Name: Coloração com Picrosirius Red para Avaliação Histopatológica Semiquantitativa da Deposição de Colágeno em Modelos Murinos de Rejeição Crônica de Aloenxerto Pulmonar (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-21T12:10:00.000+00:00
Duration: 4 min 42 s
Description: Aprenda a avaliar a deposição de colágeno em modelos murinos de rejeição crônica de aloenxerto pulmonar usando coloração Picrosirius Red com análise semiquantitativa. Este método diferencia fibras grossas e finas.

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Todos os protocolos em animais estão em conformidade com os princípios éticos dos 3Rs para pesquisa animal sem crueldade e foram aprovados pelo comitê de ética veterinária local (Veterinäramt Kanton Zürich, Suíça, Estudo número 45/2014). Da mesma forma, os leitores devem obter permissão das instituições competentes antes de realizar qualquer procedimento em animais de laboratório.
1. Aquisição de amostras
<ol>
	<li>Realizar experimentos com animais de acordo com as necessidades individuais e respectiva aprovação ética. Um único microcirurgião realiza todas as cirurgias sem nenhum tempo adicional de isquemia prolongada. NOTA: Para uma reprodução de nossos resultados representativos, obtenha camundongos machos adultos C57BL / 6J, C57BL / 10J e BALB / c pesando 27-30 g da Charles River Laboratories. Para isoenxertos, use animais C57BL/6J como doadores e receptores. No modelo menor incompatível, transplante os pulmões do doador C57BL / 10J para receptores C57BL / 6J. No modelo principal incompatível, transplantar pulmões de doadores BALB/c para receptores C57BL/6J e injetar no pós-operatório ciclosporina (10 mg/kg/dia) e metilprednisolona (1,6 mg/kg/dia) por via subcutânea diariamente5. Use solução salina para perfusão e recupere os pulmões após 8 semanas (56 dias).</li>
	<li>Para a eutanásia, intubar o animal com um cateter 20G e ventilá-lo com O2 suplementado com 2%-3% de isoflurano. Confirme a profundidade suficiente da anestesia pela ausência de resposta a um beliscão da pata.</li>
	<li>Realize uma laparosternotomia mediana incisando a parede abdominal com uma tesoura cirúrgica e cortando o comprimento do esterno para expor o coração. Identifique a veia cava inferior e o apêndice atrial esquerdo por sua localização anatômica.</li>
	<li>Em rápida sucessão, cortar a veia cava inferior e o apêndice atrial esquerdo com tesoura cirúrgica e perfundir o animal com 3-5 mL de NaCl a 0,9% através da raiz da artéria pulmonar com uma seringa para remover todo o sangue da circulação pulmonar. NOTA: A eutanásia deve ser realizada de acordo com a respectiva aprovação ética. Outros métodos podem ser igualmente aplicados. Recomenda-se que o sangue da circulação pulmonar seja completamente removido, o que também pode ser realizado por perfusão após parada circulatória.</li>
	<li>Remova os pulmões perfundidos usando uma tesoura.</li>
	<li>Para conservação, incubar as amostras em formol a 4%. Injete a solução de formalina diretamente no brônquio e na vasculatura pulmonar. Mergulhe as amostras em formalina e deixe-as incubar por pelo menos 6 h. NOTA: Para a insuflação do pulmão com formalina, um procedimento padronizado deve ser aplicado para obter resultados comparáveis. Exemplos de protocolos para tais procedimentos são publicados em outro artigo10,11.</li>
	<li>Apare o órgão de acordo com as necessidades experimentais. Corte transversalmente os pulmões ao meio para capturar todas as partes da árvore brônquica em uma seção.</li>
	<li>Transfira as amostras para um processador automático de tecidos para desidratação em sequência alcoólica, limpando em xilol e revestimento de parafina da seguinte forma: etanol 70%, etanol 70%, etanol 80%, etanol 96%, etanol 100% (1 h cada), etanol 100%, etanol 100%, xilol (2 h cada), xilol (1 h) e parafina 3x por 2 h.</li>
	<li>Derreta a parafina e incorpore as amostras na orientação correta em de incorporação de polioximetileno. Tome cuidado para incorporar as amostras com a superfície de corte voltada para baixo. Use um micrótomo rotativo para cortar seções de 5 μm consecutivamente. Deixe as lâminas secarem por 24 h a 37 °C antes de continuar o processamento.</li>
</ol>
2. Desparafinização e hidratação de lâminas de parafina
<ol>
	<li>Remova a parafina incubando as amostras 2x em xilol 100% por 5 min cada. CUIDADO: O xilol é inflamável e perigoso para a saúde. Utilizar apenas por baixo do exaustor.</li>
