Name: Transplante de Traqueia Intrapulmonar Purino: Modelo para Investigação de Doença Obliterativa das Vias Aéreas Após Transplante Pulmonar (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-10T12:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 15 s
Description: Aprenda o modelo de transplante traqueal intrapulmonar em camundongos para estudar doença obstrutiva das vias aéreas após transplante pulmonar. Este método ajuda pesquisadores a investigar respostas imunológicas e angiogênicas.

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Os autores gostariam de agradecer a Jerome Valero pela edição deste manuscrito. A Figura 1 e a Figura 3I,J,L foram criadas com BioRender.com.

Todos os animais foram tratados de acordo com as diretrizes estabelecidas pelo Conselho Canadense de Cuidados com Animais no Guide to the Care and Use of Experimental Animals. O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de Cuidados com Animais do Toronto General Hospital Research Institute, University Health Network.
1. Cirurgia do doador
NOTA: Camundongos BALB/c são usados como exemplo de doadores para o experimento. Todos os procedimentos devem ser realizados utilizando técnica estéril.
<ol><li>Antes do procedimento, registre o peso de cada mouse.</li>
	<li>Eutanásia do rato utilizando uma câmara de CO2 .</li>
	<li>Uma vez confirmada a morte, posicione o camundongo em decúbito dorsal e fixe os membros com fita adesiva.</li>
	<li>Preparar a área cirúrgica esterilizando-a com álcool isopropílico 70%. NOTA: Se necessário e conforme recomendado pelo comitê de ética animal local, pare o pelo do local da incisão.</li>
	<li>Faça uma incisão mediana na pele, começando pelo abdome médio e estendendo-se até a região cervical anterior.</li>
	<li>Acesse a traqueia retraindo cuidadosamente os coxins de gordura, movendo lateralmente os músculos da cinta e separando a traqueia do tecido conjuntivo circundante. Use pinças para criar espaço entre a traqueia e o esôfago.</li>
	<li>Levante o xifoide e corte o diafragma.</li>
	<li>Eleve o esterno, garantindo um caminho livre do esterno até a região do pescoço, inserindo um hemostático. Aperte a caixa torácica em ambos os lados e corte o esterno, estendendo-se até os músculos do pescoço.</li>
	<li>Remova o timo e qualquer gordura ou músculo que obstrua a traqueia para expor a bifurcação traqueal.</li>
	<li>Corte ambos os brônquios principais e separe cuidadosamente as vias aéreas do esôfago.</li>
	<li>Corte a laringe e remova-a.</li>
	<li>Borrifar a traqueia dissecada com soro fisiológico estéril ou solução de preservação com gaze estéril embebida em soro fisiológico estéril ou solução de preservação e colocá-la sobre gelo para preservar sua viabilidade.</li>
</ol>2. Cirurgia do receptor
NOTA: Camundongos C57BL/6 são usados como exemplo de receptores para o experimento.
<ol><li>Administrar buprenorfina de libertação sustentada por via subcutânea na dose de 1 mg/kg na manhã do dia da cirurgia.</li>
	<li>Induzir anestesia em câmara de indução com isoflurano a 5%.</li>
	<li>Uma vez que o camundongo esteja levemente anestesiado, injete intraperitonealmente um coquetel composto por (0,1 mg/g) de xilazina e (0,01 mg/g) de cetamina.</li>
	<li>Retornar o camundongo à câmara de indução com isoflurano a 2-3% mantido.</li>
	<li>Faça a barba no local da cirurgia. Administrar também bupivacaína em forma de bloqueio por via subcutânea ao longo do local planejado para insicião na dose de 7 mg/kg.</li>
	<li>Confirmar a ausência de resposta reflexa a uma pinça do pododáctilo antes da intubação orotraqueal. Intubar o camundongo orotraquealmente usando um cateter intravenoso de 20 G e conectá-lo a um ventilador com volume corrente de 500 μL, frequência respiratória de 120 bpm, oxigênio a 100% e isoflurano a 2%. Utilize um suporte com pinça aplicada na língua, segurando o animal em posição vertical com o pescoço estendido, para facilitar esse procedimento.</li>
	<li>Acione uma almofada de aquecimento e posicione o mouse em posição lateral direita sobre a almofada, com a cabeça afastada do cirurgião e a cauda voltada para o cirurgião (Figura 2). Fixe os membros com fita adesiva. Coloque pomada veterinária nos olhos para evitar o ressecamento enquanto estiver sob anestesia.</li>
