Name: Estabelecimento e Caracterização de Modelos de Xenoenxerto Derivado de Pacientes de Carcinoma Anaplásico de Tireoide e Carcinoma Espinocelular de Cabeça e Pescoço (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-02T14:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 8 s
Description: Aprenda a estabelecer modelos de xenoenxerto derivado de pacientes (PDX) para carcinoma anaplásico de tireoide e carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço. Esta técnica reflete a heterogeneidade tumoral e permite triagem de sensibilidade a fármacos.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabalho foi apoiado pelo Programa de Apoio à Ciência e Tecnologia da Província de Sichuan (Grant Nos. 2019JDRC0019 e 2021ZYD0097), o projeto 1.3.5 para disciplinas de excelência, West China Hospital, Sichuan University (Grant No. ZYJC18026), o projeto 1.3.5 para disciplinas de excelência-Projeto de Incubação de Pesquisa Clínica, West China Hospital, Sichuan University (Grant No. 2020HXFH023), os Fundos de Pesquisa Fundamental para as Universidades Centrais (SCU2022D025), o Projeto de Cooperação Internacional do Escritório de Ciência e Tecnologia de Chengdu (Processo nº 2022-GH02-00023-HZ), o Projeto Centelha de Inovação da Universidade de Sichuan (Bolsa nº 2019SCUH0015) e o Fundo de Treinamento de Talentos para a Integração de Engenharia Médica do Hospital da China Ocidental - Universidade de Ciência e Tecnologia Eletrônica (Bolsa nº. HXDZ22012).

