January 3rd, 2025
Aqui, descrevemos um protocolo simples e econômico para realizar a quantificação imparcial da densidade microvascular pulmonar para tecido pulmonar de camundongos inteiros usando coloração única de Isolectina B4.
Nossa pesquisa visa quantificar a densidade microvascular pulmonar em vários lóbulos pulmonares de camundongos, considerando diferenças anatômicas e alterações relacionadas à idade, usando coloração com isolectina B4 e análise ImageJ. As principais questões que estamos tentando abordar são como quantificar a densidade microvascular em diferentes lóbulos pulmonares com precisão e quais mudanças ocorrem na densidade microvascular nos lóbulos com o envelhecimento. Avanços recentes na pesquisa microvascular pulmonar, incluindo técnicas aprimoradas de limpeza e fixação de tecidos, imagens avançadas e ferramentas de software para quantificação precisa.
Esses desenvolvimentos aprimoram nossa compreensão das alterações microvasculares no envelhecimento e doenças relacionadas, como asma e COVID-19, oferecendo insights para possíveis terapias. Os principais desafios são localizar com precisão as lesões, seccionar adequadamente os tecidos pulmonares, mitigar os danos teciduais relacionados ao fixador e a falta de marcadores específicos para as células endoteliais pulmonares. Os métodos tradicionais muitas vezes ignoram as variações dentro da forma e vascularização em diferentes lobos pulmonares.
Nosso protocolo aborda a lacuna, fornecendo uma abordagem abrangente para seccionar os lobos pulmonares e quantificar a densidade microvascular usando isolectina antes da coloração. A combinação da coloração IB4 com o software gratuito ImageJ para análise avançada da densidade microvascular garante resultados precisos e úteis. Os mecanismos celulares e moleculares pelos quais as lesões microvasculares pulmonares participam da progressão de doenças relacionadas ao pulmão e desenvolvem novas estratégias ou alvos para resgatar a função microvascular pulmonar para promover o reparo pulmonar e induzir a recuperação funcional.
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Este estudo concentra-se em quantificar a densidade microvascular pulmonar em lóbulos pulmonares de camundongos, levando em conta diferenças anatômicas e mudanças relacionadas à idade. Utilizando a coloração com isolectina B4 junto com a análise ImageJ, a pesquisa visa melhorar a precisão das medições de densidade microvascular em diferentes lobos dos pulmões.
Quantitative assessment of pulmonary microvascular density across distinct lung lobules addresses a critical gap in preclinical respiratory research, enabling more accurate modeling of microvascular dysfunction and remodeling. This protocol enhances predictive confidence in disease-relevant systems by accounting for anatomical and age-related heterogeneity, supporting translational continuity from discovery through preclinical validation. The approach is directly relevant for biopharma teams prioritizing mechanistic de-risking and target validation in pulmonary vascular research portfolios.
This protocol integrates into the discovery-to-preclinical continuum by enabling hypothesis-driven quantification of microvascular changes in murine lung lobules.