	<li>Hidrate as amostras em 100% de etanol, 100% de etanol, 95% de etanol, 70% de etanol e 50% de etanol por 2 min cada. Em seguida, lave por 2 min em água destilada.</li>
</ol>
3. Coloração com Picrosirius Red
<ol>
	<li>A coloração desliza por 8 min na solução de hemalum de Meyer. Lave as lâminas por 10 min em água corrente da torneira.</li>
	<li>Incubar as lâminas durante 1 h em solução de Picrosirius Red. Para a solução de Picrosirius Red, utilize uma solução de coloração pré-misturada ou utilize 0,1% de Direct Red 80 ou Sirius Red F 3B (CI 35780) diluído em ácido pícrico saturado. CUIDADO: O ácido pícrico é inflamável e altamente explosivo e deve ser tratado com cuidado. NOTA: Existem muitos fornecedores diferentes para kits de coloração Picrosirius Red disponíveis, conforme listado na Tabela de Materiais. Esteja ciente das diferenças de preço e métodos de coloração e sempre siga as instruções dos fornecedores. Recomenda-se usar apenas kits de coloração com o índice de cores específico para Sirius Red F 3B (CI 35780).</li>
	<li>Mergulhe as lâminas 5x-10x em uma solução de ácido acético (0,5%). Agite suavemente as lâminas para remover fisicamente a solução.</li>
	<li>Desidrate as lâminas em etanol 95%, etanol 100%, etanol 100%, xilol 100% e xilol 100% por 5 min cada.</li>
	<li>Incorpore adicionando uma gota de meio de montagem em cada amostra e cubra com uma lamínula. Deixe as corrediças secarem sob um exaustor.</li>
</ol>
4. Digitalização e processamento de imagem
<ol>
	<li>Focalizar as amostras sob um microscópio óptico com software de imagem apropriado até que a imagem se torne clara e nítida. Adicione um filtro polarizador e ajuste o grau de polarização até que o fundo fique completamente escuro ou preto. Quando o fundo é o mais escuro possível, a polarização correta é alcançada. NOTA: Também é possível visualizar a coloração Picrosirius Red com luz transmitida convencional e sem filtro polarizador. Para isso, recomenda-se o uso do Sirius Red com Fast Green, pois ele tem se mostrado mais sensível do que o Sirius Red sozinho 12,13. No entanto, a microscopia polarizada é necessária para distinguir entre fibras colágenas grossas e finas.</li>
	<li>Digitalize todas as amostras completamente com ampliação de 20x e exporte conforme .tiff. Transferir para o software Fiji14. Certifique-se de limpar os slides adequadamente com antecedência e use configurações padronizadas em relação ao tempo de exposição e à intensidade da fonte de luz.</li>
	<li>Coloque a amostra manualmente e recorte-a no software usando Editar &gt; Limpar Fora. Meça a área total da superfície clicando em Analisar &gt; Medir. NOTA: A seleção do compartimento a ser medido é uma etapa crítica na criação de resultados confiáveis e comparáveis. Ao digitalizar e selecionar toda a amostra, uma boa seção transversal é exibida e os tecidos heterogêneos são considerados como um todo. No entanto, também é possível limitar-se a áreas específicas dentro das amostras, como pleura ou brônquios individuais. Lembre-se de sempre selecionar compartimentos para comparar de forma padronizada. Caso as amostras apresentem grande variabilidade na ventilação, é aconselhável excluir a área do espaço aéreo do compartimento analisado15.</li>
	<li>Meça o conteúdo total de colágeno por amostra usando o limite de cor clicando em Imagem &gt; Ajustar &gt; Limite de Cor e ajuste as configurações clicando em Analisar &gt; Analisar Partículas. Tamanho do conjunto = 1 - infinito, claro, resumir. Brilho = 35 - 255. Matiz = 2 - 130 NOTA: Uma configuração razoável dos limites de cores é fundamental para obter resultados confiáveis.</li>
	<li>Repita para fibras de colágeno grossas e finas ajustando Matiz como Fibras de Colágeno Grossas Vermelhas <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66395/66395eq01.jpg" style="margin: auto;"> (Matiz 2-30) e Fibras de Colágeno Finas Amarelo-Verde <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/66395/66395eq01.jpg" style="margin: auto;"> (Matiz 31-130). O resultado será a área de pixels manchados.</li>
	<li>Configure a macro para processamento automatizado clicando em Plug-ins &gt; Macros &gt; Gravar e repita com todas as amostras.</li>
	<li>Para receber valores finais padronizados para a área de superfície da seção transversal, divida a área de pixels manchados para todos os parâmetros pela área de superfície total, conforme medido nas etapas 4.3 e 4.5 para cada amostra, respectivamente.</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>Avaliação do colágeno na fibrose pulmonar murina usando coloração Picrosirius Red

