Estabelecimento e Caracterização de Organoides Gástricos Derivados de Pacientes a partir de Biópsias do Corpo Gástrico Benigno e Epitélio Antral
January 26th, 2024
Organoides gástricos derivados de pacientes encontram uso crescente em pesquisas, mas faltam protocolos formais para gerar organoides gástricos humanos a partir de digestores unicelulares com densidade de semeadura padronizada. Este protocolo apresenta um método detalhado para a criação confiável de organoides gástricos a partir de tecido de biópsia obtido durante a endoscopia digestiva alta.
Nossa pesquisa se concentra nas causas hereditárias do câncer gástrico. Em particular, estamos interessados no câncer gástrico difuso hereditário devido a variantes causadoras de doenças no gene CDH1 ou CTNNA1. Também investigamos o papel do BRCA1 e BRCA2 no risco de câncer gástrico e na carcinogênese.
Os organoides estão sendo cada vez mais utilizados em uma variedade de domínios de pesquisa e a gastroenterologia não é exceção, então com isso surge a necessidade de padronização dessas técnicas para gerar esses organoides, em particular organoides gástricos derivados do paciente. Nosso protocolo oferece um método passo-a-passo para gerar organoides gástricos derivados do paciente de forma confiável a partir de biópsias das regiões antral e corporal do estômago. Em particular, utilizamos uma abordagem de digestão de célula única para permitir a semeadura padronizada de células em um esforço para fazer comparações confiáveis entre organoides gerados de diferentes pacientes.
Nossos achados mostram que, em comparação com organoides gástricos derivados do paciente da região do corpo do estômago, aqueles da região antral realmente crescem mais numerosos e maiores em tamanho ao longo de 20 dias após a semeadura inicial. Esses achados devem ser levados em conta por pesquisadores que procuram utilizar organoides gástricos derivados de diferentes regiões do estômago.
Visão Geral
Esta pesquisa investiga as causas hereditárias do câncer gástrico, focando em variantes nos genes CDH1 e CTNNA1. O estudo apresenta um protocolo confiável para gerar organoides gástricos derivados de pacientes a partir de tecidos de biópsia obtidos durante endoscopia superior, demonstrando diferenças nas taxas de crescimento entre organoides derivados das regiões ântral e corporal do estômago.
Componentes Principais do Estudo
Área de Pesquisa
- Causas hereditárias do câncer gástrico
- Geração de organoides gástricos
- Padronização de técnicas biológicas
Fundamentos
- Câncer gástrico difuso hereditário e variantes genéticas
- Uso de organoides na pesquisa em gastroenterologia
- Protocolos padronizados para desenvolvimento de organoides gástricos
Métodos Utilizados
- Isolamento de células únicas de biópsias de tecido gástrico
- Organoides gástricos derivados de pacientes como o modelo biológico
- Protocolos de digestão e semeadura de células em cultura
Principais Resultados
- Organoides de tecido de biópsia ântral exibem tamanho maior e taxas de crescimento em comparação com aqueles do tecido corporal
- Variações significativas na morfologia dos organoides entre diferentes pacientes
- Métodos padronizados permitem uma comparação confiável do crescimento dos organoides
Conclusões
- O estudo estabelece um método confiável para gerar organoides gástricos, auxiliando pesquisas futuras sobre o câncer gástrico.
- Os resultados destacam a importância da origem do tecido no crescimento dos organoides, o que é crucial para a reprodutibilidade experimental.
Perguntas Frequentes
Chapters in this video
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Introduction
1:20
Isolating Single Cells from Upper Endoscopy Biopsies Derived from Gastric Patients for Organoid Generation
3:36
Embedding Gastric Biopsy‐Derived Single Cells in a Basement Membrane Matrix Dome for Organoid Generation
5:37
Routine Passaging of Patient‐Derived Gastric Organoids Through Fragmentation
