Name: Perfusão Cirúrgica e Isolamento do Pâncreas Suíno para Isolamento de Ilhotas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-06-07T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Aprenda a perfusão cirúrgica e isolamento do pâncreas suíno para obtenção de ilhotas pancreáticas com alta pureza. Este método otimizado minimiza danos por isquemia e lesão mecânica.

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<meta charset="utf8"></head><body>Purificação de ilhotas suínas por perfusão cirúrgica de pâncreas suíno

<ol><li>Gillespie, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+1+diabetes%3A+pathogenesis+and+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22CMAJ%22%5BJournal%5D)">Type 1 diabetes: pathogenesis and prevention.</a> CMAJ. 175 (2), 165-170 (2006).</li>
<li>Shapiro, A. M., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+pancreatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nat Rev Endocrinol. 13 (5), 268-277 (2017).</li>
<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343 (4), 230-238 (2000).</li>
<li>Anazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+method+of+porcine+pancreas+procurement+with+arterial+flush+and+ductal+injection+enhances+islet+isolation+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Improved method of porcine pancreas procurement with arterial flush and ductal injection enhances islet isolation outcome.</a> Transplant Proc. 42 (6), 2032-2035 (2010).</li>
<li>Dufrane, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameters+favouring+successful+adult+pig+islet+isolations+for+xenotransplantation+in+pig-to-primate+models%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Parameters favouring successful adult pig islet isolations for xenotransplantation in pig-to-primate models.</a> Xenotransplantation. 13 (3), 204-214 (2006).</li>
<li>Hilling, D. E., Rijkelijkhuizen, J. K., Tons, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+islet+isolation+outcome+is+not+affected+by+the+amount+and+distribution+of+collagen+in+the+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Porcine islet isolation outcome is not affected by the amount and distribution of collagen in the pancreas.</a> Xenotransplantation. 17 (3), 250-255 (2010).</li>
<li>Lamb, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+maturation+of+viable+islets+from+partially+digested+young+pig+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">In vitro maturation of viable islets from partially digested young pig pancreas.</a> Cell Transplant. 23 (3), 263-272 (2014).</li>
<li>Otsuka, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreas+preservation+with+a+neutrophil+elastase+inhibitor%2C+alvelestat%2C+contributes+to+improvement+of+porcine+islet+isolation+and+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Pancreas preservation with a neutrophil elastase inhibitor, alvelestat, contributes to improvement of porcine islet isolation and transplantation.</a> J Clin Med. 11 (15), 4290(2022).</li>
<li>Vanderschelden, R., Sathialingam, M., Alexander, M., Lakey, J. R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cost+and+scalability+analysis+of+porcine+islet+isolation+for+islet+transplantation%3A+comparison+of+juvenile%2C+neonatal+and+adult+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Cost and scalability analysis of porcine islet isolation for islet transplantation: comparison of juvenile, neonatal and adult pigs.</a> Cell Transplant. 28 (7), 967-972 (2019).</li>
<li>Weegman, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+profiles+of+different+cooling+methods+in+porcine+pancreas+procurement%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Temperature profiles of different cooling methods in porcine pancreas procurement.</a> Xenotransplantation. 21 (6), 574-581 (2014).</li>
<li>Hart, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+an+adequate+perfusion+pressure+for+continuous+dual+vessel+hypothermic+machine+perfusion+of+the+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl+Int%22%5BJournal%5D)">Determination of an adequate perfusion pressure for continuous dual vessel hypothermic machine perfusion of the rat liver.</a> Transpl Int. 20 (4), 343-352 (2007).</li>
<li>Tullius, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accumulation+of+crystal+deposits+in+abdominal+organs+following+perfusion+with+defrosted+University+of+Wisconsin+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Accumulation of crystal deposits in abdominal organs following perfusion with defrosted University of Wisconsin solutions.</a> Am J Transplant. 2 (7), 627-630 (2002).</li>
<li>Ching, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reliable+method+for+isolation+of+viable+porcine+islet+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">A reliable method for isolation of viable porcine islet cells.</a> Arch Surg. 136 (3), 276-279 (2001).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+pig+islet+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Adult pig islet isolation.</a> J Vis Exp. (176), (2021).</li>
