Name: In vivo Entrega de Genes em Células Epiteliais Mamárias de Camundongos Através de Injeção Intraductal Mamária (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 36 s
Description: Aprenda a entrega intraductal de vetores virais em células epiteliais mamárias de camundongos. Este método permite controle quantitativo da transferência gênica, melhorando a modelagem de tumores mamários in vivo.

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Agradecemos ao Dr. Gary Chamness por seus comentários úteis sobre este manuscrito. Este trabalho foi apoiado pelo Departamento de Defesa (DOD) CDMRP BC191649 (YL) e BC191646 (YL), bem como pelo National Institutes of Health (NIH) CA271498 (YL). Os autores gostariam de agradecer ao Breast Center Pathology Core Facility apoiado pelo SPORE P50CA186784, e ao Cytometry and Cell Sorting Core apoiado pelo CPRIT-RP180672, NIH CA125123 e RR024574 com a assistência de Joel M. Sederstrom.

Todos os procedimentos com camundongos foram realizados de acordo com o protocolo de animais aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais. Para o presente estudo, camundongos fêmeas com 9-12 semanas de idade FVB/N ou MMTV-tva foram usados. Os camundongos foram obtidos comercialmente ou de fabricação própria (ver Tabela de Materiais). Foram utilizados os vírus Lenti-EGFP (FUCGW) e RCAS-Erbb2 (Neu). A preparação e a determinação dos títulos virais foram realizadas seguindo os relatos previamente publicados10,12.
1. Preparação da seringa
<ol><li>Corte as agulhas do cubo de metal de 33 G (ver Tabela de Materiais) com aproximadamente 1 cm de comprimento. Armazenar as agulhas e a seringa de 50 μL em álcool a 70% após a autoclavagem.</li>
	<li>Retire seringas e agulhas do álcool. Empurre o álcool restante para fora da seringa e da agulha. Desmonte a seringa para secagem ao ar em uma bancada absorvente autoclavada.</li>
	<li>Monte a seringa após a secagem.</li>
</ol>2. Preparação do vírus
<ol><li>Retire um ou vários tubos de estoque viral, conforme necessário, do freezer de -80 °C e descongele o vírus no gelo. NOTA: Dependendo do número de células a serem infectadas, o vírus pode precisar ser diluído em títulos pretendidos usando 1x PBS neste momento.</li>
	<li>Adicione azul de bromofenol mergulhando a ponta da pipeta a uma profundidade de 1 cm no pó azul de bromofenol (ver Tabela de Materiais). Em seguida, traga a quantidade de vestígio anexado de azul de bromofenol para a suspensão do vírus. NOTA: Para o presente estudo, o estoque viral é geralmente de 200 μL por tubo, de modo que a concentração final do corante é de aproximadamente 0,2% (0,2 μg/100 μL). O azul de bromofenol deve ser esterilizado com radiação de micro-ondas por 45 segundos a uma potência de 1250 W (ver Tabela de Materiais). Certifique-se de realizar todo o procedimento em um ambiente estéril.</li>
	<li>Misture o azul de bromofenol com a solução de vírus pipetando para cima e para baixo 10 vezes.</li>
	<li>Coloque o vírus no gelo e leve o balde de gelo para o biotério.</li>
</ol>3. Preparo dos animais
<ol><li>Anestesiar uma fêmea de camundongo por injeção intraperitoneal de 2 μL/g de anestésico (37,6 mg/mL de cetamina, 1,92 mg/mL de xilazina e 0,38 mg/mL de acepromazina, ver Tabela de Materiais). Verifique a profundidade da anestesia com uma pinça no dedo do pé. Aplique pomada nos olhos para evitar o ressecamento durante a anestesia. NOTA: O rato não deve responder à pinça dos dedos dos pés sob boa anestesia. O isoflurano também pode ser usado para anestesiar os camundongos.</li>
	<li>Coloque o mouse em decúbito dorsal em uma almofada quente e prenda os quatro membros ao banco usando fita adesiva.</li>
	<li>Identificar um mamilo (ou mais) a ser injetado (o número 4 é preferido para o presente estudo). Exponha aparando o cabelo ao redor usando uma tesoura.</li>
	<li>Aplique álcool 70% e cotonetes iodóforos na área do mamilo em três rodadas para limpar e expor o mamilo.</li>
</ol>4. Injeção intraductal de vírus
NOTA: Uma lâmpada de aumento pode ser usada para ajudar a visualizar a abertura do mamilo.
<ol><li>Transeccionar a ponta distal de um mamilo usando um par de tesouras estéreis de mola de microdissecação, até que uma pequena abertura ductal central possa ser vista sob uma lâmpada de aumento (ver Tabela de Materiais).</li>
	<li>Coloque 10 μL da mistura vírus/azul de bromofenol na seringa. NOTA: Lenti-EGFP (FUCGW) e RCAS-Erbb2 (Neu) são usados nesta demonstração.</li>
	<li>Introduza cuidadosamente a agulha na abertura do mamilo com a ajuda da lâmpada de lupa. A orientação da agulha é ligeiramente ajustada de medial para lateral para alinhar com o ducto principal.</li>
	<li>Injete todos os 10 μL do vírus na árvore do duto. NOTA: Os ductos sob a pele devem ficar azuis, se a injeção for bem-sucedida. Qualquer resistência ou o aparecimento de uma mudança de cor localizada indica a falha da injeção.</li>
	<li>Coloque o mouse em um aquecedor de slides definido a 45 °C até que o mouse acorde completamente (~30-60 min).</li>
</ol>5. Detecção de células infectadas por estereomicroscópio fluorescente
<ol><li>Três a cinco dias após a injeção do vírus portador de GFP ou outros genes fluorescentes, eutanasiar o camundongo com sobredosagem com 4 uL/g de anestésico (37,6 mg/mL de cetamina, 1,92 mg/mL de xilazina e 0,38 mg/mL de acepromazina).</li>
	<li>Abra a cavidade torácica. Cortar a pele ao longo da linha média ventral e ao longo dos membros superiores e inferiores usando uma tesoura. Levante a pele e exponha as glândulas mamárias.</li>
	<li>Remova a glândula mamária injetada da pele usando um par de pinças e tesouras. Além disso, remova uma glândula não injetada como controle.</li>
	<li>Coloque as glândulas mamárias em lâminas de vidro e espalhe as glândulas para sua forma original.</li>
	<li>Observe e visualize as glândulas sob um estereomicroscópio fluorescente.</li>
</ol>

