Name: Coloração viva/morta para quantificar células viáveis, mas não cultiváveis, em bactérias causadoras de feridas tratadas com mel de Manuka (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T12:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Aprenda a quantificar células viáveis, mas não cultiváveis, em bactérias causadoras de feridas tratadas com mel de Manuka usando coloração viva/morta. Este método auxilia pesquisadores em microbiologia a estudar estados de dormência bacteriana.

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<ol><li>Spoering, A., Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilms+and+planktonic+cells+of+Pseudomonas+aeruginosa+have+similar+resistance+to+killing+by+antimicrobials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Biofilms and planktonic cells of Pseudomonas aeruginosa have similar resistance to killing by antimicrobials.</a> J Bacteriol. 183 (23), 6746-6751 (2001).</li>
<li>Mulcahy, L. R., Burns, J. L., Lory, S., Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+Pseudomonas+aeruginosa+strains+producing+high+levels+of+persister+cells+in+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Emergence of Pseudomonas aeruginosa strains producing high levels of persister cells in patients with cystic fibrosis.</a> J Bacteriol. 192 (23), 6191-6199 (2010).</li>
<li>Li, L., Mendis, N., Trigui, H., Oliver, J. D., Faucher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+viable+but+non-culturable+state+in+human+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The importance of the viable but non-culturable state in human bacterial pathogens.</a> F Microbiol. 5, 00258(2014).</li>
<li>Reygaert, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+the+antimicrobial+resistance+mechanisms+of+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22AIMS+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An overview of the antimicrobial resistance mechanisms of bacteria.</a> AIMS Microbiol. 4 (3), 482-450 (2018).</li>
<li>Ayrapetyan, M., Williams, T. C., Baxter, R., Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+but+nonculturable+and+persister+cells+coexist+stochastically+and+are+induced+by+human+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Viable but nonculturable and persister cells coexist stochastically and are induced by human serum.</a> Infect Immun. 83 (11), 4194-4203 (2015).</li>
<li>Cabral, D. J., Wurster, J. I., Belenky, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+persistence+as+a+metabolic+adaptation%3A+Stress%2C+metabolism%2C+the+host%2C+and+new+directions%5BTitle%5D)+AND+%22PHARH2%22%5BJournal%5D)">Antibiotic persistence as a metabolic adaptation: Stress, metabolism, the host, and new directions.</a> PHARH2. 11 (1), 11010014(2018).</li>
<li>Heidelberg, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+aerosolization+on+culturability+and+viability+of+gram-negative+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Effect of aerosolization on culturability and viability of gram-negative bacteria.</a> Appl Environ Microbiol. 63 (9), 3585-3588 (1997).</li>
<li>Cook, K. L., Bolster, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+Campylobacter+jejuni+and+Escherichia+coli+in+groundwater+during+prolonged+starvation+at+low+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Survival of Campylobacter jejuni and Escherichia coli in groundwater during prolonged starvation at low temperatures.</a> J Appl Microbiol. 103 (3), 573-583 (2007).</li>
<li>Xu, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+and+viability+of+nonculturable+Escherichia+coli+and+Vibrio+cholerae+in+the+estuarine+and+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Microbl+Ecol%22%5BJournal%5D)">Survival and viability of nonculturable Escherichia coli and Vibrio cholerae in the estuarine and marine environment.</a> Microbl Ecol. 8 (4), 313-323 (1982).</li>
<li>Qi, Z., Huang, Z., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+differences+of+biofilm+and+planktonic+Pseudomonas+aeruginosa+in+viable+but+nonculturable+state+induced+by+chlorine+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Metabolism differences of biofilm and planktonic Pseudomonas aeruginosa in viable but nonculturable state induced by chlorine stress.</a> Sci Total Environ. 821, 153374(2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+Viable+but+Non-culturable+%28VBNC%29+state+formation+of+staphylococcus+aureus+and+its+control+in+food+system%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Study on the Viable but Non-culturable (VBNC) state formation of staphylococcus aureus and its control in food system.</a> F Microbiol. 11, 599739(2020).</li>
<li>Oryan, A., Alemzadeh, E., Moshiri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+and+therapeutic+activities+of+honey+in+wound+healing%3A+A+narrative+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Viability%22%5BJournal%5D)">Biological properties and therapeutic activities of honey in wound healing: A narrative review and meta-analysis.</a> J Tissue Viability. 25 (2), 98-118 (2016).</li>
<li>Lusby, P. E., Coombes, A. L., Wilkinson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bactericidal+Activity+of+different+honeys+against+pathogenic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Bactericidal Activity of different honeys against pathogenic bacteria.</a> Arch Med Res. 36 (5), 464-467 (2005).</li>
<li>Mandal, M. D., Mandal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey%3A+Its+medicinal+property+and+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+Pac+J+Trop.+Biomed%22%5BJournal%5D)">Honey: Its medicinal property and antibacterial activity.</a> Asian Pac J Trop. Biomed. 1 (2), 154-160 (2011).</li>
<li>Carter, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+Manuka+Honey%3A+No+longer+so+alternative%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic Manuka Honey: No longer so alternative.</a> F Microbiol. 7, 00569(2016).</li>
<li>Cooper, R. A., Molan, P. C., Harding, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sensitivity+to+honey+of+Gram-positive+cocci+of+clinical+significance+isolated+from+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The sensitivity to honey of Gram-positive cocci of clinical significance isolated from wounds.</a> J Appl Microbiol. 93 (5), 857-863 (2002).</li>
<li>George Narelle May, C., Keith, F. Antibacterial Honey: In-vitro activity against clinical isolates of MRSA, VRE, and other multiresistant Gram-negative organisms. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGeorge+Narelle+May%2C+C+%22HMP+Global+Learning+Network%22">HMP Global Learning Network</a>. , https://www.hmpgloballearningnetwork.com/site/wounds/article/7751 (2007).</li>
