Name: Refinamento Técnico de um Modelo Bilateral de Isquemia-Reperfusão Renal em Camundongos para Pesquisa de Lesão Renal Aguda (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-03T14:20:00.000+00:00
Duration: 3 min 13 s
Description: Aprenda a refinar um modelo de isquemia-reperfusão renal bilateral em camundongos C57BL/6 para pesquisa de lesão renal aguda. Este método permite induzir lesão renal de forma consistente e segura.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este modelo foi desenvolvido com o apoio financeiro do Ministério da Ciência e Tecnologia, Taiwan (MOST 109-2320-B-030-006-MY3). Este manuscrito foi editado pela Wallace Academic Editing.

Todos os experimentos com animais foram conduzidos de acordo com o Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, publicado pelo National Institutes of Health dos EUA (publicação NIH no. 85-23, revisada em 1996). O protocolo do estudo foi aprovado e de acordo com as diretrizes do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Católica de Fu-Jen. Consulte a Tabela de Materiais para obter detalhes sobre todos os materiais e instrumentos usados neste protocolo.
1. Preparação dos ratos
<ol><li>Selecionar camundongos machos C57BL/6 de 8 semanas de idade com peso de 21-23 g.</li>
	<li>Abrigar e manter os ratos sob um ciclo claro e escuro de 12 h a uma temperatura controlada (21 ± 2 °C) com livre acesso a alimentos, pellets padrão de ração para camundongos e água da torneira.</li>
</ol>2. Anestesia
<ol><li>Coloque uma máscara cirúrgica e luvas estéreis.</li>
	<li>Colocar os camundongos sob anestesia com isoflurano a 2% misturado com oxigênio a 1 L/min na câmara de indução.</li>
	<li>Avaliar o nível de anestesia pelo reflexo pedalar. NOTA: O reflexo do pedal é uma retração da pata traseira em resposta a uma pinça firme do dedo do pé. A anestesia é completa quando o reflexo pedal desaparece.</li>
	<li>Mover e colocar cada camundongo em decúbito ventral em uma plataforma cirúrgica com uma manta elétrica para manter sua temperatura corporal assim que a anestesia estiver completa. Estabilizar a temperatura corporal antes da cirurgia e monitorar com sondas de temperatura retal. Aplique pomada oftálmica em ambos os olhos para evitar o ressecamento.</li>
	<li>Tape as patas dos ratos na prancha.</li>
	<li>Anexar uma máscara ao rosto dos ratos para fornecer um fornecimento constante de isoflurano a 1% e 1 L/min de oxigénio</li>
	<li>Avaliar o nível de anestesia pelo reflexo pedioso regularmente e ajustar a administração anestésica de acordo durante a cirurgia.</li>
</ol>3. Cirurgia renal bilateral de IR-LRA
<ol><li>Toque as costas e encontre a coluna lombar dos ratos manualmente. Mova-se ao longo da coluna cefálica e procure ângulos costovertebrais que estão abaixo de ambos os lados da última costela dos camundongos.</li>
	<li>Aplique loção depilatória em ambos os lados da região do ângulo costovertebral por aproximadamente 30 s e, em seguida, remova o pelo com soro fisiológico.</li>
	<li>Desinfete a pele raspada com três rodadas de solução de betadina e álcool a 75% usando bolas de algodão. OBS: Manter um campo estéril para a cirurgia durante todo o procedimento é fundamental. Aplique um pano cirúrgico e use instrumentos estéreis.</li>
	<li>Use pinça de ponta fina para levantar suavemente a pele abaixo do ângulo costovertebral esquerdo e, em seguida, use tesoura para criar uma incisão dorsolateral oblíqua de 1 cm ao longo das linhas de tensão da pele a partir da linha média lombar no flanco esquerdo. Transeccionar a parede muscular do flanco esquerdo com tesoura para visualizar o rim esquerdo.</li>
	<li>Repetir os procedimentos cirúrgicos citados acima para visualizar o rim direito. Remova as pequenas quantidades de sangue produzidas durante o procedimento com cotonetes estéreis.</li>
	<li>Empurre e separe o rim esquerdo cuidadosamente do tecido circundante com pinças. Identificar o pedículo renal após a exposição do rim esquerdo. NOTA: Tenha cuidado para não ferir a glândula adrenal e os vasos sanguíneos circundantes.</li>
	<li>Fixação sobre o pedículo renal esquerdo com clipe microvascular por 25 min. Confirme a isquemia por uma mudança visível na cor do rim de rosa para vermelho escuro.</li>
	<li>Cubra o rim pinçado com bolas de algodão úmidas de soro fisiológico estéril para evitar a dessecação durante o clampeamento do pedículo renal esquerdo.</li>
	<li>Repetir os procedimentos cirúrgicos acima mencionados para pinçar o pedículo renal direito com um clipe microvascular por 25 min.</li>
	<li>Cubra o rim pinçado com bolas de algodão úmidas de soro fisiológico estéril para evitar a dessecação durante o clampeamento do pedículo renal direito.</li>
	<li>Monitorar periodicamente a profundidade e a umidade da anestesia das bolas de algodão úmidas com soro fisiológico estéril.</li>
	<li>Abra o clipe microvascular esquerdo para iniciar a reperfusão do rim esquerdo. Confirme a reperfusão por uma mudança de cor visível do rim esquerdo de vermelho escuro para rosa.</li>
	<li>Abra o clipe microvascular direito para iniciar a reperfusão do rim direito.</li>
	<li>Depois que a mudança de cor do rim for verificada, devolva o rim para a cavidade abdominal.</li>
	<li>Fechar a cavidade abdominal e a pele com sutura absorvível 6-0.</li>
	<li>Esfregue para desinfetar a ferida com uma solução de betadina e álcool a 75% usando bolas de algodão.</li>
	<li>Observe o animal cuidadosamente até que ele comece a se mover livremente e se alimentar. NOTA: Preste muita atenção aos animais até que eles tenham recuperado a consciência suficiente para manter a decúbito esternal.</li>
	<li>Administrar carprofeno (5 mg/kg em 0,2 mL, administrado por via subcutânea) por 2-3 dias para prevenir dor pós-cirúrgica.</li>
</ol>

