Name: Injeção intravenosa otimizada em peixe-zebra adulto (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-20T14:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 17 s
Description: Aprenda um protocolo otimizado de injeção intravenosa em peixe-zebra adulto para estudos de doenças hematológicas. Este método melhora a sobrevivência e o enxerto celular em pesquisas.

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<ol><li>Choi, T. Y., Choi, T. I., Lee, Y. R., Choe, S. K., Kim, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+an+animal+model+for+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as an animal model for biomedical research.</a> Exp Mol Med. 53 (3), 310-317 (2021).</li>
<li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+human+disease%3A+zebrafish+swim+into+view%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nat Rev Genet. 8 (5), 353-367 (2007).</li>
<li>Wu, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+in+zebrafish+embryos%3A+a+new+platform+for+translational+research+in+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in gastric cancer.</a> J Exp Clin Cancer Res. 36 (1), 160(2017).</li>
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<li>Stoletov, K., Montel, V., Lester, R. D., Gonias, S. L., Klemke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+imaging+of+the+dynamic+tumor+cell+vascular+interface+in+transparent+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">High-resolution imaging of the dynamic tumor cell vascular interface in transparent zebrafish.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (44), 17406-17411 (2007).</li>
<li>Etchin, J. P. K. J., Look, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+a+model+for+the+study+of+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as a model for the study of human cancer.</a> Methods Cell Biol. 105, 309-337 (2011).</li>
<li>Khan, N., Mahajan, N. K., Sinha, P., Jayandharan, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+method+to+generate+xenograft+tumor+models+of+acute+myeloid+leukemia+and+hepatocellular+carcinoma+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cells+Mol+Dis%22%5BJournal%5D)">An efficient method to generate xenograft tumor models of acute myeloid leukemia and hepatocellular carcinoma in adult zebrafish.</a> Blood Cells Mol Dis. 75, 48-55 (2019).</li>
<li>Corkery, D. P., Dellaire, G., Berman, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukaemia+xenotransplantation+in+zebrafish--chemotherapy+response+assay+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">Leukaemia xenotransplantation in zebrafish--chemotherapy response assay in vivo.</a> Br J Haematol. 153 (6), 786-789 (2011).</li>
<li>He, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functions+of+flt3+in+zebrafish+hematopoiesis+and+its+relevance+to+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Functions of flt3 in zebrafish hematopoiesis and its relevance to human acute myeloid leukemia.</a> Blood. 123 (16), 2518-2529 (2014).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+IDH2%28R172K%29+and+IDH2%28R140Q%29+zebrafish+models+recapitulated+features+of+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Transgenic IDH2(R172K) and IDH2(R140Q) zebrafish models recapitulated features of human acute myeloid leukemia.</a> Oncogene. 42 (16), 1331(2023).</li>
<li>Fan, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+xenograft+model+for+studying+mechanism+and+treatment+of+non-small+cell+lung+cancer+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Zebrafish xenograft model for studying mechanism and treatment of non-small cell lung cancer brain metastasis.</a> J Exp Clin Cancer Res. 40 (1), 371(2021).</li>
<li>LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+whole+kidney+marrow+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (2), e159(2007).</li>
<li>Pugach, E. K., Li, P., White, R., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injection+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injection in adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (34), e1645(2009).</li>
<li>Benjamin, D. C., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+metastasis+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of metastasis in adult zebrafish.</a> BMC Cancer. 17 (1), 660(2017).</li>
<li>Hilligan, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+BCG+protects+mice+against+lethal+SARS-CoV-2+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of BCG protects mice against lethal SARS-CoV-2 challenge.</a> J Exp Med. 219 (2), e20211862(2022).</li>
<li>Moreo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+BCG+in+mice+promotes+natural+killer+and+T+cell-mediated+antitumor+immunity+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of BCG in mice promotes natural killer and T cell-mediated antitumor immunity in the lung.</a> Nat Commun. 14 (1), 6090(2023).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+IL-12+encoding+self-replicating+RNA-lipid+nanoparticle+complex+leads+to+safe+and+effective+antitumor+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of IL-12 encoding self-replicating RNA-lipid nanoparticle complex leads to safe and effective antitumor responses.</a> Sci Rep. 14 (1), 7366(2024).</li>
<li>Saleem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+best+practice+for+validating+tail+vein+injections+in+rat+with+near-infrared-labeled+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A new best practice for validating tail vein injections in rat with near-infrared-labeled agents.</a> J Vis Exp. (146), e59295(2019).</li>
<li>Rojas, A. M., Shiau, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-localized+and+Intravenous+Microinjections+in+the+Larval+Zebrafish+to+Assess+Innate+Immune+Response%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Brain-localized and Intravenous Microinjections in the Larval Zebrafish to Assess Innate Immune Response.</a> Bio Protoc. 11 (7), e3978(2021).</li>
<li>van Soest, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+static+immersion+and+intravenous+injection+systems+for+exposure+of+zebrafish+embryos+to+the+natural+pathogen+Edwardsiella+tarda%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Comparison of static immersion and intravenous injection systems for exposure of zebrafish embryos to the natural pathogen Edwardsiella tarda.</a> BMC Immunol. 12, 58(2011).</li>
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<li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+the+adult+zebrafish+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection of the adult zebrafish kidney.</a> J Vis Exp. (54), e2839(2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Autoclaves Esterilizador a Vapor</td><td>HIRAYAMA&nbsp;</td><td>HRG-140</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga 5424</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Countess 3 Contador de Células Automatizado</td><td>Thermofisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Countess II FL</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etil 3-aminobenzoato metanossulfonato sal (Tricaína)</td> <td>Sigma-aldrich</td><td>MKCL9483</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 40 &micro; m Cell Strainer</td><td>CORNING</td><td></td><td>Blue, Estéril, Embalado Individualmente, 50/Caixa</td></tr><tr><td>FBS, Qualificado</td><td>Gibco</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Dextran (MW 10000)&nbsp;</td>Agulha de injeção <td>MedChemExpress</td><td>60842-46-8</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Hamilton&nbsp;</td><td>HAMI207434</td><td>34 G, 10 mm de comprimento</td></tr><tr><td>Micro seringa</td><td>Hamilton&nbsp;</td><td>7635-01&nbsp;</td><td>10 &micro; Capacidade L, Modelo 701 RN</td></tr><tr><td>Nikon SMZ18</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7.4 (1x)</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina (5,000 U/mL)</td><td>Gibco&trade;</td><td>15070063</td><td>100x</td></tr><tr><td>Ponteiras de Pipeta</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>epTIPS</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta de Canal Único</td><td>eppendorf&nbsp;</td><td>05-403-151</td><td></td></tr><tr><td>Água Destilada UltraPure</td><td>Invitrogen</td><td>10977015</td><td></td></tr></tbody></table>

