Name: Entrega intracerebroventricular de metabólitos microbianos derivados do intestino em camundongos em movimento livre (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-02T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Aprenda a entrega intracerebroventricular de metabólitos microbianos derivados do intestino em camundongos em movimento livre. Este método validado permite estudar o eixo intestino-cérebro e seus efeitos no comportamento.

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Reconhecemos a equipe do Centro de Animais de Laboratório da Universidade Nacional de Cheng Kung (NCKU) por cuidar dos animais. Este trabalho foi apoiado pela bolsa de estudos do Prof. Kun-Yen Huang Education Fund da CHENG-HSING Medical Foundation para C.-W.L.; os fundos do Ministério da Ciência e Tecnologia (MOST) em Taiwan: (Iniciação Científica MOST 109-2813-C-006-095-B) para T.-H.Y.; (MAIS 107-2320-B-006-072-MY3; 109-2314-B-006-046; 110-2314-B-006-114; 110-2320-B-006-018-MY3) a W.-L.W.; e o Projeto Sprout de Ensino Superior, do Ministério da Educação para a Sede do Avanço Universitário na NCKU para W.-L.W.

Os autores não têm conflitos de interesse relacionados a este trabalho.

Metabólitos derivados do intestino têm sido associados a doenças mediadas pelo cérebro sem muito mecanismo preciso, em parte devido aos seus múltiplos sítios de ligação no organismo 6,12,24. Relatos anteriores indicaram que os AGCCs poderiam servir como ligantes para receptores acoplados à proteína G, reguladores epigenéticos e fontes de produção de energia em múltiplos locais do organismo 6,12...

O trato gastrointestinal humano abriga diversos microrganismos que impactam o hospedeiro 1,2,3. Essas bactérias intestinais podem secretar metabólitos derivados do intestino durante a utilização de componentes dietéticos consumidos pelo hospedeiro 4,5. Curiosamente, os metabólitos intestinais não metabolizados na periferia podem ser transportados para outros órgãos via circulação6. Vale ressaltar que esses metabólitos secretados podem servir como mediadores para o eixo intestino-cérebro, definido como a comunicação bidirecional entre o sistema nervoso central e o intestino7. Estudos prévios mostraram que metabólitos derivados do intestino podem modular o comportamento complexo e a emoção em animais 8,9,10,11.
Os ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) são os principais metabólitos produzidos pela microbiota intestinal durante a fermentação de fibras alimentares e carboidratos indigestos6. Acetato, propionato e butirato são os AGCCs mais abundantes no intestino12. Os AGCCs servem como fonte de energia para as células do trato gastrointestinal. AGCCs não metabolizados no intestino podem ser transportados para o cérebro através da veia porta, modulando assim o cérebro e o comportamento 6,12. Estudos prévios sugeriram que os AGCCs podem desempenhar um papel crítico nos transtornos neuropsiquiátricos 6,12. Por exemplo, a injeção intraperitoneal de butirato em camundongos BTBR T+ Itpr3tf/J (BTBR), um modelo animal de transtorno do espectro autista (TEA), resgatou seus déficits sociais13. Ratos tratados com antibióticos que receberam microbiota de indivíduos depressivos mostraram um aumento nos comportamentos semelhantes à ansiedade e nos AGCCs fecais14. Clinicamente, alterações nos níveis de AGCCs fecais foram observadas em pessoas com TEA em comparação com controles com desenvolvimento típico15,16. Pessoas com depressão apresentam níveis mais baixos de AGCCs fecais do que indivíduos saudáveis17,18. Esses estudos sugeriram que os AGCCs podem alterar o comportamento em animais e humanos através de várias rotas.
Os metabólitos microbianos exercem diversos efeitos em múltiplos locais do corpo, impactando a fisiologia e os comportamentos do hospedeiro 4,19, incluindo o trato gastrointestinal, o nervo vago e o nervo simpático. É difícil identificar o papel preciso dos metabólitos derivados do intestino no cérebro ao administrar os metabólitos por vias periféricas. Este trabalho apresenta um protocolo baseado em vídeo para investigar os efeitos de metabólitos derivados do intestino no cérebro de um rato em movimento livre (Figura 1). Mostramos que os AGCCs poderiam ser administrados agudamente através da cânula-guia durante os testes comportamentais. O tipo, o volume e a taxa de infusão de metabólitos podem ser modificados dependendo da finalidade. O local da canulização pode ser ajustado para explorar o impacto dos metabólitos intestinais em uma região específica do cérebro. Nosso objetivo é fornecer aos cientistas um método para explorar o impacto potencial dos metabólitos microbianos derivados do intestino no cérebro e no comportamento.