	<li>Esfregar a área cirúrgica com iodopovidona a 7,5%, esterilizar com álcool isopropílico a 70% e esfregar novamente com iodopovidona a 10%. Aplicar campos cirúrgicos estéreis para cobrir a área cirúrgica.</li>
	<li>Carregar a traqueia do doador em cateter intravenoso de 16 G durante esse tempo (Figura 3C,D).</li>
	<li>Use bisturi para fazer uma incisão na pele do receptor e cauterizar o músculo e o tecido conjuntivo.</li>
	<li>Abra o quinto ou sexto espaço intercostal e mantenha a caixa torácica aberta com dois afastadores.</li>
	<li>Dissecar o ligamento pulmonar inferior com cotonetes e tesouras.</li>
	<li>Simular a criação do trajeto para a traqueia doadora (Figura 3G,H).</li>
	<li>Fixe o tubo de saída do ventilador ocluindo-o parcialmente com uma torneira de três vias para facilitar a insuflação do pulmão esquerdo.</li>
	<li>Crie um caminho puncionando o pulmão esquerdo com uma agulha de 20 G. Garantir que a profundidade da punção seja aproximadamente equivalente ao comprimento do aloenxerto traqueal. Selecione o local da punção na borda do pulmão (conforme indicado na Figura 3I), garantindo que o trajeto corra paralelo ao tampo da mesa (conforme marcado por um círculo azul na Figura 3J). NOTA: Um ângulo de inserção para cima resultará em penetração da camada pleural, enquanto um ângulo mais profundo pode levar a sangramento dos grandes vasos (como marcado por cruzes vermelhas na Figura 3J).</li>
	<li>Insira o cateter intravenoso 16 G no pulmão esquerdo e extruda a traqueia do doador no pulmão esquerdo. Após a inserção do aloenxerto traqueal, solte a torneira de três vias para permitir o fluxo expiratório desobstruído através do tubo de saída.</li>
	<li>Fechar o local da injeção pleural com um clipe (Figura 3K,L). Posicione o clipe precisamente sobre o local da punção, com sua borda alinhada para combinar com o contorno da borda do pulmão (indicado pelo círculo azul na Figura 3L). NOTA: Um local incorreto para o local do clipe pode resultar em vedação ineficaz e vazamento de ar, enquanto a profundidade insuficiente do clipe pode levar ao descolamento do clipe após a cirurgia (como mostrado pelas cruzes vermelhas na Figura 3L).</li>
	<li>Preencha a cavidade torácica com solução salina e absorva o soro fisiológico com uma gaze.</li>
	<li>Reinsuflar o pulmão esquerdo e fechar as costelas usando uma técnica de sutura contínua.</li>
	<li>Fechar o músculo e a pele com suturas interrompidas.</li>
	<li>Administrar analgésico meloxicam por via subcutânea na dose de 5 mg/kg no final da cirurgia.</li>
	<li>Observe o mouse receptor até que ele esteja acordado. Em seguida, retire o tubo traqueal e coloque o mouse receptor em uma gaiola. NOTA: Os ratos receptores devem ser alojados individualmente.</li>
	<li>Administrar meloxicam (5 mg/kg) uma vez ao dia por injeção subcutânea, iniciando 24 h após a cirurgia e continuando por 3 dias no pós-operatório.</li>
</ol>3. Recolha de amostras de ratinhos receptores
<ol><li>Induzir anestesia em câmara de indução com isoflurano a 5%.</li>
	<li>Confirmar a ausência de resposta reflexa ao pinçamento do pododáctilo antes da intubação orotraqueal. O método de intubação e o ajuste do respirador são os mesmos da cirurgia do receptor.</li>
	<li>Posicione o mouse em decúbito dorsal e fixe os membros.</li>
	<li>Preparar a área cirúrgica esterilizando-a com álcool isopropílico 70%.</li>
	<li>Faça uma incisão mediana na pele, começando pelo abdome médio e estendendo-se até a região cervical anterior.</li>
	<li>Exsanguinar o rato através da veia cava inferior utilizando uma seringa de 1 ml ligada a uma agulha de 25 G, resultando em eutanásia.</li>
	<li>Abra o tórax e acesse a traqueia da mesma forma que um camundongo doador. Amarre a traqueia ao redor do tubo de intubação com seda 7-0.</li>
	<li>Remova o timo, a gordura e os músculos para expor o coração.</li>
	<li>Cortar o átrio esquerdo, átrio direito e veia cava inferior. Perfundir os pulmões com 3 mL de solução salina estéril através do ventrículo direito.</li>
	<li>Para análise histológica, inflar os pulmões com formalina a 10% através de um tubo de intubação.</li>
	<li>Extubar o tubo de ventilação e amarrar a traqueia com seda 7-0.</li>
	<li>Divida a laringe e o esôfago. Puxe-os em uma direção inferior e, em seguida, extraia o bloqueio cardíaco e pulmonar, colocando-o em formalina a 10%.</li>
</ol>

