Name: Uso da administração de medicamentos guiados por micropipeta como método alternativo à gavagem oral em modelos de roedores (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-07-26T13:40:00.000+00:00
Duration: 2 min 44 s
Description: Aprenda a técnica de administração de medicamentos guiada por micropipeta (MDA) como alternativa menos estressante à gavagem oral em camundongos. Este método reduz o desconforto dos animais e minimiza vieses experimentais em pesquisas.

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<meta charset="utf8"></head><body>Reduzindo o estresse animal de pesquisa com a administração de medicamentos guiada por micropipeta

<ol><li>Vandenberg, L. N., Welshons, W. V., Vom Saal, F. S., Toutain, P. -L., Myers, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Should+oral+gavage+be+abandoned+in+toxicity+testing+of+endocrine+disruptors%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health%22%5BJournal%5D)">Should oral gavage be abandoned in toxicity testing of endocrine disruptors.</a> Environ Health. 13 (1), 46(2014).</li>
<li>Craig, M. A., Elliott, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+fed+radiolabeled+protein+by+gavage+show+sporadic+passage+of+large+quantities+of+intact+material+into+the+blood%2C+an+artifact+not+associated+with+voluntary+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp+Top+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Mice fed radiolabeled protein by gavage show sporadic passage of large quantities of intact material into the blood, an artifact not associated with voluntary feeding.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 38 (5), 18-23 (1999).</li>
<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+of+substances+to+laboratory+animals%3A+routes+of+administration+and+factors+to+consider%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).</li>
<li>Gulin, J. E. N., Bisio, M., García-Bournissen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refining+drug+administration+in+a+murine+model+of+acute+infection+with+Trypanosoma+cruzi%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+Res%22%5BJournal%5D)">Refining drug administration in a murine model of acute infection with Trypanosoma cruzi.</a> Lab Anim Res. 36, 37(2020).</li>
<li>Bonnichsen, M., Dragsted, N., Hansen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+welfare+impact+of+gavaging+laboratory+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Welf%22%5BJournal%5D)">The welfare impact of gavaging laboratory rats.</a> Anim Welf. 14 (3), 223-227 (2005).</li>
<li>Brown, A. P., Dinger, N., Levine, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+produced+by+gavage+administration+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp+Top+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Stress produced by gavage administration in the rat.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 39 (1), 17-21 (2000).</li>
<li>Scarborough, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+validation+of+the+micropipette-guided+drug+administration+%28MDA%29+method+in+the+maternal+immune+activation+model+of+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Preclinical validation of the micropipette-guided drug administration (MDA) method in the maternal immune activation model of neurodevelopmental disorders.</a> Brain Behav Immun. 88, 461-470 (2020).</li>
<li>Germann, P. G., Ockert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulomatous+inflammation+of+the+oropharyngeal+cavity+as+a+possible+cause+for+unexpected+high+mortality+in+a+Fischer+344+rat+carcinogenicity+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Granulomatous inflammation of the oropharyngeal cavity as a possible cause for unexpected high mortality in a Fischer 344 rat carcinogenicity study.</a> Lab Anim Sci. 44 (4), 338-343 (1994).</li>
<li>Martins, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+gelatin+flavors+for+oral+dosing+of+C57BL%2F6J+and+FVB%2FN+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Comparison of gelatin flavors for oral dosing of C57BL/6J and FVB/N mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 61 (1), 89-95 (2022).</li>
