Name: Injeções intrafemorais simplificadas usando camundongos vivos permitem análise contínua da medula óssea (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-10T13:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Aprenda a técnica de injeção intrafemoral em camundongos para transplante de células-tronco hematopoéticas e leucêmicas. Este método simplificado permite enxerto seguro e análise serial da medula óssea em pesquisa.

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<meta charset="utf8"></head><body>Injeção intrafemoral para estudo da medula óssea em camundongos vivos

<ol><li>Majeti, R., Park, C. Y., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+hierarchy+of+multipotent+hematopoietic+progenitors+in+human+cord+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of a hierarchy of multipotent hematopoietic progenitors in human cord blood.</a> Cell Stem Cell. 1 (6), 635-645 (2007).</li>
<li>Wilkinson, A. C., Igarashi, K. J., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cell+self-renewal+in+vivo+and+ex+vivo.+Nature+reviews%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cell self-renewal in vivo and ex vivo. Nature reviews.</a> Genetics. 132, 1-14 (2020).</li>
<li>Pinho, S., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cell+activity+and+interactions+with+the+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Molecular+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cell activity and interactions with the niche.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 20 (5), 303-320 (2019).</li>
<li>Méndez-Ferrer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+niches+in+haematological+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Bone marrow niches in haematological malignancies.</a> Nature Reviews. Cancer. 20 (5), 285-298 (2020).</li>
<li>Frassoni, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+intrabone+transplant+of+unrelated+cord-blood+cells+in+acute+leukaemia%3A+a+phase+I%2FII+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet.+Oncology%22%5BJournal%5D)">Direct intrabone transplant of unrelated cord-blood cells in acute leukaemia: a phase I/II study.</a> The Lancet. Oncology. 9 (9), 831-839 (2008).</li>
<li>Mazurier, F., Doedens, M., Gan, O. I., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+myeloerythroid+repopulation+after+intrafemoral+transplantation+of+NOD-SCID+mice+reveals+a+new+class+of+human+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Rapid myeloerythroid repopulation after intrafemoral transplantation of NOD-SCID mice reveals a new class of human stem cells.</a> Nature Medicine. 9 (7), 959-963 (2003).</li>
<li>McKenzie, J. L., Gan, O. I., Doedens, M., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+short-term+repopulating+stem+cells+are+efficiently+detected+following+intrafemoral+transplantation+into+NOD%2FSCID+recipients+depleted+of+CD122%2B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human short-term repopulating stem cells are efficiently detected following intrafemoral transplantation into NOD/SCID recipients depleted of CD122+ cells.</a> Blood. 106 (4), 1259-1261 (2005).</li>
<li>Futrega, K., Lott, W. B., Doran, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+bone+marrow+HSC+transplantation+enhances+local+engraftment+at+the+expense+of+systemic+engraftment+in+NSG+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Direct bone marrow HSC transplantation enhances local engraftment at the expense of systemic engraftment in NSG mice.</a> Scientific Reports. 6 (1), 23886(2016).</li>
<li>Chung, Y. R., Kim, E., Abdel-Wahab, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+bone+marrow+aspiration+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Femoral bone marrow aspiration in live mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (89), e51660(2014).</li>