<li>Blair, S. E., Cokcetin, N. N., Harry, E. J., Carter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unusual+antibacterial+activity+of+medical-grade+Leptospermum+honey%3A+Antibacterial+spectrum%2C+resistance+and+transcriptome+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Soc+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The unusual antibacterial activity of medical-grade Leptospermum honey: Antibacterial spectrum, resistance and transcriptome analysis.</a> Eur Soc Clin Microbiol. 28 (10), 1199-1208 (2009).</li>
<li>Cooper, R. A., Jenkins, L., Henriques, A. F. M., Duggan, R. S., Burton, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+bacterial+resistance+to+medical-grade+manuka+honey%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Soc+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Absence of bacterial resistance to medical-grade manuka honey.</a> Eur Soc Clin Microbiol. 29 (10), 1237-1241 (2010).</li>
<li>Lu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+can+inhibit+and+eliminate+biofilms+produced+by+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Honey can inhibit and eliminate biofilms produced by Pseudomonas aeruginosa.</a> Sci Rep. 9 (1), 18160(2019).</li>
<li>Bischofberger, A. M., Pfrunder Cardozo, K. R., Baumgartner, M., Hall, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+honey+resistance+in+experimental+populations+of+bacteria+depends+on+the+type+of+honey+and+has+no+major+side+effects+for+antibiotic+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Evol+Appl%22%5BJournal%5D)">Evolution of honey resistance in experimental populations of bacteria depends on the type of honey and has no major side effects for antibiotic susceptibility.</a> Evol Appl. 14 (5), 1314-1327 (2021).</li>
<li>Cunningham, E., O'Byrne, C., Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+weak+acids+on+Listeria+monocytogenes+survival%3A+Evidence+for+a+viable+but+nonculturable+state+in+response+to+low+pH%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Effect of weak acids on Listeria monocytogenes survival: Evidence for a viable but nonculturable state in response to low pH.</a> Food Control. 20 (12), 1141-1144 (2009).</li>
<li>Kogure, K., Simidu, U., Taga, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tentative+direct+microscopic+method+for+counting+living+marine+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A tentative direct microscopic method for counting living marine bacteria.</a> Can J Microbiol. 25 (3), 415-420 (1979).</li>
<li>Albertini, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+multiparameter+analysis+for+Vibrio+alginolyticus+viable+but+nonculturable+state+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Cytom+J+Int+Soc+Anal+Cytol%22%5BJournal%5D)">Use of multiparameter analysis for Vibrio alginolyticus viable but nonculturable state determination.</a> Cytom J Int Soc Anal Cytol. 69 (4), 260-265 (2006).</li>
<li>Nocker, A., Camper, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approaches+toward+preferential+detection+of+viable+cells+using+nucleic+acid+amplification+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol+Lett%22%5BJournal%5D)">Novel approaches toward preferential detection of viable cells using nucleic acid amplification techniques.</a> FEMS Microbiol Lett. 291 (2), 137-142 (2009).</li>
<li>Trevors, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+but+non-culturable+%28VBNC%29+bacteria%3A+Gene+expression+in+planktonic+and+biofilm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microbiol+Methods%22%5BJournal%5D)">Viable but non-culturable (VBNC) bacteria: Gene expression in planktonic and biofilm cells.</a> J Microbiol Methods. 86 (2), 266-273 (2011).</li>
<li>Ankley, L. M., Monteiro, M. P., Camp, K. M., O'Quinn, R., Castillo, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manuka+honey+chelates+iron+and+impacts+iron+regulation+in+key+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+App+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Manuka honey chelates iron and impacts iron regulation in key bacterial pathogens.</a> J App Microbiol. 128 (4), 1015-1024 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Caldo Mueller Hinton</td><td>Bioreagentes Fisher</td><td>B12322</td><td></td></tr><tr><td>Caldo Luria Bertani (LB);</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP142602</td><td></td></tr><tr><td>BD Difco Agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0812-07-1</td><td></td></tr><tr><td>cloreto de sódio</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S3014-500g</td><td></td></tr><tr><td>meropenem</td><td>TargetMol</td><td>T0224</td><td></td></tr><tr><td>tobramicina</td><td>Selleck Chemicals</td><td>S2514</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>ATCC29213</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Incubadora</td> de agitação <td>de ATCC9721</td><td></td><td>Pseudomonas aeruginosa ATCC</td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>de M13520000</td><td></td><td>Eppendorf</td></tr><tr><td></td><td>Benchmark Scientific</td><td>H2200-H&nbsp;</td><td></td></tr> Microscópio fluorescente invertido <tr><td>Manukaguard Manuka</td><td>Honey Amazon</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>DMIL&nbsp;</td><td>Leica Microsystems</td><td>11521265</td><td></td></tr><tr><td>Câmera digital</td><td>Leica Microsystems</td><td>12730522</td><td></td></tr><tr><td>tubos de falcão de 15 mL</td><td>Genesee Scientific</td><td>28-103</td><td></td></tr><tr><td>pipetas sorológicas</td><td>Diagnocine</td><td>DP-LB0100005, DP-LB010010</td><td></td></tr><tr><td>Pipete auxiliar pipetador</td><td>Drummond Scientific Company</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Bico de Bunsen</td><td>Fisher Pipetas Rainin Scientific</td><td>S48108</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Pipette.com</td><td>L-20, L-200, L-1000</td><td></td></tr><tr><td>balança</td><td>Mettler Toledo</td><td>XS603S</td> Placa de 96 poços <td></td></tr><tr><td></td><td>Falcon</td><td>351172</td><td></td></tr><tr><td>inoculação loop</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-104-5</td><td></td></tr><tr><td>isopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2618-1</td><td></td></tr><tr><td>vidro espalhador</td><td>caseiro</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Kit de coloração de mortos-vivos para bactérias</td><td>Invitrogen</td><td>L7012</td><td></td></tr><tr><td>tubos de microfífugas</td><td>Biologix Research Company</td><td>SKU 80-1500/P80-1500</td><td></td></tr><tr><td>folha de estanho</td><td>Costco</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Software de fabricação de figuras</td><td>GraphPad</td><td>NA</td><td>GraphPad Prism foi usado para fazer figuras e realizar análises estatísticas.</td></tr></tbody></table>