<li>Huynh, N., Arabian, N., Lieu, D., Asatryan, L., Davies, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilizing+an+orally+dissolving+strip+for+pharmacological+and+toxicological+studies%3A+A+simple+and+humane+alternative+to+oral+gavage+for+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Utilizing an orally dissolving strip for pharmacological and toxicological studies: A simple and humane alternative to oral gavage for animals.</a> J Vis Exp. (109), e53770(2016).</li>
<li>Hoggatt, A. F., Hoggatt, J., Honerlaw, M., Pelus, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spoonful+of+sugar+helps+the+medicine+go+down%3A+a+novel+technique+to+improve+oral+gavage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">A spoonful of sugar helps the medicine go down: a novel technique to improve oral gavage in mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 49 (3), 329-334 (2010).</li>
<li>Neto, T., Faustino-Rocha, A. I., Gilda Costa, R. M., Medeiros, R., Oliveira, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quick+and+low-intensity+method+for+oral+administration+to+large+numbers+of+mice%3A+A+possible+alternative+to+oral+gavage%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A quick and low-intensity method for oral administration to large numbers of mice: A possible alternative to oral gavage.</a> Lab Anim. 56 (2), 185-190 (2022).</li>
<li>Küster, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voluntary+ingestion+of+antiparasitic+drugs+emulsified+in+honey+represents+an+alternative+to+gavage+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Voluntary ingestion of antiparasitic drugs emulsified in honey represents an alternative to gavage in mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (2), 219-223 (2012).</li>
<li>Gonzales, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+method+of+oral+administration+by+peanut+butter+pellet+formulation+results+in+target+engagement+of+BACE1+and+attenuation+of+gavage-induced+stress+responses+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Alternative method of oral administration by peanut butter pellet formulation results in target engagement of BACE1 and attenuation of gavage-induced stress responses in mice.</a> Pharmacol Biochem Behav. 126, 28-35 (2014).</li>
<li>Teixeira-Santos, L., Albino-Teixeira, A., Pinho, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+method+for+oral+drug+administration+by+voluntary+intake+in+male+and+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">An alternative method for oral drug administration by voluntary intake in male and female mice.</a> Lab Anim. 55 (1), 76-80 (2021).</li>
<li>Schalbetter, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+application+of+clozapine-N-oxide+using+the+micropipette-guided+drug+administration+%28MDA%29+method+in+mouse+DREADD+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Oral application of clozapine-N-oxide using the micropipette-guided drug administration (MDA) method in mouse DREADD systems.</a> Lab Anim (NY). 50 (3), 69-75 (2021).</li>
<li>Vanhecke, D., Bugada, V., Buch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refined+tamoxifen+administration+in+mice+by+encouraging+voluntary+consumption+of+palatable+formulations%29%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Refined tamoxifen administration in mice by encouraging voluntary consumption of palatable formulations).</a> bioRxiv. , (2023).</li>
<li>Heraudeau, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropipette-guided+drug+administration+%28MDA%29+as+a+non-invasive+chronic+oral+administration+method+in+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Micropipette-guided drug administration (MDA) as a non-invasive chronic oral administration method in male rats.</a> J Neurosci Methods. 398, 109951(2023).</li>
<li>Sfanos, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compositional+differences+in+gastrointestinal+microbiota+in+prostate+cancer+patients+treated+with+androgen+axis-targeted+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate+Cancer+Prostatic+Dis%22%5BJournal%5D)">Compositional differences in gastrointestinal microbiota in prostate cancer patients treated with androgen axis-targeted therapies.</a> Prostate Cancer Prostatic Dis. 21 (4), 539-548 (2018).</li>
