Name: Injeção de espermátide redonda em camundongo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-26T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Aprenda a técnica de injeção de espermátide redonda em camundongos para melhorar a eficiência do desenvolvimento embrionário. Este método avança aplicações clínicas em azoospermia não obstrutiva.

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<meta charset="utf8"></head><body>Procedimento de injeção de espermátides redondas murinas para estudar o desenvolvimento embrionário

<ol><li>Redgrove, K. A., McLaughlin, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+immune+response+in+Chlamydia+trachomatis+infection+of+the+male+genital+tract%3A+A+double-edged+sword%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of the immune response in Chlamydia trachomatis infection of the male genital tract: A double-edged sword.</a> Front Immunol. 5, 534(2014).</li>
<li>Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+injection+of+spermatozoa+and+spermatogenic+cells%3A+Its+biology+and+applications+in+humans+and+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic injection of spermatozoa and spermatogenic cells: Its biology and applications in humans and animals.</a> Reprod Biomed Online. 10 (2), 247-288 (2005).</li>
<li>Palermo, G., Joris, H., Devroey, P., Van Steirteghem, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancies+after+intracytoplasmic+injection+of+single+spermatozoon+into+an+oocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte.</a> Lancet. 340 (8810), 17-18 (1992).</li>
<li>Kimura, Y., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+oocytes+injected+with+testicular+spermatozoa+or+round+spermatids+can+develop+into+normal+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mouse oocytes injected with testicular spermatozoa or round spermatids can develop into normal offspring.</a> Development. 121 (8), 2397-2405 (1995).</li>
<li>Tesarik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spermatid+injection+into+human+oocytes.+II.+Clinical+application+in+the+treatment+of+infertility+due+to+non-obstructive+azoospermia%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reprod%22%5BJournal%5D)">Spermatid injection into human oocytes. II. Clinical application in the treatment of infertility due to non-obstructive azoospermia.</a> Human Reprod. 11 (4), 780-783 (1996).</li>
<li>Tesarik, J., Mendoza, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spermatid+injection+into+human+oocytes.+I.+Laboratory+techniques+and+special+features+of+zygote+development%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reprod%22%5BJournal%5D)">Spermatid injection into human oocytes. I. Laboratory techniques and special features of zygote development.</a> Human Reprod. 11 (4), 772-779 (1996).</li>
<li>Hirabayashi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+regimens+for+full-term+development+of+rabbit+oocytes+injected+with+round+spermatids%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Activation regimens for full-term development of rabbit oocytes injected with round spermatids.</a> Mol Reprod Dev. 76 (6), 573-579 (2009).</li>
<li>Ogonuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Birth+of+a+marmoset+following+injection+of+elongated+spermatid+from+a+prepubertal+male%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Birth of a marmoset following injection of elongated spermatid from a prepubertal male.</a> Mol Reprod Dev. 86 (8), 928-930 (2019).</li>
<li>Niederberger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forty+years+of+IVF%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Forty years of IVF.</a> Fertil Steril. 110 (2), 185(2018).</li>
<li>Gross, K. X., Hanson, B. M., Hotaling, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Urol+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection.</a> Urol Clin North Am. 47 (2), 175-183 (2020).</li>
<li>Hanson, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection+into+human+oocytes%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Androl%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection into human oocytes: a systematic review and meta-analysis.</a> Asian J Androl. 23 (4), 363-369 (2021).</li>
<li>Tekayev, M., Vuruskan, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+values+and+advances+in+round+spermatid+injection+%28ROSI%29%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol%22%5BJournal%5D)">Clinical values and advances in round spermatid injection (ROSI).</a> Reprod Biol. 21 (3), 100530(2021).</li>
<li>Tanaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fourteen+babies+born+after+round+spermatid+injection+into+human+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fourteen babies born after round spermatid injection into human oocytes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (47), 14629-14634 (2015).</li>
<li>Tanaka, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ninety+babies+born+after+round+spermatid+injection+into+oocytes%3A+survey+of+their+development+from+fertilization+to+2+years+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">Ninety babies born after round spermatid injection into oocytes: survey of their development from fertilization to 2 years of age.</a> Fertil Steril. 110 (3), 443-451 (2018).</li>
<li>Yang, H., Shi, L., Chen, C. D., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+generated+after+round+spermatid+injection+into+haploid+two-cell+blastomeres%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Mice generated after round spermatid injection into haploid two-cell blastomeres.</a> Cell Res. 21 (5), 854-858 (2011).</li>
<li>Moreira, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mouse+offspring+generated+by+ROSI%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Transgenic mouse offspring generated by ROSI.</a> J Reprod Dev. 62 (1), 37-42 (2016).</li>
<li>Federici, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Round+spermatid+injection+rescues+female+lethality+of+a+paternally+inherited+Xist+deletion+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Round spermatid injection rescues female lethality of a paternally inherited Xist deletion in mouse.</a> PLoS Genet. 12 (10), e1006358(2016).</li>
<li>Sakamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paternally+inherited+H3K27me3+affects+chromatin+accessibility+in+mouse+embryos+produced+by+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Paternally inherited H3K27me3 affects chromatin accessibility in mouse embryos produced by round spermatid injection.</a> Development. 149 (18), 200696(2022).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+multiomics+sequencing+reveals+the+reprogramming+defects+in+embryos+generated+by+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Single-cell multiomics sequencing reveals the reprogramming defects in embryos generated by round spermatid injection.</a> Sci Adv. 8, (2022).</li>