Todos os experimentos com animais foram realizados de acordo com as diretrizes e protocolos da Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do West China Hospital, Sichuan University. Camundongos imunodeficientes NOD-SCID com idade entre 4-6 semanas de idade (de ambos os sexos) e camundongos fêmeas Balb/c nude com idade entre 4-6 semanas foram usados para o presente estudo. Os animais foram obtidos de fonte comercial (ver Tabela de Materiais). O comitê de ética do West China Hospital autorizou o estudo com seres humanos (protocolo número 2020353). Cada paciente assinou o termo de consentimento livre e esclarecido.
1. Preparação experimental
<ol><li>Arrume lâminas descartáveis, tesouras e pinças esterilizadas e outros instrumentos necessários para o transplante de tumor, coloque-os na bancada ultralimpa e irradie-os com luz ultravioleta com antecedência.</li>
	<li>Preparar soro fisiológico estéril e placas de Petri para uso durante o teste.</li>
</ol>2. Aquisição e transporte de tecido tumoral fresco
<ol><li>Obter amostras tumorais frescas (geralmente maiores que 5 mm x 5 mm de tamanho) da sala de cirurgia e colocá-las em um tubo centrífugo de 15 mL ou 50 mL contendo solução HTK estéril (ver Tabela de Materiais) ou soro fisiológico. Rotule os tubos de centrífuga. OBS: Amostras tumorais frescas foram obtidas por remoção cirúrgica ou punção de pacientes com CTA ou CEC de cabeça e pescoço.</li>
	<li>Coloque os tubos da centrífuga em uma caixa de gelo preparada com antecedência. NOTA: Durante este tempo, o operador de transplante deve preparar os itens necessários para o transplante (ver Tabela de Materiais).</li>
	<li>Certifique-se de que o tempo entre a coleta da amostra e o transporte para o laboratório para a construção do PDX não exceda 2 h. Durante o transporte, envolva os tubos que contêm os tecidos com uma mistura de água gelada ou bolsas de gelo para preservar a atividade do tecido.</li>
</ol>3. Transplante de tumor
<ol><li>Assim que os tecidos tumorais chegarem ao laboratório, registre-os e renumere-os. OBS: Para o presente estudo, as informações dos pacientes foram mantidas em absoluto sigilo. As demais etapas do procedimento foram realizadas em laboratório de nível de biossegurança 2 (BSL-2). Ao entrar no laboratório, recomenda-se o uso de um smock sobre a roupa de trabalho ou de proteção, um chapéu e uma máscara. O tratamento do tecido tumoral é realizado em um gabinete de biossegurança.</li>
	<li>Desinfetar os tubos de centrífuga contendo os tecidos tumorais com álcool 75% e colocá-los na mesa de operação. Transfira os tecidos tumorais para placas de Petri de 6 cm preenchidas com soro fisiológico utilizando pinça oftálmica esterilizada. Em seguida, corte-os em pequenos pedaços de cerca de 2 mm x 2 mm e 3 mm x 3 mm usando uma lâmina.</li>
	<li>Transfira os pedaços de tecidos tumorais para uma placa de Petri de 6 cm contendo a quantidade adequada de soro fisiológico, envolva a placa com o filme selante, coloque-a em uma caixa de gelo e leve-a para a sala de animais específica livre de patógenos (FPS) juntamente com os instrumentos necessários (uma tesoura, pinça e agulhas de inoculação).</li>
	<li>Prepare o animal seguindo os passos abaixo.<ol><li>Remova os pelos no tórax lateral direito de camundongos imunodeficientes NOD-SCID fêmeas ou machos de 4-6 semanas de idade e desinfete a pele com álcool a 75%. Anestesiar os ratos através de uma injeção intraperitoneal de 80 mg/kg de quetamina e 10 mg/kg de xilazina (ver Tabela de Materiais) e manchar os olhos com pomada veterinária para evitar o ressecamento. Confirme a profundidade da anestesia através da perda do reflexo pedal.</li>
		<li>Faça uma incisão de 2 mm com tesoura através da pele no meio do tórax lateral direito de camundongos.</li>
	</ol></li>
	<li>Pegue um pedaço de tumor da placa de Petri e coloque-o na agulha do trocarte de 2,4 mm x 2,0 mm (ver Tabela de Materiais) com pinças.</li>
	<li>Segure o rato, aperte a pele no local da punção, use o trocarte contendo as peças do tumor para inserir o tumor através da incisão inicial de 2 mm na pele, mova-se para a parte de trás do ombro e empurre o núcleo do trocarte.</li>
	<li>Certifique-se de que o pedaço do tumor seja empurrado para fora e seja deixado no seio transicional formado pela punção do trocarte e, em seguida, puxe o trocarte.</li>