coloração viva/morta para quantificar células viáveis, mas não cultiváveis, em bactérias causadoras de feridas tratadas com mel de manuka

Live/Dead Staining for Quantifying Viable but Not Culturable Cells in Manuka Honey-Treated Wound-Causing Bacteria

As formas de vida bacterianas viáveis, mas não cultiváveis (VBNC) são induzidas por estressores, incluindo o tratamento com antibióticos, e causam infecções recorrentes devido à sua tolerância a antibióticos. Como a HM é um antimicrobiano de amplo espectro ao qual raramente foi detectada resistência, foi levantada a hipótese de que a HM induziu menos VBNCs do que os antibióticos convencionais. O método aqui descrito foi utilizado para quantificar VBNCs formadas por duas bactérias causadoras de feridas, S. aureus...

Coloração viva/morta para quantificar células viáveis, mas não cultiváveis, em bactérias causadoras de feridas tratadas com mel de Manuka

Antibiotic resistance and tolerance among bacteria pose a significant threat to global health. Mechanisms contributing to antibiotic resistance and ...

livedead-staining-for-quantifying-viable-but-not-culturable-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo descreve um método para purificar Wolbachia pipientis a partir de uma linhagem de células Anopheles gambiae e cultura do endossimbionte na célula meio livre. Um ensaio para a viabilidade da bactéria é demonstrada.

Manutenção de Wolbachia em Cell-livre Médio

Fonte: Anderson, Q. L., et al. Um patossistema de C. elegans de alto rendimento, alto conteúdo e base líquida. J. Vis. Exp. (2018)O vídeo demonstra um ensaio em base líquida onde larvas de C. elegans geneticamente modificadas são expostas a bactérias patogênicas em uma microplaca. As toxinas bacterianas secretadas no meio induzem o estresse e a morte do hospedeiro. Um corante fluorescente cora vermes mortos, permitindo a quantificação baseada em imagens da mortalidade para avaliar a...