<li>Ward, M. A., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+sperm+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic sperm injection in mice.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2018 (1), (2018).</li>
<li>Yoshida, N., Perry, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Piezo-actuated+mouse+intracytoplasmic+sperm+injection+%28ICSI%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Piezo-actuated mouse intracytoplasmic sperm injection (ICSI).</a> Nat Protoc. 2 (2), 296-304 (2007).</li>
<li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS+selection+of+valuable+mutant+mouse+round+spermatids+and+strain+rescue+via+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">FACS selection of valuable mutant mouse round spermatids and strain rescue via round spermatid injection.</a> Zygote. 23 (3), 336-341 (2013).</li>
<li>Kong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+histone+deacetylase+inhibitor+%27Scriptaid%27+on+the+developmental+competence+of+mouse+embryos+generated+through+round+spermatid+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effects of the histone deacetylase inhibitor 'Scriptaid' on the developmental competence of mouse embryos generated through round spermatid injection.</a> Hum Reprod. 32 (1), 76-87 (2017).</li>
<li>Hosseini, S., Salehi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tricostatin+A-treated+round+spermatid+enhances+preimplantation+embryo+developmental+competency+following+round+spermatid+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Zygote%22%5BJournal%5D)">Tricostatin A-treated round spermatid enhances preimplantation embryo developmental competency following round spermatid injection in mice.</a> Zygote. 30 (3), 373-379 (2022).</li>
<li>Kishigami, S., Wakayama, S., Nguyen, V. T., Wakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+time+restriction+for+intracytoplasmic+sperm+injection+and+round+spermatid+injection+into+activated+oocytes+for+efficient+offspring+production%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Similar time restriction for intracytoplasmic sperm injection and round spermatid injection into activated oocytes for efficient offspring production.</a> Biol Reprod. 70 (6), 1863-1869 (2004).</li>
<li>Tao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte+activation+during+round+spermatid+injection%3A+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Oocyte activation during round spermatid injection: state of the art.</a> Reprod Biomed Online. 45 (2), 211-218 (2022).</li>
<li>Ogura, A., Ogonuki, N., Miki, H., Inoue, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinsemination+and+nuclear+transfer+using+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Microinsemination and nuclear transfer using male germ cells.</a> Int Rev Cytol. 246, 189-229 (2005).</li>
<li>Kimura, Y., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracytoplasmic+sperm+injection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Intracytoplasmic sperm injection in the mouse.</a> Biol Reprod. 52 (4), 709-720 (1995).</li>
<li>Ogonuki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-speed+congenic+strategy+using+first-wave+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A high-speed congenic strategy using first-wave male germ cells.</a> PLoS One. 4 (3), e4943(2009).</li>
<li>Abdelaal, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fertility+preservation+for+pediatric+male+cancer+patients%3A+illustrating+contemporary+and+future+options%3B+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Androl+Urol%22%5BJournal%5D)">Fertility preservation for pediatric male cancer patients: illustrating contemporary and future options; a case report.</a> Transl Androl Urol. 10 (1), 520-526 (2021).</li>
<li>Eyni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+bioengineering+of+male+germ+stem+cells+to+preserve+fertility%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Advanced bioengineering of male germ stem cells to preserve fertility.</a> J Tissue Eng. 12, (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>CaCl22H2O&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>C7902&nbsp;</td><td>Preparação do CZB</td></tr><tr><td>Glicose&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>G6152</td><td>Preparação do CZB</td></tr><tr><td>HEPES-Na (básico)&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>H3784&nbsp;</td><td>Preparação do CZB</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Beyotime&nbsp;</td><td>C1025</td><td>FACS</td></tr><tr><td>gonadotrofina coriônica humana (HCG)</td><td>Ningbo Second Hormone Company</td><td>HCG</td><td>Drogas promotoras de ovulação</td></tr><tr><td>Hialuronidase</td><td></td><td>Sigma H3506</td><td>Removendo células da granulosa ao redor do oócito</td></tr><tr><td>KCl&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P5405</td><td>Preparação de CZB</td></tr><tr><td>KH2PO4&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P5655&nbsp;</td><td>Preparação do CZB</td></tr><tr><td>KSOMaa</td><td>Caisson Labs</td><td>IVL04-100ML</td><td>Meio otimizado de potássio simplex suplementado com aminoácidos</td></tr><tr><td>L-glutamina&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>G8540&nbsp;</td><td>Preparação do CZB</td></tr><tr><td>Fluido operacional</td> <td>M2</td><td>Sigma</td><td>M7167-50ML</td></tr><tr><td>MgSO47H2O&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>M1880</td><td>Preparação do CZB</td></tr><tr><td>Na2-EDTA2H2O&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>E5134&nbsp;</td><td>Preparação do CZB</td></tr><tr><td>NaCl&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S5886</td><td>Preparação de CZB</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761&nbsp;</td><td>Preparação do CZB</td></tr><tr><td>Na-lactato 60% xarope d = 1,32 g/L</td><td>Sigma</td><td>L7900&nbsp;</td><td>Preparação do CZB</td></tr><tr><td>Na-piruvato&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P4562</td><td>Preparação do CZB</td></tr><tr><td>Pontas de broca piezo (ICSI)&nbsp;</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>piezoXpert</td><td>Ruptura de membrana piezoelétrica</td></tr><tr><td>égua grávida gonadotrofina sérica (PMSG)</td><td>Ningbo Second Hormone Company</td><td>PMSG</td><td>Drogas promotoras de ovulação</td></tr><tr><td>PVA&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P8136</td><td>Preparação de CZB</td></tr></tbody></table>