	<li>Se o tumor se mover com a agulha quando for retirado, use o trocarte para resetá-lo e suturar a incisão. OBS: Neste estudo, cada camundongo foi inoculado nos membros dorsais anteriores e posteriores. Um a três camundongos foram inoculados por amostra tumoral de cada paciente com base no tamanho do tumor.</li>
</ol>4. Preservação, fixação e congelamento de tecidos tumorais
OBS: Os demais tecidos tumorais foram utilizados para preservação, fixação e congelamento de DNA/RNA/proteínas, respectivamente.
<ol><li>Remova o soro fisiológico da superfície do tumor com uma gaze estéril antes de colocá-lo no tubo de criopreservação para garantir que a superfície do tumor não esteja excessivamente úmida.</li>
	<li>Colocar quatro a seis pedaços de tecido tumoral de 2 mm x 2 mm em um tubo de criopreservação de células de 2 mL, adicionar 1 mL de solução de criopreservação composta de soro fetal bovino (FBS) a 90% e dimetilsulfóxido (DMSO) a 10% no tubo, colocar o tubo em uma caixa de resfriamento gradiente, congelá-lo a -80 °C durante a noite e, finalmente, transferi-lo para nitrogênio líquido.</li>
	<li>Colocar os blocos de tecido tumoral de 3 mm x 3 mm em formalina tamponada a 10% para fixação do tecido para exame anatomopatológico.</li>
	<li>Coloque o bloco de tecido de 3 mm x 3 mm em um tubo de criopreservação de células de 2 mL, congele-o rapidamente em nitrogênio líquido e, em seguida, transfira para um refrigerador de -80 °C para extração de DNA/RNA e proteína.</li>
	<li>Coletar as informações clínicas dos pacientes, como história tabágica, tamanho do tumor, diferenciação, subtipo patológico, grau de câncer, estádio do câncer, metástase à distância, origem, história clínica, imunohistoquímica, infecção pelo papilomavírus humano (HPV) em pacientes com CEC de cabeça e pescoço e medicação de tratamento.</li>
</ol>5. Passaging, criopreserva e ressuscitação de tumores modelo PDX
<ol><li>Medir o comprimento e a largura dos tumores subcutâneos em camundongos usando paquímetro vernier uma vez por semana e calcular o volume tumoral de acordo com a fórmula: volume tumoral = 0,5 × comprimento × largura2. Desenhar a curva de crescimento do tumor.</li>
	<li>Quando o tumor PDX atingir 2.000 mm3, passe-o para a próxima geração de camundongos e realize o retransplante do tumor. Realizar a preparação dos instrumentos seguindo o passo 4.</li>
	<li>Eutanásia dos camundongos por deslocamento cervical após anestesia com 80 mg/kg de cetamina.</li>
	<li>Desinfetar a pele com álcool a 75%. Em seguida, corte a pele ao redor do tumor usando uma tesoura, depois remova o tumor com pinça e coloque-o em uma placa de Petri.</li>
	<li>Realizar o procedimento de transplante de tumor seguindo o passo 3.</li>
	<li>Realizar a preservação e criopreservação dos tumores modelo PDX seguindo o passo 4.</li>
	<li>Para a ressuscitação do tecido tumoral, siga o princípio de congelamento lento e dissolução rápida. Depois de retirar os crióvios do azoto líquido, coloque-os rapidamente num banho-maria a 37 °C para uma rápida dissolução.</li>
	<li>Agite suavemente os crióvios em banho-maria para acelerar o processo de descongelamento.</li>
	<li>Descongelar, transferir os pedaços do tumor para o soro fisiológico preparado para lavagem e, em seguida, inocular a próxima geração de camundongos. Para a operação específica, consulte o procedimento de transplante de tecido na etapa 3.</li>
</ol>6. Determinação da eficácia terapêutica do lenvatinibe e da cisplatina no modelo ATC PDX
OBS: O modelo ATC PDX foi utilizado para testar o efeito terapêutico do inibidor de tirosina quinase lenvatinibe e do quimioterápico cisplatina25,26,27.
<ol><li>Selecionar o tecido tumoral da geração P5 de um modelo ATC PDX (THY-017), cortar em pedaços de tecido de 2-4 mm 3 e inocular subcutaneamente (passo3 ) no dorso direito de dez camundongos Balb/c nus fêmeas de 4-6 semanas.</li>
	<li>Selecionar 15 camundongos com volumes tumorais entre 50-150 mm3 e dividi-los em três grupos.</li>
	<li>Administrar lenvatinib (10 mg/kg) por via intragástrica a um grupo uma vez por dia durante 15 dias, administrar cisplatina (3 mg/kg) por via intraperitoneal a um grupo a cada 3 dias, num total de seis doses, e administrar o grupo controlo com o mesmo volume de solução salina normal.</li>
	<li>Medir o peso corporal e o volume tumoral dos ratos duas vezes por semana.</li>
	<li>No final do teste, eutanasiar os camundongos (etapa 5.3) e pesar os tumores.</li>
</ol>