Avaliação da mortalidade induzida por bactérias patogênicas em larvas de C. elegans

Source: Calatayud Arroyo, M., et al. Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface. J. Vis. Exp. (2018)The video demonstrates a method to evaluate the viability of anaerobic oral bacteria using fluorescent dyes and flow cytometry. It begins with culturing bacteria in oxygen-free broth, followed by resuspending a single colony from a blood agar plate. After incubation and dilution, the culture is stained with membrane-permeable and...

Fluorescence-Based Viability Assessment of Oral Anaerobic Bacteria

O vídeo mostra um ensaio de morte opsonofagocítica in vitro usando uma co-cultura de neutrófilos humanos com Streptococcus pneumoniae. Anticorpos e proteínas do complemento facilitam a opsonização da bactéria, permitindo que os neutrófilos reconheçam e matem bactérias, mostrando atividade opsonofagocítica de neutrófilos bem-sucedida.

Avaliação da atividade de morte opsonofagocítica contra patógenos bacterianos

Este vídeo demonstra um ensaio para estudar o efeito da rigidez da matriz extracelular (MEC) na infecção bacteriana de células aderentes. Hidrogéis de poliacrilamida de rigidez variável, revestidos com colágeno, são colocados em camadas em uma placa de vários poços para imitar a rigidez da ECM fisiológica. Ao sobrepor células endoteliais humanas nos hidrogéis e infectar as células com bactérias Listeria monocytogenes projetadas para expressar uma proteína fluorescente uma vez intracelular, a...

Um ensaio para estudar o impacto da rigidez da matriz extracelular na infecção bacteriana

Central ao campo da patogénese bacteriana é a capacidade de definir se e como os micróbios sobrevivem após exposição a células eucarióticas. Este artigo descreve protocolos para a utilização de corantes fluorescentes que revelam a viabilidade das bactérias individuais dentro e associados com as células hospedeiras.

Fluorescência métodos de microscopia para determinar a viabilidade de bactérias em associação com células de mamíferos

As infecções por biofilme mostram alta tolerância à quimioterapia. Nenhum ensaio captura a complexidade dos biofilmes. Em vez disso, são necessários ensaios complementares. Apresentamos uma plataforma de triagem (desenvolvida para S. aureus) que combina ensaios de viabilidade, biomassa e matriz de biofilme. Permite a descoberta de medicamentos anti-biofilme, incluindo a avaliação dos efeitos quimioterápicos a longo prazo.

A Plataforma de Ensaios Anti-biofilme adequado para a Exploração de bibliotecas de compostos naturais

Um simples ensaio de medição da ATP e método de coloração ao vivo/morto foram usados para quantificar e Visualizar Neisseria gonorrhoeae sobrevivência após o tratamento com ceftriaxona. Este protocolo pode ser estendido para examinar os efeitos antimicrobianos de qualquer antibiótico e pode ser usado para definir a concentração inibitória mínima dos antibióticos em biofilmes bacterianos.

Exame quantitativos de susceptibilidade antibiótica de Neisseria gonorrhoeae agregados usando ATP-utilização comercial ensaios e coloração Live/mortos

Descrito aqui é um método de análise de expressão gênica bacteriana em tecidos animais em nível celular. Este método fornece um recurso para estudar a diversidade fenotípica ocorrendo dentro de uma população bacteriana em resposta ao ambiente de tecido durante uma infecção.

Um método baseado em fluorescência para estudar o Regulamento de Gene bacteriano em tecidos infectados

O protocolo descreve um método passo-a-passo para configurar um modelo de pele ferida ovina ex vivo infectada com Staphylococcus aureus. Este modelo de alto rendimento simula melhor infecções in vivo em comparação com técnicas convencionais de microbiologia e apresenta aos pesquisadores uma plataforma fisiologicamente relevante para testar a eficácia de antimicrobianos emergentes.

Um novo modelo de ferida cutânea de ovino ex vivo de alto rendimento para testar antibióticos emergentes

Aqui, apresentamos um protocolo para quantificar a sobrevivência pós-estresse em amostras de leveduras. O ensaio emprega dois corantes fluorescentes, SYTO 9 e iodeto de propídio (PI), para quantificar a integridade da membrana plasmática. Ele usa citometria de fluxo para fornecer estimativas quantitativas e reprodutíveis das frações de células vivas, mortas e danificadas para amostras de estresse pós-oxidativo.

Um ensaio LIVE/DEAD otimizado acoplado à citometria de fluxo para quantificar a sobrevivência pós-estresse em células de levedura

Aprenda a quantificar células viáveis, mas não cultiváveis, em bactérias causadoras de feridas tratadas com mel de Manuka usando coloração viva/morta. Este método auxilia pesquisadores em microbiologia a estudar estados de dormência bacteriana.

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