<ol><li>Weigt, S., DerHovanessian, A., Wallace, W., Lynch, J., Belperio, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchiolitis+Obliterans+Syndrome%3A+The+Achilles%27+heel+of+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Bronchiolitis Obliterans Syndrome: The Achilles' heel of lung transplantation.</a> Semin Respir Crit Care Med. 34 (3), 336-351 (2013).</li>
<li>Verleden, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+lung+allograft+dysfunction%3A+Definition%2C+diagnostic+criteria%2C+and+approaches+to+treatment-A+consensus+report+from+the+Pulmonary+Council+of+the+ISHLT%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">Chronic lung allograft dysfunction: Definition, diagnostic criteria, and approaches to treatment-A consensus report from the Pulmonary Council of the ISHLT.</a> J Heart Lung Transplant. 38 (5), 493-503 (2019).</li>
<li>Lama, V. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+lung+transplant+research%3A+A+consensus+statement+from+the+National+Heart%2C+Lung%2C+and+Blood+Institute+workshop%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Models of lung transplant research: A consensus statement from the National Heart, Lung, and Blood Institute workshop.</a> JCI Insight. 2 (9), e93121(2017).</li>
<li>Martinu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectrum+of+chronic+lung+allograft+pathology+in+a+mouse+minor-mismatched+orthotopic+lung+transplant+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Spectrum of chronic lung allograft pathology in a mouse minor-mismatched orthotopic lung transplant model.</a> Am J Transplant. 19 (1), 247-258 (2019).</li>
<li>de Vleeschauwer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+rejection+pathology+after+orthotopic+lung+transplantation+in+mice%3A+The+development+of+a+murine+BOS+model+and+its+drawbacks%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chronic rejection pathology after orthotopic lung transplantation in mice: The development of a murine BOS model and its drawbacks.</a> PLoS One. 7 (1), e29802(2012).</li>
<li>Yamada, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+airway+fibrosis+in+orthotopic+mouse+lung+transplantation+models-An+experimental+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Chronic airway fibrosis in orthotopic mouse lung transplantation models-An experimental reappraisal.</a> Transplantation. 102 (2), e49-e58 (2018).</li>
<li>Whittaker, P., Kloner, R. A., Boughner, D. R., Pickering, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+myocardial+collagen+with+picrosirius+red+staining+and+circularly+polarized+light%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of myocardial collagen with picrosirius red staining and circularly polarized light.</a> Basic Res Cardiol. 89 (5), 397-410 (1994).</li>
<li>Puchtler, H., Waldrop, F. S., Valentine, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization+microscopic+studies+of+connective+tissue+stained+with+picro-sirius+red+FBA%5BTitle%5D)+AND+%22Beitr+Pathol%22%5BJournal%5D)">Polarization microscopic studies of connective tissue stained with picro-sirius red FBA.</a> Beitr Pathol. 150 (2), 174-187 (1973).</li>
<li>Junqueira, L. C. U., Cossermelli, W., Brentani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+staining+of+collagens+type+I%2C+II+and+III+by+Sirius+Red+and+polarization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Histol+Jpn%22%5BJournal%5D)">Differential staining of collagens type I, II and III by Sirius Red and polarization microscopy.</a> Arch Histol Jpn. 41 (3), 267-274 (1978).</li>
<li>Davenport, M. L., Sherrill, T. P., Blackwell, T. S., Edmonds, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+and+inflation+of+the+mouse+lung+for+tumor+histology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Perfusion and inflation of the mouse lung for tumor histology.</a> J Vis Exp. (162), e60605(2020).</li>
<li>Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Instillation+and+fixation+methods+useful+in+mouse+lung+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research.</a> J Vis Exp. (102), e52964(2015).</li>
<li>Segnani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histochemical+detection+of+collagen+fibers+by+Sirius+Red%2FFast+Green+is+more+sensitive+than+van+Gieson+or+Sirius+Red+alone+in+normal+and+inflamed+rat+colon%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Histochemical detection of collagen fibers by Sirius Red/Fast Green is more sensitive than van Gieson or Sirius Red alone in normal and inflamed rat colon.</a> PLoS One. 10 (12), e0144630(2015).</li>
