Um modelo murino de disfunção da mão relacionada ao acesso para hemodiálise

Este é o único modelo animal disponível para estudar os mecanismos responsáveis pela isquemia da mão relacionada ao acesso dialítico. O modelo fornece uma plataforma robusta para examinar a complexa interação entre uremia e perturbações neuromusculares resultantes de alterações hemodinâmicas resultantes da cirurgia de fístula venosa arterial. A disfunção da mão relacionada ao acesso afeta até 60% dos pacientes em hemodiálise e pode afetar gravemente a qualidade de vida dos pacientes.

Esse modelo nos ajuda a entender a deficiência e testar novas terapias. Quem demonstrará o procedimento será o Dr. Raymond Kim, pesquisador de pós-doutorado do nosso laboratório. Para começar, coloque o camundongo anestesiado na posição supina em uma mesa cirúrgica coberta por um campo estéril e aplique o lubrificante ocular para proteger os olhos do ressecamento durante a cirurgia.

Usando um aparador de caneta, raspe os cabelos abdominais para a operação e os pelos da perna para as medições de perfusão pós-operatórias e, em seguida, limpe os cabelos do campo cirúrgico. Em seguida, fixe os membros superiores e inferiores com elásticos e tachas. Verifique a profundidade da anestesia monitorando o reflexo de pinça dos dedos dos pés e titule a anestesia conforme necessário.

Realizar a avaliação do padrão respiratório a cada três a cinco minutos durante todo o procedimento cirúrgico para calibrar o nível de anestesia. Realizar laparotomia mediana da borda inferior da margem esternal até a sínfise púbica e dissecar o coxim gorduroso púbico para obter um campo operatório mais amplo. Abra a celiotomia para acessar o conteúdo peritoneal e cubra os intestinos com uma esponja não tecida embebida em soro fisiológico.

Em seguida, dissecar cuidadosamente a fáscia perivascular e o tecido adiposo de aproximadamente um centímetro proximal à bifurcação da aorta, estendendo-se até o nível da bifurcação ilíaca esquerda usando pinça Dumont reta e pequenos cotonetes pontiagudos duros de ponta dupla de ponta. Em seguida, passe a ponta da pinça angulada sob o feixe vascular ilíaco comum esquerdo e espalhe suavemente várias vezes para mobilizar os vasos da musculatura retroperitoneal subjacente. Colocar duas suturas de seda 4-0 ao redor do feixe venoso ilíaco comum esquerdo isolado e utilizá-las como ligaduras ao feixe vascular.

Em seguida, crie um único nó a cada gravata de seda 4-0 e aplique-os sequencialmente, proximalmente e, em seguida, distalmente. Em seguida, usando as cordas de sutura de seda 4-0 como alças, gire o feixe vascular venoso arterial ilíaco esquerdo no sentido horário e ajuste fino a posição para localizar temporariamente a veia anterior à artéria. Faça uma venotomia longitudinal de aproximadamente um milímetro com uma tesoura reta de mola de Vannas e lave suavemente o sangue residual da luz venosa com soro fisiológico a 0,9%.

Em seguida, coloque uma sutura de náilon 10-0 implicante através da parede posterior da veia. Em seguida, pegue as extremidades de sutura implicadas e coloque-as sob tensão suave para deslocar a parede anterior da parede posterior da artéria ilíaca. Em seguida, faça uma incisão elíptica de tamanho aproximado de 1,0 por 0,3 milímetros com tesoura curva de mola de Vannas, removendo as paredes aderidas tanto da artéria e veia ilíaca.

Lavar suavemente o sangue residual da luz arterial exposta com solução salina a 0,9% e solução salina heparinizada. Após a confecção da fístula venosa arterial, reparar a venotomia de parede anterior inicial com dois a três pontos de náilon 10-0 de forma interrompida. Em seguida, restaurar o feixe vascular à sua orientação anatômica original e colocar um pequeno pedaço de esponja de gelatina absorvível embebida em soro fisiológico adjacente à venotomia reparada para facilitar a hemostasia.

Em seguida, solte as ligaduras de pinça cruzada de nó único 4-0 sequencialmente de distal para proximal, enquanto monitora atentamente o local da venotomia em busca de sangramento excessivo. Esfregue suavemente o feixe vascular com pequenos cotonetes de ponta dupla e pontiagudos que facilitam ainda mais a restauração do fluxo sanguíneo. A seguir, confirme o sucesso técnico da operação com a visualização do sangue oxigenado vermelho vivo pulsátil entrando na veia ilíaca e misturando-se com o sangue venoso escuro que retorna do membro pélvico.

Injetar solução salina heparinizada na veia cava inferior para anticoagulação sistêmica para melhorar os resultados da patência da fístula venosa arterial e inspecionar o sítio cirúrgico em busca de hemostasia após a injeção de solução salina heparinizada. Se não houver problemas de sangramento, feche a fáscia da linha média e, em seguida, a incisão da pele com suturas absorvíveis de PGA 5-0 de forma corrida. A ultrassonografia com Doppler foi utilizada para validar a perviedade da fístula venosa arterial.

O Doppler colorido revelou fluxo turbulento no local da fístula, e o alargamento espectral pulsátil foi visualizado na avaliação do Doppler por onda de pulso. Se a fístula estiver pérvia, a aorta apresenta velocidade de pico sistólico e diastólica final elevados, enquanto a veia cava inferior desenvolve pulsatilidade com pico de velocidade elevado. A dilatação do vaso tanto na aorta quanto na veia cava inferior é aparente com medidas seriadas pré e pós-operatórias.

As medidas de ultrassom Doppler modo B e onda de pulso após a cirurgia revelaram dilatação do vaso de entrada e saída e aumento da velocidade de pico sistólico em comparação com os animais simulados. A avaliação com laser Doppler dos membros pélvicos mostrou déficits de perfusão do POD esquerdo em aproximadamente 20% do membro contralateral após a cirurgia, com recuperação gradual ao longo do tempo. O déficit de perfusão do músculo tibial anterior foi de aproximadamente 60% após a cirurgia, com recuperação semelhante.

A função neuromotora dos membros pélvicos foi quantificada por meio de testes de força de preensão manual e análise do padrão de marcha em esteira, que foram realizados sequencialmente durante todo o período de recuperação. A força de preensão unilateral esperada é de aproximadamente 50% do membro contralateral no quarto dia de pós-operatório com recuperação gradual. Cada etapa da microcirurgia deve ser realizada com cuidado extra para evitar possíveis traumas nervosos ou vasculares que podem causar alterações substanciais tanto na hemodinâmica quanto na patologia do membro.

Após a caracterização do modelo, uma infinidade de estudos examinando fatores biológicos de disfunção neuromuscular resultante da colocação de fístula arteriovenosa pôde ser explorada.