<li>Taylor, M. J., Baicu, S., Greene, E., Vazquez, A., Brassil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+isolation+from+juvenile+porcine+pancreas+after+24-h+hypothermic+machine+perfusion+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Islet isolation from juvenile porcine pancreas after 24-h hypothermic machine perfusion preservation.</a> Cell Transplant. 19 (5), 613-628 (2010).</li>
<li>Iwanaga, Y., Sutherland, D. E., Harmon, J. V., Papas, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreas+preservation+for+pancreas+and+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Organ+Transplant%22%5BJournal%5D)">Pancreas preservation for pancreas and islet transplantation.</a> Curr Opin Organ Transplant. 13 (4), 445-451 (2008).</li>
<li>Pratschke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+death+and+its+influence+on+donor+organ+quality+and+outcome+after+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Brain death and its influence on donor organ quality and outcome after transplantation.</a> Transplantation. 67 (3), 343-348 (1999).</li>
<li>vander Windt, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+islet+damage+after+direct+exposure+of+pig+islets+to+blood%3A+has+humoral+immunity+been+underestimated%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Early islet damage after direct exposure of pig islets to blood: has humoral immunity been underestimated.</a> Cell Transplant. 21 (8), 1791-1802 (2012).</li>
<li>Wright, M. J., Cavanagh, T. J., Fetterhoff, T. J., Wile, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+blood+content+on+porcine+pancreatic+dissociation+and+islet+yield%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Effect of blood content on porcine pancreatic dissociation and islet yield.</a> Transplant Proc. 26 (6), 3442(1994).</li>
<li>Toso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+adult+porcine+islets+of+Langerhans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Isolation of adult porcine islets of Langerhans.</a> Cell Transplant. 9 (3), 297-305 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 M NaOH, 100 mL</td><td>Millipore Sigma</td><td>1310-73-2</td><td></td></tr><tr><td>10x HBSS, 500 mL (15 a 30 &graus; C)</td> <td>Thermo Fisher</td><td>14065056</td><td></td></tr><tr><td>1x D-PBS, 500 mL</td><td>Thermo Fisher</td><td>14200075</td><td></td></tr><tr><td>1x HBSS, 1 L</td><td>Thermo Fisher</td><td>14025076</td><td></td></tr><tr><td>250 mL Tubos cônicos</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS430236-6EA</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B [50 mg]</td> <td>Millipore Sigma</td><td>PHR1662</td><td></td></tr><tr><td>Anti-séptico Povidona Iodo 10%</td> <td>Millipore Sigma</td><td>25655-41-8</td><td></td></tr><tr><td>BioRad Gradient Former</td><td>BioRad</td><td>395</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de Cálcio dihidratado</td><td>Thermo Fisher</td><td>10035-04-8</td><td></td></tr><tr><td>Processador de Células COBE</td><td>Ebay</td><td>317690&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Reservatório do circuito de digestão, garrafa Gibco, 1 L</td><td>Thermo Fisher</td><td>10341001</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Thermo Fisher</td><td>85190</td><td></td></tr><tr><td>Dithizone</td><td>Thermo Fisher</td><td>60-10-6</td><td></td></tr><tr><td>Kit de conexão de formador de gradiente</td><td>BioRad</td><td>1652008</td><td></td></tr><tr><td>Heparina [1000 U/mL]</td><td>Produtos Médicos de Emergência</td><td>0409-2720-01</td><td></td></tr><tr><td>Tampão HEPES (1 M), 100 mL</td><td>Thermo Fisher</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Albumina Sérica Humana 25%, 100 mL</td><td>Celprogen</td><td>HSA2001-25-1</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Covetrus</td><td>Item#:11695067772</td><td></td></tr><tr><td>Cetamina</td><td>Patterson</td><td>Item #:07-894-8462</td><td></td></tr><tr><td>Liberase (100 mg)</td><td>Millipore Sigma</td><td>5401020001</td><td></td></tr><tr><td>VIVO/MORTO Kit de Viabilidade/Citotoxicidade</td><td>Thermo Fisher</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>Linfólito 1.1 Meio 500 mL</td><td>Cedarlane Labs</td><td>CL5020</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex LS 16 Tubulação</td><td>Masterfle</td><td>96419-16</td><td></td></tr><tr><td>Bomba Peristáltica Masterflex</td><td>Masterflex</td><td>07522-30</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep (2 mg/mL)</td><td>Celprogen</td><td>PS-30-002</td><td></td></tr><tr><td>Pulmozyme (1 mg/mL, 2.5 mL/frasco)</td><td>Dornase Alfa</td><td>8931278</td><td></td></tr><tr><td>Meio de Recuperação, PIM(R)</td><td>Prodo Laboratories, Inc.</td><td>PIM-R001GMP</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Millipore Sigma</td><td>R8758-1L</td><td></td></tr><tr><td>Meio de Cultura Padrão, PIM(S)</td><td>Prodo Laboratories, Inc.</td><td>PIM-S001GMP</td><td></td></tr><tr><td>Tzed&trade; (Tiletamina e zolazepam) Injeção C</td><td>Patterson</td><td>Item #:07-894-6240</td><td></td></tr><tr><td>Solução da Universidade de Wisconsin (UW), 3 L</td><td>Global Transplant Solutions</td><td>1000-0046-06</td><td></td></tr><tr><td>Banho-maria</td><td>Sigma Alderich</td><td>CLS6783-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Patterson</td><td>Item #:07-891-6165</td><td></td></tr></tbody></table>

