Name: Quantificando a densidade microvascular pulmonar em camundongos através de lóbulos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-03T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Aprenda a quantificar a densidade microvascular pulmonar em camundongos usando isolectin B4 e ImageJ. Este método revela diferenças anatômicas e alterações relacionadas à idade, auxiliando pesquisas sobre asma e COVID-19.

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<meta charset="utf8"></head><body>Avaliação da microvasculatura pulmonar com coloração de isolectina B4 em camundongos

<ol><li>Jia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf-2+promotes+angiogenesis+through+a+srsf1%2Fsrsf3%2Fsrpk1-dependent+axis+that+controls+vegfr1+splicing+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Fgf-2 promotes angiogenesis through a srsf1/srsf3/srpk1-dependent axis that controls vegfr1 splicing in endothelial cells.</a> BMC Biol. 19 (1), 173(2021).</li>
<li>Schneider, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+lung%3A+Physiology%2C+disease%2C+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The aging lung: Physiology, disease, and immunity.</a> Cell. 184 (8), 1990-2019 (2021).</li>
<li>Rafii, S., Butler, J. M., Ding, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiocrine+functions+of+organ-specific+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiocrine functions of organ-specific endothelial cells.</a> Nature. 529 (7586), 316-325 (2016).</li>
<li>Lipskaia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+telomerase+in+p21-positive+cells+counteracts+capillaries+rarefaction+in+aging+mice+lung%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Induction of telomerase in p21-positive cells counteracts capillaries rarefaction in aging mice lung.</a> bioRxiv. , (2022).</li>
<li>Hoshino, M., Takahashi, M., Aoike, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+vascular+endothelial+growth+factor%2C+basic+fibroblast+growth+factor%2C+and+angiogenin+immunoreactivity+in+asthmatic+airways+and+its+relationship+to+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of vascular endothelial growth factor, basic fibroblast growth factor, and angiogenin immunoreactivity in asthmatic airways and its relationship to angiogenesis.</a> J Allergy Clin Immunol. 107 (2), 295-301 (2001).</li>
<li>Ackermann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+endothelialitis%2C+thrombosis%2C+and+angiogenesis+in+covid-19%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular endothelialitis, thrombosis, and angiogenesis in covid-19.</a> New Engl J Med. 383 (2), 120-128 (2020).</li>
<li>Wertheim, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+pulmonary+microvascular+endothelial+cells+ex+vivo%3A+Implications+for+pulmonary+arterial+hypertension%2C+and+a+caution+on+the+use+of+commercial+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isolating pulmonary microvascular endothelial cells ex vivo: Implications for pulmonary arterial hypertension, and a caution on the use of commercial biomaterials.</a> PLoS One. 14 (2), e0211909(2019).</li>
<li>Thomas, S. M., Bednarek, J., Janssen, W. J., Hume, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air-inflation+of+murine+lungs+with+vascular+perfusion-fixation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Air-inflation of murine lungs with vascular perfusion-fixation.</a> J Vis Exp. (168), e62215(2021).</li>
<li>Ramasamy, S. K., Kusumbe, A. P., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+tissue+morphogenesis+by+endothelial+cell-derived+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of tissue morphogenesis by endothelial cell-derived signals.</a> Trends Cell Biol. 25 (3), 148-157 (2015).</li>
<li>Amersfoort, J., Eelen, G., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulation+by+endothelial+cells+-+partnering+up+with+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunomodulation by endothelial cells - partnering up with the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 22 (9), 576-588 (2022).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+role+of+pulmonary+endothelial+cell+heterogeneity+in+the+response+to+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Defining the role of pulmonary endothelial cell heterogeneity in the response to acute lung injury.</a> eLife. 9, e53072(2020).</li>
