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DOI: 10.3791/65530-v
Ines Cherkaoui1, Qian Du2, Dieter Egli2, Shivani Misra1,3, Guy A. Rutter1,4,5
1Department of Metabolism, Digestion and Reproduction, Faculty of Medicine,Cell Biology and Functional Genomics, 2Departments of Pediatrics, Naomi Berrie Diabetes Center, Obstetrics and Gynecology, Columbia Stem Cell Initiative, Columbia University Irving Medical Center,Columbia University, 3Department of Diabetes,Imperial College Healthcare NHS Trust, 4Faculté de Médicine,Université de Montréal, 5Lee Kong Chian Imperial Medical School,Nanyang Technological University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Este artigo apresenta um protocolo para diferenciação dirigida e análise funcional de células semelhantes a células β. Descrevemos as condições e passagens ideais de cultura para células-tronco pluripotentes humanas antes de gerar células pancreáticas produtoras de insulina. A diferenciação em seis estágios progride desde a formação definitiva da endoderme até células funcionais semelhantes às células β que secretam insulina em resposta à glicose.
Alcançar uma eficiência alta e consistente no processo de diferenciação para converter células-tronco pluripotentes em células beta humanas é um desafio notável. Esse desafio é influenciado pela precisão e consistência com que o experimentador segue o protocolo. Além disso, a quantidade de células beta obtidas em cada experimento é bastante variável, o que pode resultar na redução da função das células beta ao longo de vários experimentos.
No contexto da pesquisa de células beta de leptina alta em diabetes, a disponibilidade de doadores de ilhós cadavéricos é bastante limitada. Consequentemente, o uso de células-tronco beta diferenciadas está oferecendo um suprimento ilimitado e abundante de células secretoras de insulina. A diferenciação de células beta é um avanço fundamental em nosso campo, oferecendo inúmeros benefícios.
Ele nos permite explorar o desenvolvimento e a função das células beta, levando a uma compreensão mais profunda das causas do diabetes e da disfunção das células beta. Nosso objetivo é utilizar esta técnica para nossas pesquisas com foco na genética do diabetes. Nosso objetivo primário é focar na mutação de certos genes que podem influenciar as células beta e a função dos ilhós.
Assim, esse protocolo facilitará o acesso a ilhós humanos derivados de células-tronco pré-potentes com mutações de interesse.
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