Name: Avaliação da quebra da barreira hematoencefálica em um modelo de camundongo com lesão cerebral traumática leve (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-18T13:05:00.000+00:00
Duration: 5 min 19 s
Description: Aprenda a avaliar a quebra da barreira hematoencefálica em modelo de camundongo após lesão cerebral traumática leve induzida por ondas de choque. Este método utiliza corantes fluorescentes duplos para visualizar a dinâmica temporal da integridade da BBB.

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<meta charset="utf8"></head><body>Visualização baseada em corante fluorescente da quebra da barreira hematoencefálica em camundongos

<ol><li>Sweeney, M. D., Zhao, Z., Montagne, A., Nelson, A. R., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier%3A+From+physiology+to+disease+and+back%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier: From physiology to disease and back.</a> Physiol Rev. 99 (1), 21-78 (2019).</li>
<li>Kabu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blast-associated+shock+waves+result+in+increased+brain+vascular+leakage+and+elevated+ros+levels+in+a+rat+model+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Blast-associated shock waves result in increased brain vascular leakage and elevated ros levels in a rat model of traumatic brain injury.</a> PLoS One. 10 (5), e0127971(2015).</li>
<li>Kuriakose, M., Rama Rao, K. V., Younger, D., Chandra, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+and+spatial+effects+of+blast+overpressure+on+blood-brain+barrier+permeability+in+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Temporal and spatial effects of blast overpressure on blood-brain barrier permeability in traumatic brain injury.</a> Sci Rep. 8 (1), 8681(2018).</li>
<li>Yeoh, S., Bell, E. D., Monson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+blood-brain+barrier+disruption+in+primary+blast+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Distribution of blood-brain barrier disruption in primary blast injury.</a> Ann Biomed Eng. 41 (10), 2206-2214 (2013).</li>
<li>Readnower, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+blood-brain+barrier+permeability%2C+oxidative+stress%2C+and+activated+microglia+in+a+rat+model+of+blast-induced+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Increase in blood-brain barrier permeability, oxidative stress, and activated microglia in a rat model of blast-induced traumatic brain injury.</a> J Neurosci Res. 88 (16), 3530-3539 (2010).</li>
<li>Shetty, A. K., Mishra, V., Kodali, M., Hattiangady, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+dysfunction+and+delayed+neurological+deficits+in+mild+traumatic+brain+injury+induced+by+blast+shock+waves%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier dysfunction and delayed neurological deficits in mild traumatic brain injury induced by blast shock waves.</a> Front Cell Neurosci. 8, 232(2014).</li>
<li>Nishii, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evans+blue+and+fluorescein+isothiocyanate-dextran+double+labeling+reveals+the+precise+sequence+of+vascular+leakage+and+glial+responses+after+exposure+to+mild-level+blast-associated+shock+waves%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Evans blue and fluorescein isothiocyanate-dextran double labeling reveals the precise sequence of vascular leakage and glial responses after exposure to mild-level blast-associated shock waves.</a> J Neurotrauma. 40 (11-12), 1228-1242 (2023).</li>
<li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+and+low+molecular+weight+fluorescein+isothiocyanate+%28FITC%29-dextrans+to+assess+blood-brain+barrier+disruption%3A+Technical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">High and low molecular weight fluorescein isothiocyanate (FITC)-dextrans to assess blood-brain barrier disruption: Technical considerations.</a> Transl Stroke Res. 2 (1), 106-111 (2011).</li>
<li>Saunders, N. R., Dziegielewska, K. M., Møllgård, K., Habgood, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+for+blood-brain+barrier+integrity%3A+How+appropriate+is+Evans+blue+in+the+twenty-first+century+and+what+are+the+alternatives%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Markers for blood-brain barrier integrity: How appropriate is Evans blue in the twenty-first century and what are the alternatives.</a> Front Neurosci. 9, 385(2015).</li>
<li>Manaenko, A., Chen, H., Kammer, J., Zhang, J. H., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+Evans+blue+injection+routes%3A+Intravenous+versus+intraperitoneal%2C+for+measurement+of+blood-brain+barrier+in+a+mice+hemorrhage+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison Evans blue injection routes: Intravenous versus intraperitoneal, for measurement of blood-brain barrier in a mice hemorrhage model.</a> J Neurosci Methods. 195 (2), 206-210 (2011).</li>