perfusão cirúrgica e isolamento do pâncreas suíno para isolamento de ilhotas

Surgical Perfusion and Isolation of the Porcine Pancreas for Islet Isolation

A configuração operatória e a laparotomia da linha média são mostradas na Figura 1. A incisão da laparotomia deve ser curvada para evitar a abertura urogenital (Figura 1B). Ao configurar o retrator, prenda o poste do afastador Omni ou Bookwalter no canto inferior esquerdo da mesa. A retração ideal inclui duas lâminas retratoras para a parede abdominal direita, duas para a parede abdominal esquerda e 1-2 para o cólon direito e intestino delgado envoltos em uma toalha estéril (Figura 1C). Podem ser utilizadas lâminas retratoras de parede corporal, esplâncnicas ou maleáveis, dependendo da disponibilidade de um assistente e da preferência do operador. Se um afastador Omni ou Bookwalter não estiver disponível, 1-2 afastadores Balfour auto-retentores podem ser usados para retrair a parede abdominal em ambos os lados. Um assistente pode então aplicar a retração no cólon direito e no intestino delgado envolto em uma toalha estéril.
A dissecção retroperitoneal realizada na Figura 2 pode ser realizada com uma mistura de dissecção romba e aguda. Embora seja importante obter controle circunferencial da VCI infrarrenal e da aorta, essa dissecção não precisa ser continuada até a bifurcação. A porção intratorácica do procedimento é a mais desafiadora tecnicamente (Figura 3), pois a lesão da VCI intratorácica ou retro-hepática pode causar sangramento significativo e obscurecer o campo operatório. Ao identificar a aorta torácica descendente, separe sem rodeios a aorta do esôfago usando o polegar e o indicador. Para evitar a avulsão de pequenas artérias intercostais e sangramento subsequente, o controle circunferencial não é essencial, desde que a aorta torácica descendente seja acessível com um espaço claramente definido para acomodar uma pinça aórtica.
A canulação da aorta infrarrenal é realizada pela técnica de Seldinger (Figura 4). Isso pode ser feito com a aorta infrarrenal pinçada proximal e distalmente (Figura 4A), ou diretamente sem pinçamento. Tenha cuidado para não inserir a agulha na parede posterior da aorta. Uma bainha maior também pode ser usada se a aorta for de tamanho suficiente. É importante purgar o ar da tubulação de extensão IV e conectar a tubulação IV da solução UW à bainha de 10Fr de forma estéril. Certifique-se de que o canal IV esteja aberto, embora o fluxo não seja iniciado até que a aorta seja pinçada (Figura 4B). Ao fazer a venotomia na VCI infrarrenal, é importante que o cirurgião primário segure com segurança a VCI usando uma pinça de DeBakey, para não perder o local da venotomia e ter um grande volume de sangue derramado no campo operatório. Uma venotomia longe do pâncreas, com a colocação imediata de sucção em piscina, mantém um campo operatório incruento com planos teciduais claros para a pancreatectomia (Figura 4C). A drenagem inicial será sangue venoso escuro, mas isso diminuirá à medida que o porco for exsanguinado e a solução de UW for perfundida através das vísceras. Certifique-se de usar um recipiente de sucção grande para esta parte do procedimento.
As vísceras e, em particular, o pâncreas, ficarão cada vez mais pálidos à medida que a solução de UW for perfundida (Figura 5A). O ducto pancreático pode ser identificado seguindo o curso do lobo duodenal para o duodeno. O ducto deve ser dividido entre dois laços de seda para evitar contaminação com conteúdo entérico (Figura 5B). Embora o parênquima pancreático deva parecer pálido e sem sangue, o tecido conjuntivo remanescente ao redor do pâncreas deve ser limpo antes do isolamento das ilhotas (Figura 5C).