Explorando a doença obliterativa das vias aéreas em transplantes de pulmão

<ol><li>Chambers, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+International+Thoracic+Organ+Transplant+Registry+of+the+International+Society+for+Heart+and+Lung+Transplantation%3A+Thirty-fifth+adult+lung+and+heart-lung+transplant+report-2018%3B+Focus+theme%3A+Multiorgan+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">The International Thoracic Organ Transplant Registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: Thirty-fifth adult lung and heart-lung transplant report-2018; Focus theme: Multiorgan Transplantation.</a> J Heart Lung Transplant. 37 (10), 1169-1183 (2018).</li>
<li>Hertz, M. I., Jessurun, J., King, M. B., Savik, S. K., Murray, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproduction+of+the+obliterative+bronchiolitis+lesion+after+heterotopic+transplantation+of+mouse+airways%5BTitle%5D)+AND+%22American+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Reproduction of the obliterative bronchiolitis lesion after heterotopic transplantation of mouse airways.</a> American J Pathol. 142 (6), 1945-1951 (1993).</li>
<li>Ikonen, T. S., Brazelton, T. R., Berry, G. J., Shorthouse, R. S., Morris, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+re-growth+is+associated+with+inhibition+of+obliterative+airway+disease+in+orthotopic+tracheal+allografts+in+non-immunosuppressed+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Epithelial re-growth is associated with inhibition of obliterative airway disease in orthotopic tracheal allografts in non-immunosuppressed rats.</a> Transplantation. 70 (6), 857(2000).</li>
<li>Dutly, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+for+post-transplant+obliterative+airway+disease+reveals+angiogenesis+from+the+pulmonary+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">A novel model for post-transplant obliterative airway disease reveals angiogenesis from the pulmonary circulation.</a> Am J Transplant. 5 (2), 248-254 (2005).</li>
<li>Wagnetz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rejection+of+tracheal+allograft+by+intrapulmonary+lymphoid+neogenesis+in+the+absence+of+secondary+lymphoid+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rejection of tracheal allograft by intrapulmonary lymphoid neogenesis in the absence of secondary lymphoid organs.</a> Transplantation. 93 (12), 1212-1220 (2012).</li>
<li>Hirayama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+long-term+expression+of+lentivirally+delivered+IL-10+in+the+lung+attenuates+obliteration+of+intrapulmonary+allograft+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Local long-term expression of lentivirally delivered IL-10 in the lung attenuates obliteration of intrapulmonary allograft airways.</a> Hum Gene Ther. 22 (11), 1453-1460 (2011).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recipient+bone+marrow-derived+IL-17+receptor+A-positive+cells+drive+allograft+fibrosis+in+a+mouse+intrapulmonary+tracheal+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Immunol%22%5BJournal%5D)">Recipient bone marrow-derived IL-17 receptor A-positive cells drive allograft fibrosis in a mouse intrapulmonary tracheal transplantation model.</a> Transpl Immunol. 69, 101467(2021).</li>
