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Um Protocolo Eficiente para Análise CUT&RUN de Células Satélites de Camundongos Isoladas por ...
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Developmental Biology
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JoVE Journal Developmental Biology
An Efficient Protocol for CUT&RUN Analysis of FACS-Isolated Mouse Satellite Cells

Um Protocolo Eficiente para Análise CUT&RUN de Células Satélites de Camundongos Isoladas por FACS

Full Text
3,282 Views
10:10 min
July 7, 2023

DOI: 10.3791/65215-v

Kamar Ghaibour*1, Joe Rizk*1, Claudine Ebel1, Tao Ye1, Muriel Philipps1, Valérie Schreiber1, Daniel Metzger1, Delphine Duteil1

1CNRS, Inserm, IGBMC UMR 7104- UMR-S 1258,Université de Strasbourg

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a protocol for the fluorescence-activated cell sorting (FACS) isolation of mouse limb muscle satellite cells. This method is adapted for studying transcription regulation in muscle fibers using the CUT&RUN technique.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Molecular Biology

Background

  • The lab has focused on the role of nuclear receptors for over 20 years.
  • Mouse models have been engineered for spatial and temporal control of receptor expression.
  • Techniques have been developed to investigate molecular functions in mouse tissues.
  • Recent studies have explored steroid receptor signaling in skeletal muscle.

Purpose of Study

  • To understand the role of the androgen receptor in skeletal muscle.
  • To investigate the contractile and metabolic functions of myofibers.
  • To develop effective treatments for muscle-associated disorders.

Methods Used

  • Fluorescence-activated cell sorting (FACS)
  • Cleavage under targets and release using nuclease (CUT&RUN)
  • Mouse model engineering
  • Analysis of receptor signaling pathways

Main Results

  • The androgen receptor is crucial for myofiber function.
  • Findings enhance understanding of skeletal muscle dynamics.
  • Research contributes to potential treatments for muscle disorders.

Conclusions

  • The study provides insights into transcription regulation in muscle cells.
  • It highlights the importance of nuclear receptors in muscle physiology.
  • Future research may lead to novel therapeutic strategies.

Frequently Asked Questions

What is FACS?
FACS stands for fluorescence-activated cell sorting, a technique used to isolate specific cell types based on their fluorescence characteristics.
What is CUT&RUN?
CUT&RUN is a method used to study protein-DNA interactions in cells, allowing for precise mapping of transcription factor binding sites.
Why are nuclear receptors important?
Nuclear receptors play critical roles in regulating gene expression and are involved in various physiological processes, including metabolism and development.
How does the androgen receptor affect muscle function?
The androgen receptor is essential for the differentiation and function of myofibers, influencing their contractile and metabolic properties.
What are the implications of this research?
The findings could lead to improved treatments for muscle-related disorders by enhancing our understanding of muscle biology.

Apresenta-se aqui um eficiente protocolo para o isolamento de células satélites de músculo de membros de camundongos (FACS) adaptado ao estudo da regulação da transcrição em fibras musculares por clivagem sob alvos e liberação utilizando nuclease (CUT&RUN).

Há mais de 20 anos, nosso laboratório está interessado no papel fisiopatológico dos receptores nucleares. Para decifrar sua função in vivo, projetamos modelos de camundongos que permitem o controle espacial e temporal de sua expressão. Paralelamente, desenvolvemos técnicas de ponta para investigar sua função molecular nos tecidos de camundongos.

Nosso interesse científico recentemente nos levou a determinar a sinalização de receptores de secosteroides e esteroides em vários tecidos, incluindo o músculo esquelético. Recentemente, demonstramos que o receptor de andrógeno nas miofibras que diferenciam as células do músculo esquelético é fundamental em suas funções contráteis e metabólicas. Nossos resultados recentes fornecem uma compreensão mais profunda da dinâmica fisiopatológica do músculo esquelético que é crucial para desenvolver tratamentos eficazes para distúrbios associados ao músculo.

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