<li>Courtoy, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+image+analysis+of+Picrosirius+Red+staining%3A+A+robust+method+for+multi-organ+fibrosis+quantification+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Digital image analysis of Picrosirius Red staining: A robust method for multi-organ fibrosis quantification and characterization.</a> Biomolecules. 10 (11), 1585(2020).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
<li>Ségard, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+fibrosis+extend+and+airspace+availability+in+lung%3A+A+semi-automativ+ImageJ%2FFiji+toolbox%5BTitle%5D)+AND+%22PloS%22%5BJournal%5D)">Quantification of fibrosis extend and airspace availability in lung: A semi-automativ ImageJ/Fiji toolbox.</a> PloS. 2 (2), e0298015(2024).</li>
<li>Zhou, X., Moore, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+section+staining+and+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Lung section staining and microscopy.</a> Bio Protoc. 7 (10), e2286(2017).</li>
<li>Herovici, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picropolychrome%3A+histological+staining+technic+intended+for+the+study+of+normal+and+pathological+connective+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Fr+Etud+Clin+Biol%22%5BJournal%5D)">Picropolychrome: histological staining technic intended for the study of normal and pathological connective tissue.</a> Rev Fr Etud Clin Biol. 8, 88-89 (1963).</li>
<li>Sweat, F., Puchtler, H., Rosenthal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sirius+Red+F3BA+as+a+stain+for+connective+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol%22%5BJournal%5D)">Sirius Red F3BA as a stain for connective tissue.</a> Arch Pathol. 78, 69-72 (1964).</li>
<li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).</li>
<li>Montes, G. S., Junqueira, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+the+Picrosirius-polarization+method+for+the+study+of+the+biopathology+of+collagen%5BTitle%5D)+AND+%22Mem+Inst+Oswaldo+Cruz%22%5BJournal%5D)">The use of the Picrosirius-polarization method for the study of the biopathology of collagen.</a> Mem Inst Oswaldo Cruz. 86, Suppl 3 1-11 (1991).</li>
<li>Rittié, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+Picrosirius+Red-polarization+detection+of+collagen+fibers+in+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Method for Picrosirius Red-polarization detection of collagen fibers in tissue sections.</a> Methods Mol Biol. 1627, 395-407 (2017).</li>
<li>Diehm, Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-enriched+hybrid+breast+reconstruction+reduces+risk+for+capsular+contracture+in+a+hybrid+breast+model%5BTitle%5D)+AND+%22Plast+Reconstr+Surg%22%5BJournal%5D)">Stem cell-enriched hybrid breast reconstruction reduces risk for capsular contracture in a hybrid breast model.</a> Plast Reconstr Surg. 152 (3), 572-580 (2023).</li>
<li>Rich, L., Whittaker, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+and+Picrosirius+Red+staining%3A+A+polarized+light+assessment+of+fibrillar+hue+and+spatial+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22Braz+J+Morphol+Sci%22%5BJournal%5D)">Collagen and Picrosirius Red staining: A polarized light assessment of fibrillar hue and spatial distribution.</a> Braz J Morphol Sci. 22 (2), 97-104 (2005).</li>
<li>Datar, U. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathologic+study+of+a+series+of+giant+cell+fibroma+using+picrosirius+red+polarizing+microscopy+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Iran+Med%22%5BJournal%5D)">Clinicopathologic study of a series of giant cell fibroma using picrosirius red polarizing microscopy technique.</a> Arch Iran Med. 17 (11), 746-749 (2014).</li>
<li>Nishat, R., Kumar, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+fibers+in+oral+submucous+fibrosis+-+A+polarizing+microscopy+study+using+two+special+stains%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Pathol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Collagen fibers in oral submucous fibrosis - A polarizing microscopy study using two special stains.</a> Indian J Pathol Microbiol. 62 (4), 537-543 (2019).</li>
<li>Lattouf, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picrosirius+red+staining%3A+a+useful+tool+to+appraise+collagen+networks+in+normal+and+pathological+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Picrosirius red staining: a useful tool to appraise collagen networks in normal and pathological tissues.</a> J Histochem Cytochem. 62 (10), 751-758 (2014).</li>