<table><tbody><tr><td><forte>Material</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Advil Liqui-Géis Solubilizado Ibuprofeno A2:D41</td><td>Pfizer</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 burro anti-coelho</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-21206</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Fluorescente Ouro (coelho policlonal)</td>Filtro de Aspirador de Pó <td>Millipore</td><td>AB153-I</td><td></td></tr><tr><td>, 500 mL, 0.22 &mu; m, PES, Estéril</td><td>NEST</td><td>121921LA01</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1016</td><td>ACSF: 0,14 g/L</td></tr><tr><td>Clorexidina esfoliante 2%</td><td>Phoenix</td><td>NDC 57319-611-09</td><td></td></tr><tr><td>Solução de clorexidina</td><td>Phoenix</td><td>NDC 57319-599-09</td><td></td></tr><tr><td>Manequim comercial</td><td>RWD Life Science</td><td>62004</td><td>Single_OD 0,20 mm/ M3,5/G = 0,5 mm</td></tr><tr><td>Cânula guia comercial</td><td>RWD Life Science</td><td>62104</td><td>Single_OD 0,41 mm-27G/ M3,5/C = 2,5 mm&nbsp;</td></tr><tr><td>Injetor comercial</td><td>RWD Life Science</td><td>62204</td><td>Single_OD 0,21 mm-33G/ Combina com M3,5/C = 3,5 mm/G = 0,5 mm</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td>ACSF: 0,61 g/L</td></tr><tr><td>Acrílico dental</td><td>HYGENIC</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Parafusos de fixação</td><td>RWD Life Science</td><td>62521</td><td></td></tr><tr><td>Meio de montagem Fluoroshield com DAPI</td><td>Abcam</td><td>AB104139</td><td></td></tr><tr><td>Seringas</td> de Insulina <td>ThermoFisher Scientific</td><td>16050130</td><td></td></tr><tr><td>Serum</td><td>para cavalos BBraun</td><td>XG-LBB-9151133S-1BX</td><td>1 mL</td></tr><tr><td>Isoflurano&nbsp;</td><td>Panion & BF biotech</td><td>DG-4900-250D</td><td></td></tr><tr><td>KCl&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td>ACSF: 0,19 g/L</td></tr><tr><td>Cetoprofeno&nbsp;</td><td>Swiss Pharmaceutical</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Lidocaína&nbsp;</td><td>AstraZeneca</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Baixo ponto de fusão agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16520</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td>ACSF: 0,19 g/L</td></tr><tr><td>Lâminas de microscópio</td><td>MARIENFELD</td><td>101242</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de microscópio</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>4951PLUS-001E</td><td></td></tr><tr><td>Óleo mineral leve, branco NF</td><td>Macron Fine Chemicals</td><td>MA-6358-04</td><td></td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td>ACSF: 7,46 g/L</td></tr><tr><td>NaH2PO4&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8282</td><td>ACSF: 0.18 g/L</td></tr><tr><td>NaHCO3&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td>ACSF: adesivo de 1,76 g/L</td></tr><tr><td>n-butil cianoacrilato (cola adesiva de tecido)</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td>3M Vetbond</td></tr><tr><td>Neural tracer&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-358883</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td> FluoroGold <td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de polietileno</td><td>RWD Life Science</td><td>62329</td><td>OD 1.50, I.D 0.50 mm e OD 1.09, I.D 0.38 mm</td></tr><tr><td>Pomada Puralube Vet (olho)</td><td>Dechra&nbsp;</td><td></td><td></td>12920060</tr><tr><td>Acetato de sódio&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2889</td><td>SCFAs: 13.5 mM</td></tr><tr><td>Azida de sódio&nbsp;</td><td>Butirato de sódio Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B5887</td><td>SCFAs: 8 mM</td></tr><tr><td>Propionato de Sódio&nbsp;</td><td>SCFAs Sigma-Aldrich</td><td>P1880</td>: Cânula guia inoxidável <td>de 5,18 mM</td></tr><tr><td></td><td>Chun Ta empresa de aço inoxidável CO., LTD.</td><td>n/a</td><td>OD 0,63 mm; Fornecedor local</td></tr><tr><td>Injetor de aço inoxidável</td><td>Chun Ta empresa de aço inoxidável CO., LTD.</td><td>n/a</td><td>OD 0,3 mm; manequim é feito de injetor; fornecedor local</td></tr><tr><td>Supercola</td><td>Krazy Cola</td><td>KG94548R</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Merck</td><td>1.08603.1000</td><td></td></tr><tr><td><forte>Equipamento</forte>Suporte de</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>cânula</td><td>RWD Life Science</td><td>B485-68217</td><td></td></tr><tr><td>Câmera de teto</td><td>FOSCAM</td><td>R2</td><td></td></tr><tr><td>Instrumentos estereotáxicos digitais</td><td>Stoelting</td><td>51730D</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de dissecação</td><td>INNOVIEW</td><td>SEM-HT/TW</td><td></td></tr><tr><td>Esterilizador de esferas de vidro</td><td>RWD Life Science</td><td>RS1501</td><td></td></tr><tr><td>Almofada de aquecimento</td><td>Stoelting</td><td>53800M</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio Leica&nbsp;</td><td>Leica</td><td>DM2500</td><td></td></tr><tr><td>Micro Pinça de Dissecação</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5136</td><td>Serrilhada, Ligeira Curva; Extra Delicado; Largura da ponta de 0,5 mm; 4" de comprimento&nbsp;</td></tr><tr><td>Tesoura de Micro Dissecação</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5918</td> Controlador de Microinjeção <td>Angular Sharp de 4,5"</td></tr><tr><td></td><td>World Precision Instruments (WPI)</td><td>MICRO2T</td><td>Controlador SMARTouch</td></tr><tr><td>Bomba de seringa de microinjeção</td><td>World Precision Instruments (WPI)</td><td>UMP3T-1</td><td>UltraMicroPump3&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Seringa de microlitro</td><td>Hamilton</td><td>80014</td><td>10 &micro; L</td></tr><tr><td>Luz Fria de Fibra Óptica com Fibra Dupla Passo</td><td></td><td>LGY-150</td><td>Fornecedor local</td></tr><tr><td>Aparador de animais de estimação</td><td>WAHL</td><td>09962-2018</td><td></td></tr><tr><td>Vaporizador para Isoflurano</td><td>Step</td><td>AS-01</td><td>Fornecedor local</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>VT1000S</td><td></td></tr><tr><td>SoftwareVídeo de</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>comportamento animal software de rastreamento</td><td>Noldus</td><td>EthoVision</td><td>Versão: 15.0.1416</td></tr><tr><td>Software Leica Application Suite X</td><td>Leica</td><td>LASX</td><td>Versão: 3.7.2.22383</td></tr></tbody></table>