<li>Yen, L. F., Wei, V. C., Kuo, E. Y., Lai, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+patterns+of+cerebral+extravasation+by+Evans+blue+and+sodium+fluorescein+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Distinct patterns of cerebral extravasation by Evans blue and sodium fluorescein in rats.</a> PLoS One. 8 (7), e68595(2013).</li>
<li>Kawai, S., Takagi, Y., Kaneko, S., Kurosawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+three+types+of+mixed+anesthetic+agents+alternate+to+ketamine+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Effect of three types of mixed anesthetic agents alternate to ketamine in mice.</a> Exp Anim. 60 (5), 481-487 (2011).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+restraint+and+common+compound+administration+routes+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats.</a> J Vis Exp. 67, e2771(2012).</li>
<li>Satoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+hydrogen+prevents+social+deficits+and+depression-like+behaviors+induced+by+low-intensity+blast+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Molecular hydrogen prevents social deficits and depression-like behaviors induced by low-intensity blast in mice.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 77 (9), 827-836 (2018).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> J Vis Exp. 65, e3564(2012).</li>
<li>Selever, J., Kong, J. Q., Arenkiel, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+approach+to+high-resolution+fluorescence+imaging+in+semi-thick+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A rapid approach to high-resolution fluorescence imaging in semi-thick brain slices.</a> J Vis Exp. 53, e2807(2011).</li>
<li>Jiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+sensitive+antigen+retrieval+method+for+free-floating+and+slide-mounted+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple and sensitive antigen retrieval method for free-floating and slide-mounted tissue sections.</a> J Neurosci Methods. 93 (2), 149-162 (1999).</li>
<li>Nagaraja, T. N., Keenan, K. A., Fenstermacher, J. D., Knight, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+leakage+patterns+of+fluorescent+plasma+flow+markers+after+transient+focal+cerebral+ischemia+suggest+large+openings+in+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Acute leakage patterns of fluorescent plasma flow markers after transient focal cerebral ischemia suggest large openings in blood-brain barrier.</a> Microcirculation. 15 (1), 1-14 (2010).</li>
<li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+blood-brain-barrier+leakage+using+a+combination+of+Evans+blue+and+high+molecular+weight+fitc-dextran%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantifying blood-brain-barrier leakage using a combination of Evans blue and high molecular weight fitc-dextran.</a> J Neurosci Methods. 325, 108349(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Solução tampão neutro de formalina a 10%</td><td>FUJIFILM Wako Chemicals</td><td>062-01661</td><td></td></tr><tr><td>Anti GFAP, Coelho</td><td>DAKO-Agilent</td><td>IR524</td><td></td></tr><tr><td>Anti Iba1, Coelho</td><td>FUJIFILM Wako Chemicals</td><td>019-19741</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secundário de adsorção cruzada anti-rato IgG de frango (H + L), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-21200</td><td></td></tr><tr><td>Cryo Mount</td><td>Muto Pure Chemicals</td><td>33351</td><td>meio de congelamento de tecidos</td></tr><tr><td>Domitor</td><td>Orion Corporation</td><td></td><td>medetomidina</td></tr><tr><td>IgG anti-coelho de burro (H+L) Anticorpo secundário altamente adsorvido cruzado, Alexa Fluor 546</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A10040</td><td></td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24-well Poliestireno Fundo Plano Transparente Não Tratado Placa de Cultura de Células, com Tampa, Embalada Individualmente, Estéril, 50/Caixa</td><td>CORNING</td><td>351147</td><td></td></tr><tr><td>Isotiocianato de Fluoresceína&ndash; peso médio de mol de dextrano 40.000</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>FD40S</td><td>FITC-dextran</td></tr><tr><td>Prato de Base de Vidro 27mm (Vidro No.1)</td><td>AGC TECHNO GLASS</td><td>3910-035</td><td>Prato de fundo de vidro de 35 mm</td></tr><tr><td>IX83 Microscópio Invertido</td><td>OLYMPUS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MAS Lâminas de Microscópio de Adesão Hidrofílica</td><td>Matsunami Glass</td><td>MAS-04</td><td></td></tr><tr><td>Matsunami&nbsp; Tampa de Vidro (No.1)&nbsp; 18 x 18mm</td><td>Matsunami Glass</td><td>C018181</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam Injection 10mg [SANDOZ]</td><td>Sandoz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído EMPROVE ESSENTIAL DAC</td><td>Merck Millipore</td><td>1.04005.1000</td><td></td></tr><tr><td>Bomba Peristáltica</td><td>ATTO</td><td>SJ-1211 II-H</td><td></td></tr><tr><td>ROEDOR BRAIN MATRIX Adult Mouse, 30 g, Coronal</td><td>ASI INSTRUMENTS</td><td>RBM-2000C</td><td>brain slicer</td></tr><tr><td>Vetorphale</td><td>Meiji Saúde Animal</td><td>VETLI5</td><td>butorfanol</td></tr></tbody></table>