<li>Matsuda, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spleen+tyrosine+kinase+modulates+fibrous+airway+obliteration+and+associated+lymphoid+neogenesis+after+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Spleen tyrosine kinase modulates fibrous airway obliteration and associated lymphoid neogenesis after transplantation.</a> Am J Transplant. 16 (1), 342-352 (2016).</li>
<li>Suzuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+CTLA4-Ig+on+Obliterative+bronchiolitis+in+a+mouse+intrapulmonary+tracheal+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Effect of CTLA4-Ig on Obliterative bronchiolitis in a mouse intrapulmonary tracheal transplantation model.</a> Ann Thorac Cardiovasc Surg. 27 (6), 355-365 (2021).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+potent+anti-angiogenic+factor%2C+vasohibin-1%2C+ameliorates+experimental+bronchiolitis+obliterans%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">A potent anti-angiogenic factor, vasohibin-1, ameliorates experimental bronchiolitis obliterans.</a> Transplant Proc. 44 (4), 1155-1157 (2012).</li>
<li>Aloisi, F., Pujol-Borrell, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphoid+neogenesis+in+chronic+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lymphoid neogenesis in chronic inflammatory diseases.</a> Nat Rev Immunol. 6 (3), 205-217 (2006).</li>
<li>Cupedo, T., Jansen, W., Kraal, G., Mebius, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+secondary+and+tertiary+lymphoid+structures+in+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Induction of secondary and tertiary lymphoid structures in the skin.</a> Immunity. 21 (5), 655-667 (2004).</li>
<li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+intrapulmonary+de+novo+lymphoid+tissue+in+obliterative+bronchiolitis+after+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of intrapulmonary de novo lymphoid tissue in obliterative bronchiolitis after lung transplantation.</a> J Immunol. 182 (11), 7307-7316 (2009).</li>
<li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+airway+epithelium+in+acutely+rejection+orthotopic+vascularized+mouse+lung+transplants%5BTitle%5D)+AND+%22A+J+Resp+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Maintenance of airway epithelium in acutely rejection orthotopic vascularized mouse lung transplants.</a> A J Resp Cell Mol Biol. 37 (6), 625-630 (2007).</li>
<li>Yamada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+airway+fibrosis+in+orthotopic+mouse+lung+transplantation+models-an+experimental+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Chronic airway fibrosis in orthotopic mouse lung transplantation models-an experimental reappraisal.</a> Transplantation. 102 (2), e49-e58 (2018).</li>
<li>Watanabe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+B+cell-dependent+pathway+drives+chronic+lung+allograft+rejection+after+ischemia-reperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">A B cell-dependent pathway drives chronic lung allograft rejection after ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Am J Transplant. 19 (12), 3377-3389 (2019).</li>
<li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vendor-specific+microbiome+controls+both+acute+and+chronic+murine+lung+allograft+rejection+by+altering+CD4%2BFoxp3%2B+regulatory+T+cell+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Vendor-specific microbiome controls both acute and chronic murine lung allograft rejection by altering CD4+Foxp3+ regulatory T cell levels.</a> Am J Transplant. 19 (10), 2705-2718 (2019).</li>
</ol>

Os autores deste manuscrito não têm conflitos de interesse a declarar.