Não são divulgados potenciais conflitos de interesse.

Este estudo estabeleceu com sucesso os modelos PDX subcutâneos de ATC e CEC de cabeça e pescoço. Há muitos aspectos a serem observados durante o processo de construção do modelo PDX. Quando o tecido tumoral é separado do paciente, ele deve ser colocado na caixa de gelo e enviado ao laboratório para inoculação o mais rápido possível. Depois que o tumor chega ao laboratório, o operador deve se atentar para manter um campo estéril e praticar procedimentos assépticos. Para amostras de biópsia por agulha, como o tecido tumora...

O modelo PDX é um modelo animal no qual o tecido tumoral humano é transplantado em camundongos imunodeficientes e cresce no ambiente fornecido pelos camundongos1. Os modelos tradicionais de linhagens celulares tumorais sofrem de várias desvantagens, como a falta de heterogeneidade, a incapacidade de reter o microambiente tumoral, a vulnerabilidade a variações genéticas durante repetidas passagens in vitro e a pobre aplicaçãoclínica2,3. As principais desvantagens dos modelos animais geneticamente modificados são a perda potencial das características genômicas dos tumores humanos, a introdução de novas mutações desconhecidas e a dificuldade em identificar o grau de homologia entre tumores de camundongos e tumoreshumanos4. Além disso, a preparação de modelos animais geneticamente modificados é cara, demorada e relativamente ineficiente4.
O modelo PDX tem muitas vantagens sobre outros modelos tumorais em termos de refletir a heterogeneidade tumoral. Do ponto de vista histopatológico, embora a contraparte do camundongo substitua o estroma humano ao longo do tempo, o modelo PDX preserva bem a estrutura morfológica do tumor primário. Além disso, o modelo PDX conserva a identidade metabolômica do tumor primário por pelo menos quatro gerações e reflete melhor as complexas inter-relações entre as células tumorais e seu microambiente, tornando-o único na simulação do crescimento, metástase, angiogênese e imunossupressão do tecido tumoralhumano5,6,7. Em nível celular e molecular, o modelo PDX reflete com precisão a heterogeneidade inter e intratumoral de tumores humanos, bem como as características fenotípicas e moleculares do câncer original, incluindo padrões de expressão gênica, status de mutação, número de cópias, metilação e proteômica do DNA 8,9. Modelos PDX com passagens diferentes têm a mesma sensibilidade à terapia medicamentosa, indicando que a expressão gênica de modelos PDX é altamente estável10,11. Estudos têm demonstrado excelente correlação entre a resposta do modelo PDX a um fármaco e as respostas clínicas dos pacientes a esse fármaco12,13. Portanto, o modelo PDX emergiu como um poderoso modelo de pesquisa pré-clínica e translacional, particularmente para triagem de drogas e predição de prognóstico clínico.
O câncer de tireoide é um tumor maligno comum do sistema endócrino e é uma neoplasia maligna humana que tem mostrado um rápido aumento na incidência nos últimosanos14. O carcinoma anaplásico de tireoide (ATC) é o câncer mais maligno da tireoide, com sobrevida mediana de apenas 4,8meses15. Embora apenas uma minoria dos pacientes com câncer de tireoide seja diagnosticada com ATC a cada ano na China, a taxa de mortalidade é próxima de 100%16,17,18. A ATC geralmente cresce rapidamente e invade os tecidos adjacentes do pescoço, bem como os linfonodos cervicais, e cerca de metade dos pacientes apresenta metástases àdistância19,20. O carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço (CECP) é o sexto câncer mais comum no mundo e uma das principais causas de morte por câncer, estimando-se que 600.000 pessoas sofram de CEC de cabeça e pescoço a cada ano21,22,23. O CEC de cabeça e pescoço inclui um grande número de tumores, incluindo nariz, seios da face, boca, amígdalas, faringe e laringe24. ATC e CEC de cabeça e pescoço são duas das principais neoplasias malignas de cabeça e pescoço. Para facilitar o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos e tratamentos personalizados, é necessário desenvolver modelos animais pré-clínicos robustos e avançados, como os modelos PDX de ATC e HNSCC.
Este artigo apresenta métodos detalhados para estabelecer o modelo PDX subcutâneo de ATC e CEC de cabeça e pescoço, analisa os principais fatores que afetam a taxa de tomada tumoral na construção do modelo e compara as características histopatológicas entre o modelo PDX e o tumor primário. Enquanto isso, neste trabalho, testes farmacodinâmicos in vivo foram realizados utilizando os modelos PDX construídos com sucesso para validar sua relevância clínica.