avaliação da quebra da barreira hematoencefálica em um modelo de camundongo com lesão cerebral traumática leve

Evaluation of Blood-Brain Barrier Breakdown in a Mouse Model of Mild Traumatic Brain Injury

A Figura 1A mostra o curso do tempo de injeção do corante em relação ao início da BSW, com um pico de sobrepressão de 25 kPa. No protocolo 'Pós', a solução de azul de Evans foi administrada por via intravascular 2 h antes da perfusão com dextrana FITC, que foi realizada 6 h, 1 dia, 3 dias e 7 dias após a exposição ao BSW. No protocolo 'Pré', a solução de azul de Evans foi injetada imediatamente antes da exposição ao BSW. No protocolo 'Pós', espera-se que a concentração de azul de Evans atinja seu máximo aproximadamente 2 h antes da fixação da perfusão, enquanto no protocolo 'Pré', espera-se que atinja seu máximo por volta do momento da exposição à BSW (Figura 1B). A concentração de FITC-dextrano nos vasos hematoencefálicos foi mantida constante por 2 min durante a perfusão.
A marcação azul de Evans mostrou que a quebra da BHE começou dentro de 6 h e continuou até 7 dias após a exposição à BSW (Figura 2A). Notavelmente, a quebra da BHE não ocorreu imediatamente após a exposição à BSW, pois não houve extravasamento do corante azul de Evans em 3 h no protocolo 'Pré' (Figura 2B). Surpreendentemente, a marcação de longo prazo com azul de Evans indicou sua natureza cumulativa no protocolo 'Pré' (Figura 2B)7.
O uso de dois corantes distintos, cada um introduzido em intervalos de 2 h ou mais, permitiu o exame das mudanças temporais na integridade da BHE comparando sua distribuição. A Figura 3 mostra imagens de fluorescência dos cortes que exibiram uma diferença significativa na distribuição do azul de Evans e do FITC-dextrano.
Numerosos pontos de fluorescência de vários tamanhos foram observados. Embora alguns pontos quentes fossem brilhantes o suficiente para se classificar entre os 0,1% principais dos pixels, muitos eram apenas um pouco mais brilhantes do que os tecidos circundantes. A discrepância entre os corantes sugere que as mudanças ocorreram dentro desse intervalo. Os pontos quentes exibindo apenas fluorescência azul de Evans indicaram quebra contínua de BBB no momento da injeção de azul de Evans, que foi posteriormente reparada pela injeção de dextrana FITC. Em contraste, os pontos de acesso mostrando apenas fluorescência FITC-dextrana sugeriram que a ruptura do BBB ocorreu entre as duas injeções de corante. Por fim, os pontos quentes que exibem fluorescência de ambos os corantes indicaram quebra contínua do BBB durante todo o período de injeção.
A Figura 4A apresenta o número de pontos de acesso positivos para o azul de Evans (incluindo os pontos de acesso duplo-positivos de Evans somente azul e azul de Evans/FITC-dextrano), FITC-dextrano (incluindo os pontos de acesso duplo-positivos apenas de FITC-dextrana e azul de Evans/FITC-dextrano) ou ambos os corantes (apenas pontos de acesso duplo-positivos de azul de Evans/FITC-dextrano). No protocolo 'Pré' às 3 h, foram observados vários hotspots somente FITC-dextrana. Às 6 h e 1 dia no protocolo 'Post', foram detectados pontos quentes somente azul de Evans e somente dextrana FITC. No entanto, aos 3 dias e 7 dias no protocolo 'Pós', os hotspots foram predominantemente positivos para ambos os corantes. Esses achados sugerem que a quebra da BHE ocorreu em 3 h, foi remodelada em 1 dia e persistiu até 7 dias após a exposição à BSW (Figura 4B). É importante ressaltar que a extensão da quebra do BBB tende a diminuir em 7 dias, como mencionado anteriormente.