O procedimento murino IPTT inclui etapas críticas. Em relação à anestesia, o primeiro passo crucial é a intubação endotraqueal. É essencial segurar o rato a uma altura adequada com as pernas sobre a mesa para visualizar as cordas vocais e facilitar a intubação imediata. Além disso, é necessário um ajuste cuidadoso do volume respiratório e da pressão expiratória final positiva (PEEP). Normalmente, um volume respiratório de 500 μL e uma PEEP de 2 cmH2O são suficientes para camundongos pesando 25-30 g. No entanto...

O transplante pulmonar tem sido estabelecido como um tratamento eficaz para pacientes com doenças respiratórias em estágio terminal. Entretanto, a sobrevida mediana dos receptores de transplante pulmonar humano é de apenas aproximadamente 6 anos, sendo o desenvolvimento de bronquiolite obliterante (BO), um tipo de doença obstrutiva das vias aéreas (DAO), uma das principais causas de morte após o primeiro ano pós-transplante1.
Vários modelos animais têm sido utilizados para investigar o mecanismo subjacente à DAO. Um desses modelos é o transplante traqueal heterotópico (TCT)2. Nesse modelo, os enxertos traqueais são implantados no tecido subcutâneo ou no omento do receptor. Ocorre perda de células epiteliais do enxerto traqueal induzida por isquemia, seguida de infiltração linfocitária aloreativa e apoptose de células epiteliais doadoras. Fibroblastos e miofibroblastos migram ao redor da traqueia, produzindo uma matriz extracelular. Finalmente, ocorre obliteração fibrosa completa da luz das vias aéreas. O modelo HTT é tecnicamente simples, proporciona um ambiente in vivo e oferece alta reprodutibilidade.
Outro modelo para o estudo da DAO é o transplante traqueal ortotópico de ratos (TTO), em que enxertos traqueais são interpostos na traqueia do receptor para manter a ventilação fisiológica3. Nesse modelo, a depleção induzida por isquemia das células epiteliais do doador resulta na sua substituição por células epiteliais receptoras dentro da traqueia, formando uma via aérea desobstruída acompanhada de fibrose moderada. Embora esses modelos tenham contribuído para o entendimento da obliteração das vias aéreas após o transplante pulmonar, eles apresentam limitações em termos de recapitulação do microambiente do parênquima pulmonar.
Nosso grupo de pesquisa introduziu o modelo de transplante traqueal intrapulmonar (TTPI) de ratos, no qual enxertos traqueais são implantadosno pulmão receptor4 (Figura 1). O modelo IPTT exibe obliteração fibrosa da luz das vias aéreas ocorrendo dentro do microambiente pulmonar. Além disso, tem sido aplicado com sucesso em camundongos tecnicamente mais desafiadores que o IPTTde ratos5,6,7,8,9,10. Essa adaptação do modelo murino IPTT nos permitiu aprofundar os intrincados detalhes do ambiente imunológico pulmonar da DAO após transplante pulmonar usando camundongos transgênicos.
O modelo IPTT possui algumas características únicas. Uma delas é a neoangiogênese, que é facilitada pela circulação pulmonar e desempenha papel crucial na obliteração das vias aéreas 4,10. Além disso, o modelo IPTT exibe agregados linfoides, alguns dos quais com vênulas endoteliais elevadas expressando endereçina linfonodal periférica, indicando que são órgãos linfoides terciários (TLOs)7,8. Os TLOs assemelham-se a linfonodos e consistem de células T, células B e, frequentemente, um centro germinativo acompanhado de células dendríticas foliculares11,12. TLOs têm sido relatados em várias doenças inflamatórias crônicas, incluindo a obliteração das vias aéreas, tornando o modelo IPTT adequado para investigar o papel das OTTs na obliteração das vias aéreas 7,8,11,12,13. Este artigo apresenta a metodologia do modelo murino IPTT, com o objetivo de familiarizar os pesquisadores com esse modelo e facilitar investigações adicionais sobre a obliteração das vias aéreas após o transplante pulmonar.