entrega intracerebroventricular de metabólitos microbianos derivados do intestino em camundongos em movimento livre

Intracerebroventricular Delivery of Gut-Derived Microbial Metabolites in Freely Moving Mice

O impacto da microbiota intestinal e seus metabólitos na fisiologia e no comportamento do hospedeiro tem sido extensivamente investigado nesta década. Numerosos estudos revelaram que os metabólitos derivados da microbiota intestinal modulam as funções fisiológicas mediadas pelo cérebro através de intrincadas vias intestino-cérebro no hospedeiro. Os ácidos graxos de cadeia curta (AGCC) são os principais metabólitos derivados de bactérias produzidos durante a fermentação de fibras alimentares pelo microbioma intestinal. Os AGCCs secretados do intestino podem atuar em vários locais da periferia, afetando as respostas imunológicas, endócrinas e neurais devido à vasta distribuição de receptores SCFAs. Portanto, é um desafio diferenciar os efeitos centrais e periféricos dos AGCCs por meio da administração oral e intraperitoneal de AGCC. Este artigo apresenta um método baseado em vídeo para interrogar o papel funcional dos AGCCs no cérebro através de uma cânula guia em camundongos em movimento livre. A quantidade e o tipo de AGCCs no cérebro podem ser ajustados controlando o volume e a taxa de infusão. Este método pode fornecer aos cientistas uma maneira de apreciar o papel dos metabólitos derivados do intestino no cérebro.