Os autores declaram não haver conflitos de interesse relacionados à publicação deste artigo.

O protocolo bilateral de IR-LRA proposto é adequado para investigar o mecanismo de lesão de hipoperfusão e reperfusão de ambos os rins. O protocolo sugere que camundongos leves, anestesia geral com isoflurano, abordagem dorsolateral da cirurgia e manutenção da temperatura corporal durante a operação atenuam as dificuldades técnicas associadas, encurtam a duração da cirurgia e aumentam a consistência do procedimento para pesquisa de IR-IR renal bilateral aguda.
Dificuldades técnicas influenciam...

A parada cardíaca ocorre mais de 80.000 vezes ao ano nos Estados Unidos 1,2. A taxa de mortalidade da parada cardíaca é extremamente alta 3,4,5,6. A LRA é um importante fator de risco associado à alta mortalidade e piores desfechos neurológicos em pacientes com parada cardíaca após RCE 7,8,9,10,11,12,13. A recuperação da LRA é um bom preditor de evolução neurológica favorável e alta hospitalar14,15,16. No entanto, ainda faltam terapias efetivas para IR-LRA 15,16,17,18,19. Estratégias terapêuticas adicionais são necessárias para melhorar ainda mais os desfechos clínicos da doença.
IR-IR com abordagem de isquemia renal bilateral é um dos modelos animais utilizados para pesquisa de LRA 20,21,22,23,24,25,26. Modelos animais de IR-IR renal são menos complicados do que um modelo de lesão de IR de corpo inteiro para o estudo de LRA em pacientes com parada cardíaca súbita após RCE6,27,28,29,30. Isso implica que resultados consistentes de um modelo animal de IR-IR renal são mais fáceis de alcançar devido à presença de menos fatores de confusão nos experimentos. Além disso, os protocolos renais de IR-LRA comumente envolvem uma oclusão unilateral ou bilateral do pedículo renal. Condições em experimentos com IR-IR renal bilateral são comparáveis às condições clínicas para IR após RCE em pacientes com parada cardíaca súbita após ressuscitação cardiopulmonar bem-sucedida. Embora as características patológicas dos rins em ambos os modelos reflitam as características patológicas da lesão renal humana de IR 31,32,33, uma abordagem de isquemia renal bilateral é mais relevante para LRA em condições patológicas humanas, como insuficiência cardíaca, vasoconstrição e choque séptico 35. Modelos animais bilaterais de IR-IR renal são adequados para estudos enfocando lesões renais de IR em parada cardíaca após RCE.
Modelos renais bilaterais de IR-LRA estão associados a dificuldades técnicas, complexidade experimental e longa duração da cirurgia 23,26,32,33,35,36. Para superar essas dificuldades técnicas, o presente estudo estabeleceu um protocolo de pesquisa bilateral confiável de IR-LRA em camundongos, fazendo algumas modificações técnicas. O protocolo proposto resultou em menos complicações cirúrgicas, menor dano tecidual e menor probabilidade de mortalidade durante a cirurgia. Portanto, pode ser utilizado para investigar os processos fisiopatológicos da LRA após RCE para desenvolver novas estratégias terapêuticas contra o dano de hipoperfusão e reperfusão renal37,38,39.