<li>Corliss, B. A., Mathews, C., Doty, R., Rohde, G., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+label%2C+image%2C+and+analyze+the+complex+structural+architectures+of+microvascular+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Methods to label, image, and analyze the complex structural architectures of microvascular networks.</a> Microcirculation. 26 (5), e12520(2019).</li>
<li>Phillips, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+evaluating+the+murine+pulmonary+vasculature+using+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A method for evaluating the murine pulmonary vasculature using micro-computed tomography.</a> J Surg Res. 207, 115-122 (2017).</li>
<li>Chadwick, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+network+extraction+and+analysis+of+mouse+pulmonary+vasculature+via+x-ray+micro-computed+tomographic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Vessel network extraction and analysis of mouse pulmonary vasculature via x-ray micro-computed tomographic imaging.</a> PLoS Comput Biol. 17 (4), e1008930(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4% Paraformaldeído</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td>Fixador de Tecido</td></tr><tr><td>4', 6-diamidino-2-fenilindol</td><td>MCE</td><td>HY-D0814</td><td>Corantes Nucleicos</td></tr><tr><td>Alexa-647 Fluor Conjugado Isolectina B4</td><td>Thermo</td><td>I32450</td><td>Microvasos de Ligação</td></tr><tr><td>Anti-fluorescente Tablet Selador</td><td>Abcam</td><td>AB104135</td><td>Fixação de Amostra</td></tr><tr><td>Fluido de Reparo de Antígeno</td><td>Biosharp</td><td>BL151A</td><td>Reparo de Locais Antigênicos</td></tr><tr><td>de Biópsia</td><td>ActivFlo</td><td>39LC-500-1</td><td>Fixação e Posicionamento de Amostras de Tecido</td></tr><tr><td>Albumina de Soro Bovino</td><td>Sigma</td><td>B2064-50G</td><td>Solução</td></tr><tr><td>de Vedação Placa Fria</td><td>Leica</td><td>HistoCore Arcadia H&nbsp;</td><td>Congelamento de amostras</td></tr><tr><td>Forno de secagem elétrico de temperatura constante</td><td>Taisite</td><td>101-0AB</td> Lâmina <td></td></tr><tr><td>de micrótomo descartável</td> de reparo de alta temperatura <td>Leica</td><td>14035838383</td><td>amostras de tecido de corte para preparar seções</td></tr><tr><td>Moldes de incorporação Shitai</td><td></td><td>26155166627</td><td>fixação de amostras de tecido</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Kelong</td><td>CAS 64-17-5</td><td>Solução de desidratação de tecido</td></tr><tr><td>Parafina aquecida Estação de Incorporação</td><td>Leica</td><td>EG1150</td><td>Incorporação de Amostras de Tssue em Banho-maria de Parafina</td></tr><tr><td>HistoCore</td><td>Leica</td><td>HI1220</td><td>Achatar e Fixar Amostras de Tecido</td></tr><tr><td>ImageJ (Fiji)&nbsp;</td><td>NIH</td><td>1.54f</td><td>Ferramenta Quantitativa</td></tr><tr><td>Canetas de Imuno-Histoquímica</td><td>Biosharp</td><td>BC004</td><td>Agente Bloqueador de Água</td></tr><tr><td>Fórceps Médico</td><td>Shanghai Equipamento Médico N</td><td>/ A</td><td>Apreensão, Manipulação ou Movimentação de amostras de tecido</td></tr><tr><td>Microscópio</td><td>Nikon</td><td>Ts2</td><td>Dispositivo de imagem</td></tr><tr><td>Mídia de montagem</td><td>Jiangyuan</td><td>Insípido</td><td>Fixação e preservação Cera</td></tr> de <tr><td>parafina</td><td>SCHLEDEN</td><td>80200-0014</td><td>de fixação de seções de tecido</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td>tampão de lavagem</td></tr><tr><td>Pentobarbital Sódio</td><td>Pequim Reagente químico Empresa</td><td>Q/H82-F158-2002</td><td>Micrótomo rotativo anestésico</td></tr><tr><td></td><td>Biobase</td><td>Bk-2258</td><td>Preparando</td></tr><tr><td>fatias Tesoura estéril</td><td>Shanghai Medical Equipamento</td><td>N/A</td><td>segmentação Amostras de Tecido</td></tr><tr><td>Bisturi Cirúrgico</td><td>Shanghai Medical Equipment</td><td>N/A</td><td>Amostras de Tecido de Corte</td></tr><tr><td>Tritão&nbsp;</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td>Solução de Permeabilização</td></tr><tr><td>Corrediça Sem Lavagem</td><td>PLATINUM PRO</td><td>PRO-04 Amostras de</td><td>Fixação para Coloração</td></tr><tr><td>de Xileno</td><td>SUM</td><td>XK13-011-00031</td><td>Solução de Desparafinação de Tecidos</td></tr></tbody></table>