<table><tbody><tr><td>BALB/cJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>8-10 semanas 25-30 g</td><td>Macho, Doador</td></tr><tr><td>BD Seringa de 1 mL</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>BD Agulha PrecisionGlide Aiguile BD PrecisionGlide</td><td>Becton Dickinson</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>Bovie Change-A-Tip Deluxe High-Temperture</td><td>Bovie</td><td>DEL1</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>8-10 semanas 25-30 g</td><td>Masculino, Receptor</td></tr><tr><td>Dumont #5/45 Fórceps</td><td>F&middot; S&middot; T</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Ethicon Ligaclip Múltiplo -Clip Aplicadores-Pinça</td> Graefe Extra Fina <td>Ethicon</td><td>LX107</td><td></td></tr><tr><td></td><td>F&middot; S&middot; T</td><td>11150-10</td><td></td></tr><tr><td>Glover Bulldog Clamp</td><td>Integra</td><td>320-127</td><td></td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito Hemostats</td><td>F&middot; S&middot; T</td><td>13009-12</td><td></td></tr><tr><td>Horizon Titanium Ligating Clips</td><td>Teleflex</td><td>001201</td><td></td></tr><tr><td>Leica M651 Microscópio cirúrgico manual para procedimentos microcirúrgicos</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Magnetix Fixator com trava de mola</td><td>CD+ LABS</td><td>ACD-001</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Microcirúrgica</td><td>Jarit</td><td>277-051</td><td></td></tr><tr><td>Ventilador de Rato e Rato Perinatal Modelo 687</td><td>Harvard</td><td>55-0001</td><td></td></tr><tr><td>Perfadex Plus</td><td>XVIVO</td><td>19850</td><td></td></tr><tr><td>Ponta Retrator Sem Corte - 2.5 mm</td><td>CD+ LABS</td><td>ACD-011</td><td></td></tr><tr><td>mesa para animais pequenos</td><td>CD+ LABS</td><td>ACD-003</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro Blue 24" CV-1 Taper, Braço Duplo</td><td>Covidien</td><td>VP702X</td><td></td></tr><tr><td>Pomada Systane</td><td>Alconn</td><td>1444062</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de Elastômero</td><td>CD+ LABS</td><td>ACD-007</td><td></td></tr><tr><td>Cateter Terumo Surflo IV, 20 G x 1 in</td><td>Terumo Medical Corporation</td><td>SR-OX2025CA</td><td></td></tr><tr><td>VMT tampo de mesa</td><td>Benson</td><td>91803300</td><td></td></tr></tbody></table>

transplante de traqueia intrapulmonar purino: modelo para investigação de doença obliterativa das vias aéreas após transplante pulmonar

Murine Intrapulmonary Tracheal Transplantation: A Model for Investigating Obliterative Airway Disease After Lung Transplantation

O transplante traqueal intrapulmonar murino (TTPI) é usado como modelo de doença obliterativa das vias aéreas (DAO) após transplante pulmonar. Inicialmente relatado por nossa equipe, esse modelo tem ganhado uso no estudo da DAO devido à sua alta reprodutibilidade técnica e adequação para investigação de comportamentos imunológicos e intervenções terapêuticas.
No modelo IPTT, um enxerto traqueal de roedor é inserido diretamente no pulmão do receptor através da pleura. Esse modelo é distinto do transplante traqueal heterotópico (TCTH), em que os enxertos são transplantados para sítios subcutâneos ou omentais, e do transplante traqueal ortotópico (TTO), no qual a traqueia do doador substitui a traqueia do receptor. 
O sucesso da implementação do modelo IPTT requer habilidades anestésicas e cirúrgicas avançadas. As habilidades anestésicas incluem intubação endotraqueal do receptor, ajuste de parâmetros ventilatórios apropriados e extubação adequadamente cronometrada após a recuperação da anestesia. As habilidades cirúrgicas são essenciais para a colocação precisa do enxerto dentro do pulmão e para garantir o selamento eficaz da pleura visceral para evitar vazamento de ar e sangramento. Em geral, o processo de aprendizagem leva aproximadamente 2 meses.
Em contraste com os modelos HTT e OTT, no modelo IPTT, a via aérea do aloenxerto desenvolve obliteração das vias aéreas no microambiente pulmonar relevante. Isso permite que os investigadores estudem os processos imunológicos e angiogênicos específicos do pulmão envolvidos na obliteração das vias aéreas após o transplante pulmonar. Além disso, esse modelo também é único por exibir órgãos linfoides terciários (TLOs), que também são vistos em aloenxertos pulmonares humanos. Os TLOs são compostos por populações de células T e B e caracterizados pela presença de vênulas endoteliais elevadas que direcionam o recrutamento de células imunes; portanto, é provável que desempenhem um papel crucial na aceitação e rejeição do enxerto. Concluímos que o modelo IPTT é uma ferramenta útil para estudar as vias imunes e pró-fibróticas intrapulmonares envolvidas no desenvolvimento da obliteração das vias aéreas no aloenxerto de transplante pulmonar.