<li>Shrestha, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+the+urinary+microbiome+in+men+with+positive+versus+negative+biopsies+for+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Profiling the urinary microbiome in men with positive versus negative biopsies for prostate cancer.</a> J Urol. 199 (1), 161-171 (2018).</li>
<li>Peiffer, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+of+gastrointestinal+microbiota+in+association+with+treatment+response+in+individuals+with+metastatic+castrate+resistant+prostate+cancer+progressing+on+enzalutamide+and+initiating+treatment+with+anti-PD-1+%28pembrolizumab%29%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Composition of gastrointestinal microbiota in association with treatment response in individuals with metastatic castrate resistant prostate cancer progressing on enzalutamide and initiating treatment with anti-PD-1 (pembrolizumab).</a> Neoplasia. 32, 100822(2022).</li>
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<li>Miguelena Chamorro, B., Swaminathan, G., Mundt, E., Paul, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+more+translatable+research%3A+Exploring+alternatives+to+gavage+as+the+oral+administration+route+of+vaccines+in+rodents+for+improved+animal+welfare+and+human+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Towards more translatable research: Exploring alternatives to gavage as the oral administration route of vaccines in rodents for improved animal welfare and human relevance.</a> Lab Anim (NY). 52 (9), 195-197 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>200 &micro; Pontas de pipeta L</td><td>Mettler Toledo</td><td>17005860</td><td></td></tr><tr><td>AB SCIEX Detector de espectrometria de massa triplo QTRAP 5500</td><td>Sciex</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Akkermansia muciniphila cepa muc DNA genômico</td><td>American Type Culture Collection</td><td>BAA-835D-5</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de amônio</td><td>Sigma&ndash; Camundongos Aldrich</td><td>5.43834</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Cepa# 000664</td><td></td></tr><tr><td>C. scindens cepa 35704</td><td>American Type Culture Collection</td><td>35704</td><td></td></tr><tr><td>Cefoxitin</td><td>Sagent&nbsp;</td><td>NDC25021-109-10</td><td></td></tr><tr><td>Óleo de milho</td><td>MedChemExpress</td><td>HY-Y1888</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>etanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC611050040</td><td></td></tr><tr><td>Ácido fórmico</td><td>Sigma&ndash; Camundongos Aldrich</td><td>5.33002</td><td></td></tr><tr><td>FVB/NJ</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Cepa# 001800</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Hexano</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-002-996</td><td></td></tr><tr><td>LC-MS grau de água</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-650-357</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-003-340</td><td></td></tr><tr><td>Microtainer tubo separador de soro</td><td>Becton Dickinson</td><td>02-675-185</td><td></td></tr><tr><td>Grau de biologia molecular</td><td>água Corning</td><td>46-000-CI</td><td></td></tr><tr><td>Camundongos NSG</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Cepa# 005557</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Kit Qubit DNA HS</td><td>Invitrogen</td><td>Q32851</td><td></td></tr><tr><td>Racêmico&nbsp; equol-d4</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-219827</td><td></td></tr><tr><td>Ágar Clostridial Reforçado</td><td>Sistemas Anaeróbios</td><td>AS-6061</td><td></td></tr><tr><td>Caldo Clostridial Reforçado</td><td>Sistemas Anaeróbios</td><td>AS-606</td><td></td></tr><tr><td>S-equol</td><td>MedChemExpress</td><td>HY-100583</td><td></td></tr><tr><td>Padrão de referência S-equol para LC-MS</td><td>Cayman Chemical</td><td>10010173</td><td></td></tr><tr><td>Single pipeta de canal</td><td>Rainin</td><td>17008652</td><td></td></tr><tr><td>Streptococcus salivarius DNA genômico</td><td>American Type Culture Collection</td><td>BAA-1024D-5</td><td></td></tr><tr><td>Leite condensado adoçado</td><td>California Farms</td><td>B09TGQ7WV8</td><td></td></tr><tr><td>VSL#3</td><td>VSL#3</td><td>B07WX1LVHL</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-glucuronidase de Helix pomatia</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>G7017</td><td></td></tr></tbody></table>