<table><tbody><tr><td>Sutura absorvível, 6-0</td><td>Ethicon</td><td>J510G-BX</td><td></td></tr><tr><td>Solução Betadine</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofeno</td><td>Sigma</td><td>PHR1452</td><td></td></tr><tr><td>Bolas de algodão</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Graefe Fórceps</td><td>Fine Science</td><td>Tools 11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Almofada de aquecimento</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Critical Care Inc.</td><td>26675-46-7</td><td></td></tr><tr><td>Moria Vessel Clamp</td><td>Fine Science Tools</td><td>18320-11</td><td></td></tr><tr><td>Olsen-Hegar agulha titular</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002 - 12</td><td></td></tr><tr><td>Saline</td><td>Shineteh Istrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bisturi blades</td><td>Shinva</td><td>s2646</td><td></td></tr><tr><td>Small Animal Anesthesia Machine</td><td>Sheng-Cing Instruments Co.</td><td>STEP AS-01</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de tecido</td><td>Fine Science Tools</td><td>14072 - 10</td><td></td></tr></tbody></table>

refinamento técnico de um modelo bilateral de isquemia-reperfusão renal em camundongos para pesquisa de lesão renal aguda

Technical Refinement of a Bilateral Renal Ischemia-Reperfusion Mouse Model for Acute Kidney Injury Research

A parada cardíaca representa um grande fardo para a saúde pública. A lesão renal aguda (LRA) é um marcador adverso em sobreviventes de parada cardíaca após o retorno da circulação espontânea (RCE) após ressuscitação cardiopulmonar bem-sucedida. Por outro lado, a recuperação da função renal da LRA é um preditor de desfechos neurológicos favoráveis e alta hospitalar. No entanto, falta uma intervenção efetiva para prevenir o dano renal causado pela parada cardíaca após RCE, sugerindo que estratégias terapêuticas adicionais são necessárias. A hipoperfusão e a reperfusão renal são dois mecanismos fisiopatológicos que causam LRA após parada cardíaca. Modelos animais de IRA induzida por isquemia-reperfusão (IR-IR) de ambos os rins são comparáveis aos pacientes com LRA após RCE em um cenário clínico. No entanto, a IR-LRA de ambos os rins é tecnicamente difícil de analisar, pois o modelo está associado a alta mortalidade e ampla variação na lesão renal, o que pode afetar a análise. Foram escolhidos camundongos leves, colocados sob anestesia geral com isoflurano, submetidos à cirurgia por via dorsolateral e com temperatura corporal mantida durante a operação, reduzindo o dano tecidual e estabelecendo um protocolo reprodutível de pesquisa de IR-LRA renal aguda.