Com base em nossa experiência, a proficiência neste modelo normalmente requer aproximadamente 2 meses de treinamento. Uma vez alcançada a proficiência, os procedimentos do doador normalmente requerem 15 min, enquanto os procedimentos do receptor requerem aproximadamente 30 min. A taxa de mortalidade esperada para um operador treinado é de 0%.
Na Figura 4A, um aloenxerto traqueal exibe obstrução completa com tecido fibroblástico, e as células epiteliais estão visiv...

O modelo de transplante traqueal intrapulmonar murino (TTPI) é valioso para o estudo da doença obliterativa das vias aéreas (DAO) após o transplante pulmonar. Oferece informações sobre o comportamento imunológico e angiogênico pulmão-específico na obliteração das vias aéreas após alotransplante com alta reprodutibilidade. Descrevemos aqui o procedimento do IPTT e seus resultados esperados.

Transplante de Traqueia Intrapulmonar Purino: Modelo para Investigação de Doença Obliterativa das Vias Aéreas Após Transplante Pulmonar

Murine intrapulmonary tracheal transplantation (IPTT) is used as a model of obliterative airway disease (OAD) following lung transplantation. Initially ...

Nossa pesquisa está examinando a disfunção crônica do enxerto pulmonar após o transplante pulmonar. Quando você transplanta um pulmão, mais da metade dos pacientes desenvolverá obliteração fibrosa ou anormalidades das vias aéreas. Entender isso é realmente a chave para entender a sobrevida a longo prazo após o transplante pulmonar.A importância desse modelo de transplante traqueal intrapulmonar é que a traqueia transplantada é colocada no ambiente do próprio pulmão e, portanto, você pode olhar para um aloenxerto versus um isoenxerto em termos de sua resposta após um transplante. O mais fascinante é o fato de que um isoenxerto, mesmo tendo tido a mesma isquemia e a mesma lesão, se recupera completamente e tem anatomia normal, mas um aloenxerto desenvolve obliteração fibrosa, e entender por que isso acontece em um aloenxerto é a chave para entender os mecanismos subjacentes da fibrose no transplante de pulmão.

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Este vídeo mostra e compara dois modelos experimentais para estudar o desenvolvimento de doenças das vias aéreas obliterante (OAD) em camundongos, o modelo de transplante heterotópico e ortotópico traqueal.

Heterotópico e Transplante ortotópico traqueal em ratos usados ​​como modelos para estudar o desenvolvimento de doenças das vias aéreas obliterante

Bronquiolite obliterante é o impedimento-chave para a sobrevivência a longo prazo de transplantados de pulmão e à falta de um modelo robusto pré-clínica impede examinar imunopatogênese bronquiolite obliterante. Ao contrário de outros transplantes de órgãos sólidos, o transplante de pulmão vascularizado do mouse tem apenas recentemente foram desenvolvidos. Aqui nós mostramos o nosso modelo de bronquiolite obliterante desenvolvida de forma independente após murino de transplante de pulmão...