O pâncreas colhido pode então passar por um processo de isolamento e purificação de ilhotas em várias etapas (Figura 6). A Figura 7A mostra a distribuição representativa do tamanho das ilhotas após o processo de isolamento e purificação das ilhotas. A Figura 7B mostra ilhotas purificadas usando microscopia de campo claro e após coloração viva / morta, com coloração verde e vermelha representando células de ilhotas viáveis e não viáveis, respectivamente. O rendimento e a pureza das ilhotas podem ser avaliados usando um contador de células de ilhotas. Os rendimentos representativos são fornecidos a partir de três isolamentos pancreáticos suínos independentes resumidos na Figura 7C.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig01.jpg"> Figura 1: Configuração operatória. (A) Suíno posicionado em decúbito dorsal com o abdome preparado de forma estéril; (B) Laparotomia da linha média feita de xifóide a púbis; (C) Retroperitônio exposto com afastador Omni no lugar. Barras de escala = 2 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig02.jpg"> Figura 2: Dissecção retroperitoneal. (A) Dissecção retroperitônio completa com controle circunferencial da VCI infrarrenal e veias renais. O retângulo amarelo é ampliado na Figura 2B; (B) Imagem ampliada da VCI infrarrenal e veias renais; (C) Veias renais amarradas. Barras de escala = 2 cm. Abreviatura: IVC = veia cava inferior. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig03.jpg"> Figura 3: Obtenção do controle supracelíaco. (A) Incisação da hemicúpula diafragmática direita. O quadrado amarelo é ampliado na Figura 3B; (B) Extensão da incisão da cúpula diafragmática direita para exposição da VCI intratorácica e da aorta torácica descendente; (C) Controle circunferencial da VCI intratorácica obtida. Barras de escala = 2 cm. Abreviatura: IVC = veia cava inferior. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig04.jpg"> Figura 4: Canulação da aorta infrarrenal, isolamento visceral e perfusão. (A) Controle proximal e distal da aorta infrarrenal obtido; (B) bainha de 10Fr colocada na aorta infrarrenal pela técnica de Seldinger; (C) Perfusão visceral via bainha aórtica infrarrenal e drenagem via venotomia e sugador de piscina em VCI infrarrenal. Barras de escala = 2 cm. Abreviatura: IVC = veia cava inferior. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig05.jpg"> Figura 5: Pancreatectomia total. (A) Vísceras tornando-se mais pálidas durante a perfusão; (B) ducto pancreático isolado; (C) Pâncreas suíno explantado. Barras de escala = 2 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig06.jpg"> Figura 6: Isolamento e purificação das ilhotas. Representação esquemática da infusão de solução enzimática, digestão do pâncreas suíno, coleta de tecidos, lavagem de células com processador de células e cultura e análise de células. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig06large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66350/66350fig07.jpg"> Figura 7: Viabilidade e rendimento representativos das ilhotas após a purificação. (A) Ilhotas suínas após imagens de campo claro ampliadas e coloração viva / morta. Verde demonstra células vivas; vermelho demonstra células mortas. Barras de escala = 100μm (B) Distribuição do histograma do tamanho das ilhotas suínas após a purificação. (C) Tabela indicando a pureza e o rendimento das ilhotas de três isolamentos de ilhotas pancreáticas suínas. Abreviatura: IEQ = equivalente de ilhotas, a unidade padrão para quantificação de ilhotas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66350/66350fig07large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Perfusão Cirúrgica e Isolamento do Pâncreas Suíno para Isolamento de Ilhotas

Pancreatic islet transplantation is an emerging treatment for type I diabetes; however, it is limited by donor matching and availability. Porcine islet ...

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Alcançar alta qualidade e quantidade adequada de ilhotas humanas é um dos pré-requisitos importantes para o transplante de ilhotas bem sucedido. Neste vídeo, descrevemos passo a passo os procedimentos para o isolamento de ilhotas pancreáticas humanas (parte I: a digestão e coleta de tecido pancreático), utilizando um método modificado automatizado.