quantificando a densidade microvascular pulmonar em camundongos através de lóbulos

Quantifying Pulmonary Microvascular Density in Mice Across Lobules

Para distinguir entre as lesões nos brônquios principais e nos ramos das pequenas vias aéreas, é fundamental garantir que a estrutura contínua das lesões nesses dois tipos de vias aéreas seja observada. Isso pode ser alcançado seguindo os procedimentos de corte e incorporação descritos na Figura 1. Dados os numerosos lobos pulmonares em camundongos, que são orientados em várias direções e possuem uma estrutura semelhante a uma malha, eles são mais suscetíveis ao colapso em comparação com out...

Quantificando a densidade microvascular pulmonar em camundongos através de lóbulos

The abnormal alternation of pulmonary angiogenesis is related to lung microvascular dysfunction and is deeply linked to vascular wall integrity, blood ...

quantifying-pulmonary-microvascular-density-in-mice-across-lobules

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Um protocolo específico e rápido para pesquisar, simultaneamente, a função cardíaca direita, inflamação pulmonar, e da resposta imunológica é descrito como uma ferramenta de aprendizagem. Vídeo e figuras descrevem fisiologia e técnicas de microdissecção em um grupo organizado abordagem, que é adaptável a ser utilizado para as pequenas e grandes estudos porte.

Sistólica do ventrículo direito Medição de Pressão em combinação com colheita de amostras de tecido pulmonar e imunológica em ratos

A camada de superfície endotelial glicocálice / endotelial está idealmente estudada por microscopia intravital. Microscopia intravital é tecnicamente desafiante em um órgão em movimento, tais como o pulmão. Demonstramos como brightfield simultânea e microscopia de fluorescência pode ser utilizado para estimar a espessura da camada endotelial da superfície em um movimento...

Na medição in vivo da camada superficial do rato pulmonar endotelial

A vasoconstrição pulmonar hipóxica (HPV) é um importante fenômeno fisiológico pelo qual a perfusão pulmonar de hipóxia alveolar é compatível com a ventilação. O principal segmento vascular que contribui para o HPV é a artéria intra-acinar. Aqui, descrevemos nosso protocolo para a análise do HPV de vasos pulmonares murinas com diâmetros de 20-100 μm.

Análise videomorfométrica da vasoconstrição pulmonar hipoxica de artérias intra-pulmonares usando fatias pulmonares cortadas por precisão de murina

A preparação isolada de perfusão pulmonar de sangue faz com que seja possível visualizar redes microvasos na superfície do pulmão. Aqui nós descrevemos uma abordagem para quantificar a permeabilidade de microvasos de solteiro em pulmões isolados tempo real usando imagens de fluorescência.

Quantificar Único microvasos Permeabilidade em perfusão isolada-Sangue Rat Lung Preparação

Descrevemos um meio de medir de forma rápida e simples a capacidade de difusão pulmonar em camundongos e mostrar que ela é suficientemente sensível a alterações fenotípicas em múltiplas patologias pulmonares comuns.  Essa métrica, portanto, traz relevância translacional direta para os modelos de camundongos, uma vez que a capacidade de difusão também é facilmente medida em humanos.

Função Pulmonar Fenotipagem Rato In Vivo Com a capacidade pulmonar Diffusing

Aqui apresentamos um protocolo para medir de forma simples e confiável a curva pressão-volume pulmonar em camundongos, mostrando que ela é suficientemente sensível para detectar alterações fenotípicas do parênquima em duas patologias pulmonares comuns, fibrose pulmonar e enfisema. Essa métrica fornece um meio de quantificar as mudanças estruturais do pulmão com o desenvolvimento da patologia.

Medição da curva pressão-volume no mouse Lungs

A área de superfície pulmonar interna (ISA) é um critério crítico para avaliar a morfologia pulmonar e a fisiologia em doenças pulmonares e regeneração alveolar induzida por lesão. Descrevemos aqui um método padronizado que pode minimizar o viés de medição para ISA tanto na pneumonectomia pulmonar quanto nos modelos de mouse de implante de prótese.

Um Método Padronizado para Medição da Superfície de Pulmão Interna via Neumonectomia de Mouse e Implante de Prótese

A administração intratraqueal (TI) de agentes experimentais em camundongos geralmente resulta em parto assimétrico para os pulmões distais.  Neste relatório, nós descrevemos uma aproximação intrabronchial direta (IB) para canular cada pulmão em ratos vivos não-operatively.  Essa abordagem pode ser usada para administrar seletivamente agentes a um pulmão ou pode ser adaptada para melhorar a entrega do agente simétrico para ambos os pulmões.

Administração Intrabronquial direta para melhorar a deposição do agente seletivo dentro do pulmão do rato

Nós apresentamos um método rather simples e sensível para a quantificação exata da densidade do colagogo no fígado do rato. Este método pode ajudar a determinar os efeitos dos modificadores genéticos e ambientais e a eficácia de terapias potenciais em modelos de camundongo de doenças biliares.

Determinando a densidade do ducto biliar no fígado do rato

O objetivo desta técnica é a visualização ex vivo de redes arteriais pulmonares de camundongos pós-natais e adultos precoces através da inflação pulmonar e injeção de um composto radio-opaco à base de polímero através da artéria pulmonar. Também são discutidas possíveis aplicações para tecidos fundidos.

Fundição Vascular de Pulmões de Camundongos Adultos e Precoces para Imagem Micro-CT

Aprenda a quantificar a densidade microvascular pulmonar em camundongos usando isolectin B4 e ImageJ. Este método revela diferenças anatômicas e alterações relacionadas à idade, auxiliando pesquisas sobre asma e COVID-19.

Quantificando a densidade microvascular pulmonar em camundongos através de lóbulos

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