Name: Separação Rápida e Exibição de Agentes Fibrinogenolíticos Ativos em Sipunculus nudus por meio de Eletroforese em Gel de Fibrinogênio-Poliacrilamida (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T13:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: Aprenda a separar agentes fibrinogenolíticos ativos em Sipunculus nudus usando eletroforese em gel de fibrinogênio-poliacrilamida. Este método simplificado acelera a descoberta de novos fármacos trombolíticos para doenças cardiovasculares.

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<meta charset="utf8"></head><body>Revelando agentes fibrinogenolíticos em vermes de amendoim com fibrinogênio-PAGE

<ol><li>Bikdeli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COVID-19+and+thrombotic+or+thromboembolic+disease%3A+Implications+for+prevention%2C+antithrombotic+therapy%2C+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">COVID-19 and thrombotic or thromboembolic disease: Implications for prevention, antithrombotic therapy, and follow-up.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (23), 2950-2973 (2020).</li>
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<li>Sharma, N., Sharma, R., Rajput, Y. S., Mann, B., Singh, R., Gandhi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+methods+for+milk+proteins+on+polyacrylamide+gel+electrophoresis%3A+Critical+analysis+and+options+for+better+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22International+Dairy+Journal%22%5BJournal%5D)">Separation methods for milk proteins on polyacrylamide gel electrophoresis: Critical analysis and options for better resolution.</a> International Dairy Journal. 114, 104920(2021).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1&nbsp; M Tris-HCl (pH 6,8)</td><td>Solarbio</td><td>T1020</td><td></td></tr><tr><td>1,5 M Tris-HCl (pH 8,8)</td><td>Solarbio</td><td>T1010</td><td></td></tr><tr><td>30% Acrilamida/Bis-acrilamida</td><td>Biosharp</td><td>BL513B</td><td></td></tr><tr><td>Persulfato de amônio</td><td>XiLONG SCIENTIFIC</td><td>7727-54-0</td><td></td></tr><tr><td>Copo</td><td>PYREX</td><td>2-9425-02</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de Centrífuga (1,5 mL)</td><td>Biosharp</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de Temperatura Constante</td><td>JINGHONG</td><td>JHS-400</td><td></td></tr><tr><td>Coomas Solução de coloração azul brilhante</td><td>Beyotime</td><td>P0017F</td><td></td></tr><tr><td>Balança Analítica Eletrônica</td><td>DENVER</td><td>TP-213</td><td></td></tr><tr><td>Fibrinogen</td><td></td><td>Solarbio F8051</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de pipeta de carregamento de gel, Bulk</td><td>Biosharp</td><td>BS-200-GTB</td><td></td></tr><tr><td>Homogeneizador</td><td>AHS</td><td>ATS-1500</td><td></td></tr><tr><td>Oscilador de rotação horizontal</td><td>NuoMi</td><td>NMSP-600</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Referência</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell</td><td>BIO-RAD</td><td>165-8000~165-8007</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N',N'-Tetrametiletilenodiamina</td><td>Sigma</td><td>T9281</td><td></td></tr><tr><td>Ponta de pipeta (1 mL)</td><td>Ponta de Pipeta Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(10 &micro; L)</td>Ponta de Pipeta <td>Axygene</td><td>T-10XT-C</td><td></td></tr><tr><td>(200 &micro; L)</td><td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>Pipetador (1 mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>Pipetador (10&micro; L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZX98775</td><td></td></tr><tr><td>Pipetador (200 &micro; L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>Pipetador (50 &micro; L)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY15331</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga Refrigerada</td><td>cence</td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>Dodecil sulfato de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900859</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Solarbio</td><td>T8060</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Solarbio</td><td>T8230</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr></tbody></table>

separação rápida e exibição de agentes fibrinogenolíticos ativos em sipunculus nudus por meio de eletroforese em gel de fibrinogênio-poliacrilamida

Rapid Separation and Display of Active Fibrinogenolytic Agents in Sipunculus nudus through Fibrinogen-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

