Name: Uma abordagem de imagem intravital fluorescente para estudar a dinâmica de sinalização de cálcio induzida por carga em osteócitos de camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-24T14:05:00.000+00:00
Duration: 5 min 3 s
Description: Aprenda a usar microscopia intravital de dois fótons para estudar a sinalização de cálcio em osteócitos de camundongos durante carga mecânica. Este método avança a compreensão da mecanobiologia óssea in vivo.

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<ol><li>Lu, X. L., Huo, B., Park, M., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+response+in+osteocytic+networks+under+steady+and+oscillatory+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Calcium response in osteocytic networks under steady and oscillatory fluid.</a> Bone. 51 (3), 466-473 (2012).</li>
<li>Wu, D., Schaffler, M. B., Weinbaum, S., Spray, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-dependent+adhesion+mediates+network+responses+to+physiological+stimulation+of+the+osteocyte+cell+process%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Matrix-dependent adhesion mediates network responses to physiological stimulation of the osteocyte cell process.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (29), 12096-12101 (2013).</li>
<li>Verbruggen, S. W., Vaughan, T. J., McNamara, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+flow+in+the+osteocyte+mechanical+environment%3A+A+fluid-structure+interaction+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biomechanics+and+Modeling+in+Mechanobiology%22%5BJournal%5D)">Fluid flow in the osteocyte mechanical environment: A fluid-structure interaction approach.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 13 (1), 85-97 (2013).</li>
<li>Genetos, D. C., Kephart, C. J., Zhang, Y., Yellowley, C. E., Donahue, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+fluid+flow+activation+of+gap+junction+hemichannels+induces+atp+release+from+MLO-Y4+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Oscillating fluid flow activation of gap junction hemichannels induces atp release from MLO-Y4 osteocytes.</a> Journal of Cellular Physiology. 212 (1), 207-214 (2007).</li>
<li>Lu, X. L., Huo, B., Chiang, V., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocytic+network+is+more+responsive+in+calcium+signaling+than+osteoblastic+network+under+fluid+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Osteocytic network is more responsive in calcium signaling than osteoblastic network under fluid flow.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 27 (3), 563-574 (2012).</li>
<li>Schaffler, M. B., Kennedy, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+signaling+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Osteoporosis+Reports%22%5BJournal%5D)">Osteocyte signaling in bone.</a> Current Osteoporosis Reports. 10 (2), 118-125 (2012).</li>
<li>Kramer, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+Wnt%2F+-Catenin+signaling+is+required+for+normal+bone+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Osteocyte Wnt/ -Catenin signaling is required for normal bone homeostasis.</a> Molecular and Cellular Biology. 30 (12), 3071-3085 (2010).</li>
<li>Nakashima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+osteocyte+regulation+of+bone+homeostasis+through+RANKL+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Evidence for osteocyte regulation of bone homeostasis through RANKL expression.</a> Nature Medicine. 17 (10), 1231-1234 (2011).</li>
<li>Kennedy, O. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+resorption+in+fatigue-loaded+bone+involves+both+apoptosis+and+active+pro-osteoclastogenic+signaling+by+distinct+osteocyte+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Activation of resorption in fatigue-loaded bone involves both apoptosis and active pro-osteoclastogenic signaling by distinct osteocyte populations.</a> Bone. 50 (5), 1115-1122 (2012).</li>
<li>Rawlinson, S. C. F., Wheeler-Jones, C. P. D., Lanyon, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arachidonic+acid+for+loading+induced+prostacyclin+and+prostaglandin+E2+release+from+osteoblasts+and+osteocytes+is+derived+from+the+activities+of+different+forms+of+phospholipase+A2%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Arachidonic acid for loading induced prostacyclin and prostaglandin E2 release from osteoblasts and osteocytes is derived from the activities of different forms of phospholipase A2.</a> Bone. 27 (2), 241-247 (2000).</li>
<li>David, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+bone+formation+in+bovine+trabecular+bone+cultured+in+a+dynamic+3D+bioreactor+is+enhanced+by+compressive+mechanical+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Ex vivo bone formation in bovine trabecular bone cultured in a dynamic 3D bioreactor is enhanced by compressive mechanical strain.</a> Tissue Engineering Part A. 14 (1), 117-126 (2008).</li>
