Avaliação das Toxicidades Associadas às Células T do Receptor de Antígeno Quimérico Usando um Modelo de Xenoenxerto de Camundongo Derivado de Pacientes com Leucemia Linfoblástica Aguda

Este protocolo utiliza CAR-T humano e células tumorais e demonstra com precisão as toxicidades associadas à administração de CART19. Portanto, recapitulando o que foi observado na clínica. A principal vantagem do uso dessa plataforma é que ela fornece um modelo traduzível e clinicamente relevante onde células T humanas e células tumorais são utilizadas.

Este modelo não só permite uma avaliação eficiente das toxicidades associadas à CART19, mas também nos permite entender melhor como podemos superar essas toxicidades por meio de estratégias de tratamento aprimoradas. Para começar, monitore os camundongos administrados pelo CART19 duas vezes ao dia para avaliar quaisquer alterações em seu bem-estar, como fraqueza motora, corpo curvado e perda de peso corporal. Uma vez que os ratos desenvolvem fraqueza motora e redução de peso, colete seu sangue periférico para analisar a carga tumoral.

E realizar isolamento sérico para citocinas, conforme descrito no manuscrito. Após o isolamento, armazenar os tubos de microcentrífuga de soro a 80 graus Celsius e usar a cera para analisar as quimiocinas e citocinas usando o ensaio multiplex. Para imagens de ressonância magnética, misture 120 microlitros de gadolínio com 880 microlitros de solução salina e carregue em uma seringa de insulina de um mililitro.

Injetar 100 microlitros da solução preparada por via intraperitoneal em cada rato. Anestesiar o mouse e colocá-lo na sonda de berço compatível com roedor. Em seguida, prenda os dentes na barra de mordida.

Puxe a cabeça do rato para dentro da bobina de volume de 25 milímetros e ajuste o cone nasal preso ao sistema de anestesia com isoflurano. Aperte o botão da barra de mordida para manter a posição durante a varredura. Para avaliação da respiração, conecte a sonda de um dispositivo de monitoramento respiratório próximo ao diafragma e fixe-a com fita cirúrgica.

Mantenha a taxa de respiração entre 20 a 60 respirações por minuto para que a condição dos ratos permaneça estável. Insira a sonda do animal no pequeno furo dentro do sistema de ressonância magnética de pequenos animais de furo vertical e ajuste a cabeça do animal no centro da bobina. Usando a trava, prenda o aparelho na posição vertical e conecte o instrumento ao computador.

Em seguida, abra o software ParaVision para configurar as posições de varredura e os tipos de varreduras. Determinar as posições sagitais e axiais ideais, mantendo-as consistentes para todos os grupos experimentais. Para a coleta dos dados ponderados em T1 na RM, utilizou-se a sequência multi-slice, multieco ponderada em T1, com tempo de repetição de 300 milissegundos, tempo de eco de 9,5 milissegundos, campo de visão de 4,00 X 2,00 X 2,00 centímetros e matriz de 192 X 96 X 96.

Para imagens de RM ponderadas em T2, use uma sequência multi-slice, multi-eco com parâmetros semelhantes. Quando as varreduras estiverem concluídas, remova a sonda do furo e extraia suavemente o mouse removendo os dentes da barra de mordida. Após a extração dos dados do software, utilizou-se um software de análise para a quantificação e renderização do volume 3D das regiões de hiperintensidade, as populações de células tumorais CD19+ foram comparadas entre camundongos tratados com CART19 e camundongos não tratados por citometria de fluxo.

Redução significativa de peso foi observada em camundongos tratados com células CART19. A perda de peso é considerada como um sintoma do aparecimento da RSC, que está relacionada às toxicidades associadas às células CART. Um ensaio multiplex revelou a expressão de citocinas e quimiocinas no soro de camundongos NSG antes e após a administração de CART19.

Imagens ponderadas em T2 revelaram evidências de edema e possível infiltrado inflamatório durante neuroinflamação em camundongos tratados com CART19. Já a RM ponderada em T1 mostrou realce pelo meio de contraste no parênquima cerebral, indicando aumento da permeabilidade vascular. Reconstruções tridimensionais do cérebro de roedores foram montadas com base em regiões de hiperintensidade T1 correspondentes à permeabilidade vascular, o que torna o volume de extravasamento de gadolínio no cérebro.

É importante lembrar que o monitoramento físico diário dos camundongos após a administração de CART19, juntamente com o sangramento periférico, será o melhor indicador para prosseguir com a ressonância magnética para avaliar completamente quaisquer alterações no cérebro indicativas de SRC ou neurotoxicidade. Esta tecnologia é amplamente aplicável a terapias adicionais de células CAR-T e permitirá que os cientistas testem eficientemente potenciais toxicidades decorrentes de novas células CAR-T. Este modelo proposto é um trampolim na compreensão de como as toxicidades associadas às células CAR-T podem ser monitoradas, tratadas e usadas para validar novos modelos de células CAR-T.