<ol><li>Nguyen, D. -A., Beeman, N., Lewis, M., Schaack, J., Neville, M. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNguyen%2C+D-A+%22Methods+in+Mammary+Gland+Biology+and+Breast+Cancer+Research.+Eds+Margot%22">Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer Research. Eds Margot</a>. Ip, M. M., Asch, B. B. , Springer US. 259-270 (2000).</li>
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<li>Du, Z., Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RCAS-TVA+in+the+mammary+gland%3A+an+in+vivo+oncogene+screen+and+a+high+fidelity+model+for+breast+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">RCAS-TVA in the mammary gland: an in vivo oncogene screen and a high fidelity model for breast transformation.</a> Cell Cycle. 6 (7), 823-826 (2007).</li>
<li>Bu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammary+precancerous+stem+and+non-stem+cells+evolve+into+cancers+of+distinct+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Mammary precancerous stem and non-stem cells evolve into cancers of distinct subtypes.</a> Cancer Research. 79 (1), 61-71 (2019).</li>
<li>Bu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Keratin+6a+marks+mammary+bipotential+progenitor+cells+that+can+give+rise+to+a+unique+tumor+model+resembling+human+normal-like+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Keratin 6a marks mammary bipotential progenitor cells that can give rise to a unique tumor model resembling human normal-like breast cancer.</a> Oncogene. 30 (43), 4399-4409 (2011).</li>
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<li>Bu, W., Zhang, X., Dai, H., Huang, S., Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammary+cells+with+active+Wnt+signaling+resist+ErbB2-induced+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mammary cells with active Wnt signaling resist ErbB2-induced tumorigenesis.</a> PLoS One. 8 (11), 78720(2013).</li>
<li>Du, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+oncogenes+into+mammary+glands+in+vivo+with+an+avian+retroviral+vector+initiates+and+promotes+carcinogenesis+in+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Introduction of oncogenes into mammary glands in vivo with an avian retroviral vector initiates and promotes carcinogenesis in mouse models.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (46), 17396-17401 (2006).</li>
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<li>Dong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PR+status+of+the+originating+cell+of+ER%2FPR-negative+mouse+mammary+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">The PR status of the originating cell of ER/PR-negative mouse mammary tumors.</a> Oncogene. 35 (31), 4149-4154 (2016).</li>
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<li>Holloway, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+oncogenes+into+a+defined+subset+of+mammary+cells+demonstrates+that+the+initiating+oncogenic+mutation+defines+the+resulting+tumor+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Targeting oncogenes into a defined subset of mammary cells demonstrates that the initiating oncogenic mutation defines the resulting tumor phenotype.</a> International Journal of Biological Sciences. 12 (4), 381-388 (2016).</li>
<li>Hein, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luminal+epithelial+cells+within+the+mammary+gland+can+produce+basal+cells+upon+oncogenic+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Luminal epithelial cells within the mammary gland can produce basal cells upon oncogenic stress.</a> Oncogene. 35 (11), 1461-1467 (2015).</li>
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<li>Annunziato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+invasive+lobular+breast+carcinoma+by+CRISPR%2FCas9-mediated+somatic+genome+editing+of+the+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Modeling invasive lobular breast carcinoma by CRISPR/Cas9-mediated somatic genome editing of the mammary gland.</a> Genes & Development. 30 (12), 1470-1480 (2016).</li>
</ol>