uso da administração de medicamentos guiados por micropipeta como método alternativo à gavagem oral em modelos de roedores

Use of Micropipette-Guided Drug Administration as an Alternative Method to Oral Gavage in Rodent Models

O MDA pode ser usado na administração oral de cepas bacterianas em modelos de camundongos. Camundongos C57BL / 6J foram tratados com antibióticos (cefoxitina na água potável) por 2 dias para limpar as comunidades microbianas comensais antes de iniciar a sessão de treinamento de MDA. A solução de leite condensado/água foi administrada uma vez ao dia consecutivamente por 3 dias antes da administração do tratamento. Os camundongos foram brevemente contidos por uma nuca suave durante a administração do tratamento com MDA. No dia 4, os camundongos foram tratados uma vez com PBS (controle negativo, n = 4) ou uma cultura anaeróbica de C. scindens (bactéria desA +, n = 4) que foi previamente ressuspensa na solução de leite condensado / água. Todos os camundongos geralmente tomaram os tratamentos em segundos e beberam a dose inteira (100 μL). Para validar a entrega e a presença das bactérias anaeróbias, comparamos amostras fecais coletadas após o tratamento com antibióticos com amostras fecais coletadas 24 h após o tratamento com PBS ou C. scindens (Figura 1). O DNA fecal foi isolado, quantificado e normalizado para 10 ng/μL para realizar qPCR usando primers específicos do gene C . scindens ATCC 35704 desA (Tabela 1). Observamos que os camundongos tratados com antibióticos tinham pouca ou nenhuma bactéria desA +. Como esperado, observamos uma quantidade substancialmente maior de bactérias desA+ nos camundongos tratados com C. scindens, que foi significativamente diferente daqueles no grupo controle PBS (p = 0,0286, Figura 1).
Entrega de um composto experimental (S-equol) usando o método MDA. Camundongos NSG (n = 15) e FVB/NJ (n = 18) foram treinados com a solução de leite condensado/água dois dias antes da administração do tratamento. Camundongos NSG foram submetidos a tratamento com antibióticos (cefoxitina na água potável) para eliminar bactérias intestinais produtoras de equol e, portanto, a produção endógena de equol. Camundongos FVB/NJ foram alimentados com dieta isenta de soja para eliminar a produção endógena de equol. Todos os camundongos foram brevemente contidos por uma raspadinha suave para administrar os tratamentos. O grupo controle recebeu a solução de leite condensado/água em combinação com óleo de milho, o grupo DMSO (controle veicular para S-equol) recebeu a solução de leite condensado/água e DMSO em óleo de milho, e o grupo equol recebeu solução de leite condensado/água e equol em óleo de milho. Os camundongos foram tratados cinco dias por semana com a técnica de MDA por um total de 43 dias. Os camundongos geralmente tomavam os tratamentos em segundos e bebiam a dose inteira (100 μL). No geral, todos os camundongos consumiram pelo menos metade da dose em um determinado dia (dose parcial em um determinado dia, mas dose completa no dia anterior ou no dia seguinte). Nenhum dos camundongos recusou o tratamento inteiramente ao longo do estudo. Observamos que, após o scruffing, o posicionamento dos camundongos de costas melhorou o tempo de consumo do tratamento e garantiu que o animal tomasse a dose inteira.
Os níveis circulantes de equol demonstram a administração eficaz do medicamento MDA. Amostras de sangue foram retiradas dos camundongos NSG após a eutanásia no final do estudo para validar que a entrega de MDA de equol levou a níveis circulantes de equol nos animais do estudo. Não recuperamos sangue suficiente de um dos camundongos tratados com equol para realizar o ensaio LC/MS/MS. Os níveis séricos de equol foram medidos por LC/MS/MS no Analytical Pharmacology Shared Resource da Johns Hopkins University School of Medicine. Não observamos equol circulante nos grupos controle e DMSO (veículo equol), enquanto os camundongos tratados com equol apresentaram equol circulante detectável (Figura 2). É importante ressaltar que esperamos alguma variação nos níveis circulantes de equol nos camundongos tratados com equol devido a diferentes datas e horários de sacrifício de animais neste experimento.
As comunidades microbianas intestinais permanecem inalteradas após o tratamento com MDA. O efeito da solução láctea de MDA (com e sem equol) na microbiota intestinal foi avaliado usando os camundongos FVB/NJ. Quantificamos a composição microbiana de amostras coletadas no início do estudo (sem tratamentos/sem MDA) e amostras coletadas 7 dias após o início do tratamento (9 dias após o início do MDA, incluindo dias de treinamento). Não observamos alterações significativas na carga bacteriana total ou na composição microbiana geral da microbiota intestinal central (Akkermansia muciniphila, Bifidobacterium spp., Streptococcus salivarius, Lactobacillus spp.), conforme avaliado pela análise de qPCR específica da espécie (Figura 3), conforme descrito anteriormente21,22. Uma gaiola mostrou uma diferença significativa em Lactobacillus entre a linha de base e após o tratamento com MDA; no entanto, esse achado foi observado no controle do veículo DMSO e não foi consistente em todas as gaiolas.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66836/66836fig01.jpg"> 