Após a eletroforese, todas as bandas do marcador foram claramente exibidas. As pistas de carregamento 1x SDS-PAGE mostraram apenas bandas de 10 kDa (azul de bromofenol). As amostras de sFE e verme do amendoim não apresentaram bandas observáveis (Figura 1). Embora as bandas das amostras não sejam visíveis, o desempenho do marcador e do azul de bromofenol indicou que a eletroforese foi bem-sucedida, e as amostras foram separadas de acordo com seu peso molecular.
Embora todo o gel tenha ficado azul devido à coloração, a descoloração tornou transparente a área onde o fibrinogênio foi degradado por agentes fibrinogenolíticos. Em comparação com o marcador, a sFE indicou uma banda fibrinogenolítica ativa próxima a 25 kDa. O homogeneizado do sem-fim do amendoim apresentou 25 kDa, 33 kDa, 43 kDa e uma série de bandas maiores que 70 kDa (Figura 2). Os resultados indicaram que o sFE continha apenas um componente fibrinogenolítico de 25 kDa, mas o homogeneizado do verme do amendoim continha componentes sFE e outros agentes fibrinogenolíticos. A Figura 1 suplementar é um exemplo de uma imagem de gel mostrando o marcador em azul profundo e as amostras alvo como faixas brilhantes.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig01.jpg"> Figura 1: Gel após eletroforese. M: Marcador; Pista 1: 1x buffer de carregamento SDS-PAGE; Pista 2: sFE; Pista 3: 1x buffer de carregamento SDS-PAGE; Pista 4: homogeneizado de sem-fim de amendoim; Pista 5: 1x buffer de carregamento SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig02.jpg"> Figura 2: Gel após a descoloração. M: Marcador; Pista 1: 1x buffer de carregamento SDS-PAGE; Pista 2: sFE; Pista 3: 1x buffer de carregamento SDS-PAGE; Pista 4: homogeneizado de sem-fim de amendoim; Pista 5: 1x buffer de carregamento SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Figura suplementar 1: Imagem de gel mostrando o marcador em azul profundo e as amostras alvo como faixas brilhantes. M: Marcador; Pista 1: 1x buffer de carregamento SDS-PAGE; Pista 2: sFE; Pista 3: 1x buffer de carregamento SDS-PAGE; Pista 4: homogeneizado de sem-fim de amendoim; Pista 5: 1x buffer de carregamento SDS-PAGE. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">Clique aqui para baixar este arquivo.</a>

Separação Rápida e Exibição de Agentes Fibrinogenolíticos Ativos em Sipunculus nudus por meio de Eletroforese em Gel de Fibrinogênio-Poliacrilamida

Fibrinogenolytic agents that can dissolve fibrinogen directly have been widely used in anti-coagulation treatment. Generally, identifying new ...

rapid-separation-display-active-fibrinogenolytic-agents-sipunculus

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Este vídeo demonstra o protocolo de um ensaio in vitro angiogênese que recapitula vários estágios de angiogênese. Lapso de tempo imagens de germinação, formação de lúmen, ramificação e anastomose - características-chave da angiogênese - são mostrados.

Otimizado de fibrina Gel Assay Bead para o Estudo da angiogênese

Neste vídeo, demonstramos um método de eletroforese em gel bidimensional que separa proteínas individuais de uma mistura complexa de proteínas obtida de tecidos tumorais de adenoma hipofisário humano não funcional (NFPA). As proteínas são separadas com base em sua carga elétrica na primeira dimensão e posteriormente separadas com base em pesos moleculares na segunda dimensão.

Eletroforese em gel de poliacrilamida bidimensional: uma técnica de separação para análise de proteínas em mistura de proteínas complexas com base na carga e no peso molecular

Este vídeo demonstra o uso de um espectrofotômetro UV-visível para monitorar a formação de coágulos de fibrina insolúveis em função da mudança na turbidez da solução. O espectrofotômetro UV-visível mede a absorbância da solução ao longo do tempo, o que representa a mudança de turbidez devido à formação de coágulos de fibrina insolúveis.