Ambos os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Este artigo demonstra a técnica de injeção intraductal viral para introdução de genes em células epiteliais mamárias de camundongos para modelagem de câncer de mama esporádico. Normalmente, camundongos de pelo menos 5 semanas ou mais são injetados para que o processo oncogênico comece depois que a glândula mamária é desenvolvida. Além disso, a abertura do mamilo de camundongos com menos de 5 semanas de idade é muitas vezes muito pequena para injeção. Por outro lado, os mamilos de camundongos muito velhos às vezes são deg...

As células epiteliais das glândulas mamárias desempenham um papel importante na função dessas glândulas e são a principal célula de origem do câncer de mama. Estudos da biologia da glândula mamária e tumorigênese frequentemente necessitam da entrega de gene(s) de interesse nessas células. Cada glândula mamária de camundongo compreende uma árvore ductal revestida por células epiteliais com uma única abertura na ponta do mamilo. Essa estrutura torna as células epiteliais mamárias facilmente acessíveis aos vetores virais, que podem ser liberados para a luz de uma árvore ductal por injeção intraductal1.
A técnica de injeção intraductal mamária foi originalmente utilizada para animais muito maiores, como cabras, coelhos e ratos1. Para um animal muito menor, como camundongos, a injeção intraductal precisa de muitas ferramentas delicadas e mais práticas dos operadores. Existem duas abordagens para injeção intraductal em camundongos. Uma delas é a injeção de teto1. Outra é a injeção direta do ducto primário da glândula mamária #3 ou #4 após exposição cirúrgica1. Como a primeira é não invasiva e mais rápida uma vez que o operador tenha sido bem treinado, essa técnica é mais comumente usada e será descrita em detalhes neste artigo.
Em comparação com os modelos tradicionais de camundongos transgênicos amplamente utilizados, nos quais o gene de interesse é introduzido na fase de ovos fertilizados por microinjeção 2,3,4, a liberação gênica pelo método de injeção intraductal de vírus apresenta muitas vantagens, incluindo: (1) evita o demorado processo de confecção de uma linhagem de camundongo transgênico para cada gene de interesse; (2) evita possíveis prejuízos no desenvolvimento normal das glândulas mamárias impostos pelo gene de interesse; (3) introduz o gene de interesse em qualquer momento desejado após o nascimento; (4) pode facilmente co-introduzir mais de um gene de interesse; (5) mimetiza melhor o processo tumorigênico natural, pois as células infectadas e, portanto, portadoras de oncogenes são circundadas por células normais; e (6) em combinação com a tecnologia TVA (tumor virus A, uma proteína de superfície celular aviária e receptor para vetor RCAS de retrovírus)5, o gene de interesse pode ser introduzido em uma população celular específica para estudar a origem celular da tumorigênese e conduzir ensaios de rastreamento de linhagem celular nas glândulas mamárias 6,7,8, 9º.
