia diabética em ratos: relacionado à via de sinalização EGFR / MAPK3 / 1

A denervação renal (RDN) mediada por ozônio guiada por TC, injetando uma mistura de gás O2-O 3 ao redor dos gânglios lombares, reduz a carga de medicamentos anti-hipertensivos e atinge uma taxa de controle da pressão arterial domiciliar aprimorada. Apresentamos uma nova técnica de NDR simplificada, unilateral e sem contraste que minimiza a lesão arterial renal no tratamento de pacientes com hipertensão arterial resistente (HAR).

Melhor controle da pressão arterial em casa por denervação renal mediada por ozônio guiada por TC para pacientes com hipertensão resistente

Hipertensão ocular crônica é induzida pelo uso de fotocoagulação a laser da malha trabecular em rato olhos. A pressão intra-ocular (IOP) é ​​elevada durante vários meses após o tratamento com laser. A diminuição da acuidade visual e sensibilidade ao contraste de animais experimentais são monitorados por meio do teste optomotor.

Um modelo de rato induzida por laser de crônica Ocular Hypertension para Caracterizar defeitos visuais

O modelo de corte transversal do nervo tibial é um modelo bem-tolerado, validado, e reprodutível de atrofia do músculo esquelético. O protocolo cirúrgico modelo é descrito e demonstrado em ratinhos C57Black6.

Secção do nervo tibial - um modelo padronizado para denervação induzida por atrofia muscular em ratos

O grau de disfunção vascular e contribuindo mecanismos fisiológicos podem ser avaliados em pacientes com doença renal crônica através da medição do fluxo-mediada dilatação da artéria braquial, a velocidade da onda de pulso da aorta, e expressão da proteína de célula endotelial vascular.

Avaliação da função vascular em pacientes com doença renal crônica

A disfunção hemodinâmica em estágio inicial é fundamental para o desenvolvimento da doença renal. No entanto, as metodologias de detecção são limitadas. Avanços recentes na ultrassonografia fornecem uma opção não invasiva e precisa para a detecção precoce de lesão renal. Este estudo descreve uma metodologia ultrassonográfica passo a passo para detectar disfunção renal usando um modelo de rato de nefrotoxicidade induzida por drogas.

Detecção precoce de Induzida por Medicamentos Renal hemodinâmica Disfunção Usando ultrassonografia Tecnologia em Ratos

Aprenda a técnica de denervação renal simpática em camundongos com hipertensão induzida por angiotensina II. Este protocolo padronizado permite estudar mecanismos de controle da pressão arterial e hipertrofia cardíaca de forma reprodutível.

Denervação renal melhorada Hipertensão Mitigada Induzida por Infusão de Angiotensina II

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