Name: Modelo Murino de Íleo Pós-Operatório (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-12T13:10:00.000+00:00
Duration: 4 min 26 s
Description: Aprenda a estabelecer um modelo murino de íleo pós-operatório por manipulação intestinal. Este método permite estudar a fisiopatologia e avaliar novas estratégias anti-inflamatórias em camundongos.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modelo Murino para Estudo do Íleo Secundário Pós-Operatório por Manipulação Intestinal

<ol><li>Chapman, S. J., Pericleous, A., Downey, C., Jayne, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postoperative+ileus+following+major+colorectal+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Postoperative ileus following major colorectal surgery.</a> Br J Surg. 105 (7), 797-810 (2018).</li>
<li>Farro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCR2-dependent+monocyte-derived+macrophages+resolve+inflammation+and+restore+gut+motility+in+postoperative+ileus%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">CCR2-dependent monocyte-derived macrophages resolve inflammation and restore gut motility in postoperative ileus.</a> Gut. 66 (12), 2098-2109 (2017).</li>
<li>Wouters, M. M., Vicario, M., Santos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mast+cells+in+functional+GI+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">The role of mast cells in functional GI disorders.</a> Gut. 65 (1), 155-168 (2016).</li>
<li>Engel, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+helper+type+1+memory+cells+disseminate+postoperative+ileus+over+the+entire+intestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">T helper type 1 memory cells disseminate postoperative ileus over the entire intestinal tract.</a> Nat Med. 16 (12), 1407-1413 (2010).</li>
<li>Schwartz, C., Voehringer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+murine+basophils+by+flow+cytometry+and+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of murine basophils by flow cytometry and histology.</a> Methods Mol Biol. 2163, 367-375 (2020).</li>
<li>Funk, E. K., Weissbrod, P., Horgan, S., Orosco, R. K., Califano, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+experience+with+a+novel+single-port+platform+for+transoral+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Endosc%22%5BJournal%5D)">Preclinical experience with a novel single-port platform for transoral surgery.</a> Surg Endosc. 35 (8), 4857-4864 (2021).</li>
<li>Nemoto, S., Mailloux, A. W., Kroeger, J., Mulé, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OMIP-031%3A+Immunologic+checkpoint+expression+on+murine+effector+and+memory+T-cell+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">OMIP-031: Immunologic checkpoint expression on murine effector and memory T-cell subsets.</a> Cytometry A. 89 (5), 427-429 (2016).</li>
<li>Brandi, J., Wiethe, C., Riehn, M., Jacobs, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OMIP-93%3A+A+41-color+high+parameter+panel+to+characterize+various+co-inhibitory+molecules+and+their+ligands+in+the+lymphoid+and+myeloid+compartment+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">OMIP-93: A 41-color high parameter panel to characterize various co-inhibitory molecules and their ligands in the lymphoid and myeloid compartment in mice.</a> Cytometry A. 103 (8), 624-630 (2023).</li>
<li>Swidsinski, A., Weber, J., Loening-Baucke, V., Hale, L. P., Lochs, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+organization+and+composition+of+the+mucosal+flora+in+patients+with+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Spatial organization and composition of the mucosal flora in patients with inflammatory bowel disease.</a> J Clin Microbiol. 43 (7), 3380-3389 (2005).</li>
<li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> J Vis Exp. (113), e54161(2016).</li>
<li>van Bree, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+method+for+studying+postoperative+ileus+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Physiol+Pathophysiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Novel method for studying postoperative ileus in mice.</a> Int J Physiol Pathophysiol Pharmacol. 4 (4), 219-227 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 M HEPES</td><td>Thermo</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-mouse I-A/I-E (MHC-II)</td><td>biolegend</td><td>107614</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-mouse TCRb</td><td>Biolegend</td><td>109212</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7 anti-mouse CD4</td><td>Biolegend</td><td>100414</td><td></td></tr><tr><td>APC/Cy7 anti-mouse Ly6G</td><td>Biolegend</td><td>127624</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 anti-mouse CD69</td><td>Biolegend</td><td>104545</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 anti-mouse F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123132</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 785 anti-mouse/humano CD44</td><td>Biolegend</td><td>103041</td><td></td></tr><tr><td>BUV395 anti-mouse CD8a</td><td>BD</td><td>563786</td><td></td></tr><tr><td>BUV737 anti-mouse CD3e</td><td>BD</td><td>612771</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de cultura</td><td>CKX53</td><td>Olympus</td><td></td></tr><tr><td>Desoxirribonuclease I do pâncreas bovino (<forte>DNase I</forte>)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25-5G</td><td></td></tr><tr><td>DL-Ditiotreitol solução</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43816-10ML</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>EDS-100G</td><td></td></tr><tr><td>FITC anti-rato CD45</td><td>Biolegend</td><td></td><td></td>147709</tr><tr><td>FITC-dextrano (70 kWM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>FD70-100MG</td><td>Ensaio de Trânsito Gastrointestinal</td></tr><tr><td>Kit de coloração HE</td><td>solarbio</td><td>G1120</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-rato CD11b</td><td>Biolegend</td><td>101208</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-rato PD-1</td><td>Biolegend</td><td>114118</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 anti-rato CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117318</td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>GE (Pharmacia)</td> <td>17-0891-01</td><td></td></tr><tr><td>Symphony A5 Citômetro de fluxo</td><td>BD-Detecção</td><td></td> <td>e classificação de células imunes</td></tr><tr><td>Tribromoetanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Varioskan LUX</td><td>Thermo</td><td>N16699</td><td>Leitor de microplacas multimodo</td></tr><tr><td>Zombie Aqua Kit de viabilidade fixável</td><td>Biolegend</td><td>423102</td><td>Fluorescente corante de viabilidade&nbsp;</td></tr></tbody></table>