O camundongo foi infundido com AGCCs 1 semana após a recuperação do implante da cânula-guia para avaliar a atividade locomotora em uma nova gaiola. O camundongo foi colocado em uma nova gaiola e infundido com 2.100 nL de AGCCs ou ACSF nos primeiros 5 minutos (taxa de entrega de 7 nL/s) no cérebro através da cânula guia comercial implantada no ventrículo lateral do cérebro. A atividade locomotora em uma nova gaiola foi registrada por mais 30 minutos após a infusão. Não foi observada diferença na atividade locomotora na no...

Os metabólitos microbianos derivados do intestino têm efeitos multifacetados, levando a um comportamento complexo em animais. Nosso objetivo é fornecer um método passo-a-passo para delinear os efeitos dos metabólitos microbianos derivados do intestino no cérebro através da entrega intracerebroventricular através de uma cânula guia.

Entrega intracerebroventricular de metabólitos microbianos derivados do intestino em camundongos em movimento livre

The impact of gut microbiota and their metabolites on host physiology and behavior has been extensively investigated in this decade. Numerous studies have ...

Os metabólitos liberados pela microbiota intestinal produzem efeitos complexos sobre o hospedeiro. Este protocolo apresenta um método para interrogar o papel dos metabólitos intestinais no cérebro e no comportamento do rato. Esta técnica fornece um método preciso, meticuloso e validado para entregar metabólitos intestinais em um cérebro em camundongos em movimento livre.Nós fornecemos uma metodologia abrangente e fisiológica para a melhor visão sobre a pesquisa do eixo do cérebro intestinal. Coloque o mouse sobre o quadro estereotáxico e fixe os incisivos do mouse na barra incisiva no suporte do incisivo estereotáxico. Cubra o nariz com a máscara do cone do nariz.Em seguida, avalie a nocicepção do rato através do reflexo superior da pinça e garanta uma taxa de respiração constante antes de incidir o local cirúrgico. Uma vez aparado pelo na cabeça é removido pela fita adesiva, por via subcutânea injete o analgésico cetoprofeno para aliviar a dor e aplicar pomada ocular. Em seguida, fixe a cabeça inserindo a barra auricular pontiaguda no canal auditivo.Aperte o grampo do nariz no suporte do incisivo e pressione a cabeça suavemente para garantir que a cabeça esteja fixa. Use 3 esfoliantes alternados de cotonete de clorexidina para desinfetar o couro cabeludo. Agora, use bisturi dissecante para fazer uma incisão de menos de um centímetro no couro cabeludo de maneira anterior posterior.Depois de abrir a incisão, limpe o crânio com um cotonete segurado por pinças microdissecantes. Com base nas coordenadas estereotáxicas, identifique e rotule a posição do ventrículo lateral direito conforme descrito no manuscrito. Em seguida, faça um furo através do crânio no local rotulado usando uma broca estereotáxica e, mais tarde, faça mais dois a quatro furos no crânio.Limpe o crânio com cotonete de lidocaína e monte de 2 a 4 parafusos inoxidáveis nos orifícios. Coloque a cânula guia comercial no suporte da cânula estereotáxica e desinfete com o esterilizador de velocidade de vidro a 150 graus Celsius. Em seguida, mova o suporte da cânula estereotáxica para o orifício perfurado para o ventrículo lateral e insira lentamente a cânula guia comercial no orifício até que a profundidade desejada seja atingida.Agora aplique 10 microlitros de adesivo de n-butilcianoacrilato para fixar a cânula guia comercial no furo perfurado e aguarde de 3 a 4 minutos. Solte a cânula guia comercial suavemente do suporte da cânula estereotáxica e aplique acrílico dentário no couro cabeludo incisado para fixar a cânula guia comercial e aguarde pelo menos 5 minutos. Implante o manequim comercial na cânula guia comercial.Em seguida, coloque o rato numa nova gaiola com uma almofada de aquecimento por baixo para recuperação da anestesia e observe continuamente até que o rato acorde completamente. Monte a seringa de microlitro, contendo 10 microlitros de água destilada, na bomba de microinjeção. Usando uma seringa de insulina, encha o tubo de polietileno com água destilada e conecte a seringa de microlitro ao tubo de polietileno suspenso.Ligue o controlador de microinjeção e pressione Exibir todos os canais para acessar a tela de