Quaisquer vetores derivados de retrovírus10, lentivírus 11,12, adenovírus13 e vírus associado a adenovírus (AAV)14 podem ser usados para liberação intraductal de materiais genéticos. Vetores de retrovírus e lentivírus integram-se ao genoma do hospedeiro permanentemente; assim, introduzem genes de interesse de forma estável nas células epiteliais mamárias. Enquanto o lentivírus pode se integrar ao genoma de qualquer célula que encontre15, a integração genômica eficiente do retrovírus necessita da proliferação das células-alvo16. Os vetores adenoviral e AAV não se integram ao genoma das células infectadas e, portanto, expressam apenas transitoriamente o gene de interesse17,18. Essa característica pode ser uma vantagem quando o gene de interesse precisa ser expresso por apenas um curto período de tempo, como Cre, para excluir um gene supressor de tumor floxed.
Lentivírus, adenovírus e AAV infectam quaisquer células de camundongo que encontrarem. Mas como o epitélio luminal é amplamente isolado da camada basal subjacente, que é separada do estroma pela membrana basal, a injeção intraductal limita a infecção em grande parte às células epiteliais luminais, a célula primária de origem do câncer de mama. Dentro dessa camada epitelial luminal, existem também subtipos celulares distintos, incluindo células-tronco, células progenitoras e vários grupos de células diferenciadas. Para infectar subgrupos celulares específicos dentro da população de células luminais, pode ser usada a tecnologia TVA, com a qual vetores RCAS derivados do vírus da leucose aviária5,10 ou vetores lentivirais pseudotipados11 infectam seletivamente as células que expressam TVA em camundongos portadores de um transgene tva sob o controle de um promotor específico do tipo celular, como um promotor ativo apenas em células-tronco 6 ou certos progenitores 6, 7 ou células alveolares8 ou células ativas da via Wnt9.
Este protocolo apresenta a técnica de introdução de genes de interesse em células epiteliais mamárias através da injeção intraductal de um vetor viral. A detecção da expressão dos genes introduzidos e as lesões e tumores hiperplásicos resultantes são então demonstrados.

<table><tbody><tr><td>Anticorpo anti-HA</td><td>Covance</td><td>MMS-101P</td><td>Diluição: 1 : 1000</td></tr><tr><td>Lágrimas Artificiais</td><td>Covetrus</td><td>NDC 11695-0832-1</td><td></td></tr><tr>Radiação de microondas <td>Sigma</td><td>B5525</td><td>azul de bromofenol</td><td>por 45 segundos na potência alta do forno de microondas de 1250W</td></tr><tr><td>FACSCantoII</td><td>BD Biosciences</td><td>V96100899</td><td></td></tr><tr><td>Estereomicroscópio fluorescente</td><td>Leica</td><td>MZ16 FA</td><td></td></tr><tr><td>FUCGW lenti-virus</td><td>Self-made</td><td>N/A</td><td>Ver referência # 12</td></tr><tr><td>FVB/N</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>JAX:001800</td><td></td></tr><tr><td>Agulha Hamilton</td><td>Seringa</td><td>autoclavada</td>Hamilton <td>91033</td></tr><tr><td></td><td>Hamilton</td><td>201000</td> lâmpada de aumento LED <td>autoclavada</td></tr><tr><td></td><td>Intertek</td><td>3165273</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de mola de micro dissecação</td><td>Roboz</td><td>RS-5621</td><td>autoclavada</td></tr><tr><td>MMTV-tva</td><td>de fabricação</td><td></td> própria <td>Veja a referência # 10</td></tr><tr><td>RCAS-Neu (HA)</td><td>De fabricação própria</td><td>N/A</td><td>Veja a referência # 10</td></tr><tr><td>Comboanestésico de roedores III</td><td>Farmácia Veterinária</td><td>Prescrição veterinária</td><td>37,6 mg/mL de cetamina, 1,92 mg/mL de xilazina e 0,38 mg/mL de acepromazina</td></tr></tbody></table>

in vivo entrega de genes em células epiteliais mamárias de camundongos através de injeção intraductal mamária