Espectroscopia UV-Visível para Monitorar a Formação de Coágulos de Fibrina

O objetivo é fracionar e isolar pequenas moléculas bioativas, peptídeos de um complexo extrato vegetal e proteínas de micróbios patogênicos, empregando o método de focalização isoelétrica de fase líquida (IEF). Além disso, as moléculas separadas foram identificadas e sua bioatividade confirmada.

Separação de Pequenas Moléculas Bioativas, Peptídeos de Fontes Naturais e Proteínas de Micróbios pelo Método De Foco Isoelétrico Preparatório (IEF)

Este relatório descreve técnicas para isolar e purificar glicosaminoglycanos sulfatos (GAGs) de amostras biológicas e uma abordagem de eletroforese de gel de poliacrilamida para aproximar seu tamanho. Os GAGs contribuem para a estrutura tecidual e influenciam os processos de sinalização através da interação eletrostática com proteínas. O comprimento do polímero GAG contribui para sua afinidade vinculante para ligantes cognatos.

Detecção de glicosaminoglicanos por Electrophoresis gel poliacrilamida e coloração de prata

Aqui, apresentamos um método de purificação por afinidade de uma enzima fibrinolítica de Sipunculus nudus que é simples, barato e eficiente.

Purificação por Afinidade de uma Enzima Fibrinolítica de Sipunculus nudus

O experimento usado aqui mostra um método de docking molecular combinado com ensaio de deslocamento térmico celular para prever e validar a interação entre pequenas moléculas e alvos proteicos.

Predição de Alvos de Proteínas e Validação de Compostos de Moléculas Pequenas

As proteinases são vitais para a patogênese bacteriana, permitindo a invasão e a evasão imunológica. A extração em uma única etapa de proteínas citoplasmáticas e de membrana de bactérias em sua forma ativa é angustiante. Este artigo em vídeo demonstra a extração de proteínas celulares inteiras de Leptospira para análise de zimografia para detectar e caracterizar gelatinases.

Extração em uma etapa e análise zimográfica de gelatinases bacterianas

Este trabalho descreve um ensaio microfluídico que utiliza o estresse de cisalhamento para desencadear a formação de trombos no sangue e caracteriza o trombo por múltiplas dimensões de leitura. O ensaio pode medir a tendência protrombótica de amostras de sangue e, portanto, é útil no diagnóstico de doenças, descoberta de fármacos, bem como em estudos mecanicistas básicos relacionados à trombose.

Ensaio de Perfil de Trombo: Uma Plataforma Baseada em Microfluídica para Caracterização Abrangente da Trombogênese Biomecânica

Este protocolo descreve o Ensaio de Hemostase de Nijmegen, que permite a medição simultânea e resolvida no tempo da geração de trombina e plasmina para fornecer uma avaliação integrada da coagulação e fibrinólise. O ensaio visa melhorar a caracterização do equilíbrio hemostático em ambientes de pesquisa e clínicos além do escopo dos testes hemostáticos convencionais.

O ensaio de hemostase de Nijmegen: Medição Simultânea de Geração de Trombina e Plasmina em um Único Poço

Aprenda a separar agentes fibrinogenolíticos ativos em Sipunculus nudus usando eletroforese em gel de fibrinogênio-poliacrilamida. Este método simplificado acelera a descoberta de novos fármacos trombolíticos para doenças cardiovasculares.

Separação Rápida e Exibição de Agentes Fibrinogenolíticos Ativos em Sipunculus nudus por meio de Eletroforese em Gel de Fibrinogênio-Poliacrilamida (Vídeo) | JoVE Journal

Separação Rápida e Exibição de Agentes Fibrinogenolíticos Ativos em Sipunculus nudus por meio de Eletroforese em Gel de Fibrinogênio-Poliacrilamida

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