<li>López De Padilla, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picrosirius+Red+staining%3A+Revisiting+its+application+to+the+qualitative+and+quantitative+assessment+of+collagen+type+I+and+type+III+in+tendon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Picrosirius Red staining: Revisiting its application to the qualitative and quantitative assessment of collagen type I and type III in tendon.</a> J Histochem Cytochem. 69 (10), 633-643 (2021).</li>
<li>Junqueira, L. C. U., Bignolas, G., Brentani, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Picrosirius+staining+plus+polarization+microscopy%2C+a+specific+method+for+collagen+detection+in+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections.</a> Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).</li>
<li>Zheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scar+collagen+deposition+in+the+airways+of+allografts+of+lung+transplant+recipients%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Scar collagen deposition in the airways of allografts of lung transplant recipients.</a> Am J Respir Crit Care Med. 155 (6), 2072-2077 (1997).</li>
<li>Astbury, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliable+computational+quantification+of+liver+fibrosis+is+compromised+by+inherent+staining+variation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol+Clin+Res%22%5BJournal%5D)">Reliable computational quantification of liver fibrosis is compromised by inherent staining variation.</a> J Pathol Clin Res. 7 (5), 471-481 (2021).</li>
<li>Feingold, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffuse+myocardial+fibrosis+among+healthy+pediatric+heart+transplant+recipients%3A+Correlation+of+histology%2C+cardiovascular+magnetic+resonance%2C+and+clinical+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Transplant%22%5BJournal%5D)">Diffuse myocardial fibrosis among healthy pediatric heart transplant recipients: Correlation of histology, cardiovascular magnetic resonance, and clinical phenotype.</a> Pediatr Transplant. 21 (5), 12986(2017).</li>
<li>vander Ploeg, E. A., Melgert, B. N., Burgess, J. K., Gan, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+biomarkers+of+fibrosis+in+chronic+lung+allograft+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Rev+%28Orlando%29%22%5BJournal%5D)">The potential of biomarkers of fibrosis in chronic lung allograft dysfunction.</a> Transplant Rev (Orlando). 35 (3), 100626(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Ácido acético</td><td>Honeywell, Charlotte, EUA</td><td>33209</td><td></td></tr><tr><td>Axio Observer</td><td>Zeiss, Oberkochen, Alemanha</td><td>4633000956 (número de série)</td><td></td></tr><tr><td>Coverslip 1.5</td><td>Roth, Karlsruhe, Alemanha</td><td>KCY5.1</td><td></td></tr><tr><td>Formaldeído 37%</td><td>Fisher Scientific, Leicestershire, Reino Unido</td><td>F/1501/PB15</td><td></td></tr><tr><td>Solução de hemalum de Meyer</td><td>Merck, Darmstadt, Alemanha</td><td>109249</td><td></td></tr><tr><td>Picrosirius Red Solution</td><td>Morphisto, Offenbach am Main, Alemanha</td><td>13422</td><td>alternativas que podem ser usadas: ab150681, abcam, Cambridge, Reino Unido; SRS250 ScyTek Laboratories, Logan City US</td></tr><tr><td>Filtro polarizador</td><td>Zeiss, Oberkochen, Alemanha</td><td>000000-1121-813</td><td></td></tr><tr><td>Micrótomo rotativo, HistoCore AUTOCUT</td><td>Leica, Wetzlar, Alemanha</td><td>149AUTO00C1, 14051956472</td><td></td></tr><tr><td>Meio de montagem ROTI Histokitt</td><td>Roth, Karlsruhe, Alemanha</td><td>6638.1</td><td></td></tr><tr><td>ROTI Plast Parafina</td><td>Roth, Karlsruhe, Alemanha</td><td>6642.5</td><td></td></tr><tr><td>de incorporação Rotilabo, POM</td><td>Roth, Karlsruhe, Alemanha</td><td>K113.1</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus Adhesion Microscópio slide</td><td>epredia, Portsmouth, Reino Unido</td><td>J1800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Processador de Tecidos&nbsp;</td><td>Leica, Wetzlar, Alemanha</td><td>TP 1020</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fiji software versão 2.14.0/1.54f</td> Software <td>de imagem de código</td><td></td><td></td>aberto</tr><tr><td>ZEN 3.4.91</td><td>Zeiss, Oberkochen, Alemanha</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