<table><tbody><tr><td>2,4 mm x 2,0 mm trocarte</td><td>Shenzhen Huayang Biotechnology Co., Ltd</td><td>18-9065</td><td></td></tr><tr><td>Camundongos nus Balb/c</td><td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.</td>Armário de Biossegurança <td>401</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Suzhou Antai</td><td>BSC-1300IIA2</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina</td><td>Shenzhen Huayang Biotechnology Co., Ltd</td><td>18-0823</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga&nbsp;</td><td>Tubo</td> de criopreservação <td>Corning 430791/430829</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Chengdu Dianrui Experimental Instrument Co., Ltd</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK-Solution</td><td>Custodiol</td><td>2103417</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sulfóxido (DMSO)</td><td>SIGMA-ALORICH</td><td>D5879-500mL</td><td></td></tr><tr><td>Balança eletrônica</td><td>METTLER</td><td>ME104</td><td></td></tr><tr><td>Paquímetro</td> <td>digital eletrônicoChengdu Chengliang Tool Group Co., Ltd</td><td>0-220</td><td></td></tr><tr><td>soro fetal bovino (FBS)</td> <td>VivaCell</td><td>C04001-500</td><td></td></tr><tr><td>IBM SPSS Statistics 26</td><td>IBM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>Jiangsu Zhongmu Beikang Pharmaceutical Co., Ltd&nbsp;</td><td></td><td></td>100761663</tr> Camundongos imunodeficientes <tr><td>Lenvatinib</td><td>ApexBio</td><td>A2174</td><td></td></tr><tr><td>NOD-SCID</td><td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.</td>Solução de Estreptococos <td>406</td><td></td></tr><tr><td>Biological</td><td>Industries</td><td>03-03101BCS</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>WHB</td><td>WHB-60/WHB-100</td><td></td></tr><tr><td>Salina&nbsp;</td><td>Sichuan Kelun</td><td>W220051705</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura</td><td>Shenzhen Huayang Biotechnology Co., Ltd</td><td>18-0110</td><td></td></tr><tr><td>Pinça</td><td>Shenzhen Huayang Biotechnology Co., Ltd</td><td>18-1241</td><td></td></tr><tr><td>Pomada veterinária</td><td>Pfizer Inc.</td><td></td><td></td>P10015353</tr><tr><td>Xylazine</td><td>Dunhua Shengda Animal Medicine Co., Ltd</td><td>070031777</td><td></td></tr></tbody></table>

estabelecimento e caracterização de modelos de xenoenxerto derivado de pacientes de carcinoma anaplásico de tireoide e carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço

Establishment and Characterization of Patient-Derived Xenograft Models of Anaplastic Thyroid Carcinoma and Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

Os modelos de xenoenxerto derivado do paciente (PDX) preservam fielmente as características histológicas e genéticas do tumor primário e mantêm sua heterogeneidade. Os resultados farmacodinâmicos baseados em modelos PDX são altamente correlacionados com a prática clínica. O carcinoma anaplásico de tireoide (ATC) é o subtipo mais maligno de câncer de tireoide, com forte invasividade, prognóstico ruim e tratamento limitado. Embora a taxa de incidência de ATC seja responsável por apenas 2%-5% do câncer de tireoide, sua taxa de mortalidade é tão alta quanto 15%-50%. O carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço (CECP) é uma das neoplasias malignas mais comuns de cabeça e pescoço, com mais de 600.000 novos casos em todo o mundo a cada ano. Neste trabalho, são apresentados protocolos detalhados para estabelecer modelos PDX de ATC e CECP. Neste trabalho, os principais fatores que influenciam a taxa de sucesso de construção do modelo foram analisados, e as características histopatológicas foram comparadas entre o modelo PDX e o tumor primário. Além disso, a relevância clínica do modelo foi validada pela avaliação da eficácia terapêutica in vivo de fármacos representativos de uso clínico nos modelos PDX construídos com sucesso.