<li>Iwano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+bioluminescence+imaging+of+deep+tissue+in+freely+moving+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Single-cell bioluminescence imaging of deep tissue in freely moving animals.</a> Science. 359 (6378), 935-939 (2018).</li>
<li>Sundberg, R. D., Hodgson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aspiration+of+bone+marrow+in+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Aspiration of bone marrow in laboratory animals.</a> Blood. 4 (5), 557-561 (1949).</li>
<li>Schmitz, M., Bourquin, J. -P., Bornhauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+technique+for+intrafemoral+injection+and+bone+marrow+sampling+in+mouse+transplant+models%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia+%26+lymphoma%22%5BJournal%5D)">Alternative technique for intrafemoral injection and bone marrow sampling in mouse transplant models.</a> Leukemia & lymphoma. 52 (9), 1806-1808 (2011).</li>
<li>Nakauchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+type-specific+5hmC+landscape+and+dynamics+of+healthy+human+hematopoiesis+and+TET2-mutant+preleukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">The cell type-specific 5hmC landscape and dynamics of healthy human hematopoiesis and TET2-mutant preleukemia.</a> Blood Cancer Discovery. 3 (4), 346-367 (2022).</li>
<li>Chan, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isocitrate+dehydrogenase+1+and+2+mutations+induce+BCL-2+dependence+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Isocitrate dehydrogenase 1 and 2 mutations induce BCL-2 dependence in acute myeloid leukemia.</a> Nature Medicine. 21 (2), 178-184 (2015).</li>
<li>Zhang, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-6+blockade+reverses+bone+marrow+failure+induced+by+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">IL-6 blockade reverses bone marrow failure induced by human acute myeloid leukemia.</a> Science Translational Medicine. 12 (538), (2020).</li>
<li>Bak, R. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+genetic+engineering+of+human+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+using+CRISPR%2FCas9+and+AAV6%5BTitle%5D)+AND+%22eLIFE%22%5BJournal%5D)">Multiplexed genetic engineering of human hematopoietic stem and progenitor cells using CRISPR/Cas9 and AAV6.</a> eLIFE. 6, 27873(2017).</li>
<li>Nishimura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sufficiency+for+inducible+Caspase-9+safety+switch+in+human+pluripotent+stem+cells+and+disease+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Sufficiency for inducible Caspase-9 safety switch in human pluripotent stem cells and disease cells.</a> Gene Therapy. 27 (10-11), 525-534 (2019).</li>
<li>Chao, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+AML-iPSCs+reacquire+leukemic+properties+after+differentiation+and+model+clonal+variation+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Human AML-iPSCs reacquire leukemic properties after differentiation and model clonal variation of disease.</a> Cell Stem Cell. 20 (3), 329-344 (2017).</li>
<li>Okada, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prospective+multicenter+phase+II+study+of+intrabone+marrow+transplantation+of+unwashed+cord+blood+using+reduced-intensity+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">A prospective multicenter phase II study of intrabone marrow transplantation of unwashed cord blood using reduced-intensity conditioning.</a> European Journal of Haematology. 100 (4), 335-343 (2018).</li>