injeção de espermátide redonda em camundongo

Mouse Round Spermatid Injection

Iniciamos nossa investigação examinando o efeito do AOA na capacidade de desenvolvimento dos embriões. Uma ilustração esquemática do desenho experimental é mostrada na Figura 1A. Antes da injeção de espermatozóides, os oócitos foram submetidos a AOA (A-ICSI) ou permaneceram sem tratamento (ICSI). Dados detalhados sobre o desenvolvimento embrionário são apresentados na Tabela 1. Os resultados não revelaram diferenças significativas nas taxas de clivagem, blastocisto ou natalidade entre os grupos A-ICSI e ICSI (P &gt; 0,05; Figura 1B). Esses achados indicam que AOA usando 10 mM SrCl2 por 20 min não afetou o potencial de desenvolvimento dos embriões.
Foi relatado anteriormente que não havia diferenças perceptíveis na eficiência de desenvolvimento de embriões ROSI selecionados por FACS ou por exame visual direto ao microscópio22. Nossos experimentos empregaram a tecnologia FACS para identificar RS (Figuras 2A, B). Ao microscópio, as espermátides redondas de camundongos tinham aproximadamente 10 μm de diâmetro e exibiam uma estrutura nucléolo semelhante a uma protrusão no meio (Figura 2C). Postulamos que a seleção por meio do FACS é mais precisa do que o exame visual direto ao microscópio. Além disso, a literatura apóia a exploração direta da RS por meio de diferenças morfológicas. Os embriões ROSI foram gerados usando dois métodos distintos: o grupo A-ROSI, onde os oócitos foram submetidos a AOA antes da injeção de espermátide redonda, e o grupo ROSI-A, onde os oócitos foram submetidos a AOA após a injeção de espermátide redonda. O diagrama esquemático do desenho experimental é mostrado na Figura 1C. Notavelmente, não foram encontradas diferenças significativas nas taxas de clivagem e blastocisto entre os grupos A-ROSI, ROSI-A e ICSI (P &gt; 0,05; Figura 1D). As taxas de blastocisto dos grupos A-ROSI, ROSI-A e ICSI foram significativamente maiores do que as do grupo de ativação (P &lt; 0,05; Figura 1D). No entanto, a taxa de natalidade do grupo ROSI foi menor do que a do grupo ICSI, independentemente de os oócitos terem sido ativados antes ou depois da injeção (P &lt; 0,05; Figura 1D). É importante ressaltar que a taxa de natalidade do grupo A-ROSI foi ligeiramente maior do que a do grupo ROSI-A (Figura 1D). Mais detalhes sobre os dados de desenvolvimento embrionário são apresentados na Tabela 1.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65898/65958fig01.jpg"> 
Figura 1: Os embriões ROSI apresentaram eficiência de desenvolvimento reduzida em comparação com os embriões ICSI. (A) Ilustração esquemática do protocolo experimental avaliando o efeito da ativação no desenvolvimento embrionário da ICSI. Azul = Os oócitos não foram ativados; Amarelo = Oócitos foram ativados. (B) Eficiência de desenvolvimento de embriões derivados de A-ICSI e ICSI. (C) Ilustração esquemática do protocolo experimental para geração de diferentes tipos de embriões. (D) Eficiência de desenvolvimento de embriões derivados de A-ROSI, ROSI-A, A e ICSI. **, P &lt; 0,01. Abreviaturas: A= Ativação E= Dia embrionário; ROSI= Injeção redonda de espermátide; ICSI= Injeção intracitoplasmática de espermatozoides. As barras de erro mostram o desvio padrão. A comparação das taxas é realizada por meio do teste qui-quadrado. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/65958fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65898/65958fig02.jpg"> 
Figura 2: As espermátides redondas foram selecionadas por meio de classificação por citometria de fluxo. (A) Um diagrama de classificação por citometria de fluxo foi utilizado para a seleção das espermátides redondas. (B) Imagens representativas mostrando a seleção de espermátides redondas. Barra de escala: 10 μm. Abreviaturas: FSC = Dispersão direta; SSC = dispersão lateral; 355 é o comprimento de onda de excitação; 460/50 e 670/30 são dois canais de detecção sob laser de comprimento de onda 355. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/65958fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">Grupos</td>