A qualidade da cirurgia renal bilateral de IR-IR deve ser avaliada antes de análises microscópicas ou moleculares adicionais. Durante a cirurgia, a isquemia renal deve ser confirmada verificando-se se o rim mudou de cor de rosa para vermelho escuro logo após o pedículo renal ser pinçado com um clipe microvascular (Figura 1). Após a cirurgia, o dano renal causado pela cirurgia de IR-LRA pode ser validado com alguns microlitros de soro através da coleta de sangue submandibular para análise bio...

Este estudo estabeleceu um protocolo com foco no refinamento técnico de um modelo murino de isquemia-reperfusão renal bilateral para pesquisa de lesão renal aguda.

Refinamento Técnico de um Modelo Bilateral de Isquemia-Reperfusão Renal em Camundongos para Pesquisa de Lesão Renal Aguda

Cardiac arrest poses a large public health burden. Acute kidney injury (AKI) is an adverse marker in survivors of cardiac arrest following the return of ...

A lesão renal aguda é um importante fator de risco associado à alta mortalidade em pacientes com parada cardíaca após retorno da circulação. Esse procedimento pode ser realizado para induzir lesão renal aguda. Esse protocolo consiste em induzir a reperfusão da isquemia renal de forma precisa, segura e consistente.Quem demonstrará o procedimento será Huang Cheng-Wei, um assistente do meu laboratório. Para começar, coloque um camundongo macho C57BL/6 anestesiado de oito semanas de idade na posição prona em uma plataforma de cirurgia com uma manta elétrica para manter a temperatura corporal. Em seguida, toque as costas, encontre a coluna lombar e procure ângulos costovertebrais abaixo de ambos os lados da última costela.Aplique loção depilatória para raspar e esfregar os pelos perto de ambos os lados da região do ângulo costovertebral. Desinfetar a área cirúrgica com solução de Betadine e álcool a 75% com algodão. Use pinças de ponta fina para levantar suavemente a pele abaixo do ângulo costovertebral esquerdo.Em seguida, com tesoura, criar uma incisão dorsolateral oblíqua de um centímetro ao longo das linhas de tensão da pele a partir da linha média lombar no flanco esquerdo. Em seguida, transeccionar a parede muscular do flanco esquerdo para visualizar o rim esquerdo. Empurre e separe o rim esquerdo cuidadosamente do tecido circundante com pinças.Em seguida, identifique o pedículo renal. Apertar o pedículo renal esquerdo com um clipe microvascular. Confirme a isquemia por uma mudança visível na cor do rim de rosa para vermelho escuro.Para evitar a dessecação durante o clampeamento, cubra o rim com bolas de algodão estéreis e úmidas com soro fisiológico. Após 25 minutos, abrir o clipe microvascular esquerdo para iniciar a reperfusão do rim esquerdo. Retorne o rim para a cavidade abdominal.Fechar a cavidade abdominal com sutura absorvível 6/0. Observe o mouse até que ele comece a se mover livremente e se alimentar. A isquemia renal após o clampeamento do pedículo renal é mostrada aqui.Uma mudança de cor do rim de rosa para vermelho escuro revela que a perfusão renal tornou-se inadequada. Em comparação com os controles, os níveis séricos de nitrogênio ureico e creatinina no sangue aumentaram dois dias após a reperfusão renal. Essa técnica abre caminho para que os pesquisadores explorem novas abordagens terapêuticas contra a lesão renal aguda.

technical-refinement-bilateral-renal-ischemia-reperfusion-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Descrevemos modelos de lesão renal por isquemia e reperfusão induzida moderada e grave em que os ratos submetidos a clampeamento do pedículo renal unilateral seguido de nefrectomia contralateral simultânea ou tardia, respectivamente. Estes modelos consistentemente dar origem a uma disfunção renal e fibrose pós-lesão, mas a gravidade da lesão e sobrevivência dependem de fundo, idade e equipamento cirúrgico mouse.

Isquemia-reperfusão modelo de lesão renal aguda e Pós Lesão fibrose em camundongos

O modelo de camundongo de lesão de reperfusão de isquemia renal descrito aqui compreende uma nefrectomia direita que fornece tecido de controle e pinçamento do pedículo renal esquerdo para induzir isquemia que resulta em lesão renal aguda. Este modelo usa uma abordagem de laparotomia de linha média com todas as etapas realizadas por meio de uma incisão.

