Name: Analisando interações DNA-proteína com interferometria de biocamada baseada em estreptavidina (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Aprenda a usar interferometria de biocamada baseada em estreptavidina para analisar interações DNA-proteína em tempo real. Este método simplifica o estudo da afinidade de ligação e modificações pós-traducionais.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Análise quantitativa da cinética de ligação RPA-ssDNA usando métodos sem rótulos

<table><tbody><tr><td>0,5 micro tubos do centrifugador</td><td>científico</td><td>111554A</td><td></td></tr><tr><td>96 ponto preto padrão bom</td> do <td>micro ponto científico</td><td>4ti-0223</td><td></td></tr><tr><td>do oligonucleotídeo IDT</td><td></td><td></td><td></td>do dT</tr> do militante do miliampère do centrífugo do miliampère <tr><td>(BSA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153-10G</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td> <td>Ponto científico</td><td>DSD11000-10</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilenodiaminotetracético (EDTA)</td><td>Dot Scientific</td><td>DSE57020-500</td><td></td></tr><tr><td>Ácido Clorídrico&nbsp;</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>A144-500</td><td></td></tr><tr><td>Kimtec Science Kimwipes&nbsp;</td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Octeto N1 Software</td><td>Sartorius&nbsp;</td><td>1.4.0.13</td><td></td></tr><tr><td>Octeto SA Biosensor&nbsp;</td><td>Sartório&nbsp;</td><td>18-5019</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.2 (10x)</td><td>Gibco</td><td>1666711</td><td></td></tr><tr><td>Ensaio Pessoal Octeto N1 System</td><td>Sartorius&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ácido fosfórico&nbsp;</td><td>Ward's Science</td><td>470302-024</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de Sódio (NaCl)</td><td>Dot Scientific</td><td>DSS23020-5000</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Dot Scientific</td><td>DST60040-5000</td><td></td></tr><tr><td>Tween20&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>170-6531</td><td></td></tr></tbody></table>

analisando interações dna-proteína com interferometria de biocamada baseada em estreptavidina

Analyzing DNA-Protein Interactions with Streptavidin-Based Biolayer Interferometry

No BLI, a luz branca é refletida da interface da biocamada/tampão e da interface de referência interna para o espectrômetro. O padrão de interferência resultante é registrado e o deslocamento espectral é medido ao longo de um período de tempo e representado como resposta de curvas de ligação em nm. Uma figura representativa mostrando a ponta do biossensor com e sem ligação do analito e o deslocamento do comprimento de onda espectral correspondente (nm) é mostrada na Figura 1. As curvas de li...

Analisando interações DNA-proteína com interferometria de biocamada baseada em estreptavidina

Protein-DNA interactions underpin essential cellular processes. Understanding these interactions is critical for elucidating the molecular mechanisms of ...

analyzing-dna-protein-interactions-with-streptavidin-based-biolayer

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Neste vídeo, demonstramos a tecnologia de interferometria de biocamada (BLI) para detectar as interações intermoleculares entre ligantes e analitos alvo em tempo real. O BLI mede as mudanças no padrão de interferência da luz branca refletida por uma camada de ligantes imobilizados na superfície de um biossensor à medida que interagem com os analitos em solução.

Tecnologia de interferometria de biocamada para detectar interações entre ligante e analito

Os protocolos aqui descrever os ensaios cinéticos de interações proteína-proteína com Bio-camada Interferometria. Tipo F ATP sintase, que está envolvida no metabolismo da energia celular, pode ser inibida pela sua subunidade ε em bactérias. Temos adaptado Bio-camada de interferometria para estudar as interacções do complexo catalítico com o domínio C-terminal do inibidor ε.

Interferometria Bio-layer para Medição Cinética de interações proteína-proteína e alostéricas Ligante Effects

Aqui nós descrevemos os instrumentos e métodos para a detecção de moléculas de proteína única fluorescently rotulados interagindo com uma única molécula de DNA suspenso entre duas microesferas opticamente presos.

Combinando uma única molécula de Manipulação e imagem para o estudo das interações proteína-DNA

Aqui nós apresentamos um protocolo para monitorar a montagem e desmontagem da toxina antraz usando interferometria biolayer (BLI). Na sequência de montagem/desmontagem na superfície biosensor, os grandes complexos de proteínas são liberados da superfície para visualização e identificação dos componentes dos complexos usando microscopia eletrônica e espectrometria de massa, respectivamente.

Analisando a dinâmica da proteína montada sobre e libertado da interferometria Biolayer Biosensor usando espectrometria de massa e de microscopia eletrônica

As interações de fatores de transcrição (TFs) com a RNA polimerase são geralmente estudadas usando ensaios de pulldown. Nós aplicamos uma tecnologia da interferometria de Biolayer (BLI) para caracterizar a interação de GrgA com o polymerase do RNA do chlamydial. Comparado aos ensaios de pulldown, o BLI detecta associação e dissociação em tempo real, oferece maior sensibilidade e é altamente quantitativo.

Aplicação de interferometria Biolayer (BLI) para o estudo de interações proteína-proteína em transcrição

flexibilidade conformacional desempenha um papel crucial na função da proteína. Aqui, nós descrevemos o uso de espectrometria de massa por ionização por electropulverização resolvida no tempo acoplado a troca de hidrogénio-deutério para sondar as rápidas mudanças estruturais que conduzem a função de proteínas ordenadas e desordenadas.

resolvida no tempo com ionização por electrospray Hidrogénio-deutério troca Espectrometria de Massa para estudar a estrutura e dinâmica das proteínas

Este protocolo descreve a separação de complexos funcionais de cadeia de transporte de elétrons mitocondriais (Cx) IV e supercomplexos usando eletroforese nativa para revelar informações sobre sua montagem e estrutura. O gel nativo pode ser submetido a imunotransferência, ensaios em gel e purificação por eletroeluição para caracterizar ainda mais complexos individuais.

Analisando supercomplexos da cadeia de transporte de elétrons mitocondrial com eletroforese nativa, ensaios em gel e eletroeluição

Apresentamos um protocolo para a rápida caracterização da biomolecular de dobramento e vinculação interações com ligantes termolábil utilizando Calorimetria exploratória diferencial.

Medição de perfis Biomolecular DSC com ligantes termolábeis para caracterizar rapidamente de dobramento e vinculação de interações

O protocolo aqui descreve as interações da proteína de canal de íon hEAG1 purificado com a pequena molécula lipídica ligante fosfatidilinositol 4, 5-bisfosfato (PIP2). A medida demonstra que BLI poderia ser um método potencial para rastreio de ligante de canal novela pequena molécula íon.

Capturando a cinética de interação de uma proteína de canal iônico com pequenas moléculas por ensaio de interferometria de Bio-camada

Mutagenesis local-dirigido é uma técnica usada para introduzir mutações específicas no Ácido desoxirribonucleico (DNA). Este protocolo descreve como fazer o mutagenesis local-dirigido com um 2-passo e passo 3-cadeia da polimerase (PCR) com base em abordagem, que é aplicável a qualquer fragmento de DNA de interesse.

Mutagenesis local-dirigido para In Vitro e In Vivo experimentos exemplificados com interações de RNA em Escherichia Coli

Aprenda a usar interferometria de biocamada baseada em estreptavidina para analisar interações DNA-proteína em tempo real. Este método simplifica o estudo da afinidade de ligação e modificações pós-traducionais.

Analisando interações DNA-proteína com interferometria de biocamada baseada em estreptavidina

Explorar mais vídeos