Após a conclusão dos experimentos de extravasamento do corante, foi realizada a coloração imuno-histoquímica das fatias7. As imagens imuno-histoquímicas foram consistentemente comparadas com as dos extravasamentos de corante, confirmando que o efeito de carry-over das substâncias fluorescentes foi praticamente insignificante7. Conforme mostrado na Figura 5, aglomerados de astrócitos reativos estavam intimamente associados a locais de quebra de BBB. Outras observações revelaram que a micróglia ativada e amebóide estava presente ao lado de astrócitos reativos 3 dias após a exposição à BSW.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig01.jpg"> 
Figura 1: Desenho experimental. (A) Curso de tempo do experimento. A solução de azul de Evans foi injetada por via intravenosa após (protocolo 'Pós') ou imediatamente antes (protocolo 'Pré') exposição à BSW, enquanto o dextrano FITC foi perfundido por via transcárdica por 2 min antes da fixação. (B) Concentrações esperadas de azul de Evans e FITC-dextrano nos vasos sanguíneos nos protocolos 'Pós' e 'Pré', respectivamente. BSW, ondas de choque induzidas por explosão; FITC, isotiocianato de fluoresceína Essa figura é adaptada de Nishii et al.7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig02.jpg"> 
Figura 2: Comparação da intensidade de fluorescência em fatias de cérebro. A intensidade de fluorescência dos 0,1% mais brilhantes dos pixels no cérebro foi avaliada em todas as 12 fatias e comparada entre as condições 'Pós' (A) e 'Pré' (B). A variabilidade e a significância das diferenças são indicadas. xxx denota p &lt; 0,001; xxxx denota p &lt; 0,0001 (valores de p do teste F). *p &lt; 0,05; p &lt; 0,0001 (análise de variância com teste post hoc de comparações múltiplas de Dunnett). Essa figura é adaptada de Nishii et al.7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig03.jpg"> 
Figura 3: Quebra da BBB observada em vários pontos de tempo usando marcação dupla com azul de Evans e FITC-dextrano. São mostradas as imagens azul de Evans (magenta), FITC-dextrano (verde) e mescladas. Os protocolos de injeção de corante são apresentados no lado esquerdo. Alguns hotspots mostraram fluorescência predominante de azul de Evans (seta) ou FITC-dextrano (pontas de setas). Os asteriscos indicam o plexo coróide e os vasos relacionados. BHE, barreira hematoencefálica; FITC, isotiocianato de fluoresceína; CVO, órgãos circunventriculares do terceiro ventrículo. Barra de escala: 1 mm. Essa figura é adaptada de Nishii et al.7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig04.jpg"> 
Figura 4: Quantificação dos pontos de fluorescência. (A) Números de pontos quentes positivos para azul de Evans (magenta), FITC-dextrano (verde) e ambos os corantes (cinza). Foram coletadas a partir das imagens obtidas às 3 h no protocolo 'Pré', bem como das imagens obtidas às 6 h, 1 dia, 3 dias e 7 dias no protocolo 'Pós'. De 3 h a 1 dia, uma parcela significativa dos hotspots de fluorescência apresentou um descasamento entre os corantes, enquanto que, de 3 dias a 7 dias, esse descasamento foi dificilmente observado. (B) Esquema resumindo o curso de tempo da quebra do BBB. O eixo vertical representa conceitualmente a intensidade do vazamento de corante devido à quebra do BBB. O padrão em zigue-zague de 3 h a 1 dia indica que a localização e a intensidade do vazamento de corante são instáveis durante este período. FITC, isotiocianato de fluoresceína; BHE, barreira hematoencefálica; BSW, ondas de choque induzidas por explosão. Essa figura é adaptada de Nishii et al.7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66653/66653fig05.jpg"> 