Renal Isquemia Reperfusão: um modelo do rato de lesão e regeneração

A lesão por isquemia renal está associada à alta morbidade e mortalidade em pacientes hospitalizados. Aqui, apresentamos um modelo de camundongo simples e eficaz de lesão unilateral de isquemia renal-reperfusão e fornecemos uma visão geral sequencial das alterações patológicas representativas observadas no rim.

Um modelo eficaz de rato de isquemia renal unilateral-reperfusão lesão

Este artigo apresenta um modelo isquêmico de DRC usando IRI renal unilateral com nefrectomia contralateral realizada um dia antes da coleta da amostra; esse protocolo permite avaliação funcional baseada em soro, alta sobrevivência e patologia reprodutível da DRC em 28 e 42 dias, proporcionando uma plataforma versátil para estudos mecanicistas e intervencionistas.

Modelo murino de transição aguda para crônica de doença renal induzida por isquemia/lesão de reperfusão renal

Um modelo poderoso para perioperatório e crítica lesão renal aguda relacionada com o cuidado é apresentado. Usando hipoperfusão corpo inteiro induzida por parada cardíaca é possível a quase replicar as alterações histológicas e funcionais do AKI clínico.

Cardiac Arrest normotérmica e Ressuscitação Cardiopulmonar: um modelo do rato de isquemia-reperfusão

Nós introduzimos um método cirúrgico para induzir experimental de isquemia / reperfusão (I / R) prejuízo para simular o infarto do miocárdio (MI) em modelos de mouse que permite uma maior clareza no posicionamento da ligadura na artéria descendente anterior esquerda (LAD) para aumentar a reprodutibilidade de experimentos MI em camundongos.

Um modelo murino de isquemia-reperfusão, através da ligadura da artéria Descendente Anterior Esquerda

Aqui nós descrevemos o procedimento detalhado de isquemia e reperfusão em ratos que resulta em lesão reprodutível sem mortalidade para incentivar a padronização da técnica em todo o campo. Este modelo de lesão por isquemia-reperfusão intestinal pode ser utilizada para estudar os mecanismos celulares e moleculares da lesão e da regeneração.

Modelo murino de isquemia-reperfusão

Este artigo descreve um processo para induzir a lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada em ratos. lesão de isquemia-reperfusão da retina pela pressão intra-ocular elevada serve para modelar patologias humanas caracterizadas por oxigénio e entrega de nutrientes comprometida na retina, permitindo aos investigadores para examinar os mecanismos celulares e potenciais tratamentos para doenças humanas da unidade neurovascular da retina.

Um modelo de mouse Retinal isquemia-reperfusão Através elevação da pressão intra-ocular

Este protocolo descreve a indução de um modelo de isquemia-reperfusão (IR) em pele de orelha de rato usando íman de fixação. Usando um modelo de imagens intravital custom-built, estudamos nas respostas inflamatórias in vivo pós-reperfusão. A lógica por trás do desenvolvimento desta técnica é ampliar a compreensão de como leucócitos responder a uma lesão IR pele.

Induzindo a lesão de isquemia-reperfusão na pele da orelha de rato por Intravital Multiphoton imagem de respostas imunes

Para investigar a fisiopatologia do AVC, é criado um modelo do rato de isquémia-reperfusão cerebral. Nós distalmente ligate da artéria cerebral média direita e artéria carótida comum direita e restaurar o fluxo sanguíneo após 10 ou 40 min de isquemia.

Modelo de Mouse de dois vasos oclusão de isquémia-reperfusão Cerebral

Aprenda a refinar um modelo de isquemia-reperfusão renal bilateral em camundongos C57BL/6 para pesquisa de lesão renal aguda. Este método permite induzir lesão renal de forma consistente e segura.

Refinamento Técnico de um Modelo Bilateral de Isquemia-Reperfusão Renal em Camundongos para Pesquisa de Lesão Renal Aguda

Explorar mais vídeos