In Vivo Gene Delivery into Mouse Mammary Epithelial Cells Through Mammary Intraductal Injection

As glândulas mamárias de camundongos compreendem árvores ductais, que são revestidas por células epiteliais e têm uma abertura na ponta de cada mamilo. As células epiteliais desempenham um papel importante na função da glândula mamária e são a origem da maioria dos tumores mamários. A introdução de genes de interesse em células epiteliais mamárias de camundongos é um passo crítico na avaliação da função gênica em células epiteliais e na geração de modelos de tumores mamários de camundongos. Este objetivo pode ser alcançado através da injeção intraductal de um vetor viral carreando os genes de interesse na árvore ductal mamária de camundongos. Posteriormente, o vírus injetado infecta células epiteliais mamárias, trazendo os genes de interesse. O vetor viral pode ser lentiviral, retroviral, adenoviral ou viral associado a adenovírus (AAV). Este estudo demonstra como um gene de interesse é entregue em células epiteliais mamárias através da injeção intraductal mamária de um vetor viral em camundongos. Um lentivírus carreando GFP é usado para mostrar a expressão estável de um gene liberado, e um retrovírus carreando Erbb2 (HER2/Neu) é usado para demonstrar lesões hiperplásicas atípicas induzidas por oncogenes e tumores mamários.

Dados representativos são apresentados aqui para demonstrar o sucesso da injeção intraductal, a infecção viral bem-sucedida e o impacto dos genes liberados na tumorigênese mamária. A quantidade de vírus injetada deve ser adaptada ao objetivo de cada experimento. Para ilustrar o quão extensivamente a árvore do ducto mamário pode ser infectada, uma grande quantidade de genes portadores de vírus que podem ser imageados, como GFP, precisa ser usada. Por outro lado, para mimetizar a tumorigênese espontânea natural, uma pequen...

O presente protocolo descreve a injeção intraductal de vetores virais via teto para entregar genes de interesse nas células epiteliais mamárias.

In vivo Entrega de Genes em Células Epiteliais Mamárias de Camundongos Através de Injeção Intraductal Mamária

Mouse mammary glands comprise ductal trees, which are lined by epithelial cells and have one opening at the tip of each nipple. The epithelial cells play ...

Este método entrega o material genético nas células epiteliais da glândula mamária de forma especial, temporária e quantitativamente controlável. Como a entrega de material genético nas células epiteliais mamárias é especial, temporária e quantitativamente controlada, os modelos mamários gerados por este método mimetizam melhor a gênese natural do tumor. Comece a preparação da seringa cortando as agulhas de cubo de metal de calibre 33 até aproximadamente um centímetro de comprimento e armazenando-as em álcool.Retire seringas e agulhas do álcool e empurre o álcool restante para fora da seringa e agulhas. Em seguida, desmonte a seringa para secar ao ar. Após a secagem, monte a seringa.Retire os tubos de estoque viral do freezer de 80 graus Celsius negativos e descongele-os no gelo. Para adicionar azul de bromofenol, mergulhe a ponta da pipeta a uma profundidade de um centímetro no pó de azul de bromofenol. Em seguida, traga a quantidade de vestígios anexados de azul de bromofenol para a suspensão do vírus.Misture o azul de bromofenol com a solução do vírus pipetando para cima e para baixo 10 vezes, antes de colocar o vírus no gelo. Verifique a profundidade da anestesia apertando o de

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Este vídeo descreve uma técnica de injeção intraductal em que administramos uma mistura de injeção nos dutos das glândulas mamárias de camundongos.