Isolamento Islet humana Pancreatic: Parte I: Digestão e Coleta de tecido pancreático

O fornecimento de diabéticos tipo 2 ilhotas para pesquisa é insuficiente. Aqui nós compartilhamos nosso protocolo para isolar ilhotas de pacientes submetidos à pancreatectomia parcial. Esta abordagem representa um local único para a obtenção de ilhotas de diabéticos tipo 2 e clinicamente combinado não-diabéticos em número adequado para estudos básicos e clínicos.

Isolamento de Ilhotas Humanos de pacientes parcialmente pancreatectomizado

As ilhotas pancreáticas, também chamadas de ilhotas de Langerhans, são um aglomerado de células endócrinas que produzem hormônios para a regulação da glicose e outras funções biológicas importantes. Este protocolo explica um método para isolar ilhotas pancreáticas pela primeira vez perfundindo colagenase via ampola de Vater para digerir o tecido pancreático exócrino e uma centrifugação simplificada com gradiente de densidade para purificar as ilhotas de camundongos.

Isolamento de ilhotas pancreáticas por meio de perfusão de colagenase: um método enzimático para isolar células de ilhotas pancreáticas

Nós descrevemos um protocolo aqui para isolar ilhotas intactas de ratos recém-nascidos. Pâncreas foi parcialmente digerido com colagenase, seguido por lavagem e colheita manual. 20 - 80 agrupamentos de ilhéus podem ser obtidos por pâncreas de ratinhos recém-nascidos, que são adequados para vários estudos da ilhota.

Isolamento eficaz de ilhotas funcionais a partir de ratinho neonato Pâncreas

Este protocolo da isolação da ilhotas descreveu uma rota nova da injeção do colagenase para digerir o tecido exócrina e um procedimento simplificado do inclinação para purificar os ilhotas dos ratos. Envolve a digestão enzimática, separação de gradiente/purificação, e Islet mão-picking. O isolamento bem-sucedido pode produzir 250 – 350 de alta qualidade e ilhotas totalmente funcionais por mouse.

Um protocolo de alta eficiência simples para isolamento de Islet pancreático de camundongos

Engenharia de tecidos do pâncreas inteiro é um desafio por causa de suas funções endócrinas e exócrinas. Vamos mostrar um método para a dissecação de uma pâncreas de suínos intactas e o processo de decellularization bem sucedido por perfusão de detergentes Triton X-100 Deoxycholate do sódio e desoxirribonuclease.

Isolamento e Decellularization de um pâncreas todo porcino

O artigo em vídeo resume a técnica de pancreatectomia e alotransplante de pâncreas em um modelo de sobrevida de 3 dias suíno com uma descrição passo a passo do método e ênfase nas dicas e truques cirúrgicos para lidar com a precária e delicada anatomia visceral suína.

Dicas e truques cirúrgicos para realizar o transplante de pâncreas suíno

Aqui, fornecemos detalhes sobre a realização da secreção de insulina estimulada por glicose (GSIS) via perfusão através da vasculatura de camundongos com um pâncreas intacto como uma técnica adicional para avaliar a função pancreática endócrina com redução de possíveis fatores de confusão.

Secreção de insulina estimulada por glicose via perfusão através da vasculatura de camundongos com pâncreas intacto

Este estudo desenvolveu um método simplificado para extrair eficientemente ilhéus primários funcionais e células acinares do pâncreas do camundongo, oferecendo uma ferramenta valiosa para estudar a comunicação intercelular na patogênese do Diabetes Induzido por Pancreatite Aguda.

Um método simples e rápido para isolamento simultâneo de ilhotas primárias e células acinares pancreáticas primárias de camundongos

Este protocolo descreve um método padronizado para colheita cirúrgica, digestão enzimática e purificação por gradiente de densidade de ilhéus pancreáticos de rato Lewis, permitindo preparações de alto rendimento e alta pureza para uso direto em transplantes ou estudos in vitro .

Isolamento e purificação de ilhotas pancreáticas a partir de ratos Lewis usando digestão enzimática e separação por gradiente de densidade

Aprenda a perfusão cirúrgica e isolamento do pâncreas suíno para obtenção de ilhotas pancreáticas com alta pureza. Este método otimizado minimiza danos por isquemia e lesão mecânica.

Perfusão Cirúrgica e Isolamento do Pâncreas Suíno para Isolamento de Ilhotas

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