Um total de 18 espécimes de câncer de tireoide foram transplantados, e cinco modelos PDX de câncer de tireoide foram construídos com sucesso (taxa de tomada tumoral de 27,8%), incluindo quatro casos de câncer indiferenciado de tireoide e um caso de câncer anaplásico de tireoide. A correlação entre a taxa de sucesso de construção do modelo e a idade, sexo, diâmetro do tumor, grau e diferenciação tumoral foram analisadas. Embora a taxa de sucesso do modelo de amostras tumorais de grau 4 tenha sido maior do que a de amostra...

O presente protocolo estabelece e caracteriza um modelo de xenoenxerto derivado do paciente (PDX) de carcinoma anaplásico de tireoide (ATC) e carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (CECP), uma vez que os modelos PDX estão rapidamente se tornando o padrão no campo da oncologia translacional.

Estabelecimento e Caracterização de Modelos de Xenoenxerto Derivado de Pacientes de Carcinoma Anaplásico de Tireoide e Carcinoma Espinocelular de Cabeça e Pescoço

Patient-derived xenograft (PDX) models faithfully preserve the histological and genetic characteristics of the primary tumor and maintain its ...

Esse protocolo ajuda a estabelecer modelos de ATC e HNSCC PDX que melhor refletem a heterogeneidade tumoral, a diversidade molecular e predizem desfechos clínicos. A técnica é simples de operar, tem uma alta taxa de sucesso e também pode ser adequada para outros modelos PDX. Esta técnica pode ser estendida para o rastreamento de sensibilidade a drogas anti-câncer para orientar o tratamento personalizado de pacientes com câncer.Um indivíduo que nunca realizou esta técnica pode encontrar algumas dificuldades e recomenda-se prestar atenção a cada detalhe do esquema. Após a obtenção de amostras tumorais de ATC e CEC de cabeça e pescoço em tubo centrífugo de 50 milímetros contendo solução estéril de HTK, desinfetá-las com álcool a 75%. Use pinças oftálmicas esterilizadas para transferir o tecido tumoral para uma placa de Petri de seis centímetros cheia de soro fisiológico e corte-os em pequenos pedaços usando uma lâmina.Em seguida, transfira as peças para uma nova placa de Petri de seis centímetros contendo o soro fisiológico e envolva-a com filme selante. Coloque o prato embrulhado em uma caixa de gelo, leve-o para a sala de animais livre de patógenos com tesouras, pinças e agulhas de inoculação. Depois de anestesiar o rato, remova os pelos no tórax lateral direito e desinfete a área com álcool a 75%.Use uma tesoura para fazer uma incisão de dois milímetros no meio do tórax lateral direito. Com a pinça, retire o tecido da placa de Petri e coloque-o na agulha do trocarte. Segure o rato e aperte a pele no local da punção.Insira o trocarte com a peça do tumor na incisão para o espaço subcutâneo, em seguida, mova-se para a parte de trás do ombro e empurre o núcleo do trocarte. Para reservar o tecido restante usando uma gaze estéril, remova o soro fisiológico da superfície do tumor, garantindo que não esteja excessivamente úmido. Coloque de quatro a seis pedaços de tecido em um tubo de criopreservação celular de dois mililitros e adicione um mililitro de solução de criopreservação no tubo.Em seguida, coloque o tubo em uma caixa de resfriamento gradiente e congele-o a menos 80 graus Celsius durante a noite. Por fim, transfira-o para nitrogênio líquido. Para ressuscitar os tumores modelo PDX, utilizar paquímetro de Vernier para medir o comprimento e a largura do tumor subcutâneo uma vez por semana.Calcular o volume do tumor e desenhar a curva de crescimento do tumor. Em seguida, usando tesoura, corte a pele de camundongo eutanasiada ao redor do tumor. Retire o tumor com pinça e coloque-o em uma placa de Petri.Realizar o transplante tumoral até a quinta geração de camundongos, conforme demonstrado anteriormente. Selecionar o tecido tumoral de um camundongo modelo ATC PDX de geração P5. Corte-o em pedaços de dois a quatro milímetros cúbicos.Inocular essas peças por via subcutânea, como demonstrado anteriormente, na parte de trás direita de um camundongo BALB/c fêmea nu, de quatro a seis semanas. Quando o tumor crescer de 50 a 150 milímetros cúbicos, divida os camundongos em três grupos. Depois de administrar lenvatinib, cisplatina e controle duas vezes por semana, meça o peso corporal do camundongo.Além disso, meça o volume do tumor. A análise de correlação mostrou que a taxa de sucesso da construção do modelo ATC PDX não foi dependente da idade, sexo, diâmetro do tumor, grau e diferenciação tumoral. A taxa de tomada tumoral na construção do modelo PDX de CEC de cabeça e pescoço demonstrou que o grau de diferenciação foi associado com a taxa de sucesso do modelo, enquanto os outros parâmetros não afetaram a taxa de tomada do tumor.As curvas de crescimento tumoral para cada modelo de PDX ilustraram que as amostras de ATC foram passadas de forma estável para a geração P3, enquanto dois casos de amostras de CEC de cabeça e pescoço não formaram tumores após passarem para a geração P1. A taxa de crescimento tumoral da geração P0 para a maioria dos modelos PDX foi relativamente mais lenta do que para as passagens posteriores, provavelmente devido à adaptação do microambiente de camundongos. O exame histopatológico demonstrou que os tumores PDX mantêm as características morfológicas dos tumores primários.O tratamento com lenvatinib inibiu significativamente o crescimento tumoral e mostrou menor peso tumoral no modelo ATC PDX em comparação com o grupo controle. Além disso, os camundongos tratados com lenvatinibe não exibiram mudanças perceptíveis em seu peso total. A dosagem excessiva de cisplatina resultou em toxicidade significativa, evidenciada pela perda de peso e até morte.Os tumores frescos devem ser lavados várias vezes com soro fisiológico normal antes de serem cortados em pedaços. A mistura por amostras tumorais biopsiadas com e inoculá-las provavelmente causará a formação de tumores. Este modelo pode ser usado para pesquisa de biologia tumoral, triagem de drogas, terapia personalizada.