Figura 1: O MDA fornece bactérias anaeróbicas ao intestino do camundongo que podem ser quantificadas via qPCR fecal. Camundongos C57BL/6J foram tratados com antibióticos por dois dias consecutivos na água potável. Os camundongos foram então tratados com a bactéria anaeróbica C. scindens usando o método MDA. A carga bacteriana fecal de C. scindens (desA+) foi medida por qPCR para o gene desA tanto após o tratamento com antibióticos quanto 24 h após o tratamento com MDA (PBS ou C. scindens). (A) A quantificação do gene desA específica de C. scindens é mostrada entre camundongos tratados com PBS e C. scindens após tratamento com antibióticos e 24 h após o tratamento com MDA. (B) Os mesmos dados mostrados para 24 h pós-MDA em (A) são mostrados como um gráfico de colunas. A significância estatística foi determinada por meio de um teste não paramétrico de Mann-Whitney. (*) p = 0,0286, barras de erro = SD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66836/66836fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66836/66836fig02.jpg"> 
Figura 2: Análise dos níveis circulantes de equol em camundongos NSG tratados com equol por meio da técnica de MDA. Os níveis séricos de equol foram quantificados via LC/MS/MS em camundongos tratados com controle (n = 5), DMSO (veículo, n = 5) e equol (n = 4). Não foi recuperado sangue suficiente de um dos camundongos tratados com equol para realizar LC/MS/MS. Esses tratamentos foram administrados usando o método MDA. O equol sérico só foi detectável no grupo tratado com equol. Limite de quantificação &lt; 5 ng/ml. A significância estatística foi determinada por meio de uma ANOVA não paramétrica de uma via com comparações múltiplas (correção de Dunn). (**) p = 0,0053, barras de erro = SD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66836/66836fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66836/66836fig03.jpg"> 
Figura 3: As bactérias intestinais centrais e os níveis de carga bacteriana total permanecem inalterados em camundongos FVB/NJ após o tratamento com MDA. Não foram observadas alterações significativas nos valores de qPCR Cq para as comunidades microbianas alvo antes e após a administração do tratamento usando o método MDA. Lactobacillus mostrou uma diferença significativa (*, p = 0,0321) apenas na gaiola 3 entre a linha de base e o tratamento com MDA. Esse achado não foi consistente entre as gaiolas. Os números das gaiolas são marcados como C1-C4. A significância estatística foi determinada por meio de uma ANOVA de uma via com comparações múltiplas (correção de Tukey). Barras de erro = SD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66836/66836fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Nome do primer</td>
			<td>Sequências de primers</td>
			<td>Condições de PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DesA_CS_F</td>
			<td>5'-GGACAGGGTGTCGGCTTTATG-3'</td>
			<td rowspan="2">93 ° C 3 min, 34 ciclos (95 ° C 30 s, 54 ° C 30 s)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DesA_CS_R</td>
			<td>5'-TTACTTCACCTTCGCCAGTTTCTG-3'</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: Primers e condições de qPCR para bactérias desA+ (C. scindens).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Nome do primer</td>
			<td>Sequências de primers</td>
			<td>Condições de PCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V6_F V6_R</td>
			<td>5'-CAACGCGWRGAACCTTACC-3' 5'-CRACACGAGCTGACGAC-3'</td>
			<td>95 °C, 3 min 36 ciclos 95 °C, 30 s 53 °C, 30 s</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A.muc_F A.muc_R</td>
			<td>5'-CAGCACGTGAAGGTGGGGAC-3' 5'-CCTTGCGGTTGGCTTCAGAT-3'</td>
			<td>50 °C, 5 min 95 °C, 10 min 40 ciclos 95 °C, 15 s 60 °C, 1 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bifido_F Bifido_R</td>
			<td>5'-CGGGTGAGTAATGCGTGACC-3' 5'-TGATAGGACGCGACCCCA-3'</td>
			<td>95 °C, 3 min 36 ciclos 95 °C, 30 s 53 °C, 30 s</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S. salivarius_F S. salivarius_R</td>
			<td>5'-CACGCCATGCTGGAAGTG-3' 5'-GCGATGAGCCAAGCTGAAG-3'</td>
			<td>95 °C, 10 min 44 ciclos 95 °C, 15 s 60 °C, 1 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lacto_F Lacto_R</td>
			<td>5'-TGGAAACAGRTGCTAATACCG-3' 5'-GTCCATTGTGGAAGATTCCC-3'</td>
			<td>50 °C, 2 min 95 °C, 10 min 40 ciclos 95 °C, 15 s 62 °C, 1 min</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 2: Primers e condições de qPCR usados para medir o efeito do MDA na microbiota intestinal central.