<li>Davies, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+loaded+ex+vivo+bone+culture+system+%26%2334%3BZetos%26%2334%3B%3A+systems+and+culture+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Cell+%26+Materials%22%5BJournal%5D)">Mechanically loaded ex vivo bone culture system &#34;Zetos&#34;: systems and culture preparation.</a> European Cell & Materials. 11, 57-75 (2006).</li>
<li>Adachi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+calcium+signaling+response+to+bone+matrix+deformation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Osteocyte calcium signaling response to bone matrix deformation.</a> Journal of Biomechanics. 42 (15), 2507-2512 (2009).</li>
<li>Huo, B., Lu, X. L., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+calcium+wave+propagation+in+linear+and+circuit-like+bone+cell+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+A%3A+Mathematical%2C+Physical+and+Engineering+Sciences%22%5BJournal%5D)">Intercellular calcium wave propagation in linear and circuit-like bone cell networks.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society A: Mathematical, Physical and Engineering Sciences. 368 (1912), 617-633 (2010).</li>
<li>Morrell, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+induced+Ca2%2B+oscillations+in+osteocytes+release+extracellular+vesicles+and+enhance+bone+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanically induced Ca2+ oscillations in osteocytes release extracellular vesicles and enhance bone formation.</a> Bone Research. 6, 6(2018).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+intracellular+calcium+oscillations+in+osteocytes+in+intact+mouse+long+bones+under+dynamic+mechanical+loading%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">In situ intracellular calcium oscillations in osteocytes in intact mouse long bones under dynamic mechanical loading.</a> FASEB Journal. 28 (4), 1582-1592 (2014).</li>
<li>Chen, T. -W., Wardill, T. J., Sun, Y., Pulver, S. R., Renninger, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-sensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultra-sensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li>
<li>Jacobs, C. R., Temiyasathit, S., Castillo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+mechanobiology+and+pericellular+mechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Osteocyte mechanobiology and pericellular mechanics.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 12, 369-400 (2010).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+properties+of+intracellular+calcium+signaling+in+osteocytic+and+osteoblastic+cell+networks+under+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal properties of intracellular calcium signaling in osteocytic and osteoblastic cell networks under fluid.</a> Bone. 53 (2), 531-540 (2013).</li>
<li>Thi, M. M., Suadicani, S. O., Schaffler, M. B., Weinbaum, S., Spray, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensory+responses+of+osteocytes+to+physiological+forces+occur+along+processes+and+not+cell+body+and+require+%CE%B1V%CE%B23+integrin%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Mechanosensory responses of osteocytes to physiological forces occur along processes and not cell body and require αVβ3 integrin.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (52), 21012-21017 (2013).</li>
<li>Wang, Y., McNamara, L. M., Schaffler, M. B., Weinbaum, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+the+role+of+integrins+in+flow+induced+mechanotransduction+in+osteyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A model for the role of integrins in flow induced mechanotransduction in osteyocytes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (40), 15941-15946 (2007).</li>
<li>McNamara, L. M., Majeska, R. J., Weinbaum, S., Friedrich, V., Schaffler, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attachment+of+osteocyte+cell+processes+to+the+bone+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Attachment of osteocyte cell processes to the bone matrix.</a> The Anatomical Record. 292 (3), 355-363 (2009).</li>
<li>Franz-Odendaal, T. A., Hall, B. K., Witten, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buried+alive%3A+How+osteoblasts+become+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Buried alive: How osteoblasts become osteocytes.</a> Developmental Dynamics. 235 (1), 176-190 (2005).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+its+application+to+bone+and+dental+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and its application to bone and dental tissues.</a> Journal of Dental Research. 98 (6), 621-631 (2019).</li>