establishment-characterization-patient-derived-xenograft-models

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Geração de um modelo de camundongo ortotópico de carcinoma anaplásico de tireóide é descrito aqui. Essa técnica emprega colocação cirúrgica de células de câncer de tireóide anaplásico humanos na tireóide de ratos imunodeficientes, criando assim um ambiente mais clinicamente relevante para estudar a progressão da doença, bem como tela de intervenções terapêuticas inovadoras.

Um modelo de camundongo ortotópico de Carcinoma anaplásico da tiróide

Utilizando tumores derivados do paciente em um modelo pré-clínico subcutânea é uma excelente maneira de estudar a eficácia de novas terapias, a descoberta de biomarcadores preditivos, e vias resistentes aos medicamentos. Este modelo, no processo de desenvolvimento de medicamentos, é essencial para determinar o destino de muitas terapias anti-cancro novos antes da investigação clínica.

Desenvolvimento e manutenção de um tumor do paciente pré-clínica Derivado Xenoenxerto Modelo de Investigação de Novel Anti-Cancer Therapies

Aqui, apresentamos um protocolo utilizar injeção guiada por ultra-som de neuroblastoma (NB) e células (ES) de sarcoma de Ewing (estabeleceu linhas celulares e células tumorais do paciente-derivado) biologicamente relevantes locais para criar modelos pré-clínicos confiáveis para câncer pesquisa.