Injeção intraductal: Aplicação da mistura de injeção nos ductos da glândula mamária do camundongo

Um protocolo para a entrega intraductal não-invasivo de reagentes aquosas para a glândula mamaria do rato está descrito. O método aproveita injecção localizada nos mamilos das glândulas mamárias destinadas especificamente ductos mamários. Esta técnica é adaptável para uma variedade de compostos, incluindo o siRNA, agentes quimioterapêuticos e moléculas pequenas.

Injeção Intraductal para localizada Drug Delivery ao Rato glândula mamária

Ativação de mutações latentes com adenovírus-Cre no sistema ductal resultados mamárias em um câncer de mama metastático clinicamente relevante. Incorporação de um promotor YFP permite o rastreamento de células tumorais metastáticas distais. Este modelo é útil para estudar metástase latente, a imunidade anti-tumor, e para a concepção de novas imunoterapias para tratar o câncer de mama.

Início do Carcinoma de mama metastático por Segmentação do ductal Epithelium com Adenovírus-Cre: Um Modelo Novel de camundongo transgênico do Câncer de Mama

O cancro é uma doença complexa que é influenciada pelo tecido circundante do tumor, bem como pro- local e anti-inflamatórias mediadores. Portanto, os modelos de injeção ortotrópicas, ao invés de modelos subcutâneos pode ser útil para estudar a progressão do câncer de uma forma que melhor mimetiza patologia humana.

Injeção Orthotopic de células cancerosas da mama na mamária Fat Pad de Ratos para o Estudo de crescimento tumoral.

Aqui, descrevemos uma técnica para a entrega localizada de reagentes na glândula mamária de coelho por meio de uma injeção intraductal. Além disso, descrevemos um protocolo para visualização e confirmação da entrega por ultrassonografia de alta resolução de agentes de contraste.

Entrega Intraductal ao Coelho glândula mamária

Aqui, apresentamos um protocolo para implante de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de forma simples, menos invasiva e fácil de manusear de maneira, e este modelo de câncer de mama ortotópico rato com um ambiente adequado do tecido mamário pode ser usado para investigar vários aspectos da câncer.

Ortotópico injeção de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de ratos

O objetivo deste protocolo é descrever uma nova abordagem de modelagem de câncer de mama baseada na injeção intraductal de adenovírus expressando CRE em glândulas mamárias de camundongo. Esta aproximação permite a manipulação Cell-Type-e órgão-específica de eventos oncogênico em uma maneira temporally controlada.

Modelagem de câncer de mama através de uma injeção intraductal de CRE-expressando Adenovirus na glândula mamária do mouse

Um método de injeção intradutal de reagentes para uma solução ablativa à base de etanol para a árvore ductal mamária do camundongo para a imagem in vivo e prevenção do câncer de mama é descrito. A injeção diretamente na abertura do mamilo permite atingir células epiteliais mamárias com danos colaterais mínimos.

Entrega intraduto e visualização de raios-X da solução ablativa baseada em etanol para prevenção e tratamento local do câncer de mama em modelos de camundongos

O presente protocolo descreve uma técnica fácil para a imagem intravital da glândula mamária de camundongos lactantes por microscopia confocal e multifotônica de varredura a laser.

Microscopia Subcelular Intravital da Glândula Mamária

O manuscrito descreve uma metodologia para o estabelecimento, bem como o monitoramento longitudinal do crescimento de metástases pulmonares espontâneas de tumores de mama injetados ortotopicamente, passíveis de intervenção em todos os estágios da cascata metastática.

In vivo Imagem para medir metástase pulmonar espontânea de células tumorais de mama injetadas ortotopicamente

Este protocolo descreve uma abordagem escalável de triagem intraductal CRISPR, permitindo estudos paralelos in vivo de eliminação e ativação genética na glândula mamária do camundongo.

Triagem In Vivo Paralela da Eliminação e Ativação Gênica na Glândula Mamária do Camundongo

Aprenda a entrega intraductal de vetores virais em células epiteliais mamárias de camundongos. Este método permite controle quantitativo da transferência gênica, melhorando a modelagem de tumores mamários in vivo.

In vivo Entrega de Genes em Células Epiteliais Mamárias de Camundongos Através de Injeção Intraductal Mamária

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