coloração com picrosirius red para avaliação histopatológica semiquantitativa da deposição de colágeno em modelos murinos de rejeição crônica de aloenxerto pulmonar

Picrosirius Red Staining for Semiquantitative Histopathologic Evaluation of Collagen Deposition in Murine Models of Chronic Lung Allograft Rejection

O protocolo descrito acima permite uma avaliação semiquantitativa objetiva da deposição de colágeno no tecido pulmonar murino. O remodelamento fibrótico é a marca fisiopatológica da rejeição crônica após o transplante pulmonar. Portanto, a coloração Picrosirius Red foi aplicada em modelos de rejeição crônica de aloenxerto pulmonar usando transplante pulmonar ortotópico murino do lado esquerdo. O principal transplante pulmonar incompatível com MHC de um doador BALB/c para um receptor C57BL/6 sob imunossupressão leve resul...

Coloração com Picrosirius Red para Avaliação Histopatológica Semiquantitativa da Deposição de Colágeno em Modelos Murinos de Rejeição Crônica de Aloenxerto Pulmonar

Fibrosis is the pathophysiologic hallmark of chronic rejection after lung transplantation and the foremost hurdle to long-term recipient survival. Several ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este vídeo descreve a coloração com vermelho picrosirius de tecidos fibróticos para detectar deposição excessiva de colágeno em seções de tecido fibrótico. A técnica de coloração ajuda a avaliar a expressão de colágeno em doenças do tecido conjuntivo.