Uso da administração de medicamentos guiados por micropipeta como método alternativo à gavagem oral em modelos de roedores

Oral gavage (OG) with the use of a cannula attached to a syringe is one of the most common methods used to deliver precise dosing of compounds to the ...

use-micropipette-guided-drug-administration-as-an-alternative-method

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Testes pré-clínicos completa de drogas que atuam no sistema nervoso central, muitas vezes envolve a avaliação e comparação de biodistribuição da droga em associação com rotas específicas de administração. Aqui, três métodos comumente utilizados de entrega sistêmica (intravenosa, intraperitoneal e oral), bem como um método para entrega local (convecção avançada entrega) são demonstrados em camundongos.

Entrega da droga sistêmica e local para o tratamento de doenças do sistema nervoso central em modelos de roedores

Trabalhar com segurança e de forma humana com roedores de investigação exige uma competência central em métodos de manipulação e contenção. Este artigo irá apresentar os princípios básicos necessários para lidar com segurança e efetivamente administrar compostos para camundongos e ratos.

Restrição manual e rotas de Administração composto comum em camundongos e ratos

A auto-administração intravenosa paradigma (IVSA) é considerado como sendo o padrão de ouro para examinar as propriedades de reforço de drogas de abuso em roedores. Este manuscrito descreve os procedimentos experimentais e técnicas cirúrgicas necessárias para a obtenção de dados confiáveis ​​IVSA. Em particular, a implantação do cateter meticulosa e manutenção são realçados.

Métodos de auto-administração intravenosa em um modelo de camundongo

Fonte: Poland, R. et al. Microinjeção de cérebro de roedores para estudar substratos moleculares do comportamento motivado. J. Vis. Exp. (2015)Neste vídeo, uma configuração de microinjeção cheia de água que consiste em uma seringa e um tubo de microinjetor é usada para a administração precisa do medicamento. Um rato com uma cânula guia pré-implantada é submetido a microinjeção cerebral direcionada, permitindo a administração precisa de agentes terapêuticos em animais acordados com danos mínimos...

Entrega baseada em microinjeção de um agente terapêutico em um cérebro de roedor acordado

Fonte: Kanazawa, T., et al. Novos métodos para administração intranasal sob anestesia inalatória para avaliar a administração de medicamentos nariz-cérebro. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra a administração intranasal de medicamentos radiomarcados em um camundongo anestesiado para obter a entrega de medicamentos nariz ao cérebro. Ele explica como as drogas atravessam o epitélio nasal e viajam por vias neuronais para chegar ao cérebro, bem como como o movimento ciliar influencia a retenção...

Administração de medicamentos intranasais em camundongos via pipeta e canulação reversa para administração de medicamentos nariz-cérebro

Descreve-se um método para alvejar fármacos para o sistema nervoso central por qualquer implante de um cateter ou realizar uma injecção de bolus no ventrículo lateral direito de ratos. Nós nos concentramos especificamente na entrega de oligonucleotídeos antisense. Esta técnica é facilmente adaptável a outros fármacos e a ratos.

Entrega intraventricular direta de medicamentos para o Sistema Nervoso Central Rodent

Roedores são um modelo apropriado para investigar os substratos moleculares do comportamento e transtornos psiquiátricos complexos. A microinjeção cerebral em roedores acordados pode ser usada para elucidar substratos de doenças. Um método de microinjeção cerebral eficiente e personalizável, bem como a execução de um paradigma operante que quantifica a motivação, é apresentado.

Roedor Cérebro microinjeção para estudar substratos moleculares do comportamento motivado

O protocolo seguinte descreve um novo método para a administração de medicamentos por via oral crónica usando uma tira de dissolução por via oral (ODS), em vez do método de administração por sonda mais comumente usado por via oral. Nós demonstramos que a entrega de drogas pré-clínicos, oral utilizando o método ODS representa uma alternativa segura, conveniente e humana para sonda oral.

Utilizando um Dissolver Faixa por via oral para estudos farmacológicos e toxicológicos: uma alternativa simples e Humane a sonda oral for Animals

O objetivo geral deste procedimento é descrever um método de autoadministração de medicamentos que podem ser usados em modelos de camundongos de alimentação e obesidade.

Autoadministração de Drogas em Modelos de Alimentação e Obesidade

A administração oral via gavagem em roedores pode induzir sofrimento associado à contenção. Exploramos a administração oromucosa/bucal de extrato de Cannabis enriquecido com CBD, onde os ratos foram tratados por 15 dias com o extrato a 3 mg/kg/dia. Os tratamentos foram administrados por via oral com micropipeta, utilizando-se a técnica de toque afetuoso para manipular os animais.

Oromucosa como método alternativo para administração de produtos de cannabis em roedores

Aprenda a técnica de administração de medicamentos guiada por micropipeta (MDA) como alternativa menos estressante à gavagem oral em camundongos. Este método reduz o desconforto dos animais e minimiza vieses experimentais em pesquisas.

Uso da administração de medicamentos guiados por micropipeta como método alternativo à gavagem oral em modelos de roedores

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