Desenvolvimento de bronquiolite obliterante em um modelo murino de transplante de pulmão ortotópico

A utilização de um modelo que simula a condição de doenças pulmonares em humanos é fundamental para o estudo da fisiopatologia e / ou etiologia de uma doença em particular e para o desenvolvimento da intervenção terapêutica. Aqui um método de intubação orotraqueal não invasivo que pode entregar diretamente materiais exógenos aos pulmões do rato é apresentado.

Não invasiva Intratraqueal intubação para estudar a Patologia e Fisiologia do Rato Lung

Este artigo apresenta um método rápido e simples para a administração de bleomicina diretamente na traquéia do mouse através de intubação. As principais vantagens deste método é que ele é altamente reprodutível, fácil de dominar, e não requer equipamento especializado ou tempos de recuperação longos.

Um método melhorado para rápida de intubação da traqueia em Ratos

Estenose de enxerto representa um obstáculo crítico em substituição de engenharia de tecidos das vias respiratórias. Para investigar os mecanismos celulares subjacentes estenose, utilizamos um modelo murino de substituição traqueal de engenharia de tecidos com células mononucleares de medula semeado (BM-MNC). Aqui, nós detalhe nosso protocolo, incluindo a fabricação de andaime, BM-MNC isolamento, enxerto semeadura e implantação.

A propagação e a implantação de um enxerto traqueal biossintética engenharia de tecido em um modelo do rato

Diversos modelos animais de hérnia diafragmática congênita e oclusão traqueal fetal apresentam vantagens e desvantagens em relação a questões éticas, custo, dificuldade cirúrgica, tamanho, taxas de sobrevivência e disponibilidade de ferramentas genéticas. Este modelo fornece uma nova ferramenta para estudar o impacto da oclusão traqueal e do aumento da pressão luminal no desenvolvimento pulmonar.

Modelo de oclusão traqueal fetal transuterina em camundongos

O objetivo deste manuscrito é descrever as etapas microcirúrgicas necessárias para a realização de um transplante laríngeo heterotópico em camundongos. As vantagens deste modelo de camundongo em comparação com outros modelos animais de transplante laríngeo são seu custo-efetividade e a disponibilidade de ensaios e dados imunológicos.

Um modelo heterotópico de camundongo para estudar o transplante laríngeo

Um modelo cirúrgico de camundongo para criar lesão de reperfusão (RI) de isquemia pulmonar esquerda, mantendo a ventilação e evitando a hipóxia.

Um Modelo de Rato de Intubação Orotraqueal e Cirurgia de Reperfusão de Isquemia Pulmonar Ventilada

Transplante de ilhotas isoladas foi proposto para ser um potencial tratamento para diabetes tipo 1. Aqui nós descrevemos um método para isolar ilhotas de rato pancreata e transplantá-las para o espaço subcapsular do rim.

Um método para isolamento de ilhotas murino e transplante renal subcapsular

O modelo de transplante de coração de murídeo cervical é bem adequado para imunológico, bem como estudos de lesão de reperfusão de isquemia. Nós modificamos o procedimento usando uma técnica cuff não sutura e realizou mais de 1.000 transplantes de sucesso com essa abordagem.  Aqui, nós fornecemos mais detalhes desta técnica para complementar o vídeo.

Murino Cervical Modelo de coração Transplante usando uma técnica Cuff Modificado

Aprenda o modelo de transplante traqueal intrapulmonar em camundongos para estudar doença obstrutiva das vias aéreas após transplante pulmonar. Este método ajuda pesquisadores a investigar respostas imunológicas e angiogênicas.

Transplante de Traqueia Intrapulmonar Purino: Modelo para Investigação de Doença Obliterativa das Vias Aéreas Após Transplante Pulmonar (Vídeo) | JoVE Journal

Transplante de Traqueia Intrapulmonar Purino: Modelo para Investigação de Doença Obliterativa das Vias Aéreas Após Transplante Pulmonar

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