Origem e Rota de Contaminação por Alcaloide Pirrolizidínico em Amostras de Chá

O desenvolvimento de um método de detecção de 15 alcaloides pirrolizidínicos em plantas daninhas, solo, folhas de chá fresco e amostra seca de chá pode fornecer suporte técnico para explorar a fonte de contaminação por alcaloides pirrolizidínicos no chá. Comparado com a extração em fase sólida, o método adsorvente para amostra de solo pode economizar tempo, menor custo e melhores recuperações para análise de alcaloides pirrolizidínicos. Para iniciar a extração nos produtos de chá seco pré-aquecido, folhas de chá fresco ou ervas daninhas, pese um grama de uma amostra em um tubo de centrífuga de 50 mililitros e adicione 10 mililitros de solução de ácido sulfúrico de 0,1 mols por litro no tubo.

Em seguida, vórtice a amostra por dois minutos se for para ser analisada usando extração em fase sólida, enquanto por um minuto se a mesma for analisada usando limpeza adsorvente. Em seguida, submeter a amostra à extração ultra-sônica por 15 minutos, seguida de centrifugação a 9,390 G por 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, usando um conta-gotas com ponta de plástico, transfira a solução sobrenadante para um tubo de centrífuga de 50 mililitros.

Após realizar a extração duas vezes, combine os sobrenadantes no tubo. Para iniciar a extração no solo preparado, pese um grama de uma amostra em um tubo de centrífuga de 50 mililitros. Adicione 0,1 mililitros de solução de citrato trissódico de 0,1 mols por litro para ajustar o pH do solo para 6,0 e deixe a amostra repousar por dois minutos.

Em seguida, adicione 10 mililitros de solução de metanol de ácido sulfúrico 0,1 mols por litro no tubo e agite a amostra por dois minutos, seguido de agitação por 30 minutos. Em seguida, execute a extração ultra-sônica por 30 minutos, como demonstrado antes. Em seguida, centrifugar a amostra a 9, 390 G por 10 minutos.

E usando um conta-gotas com ponta de plástico, transfira o sobrenadante para um tubo centrífugo de 50 mililitros. Após realizar a extração duas vezes, combinar os sobrenadantes. Ativar a extração em fase sólida ou cartucho SPE com cinco mililitros de metanol seguidos de cinco mililitros de água deionizada.

Após a ativação, adicione 10 mililitros do sobrenadante da extração da amostra ao cartucho pré-ativado. Após o nível da solução da amostra atingir a camada superior dos cartuchos, eluir a matriz da amostra com cinco mililitros de solução de ácido fórmico a 1%, seguidos de cinco mililitros de metanol, e descartar os eluentes. Em seguida, eluir os analitos com cinco mililitros de metanol contendo 0,5% de água de amônia.

Filtrar o eluente através de um filtro de membrana de 0,22 mícron para análise por UPLC-MS/MS. Para realizar a limpeza da amostra usando adsorvente, prepare um tubo centrífugo de 10 mililitros com o adsorvente comprometendo GCB, PSA e C18 na proporção de 10 a 20 a 15 miligramas. Em seguida, adicionar dois mililitros do sobrenadante obtido após o tratamento da amostra.

Em seguida, vórtice a amostra e a mistura adsorvente por um minuto e centrifugar a 9,390 G por oito minutos à temperatura ambiente. Filtrar um mililitro do sobrenadante resultante através de um filtro de membrana de 0,22 mícron em um frasco para injetáveis de amostra antes de analisá-lo por UPLC-MS/MS. No estudo, uma maior porcentagem de recuperação de 15 alcaloides pirrolizidínicos de folhas de chá fresco, amostras de chá seco e plantas daninhas foi obtida usando a técnica de purificação do adsorvente em comparação com o método do cartucho SPE.

As recuperações dos alcaloides no solo usando purificação adsorvente foram de 79 a 111% Nas folhas de chá fresco coletadas nos cinco pontos de amostragem, foi detectado maior teor de N-óxido intermediário do que de senecionina. Senecionina não foi detectada em folhas maduras dos pontos de amostragem um e dois. Entre os 11 alcaloides pirrolizidínicos, apenas N-óxido intermediário foi detectado no solo, enquanto senecionina e N-óxido intermediário foram detectados em diferentes partes das plantas de chá.

Adicionalmente, o teor de N-óxido de Intermedine em uma gema com duas folhas foi o mais alto. Ao tentar isso primeiro, o mais importante é adicionar 0,1 mililitros de solução de citrato trissódico de 0,1 mols por litro para ajustar o pH do solo para 6,0. Este método pode ser aplicado à análise de alcaloides em outras plantas comestíveis, e também fornece técnica natural para explorar a fonte de alcaloides nelas.