modelo murino de Íleo pós-operatório

Postoperative Ileus Murine Model

Nesse protocolo, a IOP foi induzida cirurgicamente por manipulação intestinal (MI), que é semelhante ao efeito da cirurgia clínica. No grupo sham, foi feita uma incisão sem o MI. Os camundongos POI foram sacrificados 24 horas após a cirurgia de POI, juntamente com os camundongos controle simulados. A função crítica do trato digestivo, função de trânsito de conteúdo, foi detectada por gavagem de FITC-dextrana. O modelo POI foi considerado bem-sucedido porque a intensidade do FITC aumentou na parte proximal do intestino delgado (Figura 2B). As médias dos GCs foram calculadas para quantificar a disfunção do trânsito do MI e indicar a consistência da operação (Figura 2C).
A coloração HE indicou a morfologia de diferentes segmentos do trato digestivo (Figura 3). A submucosa e a camada muscular lisa do duodeno e íleo ficaram inchadas 24 h após a indução do IOP (Figura 3A,B). Em comparação com aqueles em camundongos simulados, a coloração HE do duodeno revelou aumento da infiltração de células imunes em camundongos POI (Figura 3A).
A análise de citometria de fluxo multicolorida é o método central para analisar a proporção, o status e a função das células imunes. O tecido intestinal foi digerido com colagenase e desoxirribonuclease e separado em uma suspensão unicelular para citometria de fluxo. A estratégia de gating foi usada para determinar as proporções de células T CD3 e subpopulações relacionadas entre os LPLs (Figura 4A). O marcador de ativação e adesão CD69 e a expressão de células T CD4, células T CD8 e células T gd são reguladas positivamente em camundongos POI (Figura 4B)7. Da mesma forma, a proporção da subpopulação CD44+ PD-1+ (ativação, diferenciação terminal e marcador de exaustão) apresentou tendência crescente (Figura 4C)7. Além dos linfócitos, as proporções de subconjuntos de células mieloides (neutrófilos, células dendríticas e macrófagos) também aumentam após a cirurgia IM (Figura 4D)8.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig1v2.jpg"> 
Figura 1: Modelo murino de íleo paralítico pós-operatório. (A) Esquema do modelo murino de íleo paralítico pós-operatório. (B) Fixação do camundongo após anestesia e barbear. (C) A incisão foi exposta e coberta com uma gaze médica estéril. (D) Os tubos intestinais foram espremidos para fora da cavidade abdominal através da incisão abdominal e expostos colocando-os em gaze estéril. (E) Todo o intestino delgado foi exposto a um cotonete estéril umedecido. (F) A camada muscular foi fechada por sutura cirúrgica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig1v2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig02v2.jpg"> 
Figura 2: Ensaio de trânsito gastrointestinal para avaliação da função do trato digestivo. Às 22,5 h após a cirurgia, os camundongos simulados ou POI foram gavagados com solução de FITC-dextrana e sacrificados 90 minutos depois. (A) O trato digestivo foi dividido em 15 segmentos e numerados de acordo com a posição fisiológica. (B) Intensidade FITC de cada segmento do trato digestivo de camundongos simulados e POI. (C) Os centros geométricos do FITC-dextrano administrado foram calculados e são mostrados como gráficos de violino. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig03.jpg"> 
Figura 3: Coloração HE representativa do intestino delgado de camundongos POI. Coloração HE de seções transversais do duodeno (A) e (B) íleo de camundongos simulados e POI. Barras de escala: 100 μm ou 25 μm (imagem ampliada da inserção). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66465/66465fig04.jpg"> 
Figura 4: Análise citométrica de fluxo representativa de células imunes do intestino delgado de camundongos POI. (A) Estratégia de bloqueio por citometria de fluxo para populações de células T de tecidos intestinais delgados de camundongos POI 24 h após a cirurgia. (B) As proporções de marcadores ativos de células T CD69 + em células T CD4, células T CD8 e células T gd do intestino delgado de camundongos simulados e POI. (C) As proporções de marcadores ativos CD44 + PD-1 + entre células T CD4, células T CD8 e células T gd no intestino delgado de camundongos simulados e POI. (D) As proporções de neutrófilos (Ly6G + CD11b +), células dendríticas (CD11c + MHC-II +) e macrófagos (CD11b + F4 / 80 +) entre as células imunes vivas CD45 + Aqua- do intestino delgado de camundongos simulados e POI. O número em cada painel representa a porcentagem dos respectivos tipos de células. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66465/66465fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Modelo Murino de Íleo Pós-Operatório