Coloração de polarização vermelha de Picrosirius: uma técnica para detectar fibrose em seções de tecido cardíaco usando microscopia de campo claro

Aqui, apresentamos um protocolo para estudar a imunologia da rejeição. O modelo cirúrgico apresentado relata um curto tempo operatório e uma técnica concisa. Dependendo da combinação de cepas doador-receptor, o rim transplantado pode desenvolver rejeição celular aguda ou dano crônico ao aloenxerto, definido por fibrose intersticial e atrofia tubular.

Rato Transplante Renal: Modelos de rejeição de enxertos

Streptococcus pneumoniae forma lesões microscópicas discretas e não purulentas no coração. Está delineado o protocolo para um modelo murino de formação de microlesões cardíacas. São fornecidas instruções sobre visualização de microlesões usando microscopia, discriminação entre microlesões precoces e tardias e métodos para detectar remodelação cardíaca em corações de animais convalescentes.

Visualização de<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Dentro Microle- cardíacas e remodelação cardíaca Subsequente

O objetivo deste estudo foi desenvolver um modelo murino de cicatrização de feridas queimadas. Uma queimadura térmica foi induzida na pele dorsal de camundongos usando um modelo de latão pré-aquecido. Tecido queimado foi desbridado e sobreposto com um enxerto de pele colhido da cauda de um rato doador geneticamente semelhante.

Um modelo murino de uma ferida de queimadura reconstruída com um enxerto de pele aogenética

Este protocolo descreve um método para estabelecer um modelo de silicose em camundongos através da exposição repetida a suspensões de sílica via gotejamento nasal. Este modelo pode eficiente, convenientemente e flexivelmente mimetizar o processo patológico da silicose humana com alta repetibilidade e economia.

Modelo de silicose em camundongos estabelecido por inalação repetida de pó de sílica cristalina

Estabelecemos um modelo murino de fibrose hepática crônica, que fornece um modelo animal adequado para o estudo mecanístico da atresia biliar (AB) induzida por vírus e uma plataforma para futuros tratamentos de AB.

Um Modelo Murino de Fibrose Hepática Crônica para o Estudo da Atresia Biliar

Aqui, apresentamos um protocolo para obter imagens intravitais do pulmão esquerdo de camundongo transplantado usando microscopia de dois fótons. Isso representa uma ferramenta valiosa para estudar a dinâmica e as interações celulares em tempo real após o transplante de pulmão murino.

Microscopia intravital de dois fótons do pulmão de camundongo transplantado

Modelo de camundongo de doença hepática esteatótica associada à disfunção metabólica (MASLD) com disfunção metabólica, alterações na expressão gênica hepática e alterações histopatológicas hepáticas que se assemelham à MASLD humana, incluindo fibrose que progride para fibrose avançada estágio 3. Esse modelo pode ser usado em estudos de fisiopatologia da MASLD e em estudos pré-clínicos de novas terapias.

Modelo de camundongo de doença hepática esteatótica associada à disfunção metabólica com fibrose

Este protocolo delineia um método para induzir fibrose pulmonar em camundongos por meio da administração orofaríngea repetida de bleomicina, produzindo características patológicas muito semelhantes às da fibrose pulmonar idiopática.

Modelo Murino Refinado de Fibrose Pulmonar Idiopática

Antes de tentar a cirurgia, um cirurgião novo deve ter uma formação básica em técnicas cirúrgicas e conceitos. Este artigo apresenta considerações básicas cirúrgica com ênfase em roedores.

Princípios de Cirurgia de roedores para o Cirurgião Nova

Aprenda a avaliar a deposição de colágeno em modelos murinos de rejeição crônica de aloenxerto pulmonar usando coloração Picrosirius Red com análise semiquantitativa. Este método diferencia fibras grossas e finas.

Coloração com Picrosirius Red para Avaliação Histopatológica Semiquantitativa da Deposição de Colágeno em Modelos Murinos de Rejeição Crônica de Aloenxerto Pulmonar (Vídeo) | JoVE Journal

Coloração com Picrosirius Red para Avaliação Histopatológica Semiquantitativa da Deposição de Colágeno em Modelos Murinos de Rejeição Crônica de Aloenxerto Pulmonar

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