comando. Em seguida, pressione a configuração e defina a meta de volume para 9.800 nanolitros com taxa de entrega de 100 nanolitros por segundo. Em seguida, pressione a direção para alternar para o modo de infusão e pressione executar para infundir 9.800 nanolitros de água destilada do tubo de polietileno conectado à seringa de microlitro.Agora, coloque o injetor em um frasco contendo o óleo mineral, pressione a configuração e defina a meta de volume para 3.000 nanolitros com taxa de entrega de 100 nanolitros por segundo. Para retirar 3.000 nanolitros de óleo mineral, pressione a direção para alternar para o modo de retirada e, em seguida, pressione correr. Desmonte o tubo de polietileno da agulha da seringa de microlitro.Para cuspir 3.000 nanolitros de água destilada da agulha da seringa de microlitro, pressione a direção para alternar para o modo de infusão e pressione correr. Em seguida, insira a seringa de microlitro de volta no tubo de polietileno. Coloque o injetor num frasco para injetáveis contendo AGCC.Pressione a configuração e defina a meta de volume para 9.500 nanolitros com taxa de entrega de 100 nanolitros por segundo. Retire 9.500 nanolitros de SCFAs pressionando a direção para alternar para o modo de retirada e pressione run. Rotule a fase de SCFAs de óleo para validar se os SCFAs são infundidos com êxito.Pressione a configuração e defina a meta de volume desejada com taxa de entrega para 7 nanolitros por segundo. Pressione a direção para alternar para o modo de infusão. Pressione correr para infundir a seringa de microlitro para a frente até que o líquido saia na extremidade frontal do injetor comercial antes de inserir o injetor na cânula para injeção de SCFAs.Depois de anestesiar o rato, introduza o injector comercial na cânula guia comercial. Uma vez que o rato esteja recuperado da anestesia, coloque-o em uma nova gaiola e deixe-o explorar por 35 minutos livremente. Infundir SCFAs usando uma taxa de entrega de 7 nanolitros por segundo para um volume alvo de 2.100 nanolitros nos primeiros 5 minutos.Em seguida, pressione a direção para o modo de infusão e pressione executar. Após o teste comportamental, remova o injetor comercial da cânula guia comercial. Infundir 2.100 nanolitros do traçador neutro com a taxa de entrega de 7 nanolitros por segundo para verificar o local de infusão.Fotografe o sinal fluorescente no local de infusão usando um microscópio de fluorescência. Ambos os ratos com infusão de ACSF e SCFAs viajaram em uma nova gaiola por um total de 35 minutos. Não foi observada diferença na atividade locomotora na nova gaiola entre a infusão de AGCCs e SCSF.O corante fluorescente foi detectado no ventrículo lateral e nas regiões circundantes do cérebro do rato quando infundido com uma cânula guia comercial. Da mesma forma, a infusão através da cânula guia de aço inoxidável leva à detecção de sinais no ventrículo lateral e nas regiões circundantes do cérebro do rato. A combinação deste procedimento com tecnologias neurais baseadas em circuitos permitirá que os cientistas obtenham informações sobre o controle baseado em circuitos do cérebro e o comportamento contribuído pelos metabólitos intestinais.Esta técnica abre o caminho para os pesquisadores explorarem o papel da microbiota e dos metabólitos no intrincado eixo cerebral intestinal.

intracerebroventricular-delivery-gut-derived-microbial-metabolites

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este artigo demonstra dois métodos muito diferentes de injecção: 1) para o cérebro (intracerebroventricular) e 2) sistêmica (intravenosa) para introduzir a agentes terapêuticos para o sistema nervoso central de camundongos recém-nascidos.

Entrega de agentes terapêuticos Através intracerebroventricular (ICV) e injecção intravenosa (IV) em ratos

Este vídeo demonstra o processo de injeção intracerebroventricular para estudar a distribuição do citomegalovírus murino (MCMV) no cérebro de camundongos neonatais. O MCMV, projetado para expressar uma proteína fluorescente verde aprimorada (EGFP) para visibilidade, é injetado no ventrículo lateral do cérebro de um filhote de camundongo. O vírus injetado circula pelo líquido cefalorraquidiano, infectando células na região periventricular, incluindo a zona marginal, o plexo coróide e a zona...