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Íleo pós-operatório (POI) é uma complicação da cirurgia abdominal levando a um aumento da morbidade e permanência hospitalar prolongada. Porque estratégias profiláticas e terapêuticas faltam pesquisa intensificada é necessário. Por isso, estabeleceu um modelo de mouse padronizada e viável para o entendimento da fisiopatologia POI e estudar potenciais opções terapêuticas.

Avaliação Funcional da motilidade intestinal e inflamação da parede do intestino em Roedores: Análises em um modelo padronizado de Manipulação Intestinal

Este vídeo descreve o protocolo detalhado para ressecção intestinal em um modelo murino. Essa técnica fornece informações sobre a má absorção, o acúmulo excessivo e a toxicidade da bile induzida por ileectomia no intestino de camundongos.

Modelo de Ressecção Ileal Murina: Estudando o Metabolismo da Bílis Induzido por Ileectomia em Modelo Murino

A ressecção ileocólica é comumente realizada em várias doenças humanas; no entanto, pouco se sabe sobre o impacto da ressecção intestinal nas doenças cirúrgicas. Este artigo fornece instruções sobre a execução do procedimento em camundongos com alto sucesso, fornecendo um meio de estudar os efeitos da ressecção ileocólica em modelos de doença.

Murino ileocolic Bowel ressecção com anastomose primária

O modelo murino de obstrução ureteral unilateral irreversível (UUO) é apresentado juntamente com o modelo de UUO reversível no qual a obstrução ureteral é aliviada pela anastomose do ureter cortado na bexiga. Esses modelos permitem o estudo da inflamação e cicatrização renal, bem como a remodelação tecidual.

Um modelo murino de irreversível e reversível obstrução ureteral unilateral

Aqui nós descrevemos o procedimento detalhado de isquemia e reperfusão em ratos que resulta em lesão reprodutível sem mortalidade para incentivar a padronização da técnica em todo o campo. Este modelo de lesão por isquemia-reperfusão intestinal pode ser utilizada para estudar os mecanismos celulares e moleculares da lesão e da regeneração.

Modelo murino de isquemia-reperfusão

Reabsorção de ácidos biliares de intestino-dependente e feedback a inibição da síntese hepática de ácidos biliares é importante para a saúde e homeostase sistêmica. Neste estudo, descrevemos um modelo do rato para ressecção ileal avaliar a toxicidade no intestino de rato, overaccumulation e má-absorção induzida por ileectomy biliar.

Overaccumulation induzida por Ileectomy biliares no intestino de rato

Obstruções intestinais são um bloqueio parcial ou total do intestino que pode causar dor abdominal, náuseas, vômitos e impedindo a passagem das fezes. Este procedimento para criar obsructions parcial intestinal em camundongos é confiável em estudar os mecanismos subjacentes do crescimento celular patológica e morte no intestino.

Um modelo do rato de obstrução Intestinal parcial

Murino colostomia distal fornece um modelo murino para colite de diversão humana, uma colite linfocítica predominantemente no segmento de cólon excluído do fluxo fecal.

Murino colostomia Distal, um novo modelo de colite de diversão em camundongos C57BL/6

Nós descrevemos em detalhe um modelo clinicamente relevante do tumor das metástases do fígado do cancro colorretal (crlm) e a influência do reperfusão da isquemia do fígado (I/R) no crescimento e na metástase do tumor. Este modelo pode ajudar a compreender melhor os mecanismos subjacentes à promoção cirurgia-induzida do crescimento metastático do fígado.

Modelo murino de tumores hepáticos metastáticos no cenário de lesão de reperfusão de isquemia

A derivação duodeno-ileal de anastomose única (SADI-S) é um procedimento bariátrico emergente com importantes efeitos metabólicos. Neste artigo, apresentamos um modelo confiável e reprodutível de SADI-S em camundongos.

Modelo de Bypass Duodeno-Ileal de Anastomose Única com Gastrectomia Vertical em Camundongos

Aprenda a estabelecer um modelo murino de íleo pós-operatório por manipulação intestinal. Este método permite estudar a fisiopatologia e avaliar novas estratégias anti-inflamatórias em camundongos.

Modelo Murino de Íleo Pós-Operatório

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