Utilização do ultra-som guiado implantação celular tecido-dirigido para o estabelecimento de Xenografts biologicamente relevantes Tumor metastático

O protocolo atual descreve métodos para estabelecer modelos paciente-derivados do xenograft (PDX) e linhas de célula cancerosas preliminares das amostras cirúrgicas do cancro gastric. Os métodos fornecem uma ferramenta útil para o desenvolvimento de drogas e pesquisa de biologia do câncer.

Estabelecimento de modelos de xenoenxertos derivados de câncer gástrico e linhas celulares primárias

Os modelos PDX de metástases do sistema nervoso central representam as características fenotípicas e moleculares das metástases humanas, tornando-os excelentes modelos para estudos pré-clínicos. Descrevemos aqui como estabelecer modelos de PDX e as rotas de inoculação que são mais bem utilizadas para estudos pré-clínicos.

Estabelecimento e Utilização de Modelos de Xenoenxerto de Metástases do Sistema Nervoso Central Derivados de Pacientes

Aqui, apresentamos um pipeline padrão para a obtenção de tumores ATC murinos por modelos espontâneos de camundongos geneticamente modificados. Além disso, apresentamos a dinâmica tumoral e informações patológicas sobre as lesões primárias e metastizadas. Esse modelo ajudará os pesquisadores a entender a tumorigênese e facilitará a descoberta de drogas.

Modelo Murino Espontâneo de Câncer Anaplásico de Tireoide

O presente protocolo descreve o método para estabelecer um modelo de camundongo xenoenxerto derivado do paciente (PDX) usando tecido de osteossarcoma humano.

Estabelecimento de modelo de camundongo xenoenxerto derivado de pacientes com tecidos de osteossarcoma humano

Este estudo apresenta um modelo ortotópico de câncer de pulmão de células não pequenas (CPCNP) baseado na inoculação intrapulmonar de esferoides multicelulares de células fluorescentes A549-iRFP. O modelo recapitula os estágios clínicos do NSCLC e responde à cisplatina, de acordo com o monitoramento dinâmico in vivo da fluorescência de comprimento de onda longo.

Construção de um modelo ortotópico de xenoenxerto de câncer de pulmão de células não pequenas imitando a progressão da doença e prevendo atividades medicamentosas

O desenvolvimento de modelos ortotópicos de tumores cerebrais pediátricos requer precisão meticulosa, usando um dispositivo estereotáxico para implantar células cancerígenas com precisão. A metodologia apresentada aqui descreve as etapas envolvidas na preparação de células tumorais cerebrais, na realização de injeções intracranianas e na implementação de um sistema de monitoramento pós-operatório para avaliar o enxerto de tumor cerebral.

Estabelecimento de modelos ortotópicos de xenoenxerto derivados de pacientes para tumores cerebrais usando um dispositivo estereotáxico

Este protocolo descreve um método eficiente e não cirúrgico para a implantação ortotópica de xenoenxertos derivados de pacientes com câncer de mama em camundongos. A técnica envolve a dissociação enzimática do tumor seguida de injeção direta nas bolsas de gordura mamária, permitindo a implantação de alto rendimento. A validação abrangente garante a fidelidade do modelo, facilitando estudos rigorosos em vários subtipos de câncer de mama.

Dissociação de alto rendimento e implantação ortotópica de xenoenxertos derivados de pacientes com câncer de mama

Aprenda a estabelecer modelos de xenoenxerto derivado de pacientes (PDX) para carcinoma anaplásico de tireoide e carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço. Esta técnica reflete a heterogeneidade tumoral e permite triagem de sensibilidade a fármacos.

Estabelecimento e Caracterização de Modelos de Xenoenxerto Derivado de Pacientes de Carcinoma Anaplásico de Tireoide e Carcinoma Espinocelular de Cabeça e Pescoço (Vídeo) | JoVE Journal

Estabelecimento e Caracterização de Modelos de Xenoenxerto Derivado de Pacientes de Carcinoma Anaplásico de Tireoide e Carcinoma Espinocelular de Cabeça e Pescoço

Explorar mais vídeos