			<td colspan="3">Desenvolvimento pré-implantação</td>
			<td colspan="2">Desenvolvimento pós-implantação</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Replica</td>
			<td>Taxa de clivagem (%)</td>
			<td>Taxa de blastocisto (%)</td>
			<td>Embriões de 2 células transferidos/ Nº. dos destinatários</td>
			<td>Taxa de natalidade (%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-ICSI</td>
			<td>5</td>
			<td>99.33 (149/150)</td>
			<td>75.17 (112/149)</td>
			<td>49/5</td>
			<td>48.98 (24/49)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-ROSI</td>
			<td>5</td>
			<td>99.33 (149/150)</td>
			<td>73.83 (110/149)</td>
			<td>44/5</td>
			<td>18.18 (8/44) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROSI-A</td>
			<td>5</td>
			<td>98.00 (147/150)</td>
			<td>64.63 (95/147)</td>
			<td>45/5</td>
			<td>13.33 (6/45) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ativação</td>
			<td>5</td>
			<td>100.00 (150/150)</td>
			<td>12.00 (18/150) **</td>
			<td>51/5</td>
			<td>0.00 (0/51) **</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ICSI</td>
			<td>5</td>
			<td>98.00 (147/150)</td>
			<td>73.47 (108/147)</td>
			<td>46/5</td>
			<td>52.17 (24/46)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1. A eficiência do desenvolvimento de embriões derivados de diferentes grupos.
Tabela Suplementar 1. A proporção de diferentes populações de células classificadas por citometria de fluxo. A parte P3 é composta por espermátides redondas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65898/Supplementary%20Table%201_RE.zip" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>

Injeção de espermátide redonda em camundongo

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Avaliação funcional da cinesina-7 CENP-E em espermatócitos utilizando inibição in vivo , imunofluorescência e citometria de fluxo

O método de manipulação cervical apresentado pode induzir pseudogestantes em camundongos sem a necessidade de fêmeas reprodutoras com machos vasectomizados. A indução da pseudogravidez é necessária para o sucesso da transferência não cirúrgica de embriões e da inseminação artificial não cirúrgica, ambas também apresentadas.

Indução de pseudogravidez em camundongos fêmeas sem a necessidade de machos vasectomizados antes da transferência não cirúrgica de embriões ou inseminação artificial

O modelo de camundongo AcroSensE e os métodos de imagem de células vivas descritos aqui fornecem uma nova abordagem para estudar a dinâmica do cálcio no compartimento subcelular do acrossoma espermático e como eles regulam etapas intermediárias que levam à fusão da membrana e exocitose acrossomal.

Imagem em Tempo Real da Dinâmica do Cálcio Acrossomal e Exocitose em Espermatozoides Vivos de Camundongos

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de camundongo de injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) e transferência de embriões (ET), permitindo-nos observar mudanças relacionadas à idade no metabolismo da glicose que podem ser atribuídas à ICSI, fornecendo informações sobre seus potenciais impactos de longo prazo no desenvolvimento humano.

Monitoramento da glicose no sangue na prole de camundongos após injeção intracitoplasmática de espermatozóides

Aprenda a técnica de injeção de espermátide redonda em camundongos para melhorar a eficiência do desenvolvimento embrionário. Este método avança aplicações clínicas em azoospermia não obstrutiva.

Injeção de espermátide redonda em camundongo

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