<li>Lewis, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+calcium+signals+encode+strain+magnitude+and+loading+frequency+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Osteocyte calcium signals encode strain magnitude and loading frequency in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (44), 11775-11780 (2017).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DMP1-targeted+Cre+expression+in+odontoblasts+and+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">DMP1-targeted Cre expression in odontoblasts and osteocytes.</a> Journal of Dental Research. 86 (4), 320-325 (2007).</li>
<li>Rubin, C. T., Lanyon, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+strain+similarity+in+vertebrates%3B+an+alternative+to+allometric+limb+bone+scaling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Theoretical+Biology%22%5BJournal%5D)">Dynamic strain similarity in vertebrates; an alternative to allometric limb bone scaling.</a> Journal of Theoretical Biology. 107 (2), 321-327 (1984).</li>
<li>Jacobs, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effect+of+steady+versus+oscillating+flow+on+bone+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Differential effect of steady versus oscillating flow on bone cells.</a> Journal of Biomechanics. 31 (11), 969-976 (1998).</li>
<li>Kato, Y., Windle, J. J., Koop, B. A., Mundy, G. R., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+osteocyte-like+cell+line%2C+MLO-Y4%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Establishment of an osteocyte-like cell line, MLO-Y4.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 12 (12), 2014-2023 (1997).</li>
<li>Kato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+osteoid+preosteocyte-like+cell+MLO-A5+that+spontaneously+mineralizes+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Establishment of an osteoid preosteocyte-like cell MLO-A5 that spontaneously mineralizes in culture.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 16 (9), 1622-1633 (2001).</li>
<li>Woo, S. M., Rosser, J., Dusevich, V., Kalajzic, I., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+line+IDG-SW3+replicates+osteoblast-to-late-osteocyte+differentiation+in+vitro+and+accelerates+bone+formation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Cell line IDG-SW3 replicates osteoblast-to-late-osteocyte differentiation in vitro and accelerates bone formation in vivo.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 26 (11), 2634-2646 (2011).</li>
<li>vander Plas, A., Nijweide, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+purification+of+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Isolation and purification of osteocytes.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 7 (4), 389-396 (1992).</li>
<li>Gu, G., Nars, M., Hentunen, T. A., Metsikkö, K., Väänänen, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+primary+osteocytes+express+functional+gap+junctions+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Isolated primary osteocytes express functional gap junctions in vitro.</a> Cell and Tissue Research. 323 (2), 263-271 (2006).</li>
<li>Paic, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+differentially+expressed+genes+between+osteoblasts+and+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Identification of differentially expressed genes between osteoblasts and osteocytes.</a> Bone. 45 (4), 682-692 (2009).</li>
<li>Tian, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neural+activity+in+worms%2C+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nature Methods. 6 (12), 875-881 (2009).</li>
<li>Grienberger, C., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+calcium+in+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging calcium in neurons.</a> Neuron. 73 (5), 862-885 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#3 Lidar com bisturi</td><td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>72040-03</td><td>Suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>20x Objetiva de imersão em água</td><td>Olympus</td><td>XLUMPLFLN20XW</td><td>Esta é uma objetiva de 20x, mas 40x também pode ser usada para este protocolo. Recomendamos imersões em água porque ela precisa ser mergulhada no banho durante a imagem, portanto, a objetiva ao ar livre pode causar aberrações</td></tr><tr><td>AM Bickford Omnicon F / AIR</td><td>AM Bickford</td><td>80120</td><td>Uma resposta sensata para problemas de gás anestésico na sala de cirurgia, o filtro de gás anestésico F / AIR foi projetado especificamente para remover gases anestésicos residuais, como isoflurano, Halotano, Enflurano, etc. do ambiente da sala de cirurgia.