Uma injeção intracerebroventricular para analisar a distribuição do citomegalovírus murino em um cérebro de camundongo neonatal

Fonte: Liou, C. et al. Entrega intracerebroventricular de metabólitos microbianos derivados do intestino em camundongos que se movem livremente. J. Vis. Exp. (2022).Este vídeo demonstra a injeção intracraniana de ácidos graxos de cadeia curta (SCFAs) em um camundongo que se move livremente para estudar seus efeitos no comportamento mediado pelo cérebro. Uma cânula injetora é inserida em uma cânula guia implantada no cérebro do camundongo. Após a recuperação, o camundongo se aclimata em uma nova...

Injeção intracraniana de metabólitos microbianos derivados do intestino em um modelo de camundongo

Um modelo do rato de reconstrução endoscópica da base do crânio humano foi desenvolvido que cria uma interface semipermeável entre o cérebro eo nariz com enxertos mucosas nasais. Este método permite que os investigadores a estudar a libertação no sistema nervoso central de terapêutica de elevado peso molecular, que são de outro modo excluídos pela barreira sangue-cérebro, quando administrado sistemicamente.

Heterotópico mucosa enxertando Procedimento para entrega da droga direto para o cérebro em ratos

Aqui, descrevemos um método simples de injeção intracerebroventricular e intravascular de partículas virais ou microesferas fluorescentes no cérebro de camundongos neonatais. O padrão de localização do vírus e das nanopartículas pode ser detectado por avaliação microscópica ou por hibridização in situ.

Intracerebroventricular e intravascular A injeção de Viral partículas e fluorescentes microesferas no cérebro Neonatal

Este estudo detalha o processo de quantidades precisas de gavaging de probióticos para camundongos neonatais. A montagem experimental foi otimizada para incluir, mas não está limitada ao probiótico dosagem, métodos de administração e quantificação de bactérias no intestino.

Estudos de probiótico em camundongos neonatais usando Gavage

O objetivo aqui é delinear um protocolo para investigar os mecanismos de disbiose na doença cardiovascular. Este artigo discute como coletar e transplantar amostras fecais murinas assepticamente, isolar intestinos e usar o método "Swiss-roll", seguido por técnicas de imunomarcação para interrogar alterações no trato gastrointestinal.

Isolamento Fecal Murino e Transplante de Microbiota

A comunicação intestino-cérebro, facilitada pelo nervo vago, é crucial para a comunicação entre o sistema endócrino gastrointestinal e o cérebro. No entanto, ainda não se sabe se a injeção intragástrica de glicose pode alterar a atividade cortical. Aqui, oferecemos um protocolo abrangente para observar mudanças na atividade cortical após a injeção de glicose no duodeno.

Análise em tempo real da comunicação neural intestino-cérebro: dinâmica do cálcio em todo o córtex em resposta à estimulação intestinal da glicose

O protocolo demonstra um método para coletar sangue de veias porta e veia cava inferior de camundongos sequencialmente para avaliar a produção e absorção de metabólitos microbianos intestinais.

Coleta sequencial de sangue da veia cava inferior seguida da veia porta para avaliar metabólitos microbianos intestinais em camundongos

O parto prematuro (parto &lt; 37 semanas) é um problema de saúde global urgente com opções de prevenção e tratamento abaixo do ideal. Apresentamos um modelo de camundongo de parto prematuro induzido por infecção bacteriana vaginal ascendente e descrevemos como analisar a morbidade e mortalidade neonatal resultante.

Modelagem de infecção vaginal ascendente, parto prematuro e morbidade neonatal em camundongos

Este artigo descreve: (1) entrega oral por gavage de moléculas de teste para camundongos neonatais já no DOL 6; e (2) avaliação ex vivo da função da barreira epitelial do cólon em biópsias desde filhotes DOL 10 até desmame (DOL 20), avaliando a permeabilidade paracelular e transcelular com câmaras de Ussing.

Gavage Oral em Filhotes de Camundongos Neonatais e Avaliação Funcional da Integridade da Barreira Intestinal Usando Câmaras de Uso

Aprenda a entrega intracerebroventricular de metabólitos microbianos derivados do intestino em camundongos em movimento livre. Este método validado permite estudar o eixo intestino-cérebro e seus efeitos no comportamento.

Entrega intracerebroventricular de metabólitos microbianos derivados do intestino em camundongos em movimento livre

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