Figura 5: Expressão de GFAP e Iba1 como marcadores para astrócitos e micróglia, respectivamente. Cada coluna da figura contém imagens de fluorescência do extravasamento de corante com azul de Evans ou FITC-dextrana, juntamente com imagens imuno-histoquímicas GFAP ou Iba1. A barra de cores indica intensidades de fluorescência normalizadas de azul de Evans e FITC-dextrano usando aquelas dentro do GRN. Os protocolos de injeção de corante são apresentados no lado esquerdo. A fatia de 1 dia no protocolo 'Pré' mostra fluorescência de azul de Evans e FITC-dextrana, enquanto a fatia de 3 dias no protocolo 'Pré' mostra apenas fluorescência de azul de Evans (setas). As regiões denotadas pelas setas nas imagens de extravasamento de corante se alinham com as imagens imuno-histoquímicas. As pontas das setas indicam aglomerados de astrócitos reativos. O anticorpo policlonal GFAP marcou astrócitos dentro e ao redor da substância branca, bem como no tecido nervoso adjacente à pia-máter. Como resultado, os astrócitos dentro e perto do dcw são rotulados nesta figura. As imagens ampliadas correspondentes ao quadro ou seta na coluna Iba1 são representadas nas inserções. Barras de escala: 1 mm e 200 μm para as imagens de extravasamento de corante e imuno-histoquímica, respectivamente. GFAP, proteína ácida fibrilar glial; Iba1, molécula adaptadora de ligação ao cálcio ionizado 1; FITC, isotiocianato de fluoresceína; BSW, ondas de choque induzidas por explosão; DCW, substância branca cerebral profunda. Essa figura é adaptada de Nishii et al.7. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66653/66653fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Avaliação da quebra da barreira hematoencefálica em um modelo de camundongo com lesão cerebral traumática leve

Fluorescent dyes are used to determine the extent of dye extravasation that occurs due to blood-brain barrier (BBB) breakdown. Labeling with these dyes is ...

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Research

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Avaliando a integridade da barreira hematoencefálica em um modelo de rato com lesão cerebral induzida por laser 

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Modelos simplificados de traumatismo cranioencefálico (TCE) facilitaram o desenvolvimento de abordagens terapêuticas. Este protocolo descreve a criação de um córtex de camundongo ferido por facada usando agulhas, permitindo a análise de hemorragia e inflamação. O modelo de camundongo TBI com ferida por faca oferece a vantagem de ser realizado sem a necessidade de equipamento especializado.

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Aprenda a avaliar a quebra da barreira hematoencefálica em modelo de camundongo após lesão cerebral traumática leve induzida por ondas de choque. Este método utiliza corantes fluorescentes duplos para visualizar a dinâmica temporal da integridade da BBB.

Avaliação da quebra da barreira hematoencefálica em um modelo de camundongo com lesão cerebral traumática leve

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