</td></tr><tr><td>Kit A.M. Bickford Omnicon F/AIR&nbsp;</td><td>AM Bickford</td><td>80000</td><td>Um kit completo com tubo e adaptadores para conectar F / AIR à configuração</td></tr><tr><td>B6J. Cg-Gt (ROSA) 26Sortm95.1 (CAG-GCaMP6f) Hze / MwarJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>28865</td><td>GCaMP6f Camundongos para cruzamento com camundongos Dmp1-Cre</td></tr><tr><td>B6N. FVB-Tg(Dmp1-cre)1Jqfe/BwdJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>23047</td><td>Camundongos Dmp1-Cre para cruzamento com camundongos GCaMP6f&nbsp;</td></tr><tr><td>Célula de carga de compressão</td><td>FUTEK Advanced Sensor Technology, Inc.</td><td>905898</td><td>LCM100, 1000 g, Célula de carga de compressão e tensão subminiatura (miniatura/rosca em linha), RoHS sem chumbo, Material - 17-4 PH S.S., M3x0,5-thread, 34 Awg 4 condutores cabo de poliéster trançado, 5 pés de comprimento</td></tr><tr><td>Corning 500 mL DPBS (solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco), 1x [+] cálcio, magnésio</td><td>VWR International</td><td>21-030-CV</td><td>Banho ionicamente equilibrado que contém cálcio submerge o metatarso durante a imagem</td></tr><tr><td>Ferramenta de picareta odontológica</td> Ciências <td></td> de <td>Microscopia Eletrônica</td><td>Suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Álcool etílico puro 200 prova ACS reagente >99,5%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SIAL-459844-500ML</td><td>Finalidades de esterilização</td></tr><tr><td>Pino de fulcro</td><td>Braça N</td><td>/A</td><td>Fabricado por sinterização direta a laser 3D de aço inoxidável (liga PH1) a partir de arquivos 3D SolidWorks STL. O fornecedor original foi GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc, agora adquirida pela FATHOM, as especificações são fornecidas no documento publicado anteriormente Kit</td></tr><tr><td>de saída USB220 de alta resolução e velocidade</td><td>FUTEK Advanced Sensor Technology, Inc.</td><td>717435</td><td>Usado para conectar a célula de carga ao laptop</td></tr><tr><td>ImageJ 1.53t com Java 1.8.0_172 (para Windows 64 bits)</td> <td>NIH</td><td>N / A</td><td>Instale aqui https://imagej.nih.gov/ij/</td></tr> <tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal Critical Care</td><td>66794-013-25</td><td>100% líquido de vapor de inalação</td></tr><tr><td>Suporte de carregamento</td><td>Braça N</td><td>/ A</td><td>Fabricado por sinterização direta a laser 3D de aço inoxidável (liga PH1) a partir de arquivos 3D SolidWorks STL. O fornecedor original foi GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc, agora adquirida pela FATHOM, as especificações são fornecidas no documento publicado anteriormente</td></tr><tr><td>MATLAB R2019a</td><td>MathWorks</td><td></td><td>Para executar o dispositivo de carregamento</td></tr><tr><td>Vaporizador Matrx VIP 3000 bem preencher isoflurano</td><td>Butler Schein Animal Health</td><td>14309</td><td>Vaporizador para anestésico</td></tr><tr><td>Oxímetro de pulso Nonin Modelo 2500A Vet</td><td></td><td>2500A Vet</td><td></td></tr><tr><td>Piezo servo controlador</td><td>PI-USA</td><td>E-625</td><td>Componente eletrônico recomendado pela empresa para ser usado com o atuador</td></tr><tr><td>Atuador piezo linear de alta rigidez PiezoMove</td><td>PI-USA</td><td>P-602.5SL</td><td>Atuador para o dispositivo de carregamento</td></tr><tr><td>Lâminas de bisturi, nº 10 para alça nº 3, pacote de 100</td><td>Microscopia Eletrônica Sciences</td><td>72044-10</td><td>Material cirúrgico</td></tr><tr><td>Pinças de aço inoxidável com pontas afiadas e finas. Comprimento: 120 mm</td><td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>78326-42</td><td>Material cirúrgico</td></tr><tr><td>Thorlabs Bergamo microscópio multifotônico</td><td>ThorLabs</td><td>N/A</td><td>Este é apenas o sistema de imagem e não tem o laser incluído, embora ThorLabs tenha opções de laser se desejado</td></tr><tr><td>Titanium-Saphire Chameleon Discovery NX com Controle Total de Potência (TPC)</td><td>Coerente</td><td>N/A</td><td>Este sistema tecnicamente possui dois lasers, um ajustável e um fixo. No entanto, para o protocolo, apenas o sintonizável é necessário.&nbsp;</td></tr><tr><td>Tesoura de mola Vannas - 4 mm de ponta</td><td>Ferramentas de Belas Ciências</td><td>15018-10</td><td>Suprimentos cirúrgicos</td></tr><tr><td>Banho maria</td><td>Fathom</td><td>N/A</td><td>Fabricado por sinterização direta a laser 3D de aço inoxidável (liga PH1) a partir de arquivos 3D SolidWorks STL. O fornecedor original foi GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc, agora adquirida pela FATHOM, as especificações são fornecidas no documento publicado anteriormente</td></tr></tbody></table>