<li>Fink, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capacity+of+the+medullary+cavity+of+tibia+and+femur+for+intra-bone+marrow+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Capacity of the medullary cavity of tibia and femur for intra-bone marrow transplantation in mice.</a> PloS One. 14 (11), 0224576(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Seringa de 1/2 mL, 27 G</td><td>BD</td><td>305620</td><td>https://www.bd.com/en-ca/offerings/capabilities/bd-luer-lok-syringe-with-attached-needle/305620</td></tr><tr><td>ACK Lysing Buffer</td><td>Qualoty Biológico</td><td>118-156-101CS</td><td>https://www.qualitybiological.com/product/ack-lysing-buffer/</td></tr> <tr><td>Irradiador</td><td>Biológico Kimtron</td><td>IC-250</td><td>https://www.kimtron.com/ic-250</td></tr><tr><td>Clorexidina</td><td>Nolvasan</td><td>NDC 54771-8701-1</td><td>https://www.zoetisus.com/products/petcare/nolvasan-skin-and-wound-cleanser</td></tr><tr><td>Álcool etílico, prova 190</td><td>Gold Shield</td><td></td><td>https://goldsd.com/line-card/</td></tr> <tr><td>FACSCanto II&nbsp;</td><td>(Becton Dickinson and Company (BD), Franklin Lakes, NJ, EUA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino (FBS)</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-01</td><td>https://www.omegascientific.com/product/fetal-bovine-serum-usda-certified/</td></tr> <tr><td>Citômetro de fluxo, AriaII</td><td>Beckton Dickinson (BD)</td><td></td><td>classificação de células</td></tr><tr><td>IMDM</td><td>Gibco</td><td>12440053</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/12440053</td></tr><tr><td>Isoflurano, USP</td><td>Dechra</td><td>NDC 17033-094-25</td><td>https://www.dechra-us.com/our-products/us/companion-animal/dog/prescription/isoflurane-usp-inhalation-anesthetic</td></tr><tr><td>NOD. Camundongos Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG)&nbsp;</td><td>Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, USA</td><<td>br/> Cepa #:005557</td><td>Macho ou fêmea de seis a dez semanas de idade&nbsp;</td></tr><tr><td>Pomada oftálmica, USP</td><td>Bausch Lomb</td><td>NDC 24208-780-55</td><td>https://www.bausch.com/contentassets/2914df881e4344a 7a202cc5a0673c977/neomycin-and-polymyxin-b-sulfates-gramicidin-ophthalmic-solution.pdf</td></tr><tr><td>Injeção de OstiFen (Caprofeno)</td><td>VetOne</td><td>NDC 13985-748-20</td><td>http://vetone.net/Default/CatHeaderPage?id=9534ccca-eac5-4d68-8ad8-46436067587b</td></tr><tr><td>PBS, pH 7,4</td><td>Caseiro</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15140122</td></tr><tr><td>Iodo-povidona</td><td>Betadine</td><td>NDC 67618-155-16</td><td>https://www.betadine.com/veterinary-surgical-scrub-and-solution/</td></tr> <tr><td>TokeOni (nos EUA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>808350-5MG</td><td>AkaLumine-HCl/Akaluc; https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/808350</td></tr><tr><td>UltraPure 0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15575020</td></tr><tr><td>Painel de anticorpos de enxerto (in vivo, medula óssea de camundongo)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antigen</td><td></td><td></td><td>Diluição</td></tr><tr><td>Antígeno: Anti-humano CD45 Fluorophore: V450 Clone: HI30</td><td>BD Biosciences</td><td>560367</td><td>1:25</td></tr><tr><td>Antigen: Anti-mouse CD45.1 Fluorophore: PE-Cy7 Clone: A20</td><td>eBioscience</td><td>25-0453-81</td><td>1:50</td></tr><tr><td>Antigen:Anti-mouse TER-119 Fluorophore: PE-Cy5 Clone: TER-119</td><td>eBioscience</td><td>15-5921-83</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Antígeno:Anti-humano CD3 Fluorophore: APC-Cy7 Clone: SK7</td><td>BD Biosciences</td><td>341090</td><td>1:12.5</td></tr><tr><td>Antigen:Anti-humano CD19 Fluorophore: APC Clone: HIB19</td><td>BD Biosciences</td><td>555415</td><td>1:25</td></tr><tr><td>Antigen:Anti-humano CD33 Fluorophore: PE Clone: WM53</td><td>BD Biosciences</td><td>555450</td><td>1:25</td></tr><tr><td>Live/Dead staining</td><td></td><td></td><td>Conc.</td></tr><tr><td>PI</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>1 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>Contas de compensação</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Controle negativo</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Veja as instruções para detalhes</td></tr><tr><td>Anti-mouse Ig, &kappa;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Veja as instruções para obter detalhes</td></tr></tbody></table>