uma abordagem de imagem intravital fluorescente para estudar a dinâmica de sinalização de cálcio induzida por carga em osteócitos de camundongos

A Fluorescent Intravital Imaging Approach to Study Load-Induced Calcium Signaling Dynamics in Mouse Osteocytes

Aqui relatamos uma metodologia para estudar a sinalização de cálcio em osteócitos embutidos in vivo usando preparação cirúrgica aguda e imagens fluorescentes multifotônicas. O sinal fluorescente verde pode ser observado a partir de indicadores de cálcio geneticamente codificados em osteócitos via expressão de DMP1-Cre. A Figura 4 é uma imagem de plano único de osteócitos embutidos. Observe que todas as células são marcadas e expressam fluorescência verde de linha de base, f...

Uma abordagem de imagem intravital fluorescente para estudar a dinâmica de sinalização de cálcio induzida por carga em osteócitos de camundongos

Bone tissue is exquisitely sensitive to differences in mechanical load magnitude. Osteocytes, dendritic cells that form a syncytium throughout the bone, ...

a-fluorescent-intravital-imaging-approach-to-study-load-induced

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Para entender a dinâmica da rede de microcircuitos no neocórtex, é essencial para gravar simultaneamente a atividade de um grande número de neurônios. In-vivo de dois fótons de imagens de cálcio é o único método que permite registrar a atividade de uma densa população neuronal com uma única célula de resolução.

Vivo em 2-Photon Imagens de cálcio na camada 2 / 3 dos Ratos

Fluorescência baseada em Medição da loja operada entrada de cálcio em células vivas: a partir de células cancerosas cultivadas em fibra muscular esquelética

Fonte: Heredia, D. J., et. al. Imagem ex vivo da sinalização de cálcio específica da célula na sinapse tripartida do diafragma do camundongo. J. Vis. exp.}} (2018) Este vídeo demonstra imagens de fluorescência Caracterização da dinâmica do cálcio nas junções neuromusculares (NMJs) em um camundongo transgênico que expressa indicadores de cálcio geneticamente codificados. Um NJM é identificado por receptores de acetilcolina marcados com fluorescência no diafragma com o nervo frênico. Um divisor...

Imagem de fluorescência da dinâmica do cálcio nas junções neuromusculares no diafragma de um camundongo transgênico

Aqui apresentamos técnicas para imagens de eventos locais de Ca2+ mediados por IP3 usando microscopia de fluorescência em células intactas de mamíferos carregadas com indicadores de Ca2+, juntamente com um algoritmo que automatiza a identificação e análise desses eventos.

Imagem local Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Sinais em células de mamíferos em cultura

Aqui nós apresentamos um protocolo ao cálcio imagem sinalização em populações de tipos de células individuais na junção neuromuscular murino.

Ex Vivo Imagem de célula específica cálcio sinalização em sinapse tripartida do diafragma de rato

Apresentamos a metodologia para o isolamento dos miócitos de urina e como obter traços de tensão ou cálcio simultaneamente com traços de encurtamento de sarcomeros usando fotometria de fluorescência com medições simultâneas de geometria celular digital.

Imagem óptica de miócitos ventriculares isolados de urina

Apresentamos um protocolo para expor o tronco cerebral do rato adulto do lado ventral. Usando uma lente de índice gradiente-refrativo com um microscópio em miniatura, a imagem de cálcio pode ser usada para examinar a atividade de somata neural inferior de oliva in vivo.

In vivo Imagem de cálcio em rato de azeitona inferior

Dois métodos relacionados são descritos para visualizar eventos subcelulares necessários para transmissão sináptica. Esses protocolos permitem o monitoramento em tempo real da dinâmica do influxo de cálcio pré-sináptico e da fusão da membrana vesícula sináptica usando imagens de células vivas de neurônios in vitro cultivados.

Medição fluorescente em tempo real de funções sinápticas em modelos de esclerose lateral amiotrófica

O protocolo descreve o método de carregar um corante de cálcio fluorescente através do nervo cortado em terminais nervosos motores do rato. Além disso, é apresentado um método único para o registro de transintes rápidos de cálcio nas terminações nervosas periféricas usando microscopia confocal.

Registro de Transintes de Cálcio na Junção Neuromuscular do Rato com Alta Resolução Temporal utilizando Microscopia Confocal

O presente protocolo descreve a confecção de uma grande janela craniana (6 x 3 mm2) usando envoltório de alimentos, silicone transparente e vidro de cobertura. Esta janela craniana permite experiências de imagem de cálcio in vivo de campo largo e de dois fótons no mesmo rato.

In vivo Imagem de cálcio de campo amplo e de dois fótons de um rato usando uma grande janela craniana

Este estudo descreve o método para visualizar e desenvolver modelos tridimensionais (3D) de osteócitos dentro da rede lacunar-canalicular (LCN) para análise de dinâmica de fluidos computacional (CFD). Os modelos gerados usando este método ajudam a entender a mecanosensação dos osteócitos em ossos saudáveis ou doentes.

Análise e imagem de osteócitos

Aprenda a usar microscopia intravital de dois fótons para estudar a sinalização de cálcio em osteócitos de camundongos durante carga mecânica. Este método avança a compreensão da mecanobiologia óssea in vivo.

Uma abordagem de imagem intravital fluorescente para estudar a dinâmica de sinalização de cálcio induzida por carga em osteócitos de camundongos (Vídeo) | JoVE Journal

Uma abordagem de imagem intravital fluorescente para estudar a dinâmica de sinalização de cálcio induzida por carga em osteócitos de camundongos

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