injeções intrafemorais simplificadas usando camundongos vivos permitem análise contínua da medula óssea

Simplified Intrafemoral Injections Using Live Mice Allow for Continuous Bone Marrow Analysis

Seguindo esses protocolos 1,14,15,16,17,18,19,20, cada amostra foi transplantada e o modelo de camundongo xenoenxerto foi estabelecido. O objetivo dos experimentos aqui foi mostrar a injeção de IF com vários tipos de células humanas e após aspiração / análi...

Injeções intrafemorais simplificadas usando camundongos vivos permitem análise contínua da medula óssea

Despite the complexity of hematopoietic cell transplantation in humans, researchers commonly perform intravenous or intrafemoral (IF) injections in mice. ...

simplified-intrafemoral-injections-using-live-mice-allow-for

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Medicine

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O transplante de medula óssea oferece uma maneira de alterar o genótipo de células derivadas de medula óssea. Se o gene de interesse é expresso em ambas as células de medula óssea e células derivadas de medula óssea não derivados, transplante de medula óssea pode mudar as células de medula óssea derivadas de um genótipo diferente sem alterar a non-bone marrow genótipo celular derivada.

Diferenciando papéis funcionais da expressão do gene de células imunes e não-imunes na colite Rato por Transplante de Medula Óssea

A Novel de alta resolução<em&gt; In vivo</em&gt; Técnica de Imagem para estudar a resposta dinâmica de estruturas intracranianas ao crescimento do tumor e Terapêutica

Este protocolo descreve um procedimento para amostragem seriada da medula óssea (MO) femoral sem exigir o sacrifício de camundongos. Este procedimento facilita estudos longitudinais da composição da MO de camundongos ao longo do tempo e fornece acesso serial às células dentro da MO para estudos ex vivo e de transplante.

Femoral Medula Óssea aspiração Live Ratos

A natureza das interações entre células tronco e progenitoras hematopoéticas (hspCs) e nichos de medula óssea é pouco compreendido. Modificações de hardware personalizado e um protocolo de aquisição multi-passo permite o uso de dois fótons e microscopia confocal a imagem ex vivo hspCs rotulados hospedados dentro de áreas da medula óssea, as interações de rastreamento e movimento.

In Vivo Rastreamento 4-Dimensional de tronco hematopoéticas e células progenitoras em adultos mouse na calota craniana de Medula Óssea

Aqui apresentamos um protocolo para a dissecção de ossos longos de membros posteriores (fêmures e tíbias) do camundongo de laboratório. Descrevemos ainda uma técnica rápida para isolamento da medula óssea desses ossos que utiliza centrifugação para remoção da medula óssea do espaço da medula óssea.

Murino Hind Limb Ossos Longos Dissecção e Medula Óssea O isolamento

Este manuscrito fornece o procedimento detalhado de injeção de artéria intra-ilíaca (IIA), uma técnica para entregar células cancerígenas especificamente aos tecidos dos membros posteriores, incluindo ossos, para estabelecer metástases ósseas experimentais. Embora inicialmente estabelecido com modelos de tumor de mama, esse protocolo pode ser facilmente estendido a outros tipos de câncer.

Injeção Artéria Intra-ilíaca para eficiente e seletiva Modelagem de microscópico metástase óssea

O protocolo descreve um novo modelo de câmara de janela de fêmur murino que pode ser usado para rastrear o movimento de células na medula óssea femoral in vivo. A microscopia de fluorescência multifotônica intravital é usada para obter imagens de três componentes da medula óssea femoral (vasculatura, matriz de colágeno e neutrófilos) ao longo do tempo.

Modelo Câmara fêmur Janela para<em&gt; In Vivo</em&gt; Acompanhamento de celular na Murino de Medula Óssea

Microscopia de fluorescência intravital (IVFM) da calvária é aplicada em combinação com modelos de animais geneticamente para estudar o homing e enxertia das células hematopoiéticas em nichos de medula óssea (BM).

Combinando a microscopia Intravital fluorescente (IVFM) com modelos genéticos para estudar a dinâmica de enxertia das células hematopoiéticas para nichos de medula óssea

As injeções intrafemorais permitem o enxerto de um pequeno número de células-tronco e progenitoras hematopoiéticas (HSPCs), colocando as células diretamente na cavidade da medula óssea. Aqui descrevemos um protocolo experimental de injeção intrafemoral de HSPCs humanos em camundongos imunodeficientes.

Injeção intrafemoral de células-tronco hematopoiéticas humanas e progenitoras em camundongos imunocomprometidos 

Aqui, um método baseado em citometria de fosfofluxo é descrito para analisar a sinalização a jusante das vias mTORC1, JAK/STAT5 e MAPK em células de leucemia mielóide humana aguda xenoenxertadas em camundongos e obtidas de aspirados de medula óssea. Os níveis de p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 e p-ERK1/2 são medidos simultaneamente usando um citômetro de fluxo espectral de última geração com alta sensibilidade.

Citometria de fosfofluxo intracelular de xenotransplantes derivados de pacientes com leucemia mielóide aguda

Aprenda a técnica de injeção intrafemoral em camundongos para transplante de células-tronco hematopoéticas e leucêmicas. Este método simplificado permite enxerto seguro e análise serial da medula óssea em pesquisa.

Injeções intrafemorais simplificadas usando camundongos vivos permitem análise contínua da medula óssea

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