injeção intravenosa otimizada em peixe-zebra adulto

Optimized Intravenous Injection in Adult Zebrafish

Para avaliar a eficácia e precisão de diferentes métodos de injeção em peixes Casper adultos, foi realizada uma análise comparativa usando técnicas intracardíacas, RO e IV (Figura 2A). Quantidades variadas de células WKM de peixes Tg (mpo: EGFP) foram injetadas, cada uma misturada com corante FITC-dextrano nas concentrações de 1 × 105 e 3 × 105 células. O sucesso de cada método foi determinado por meio da avaliação microscópica imediata da presença do sinal de GFP pós-injeção. Os resultados revelaram variações significativas no sucesso do parto entre os métodos. O método de injeção IV demonstrou a maior eficácia, com sinais de GFP detectados em 41 dos 43 peixes. Em contraste, o método RO mostrou sucesso limitado, com injeções bem-sucedidas observadas em apenas 3 dos 37 peixes. O método intracardíaco alcançou uma entrega bem-sucedida em 11 dos 40 peixes (Figura 2A). A sobrevivência dos peixes transplantados também foi monitorada. Os peixes injetados por meio dos métodos RO e intracardíaco tiveram taxas de sobrevivência significativamente mais baixas em comparação com aqueles injetados por via intravenosa (Figura 2B). Notavelmente, o número de células injetadas influenciou as taxas de sobrevivência entre os peixes injetados por via intravenosa, com os receptores recebendo 3 × 105 células mostrando melhor sobrevivência. Essas descobertas destacam a eficácia e confiabilidade superiores do método de injeção IV na entrega de células e substâncias em peixes-zebra adultos.
A eficiência de enxerto de células WKM em peixes Casper receptores foi cuidadosamente avaliada pelo monitoramento do sinal GFP das células transplantadas. Em peixes que receberam injeções intravenosas, os sinais de GFP foram detectáveis já no terceiro dia após o transplante (Figura 2C), indicando um processo de enxerto rápido e eficaz. Em contraste, os peixes submetidos a injeções intracardíacas e de RO mostraram uma emergência tardia do sinal de GFP, indicando uma taxa de enxerto mais lenta. No dia 17 após o transplante, as células transplantadas haviam repovoado predominantemente a medula renal, com os sinais de GFP mais pronunciados observados nos peixes injetados por via intravenosa (Figura 2C). A análise citométrica de fluxo do KM dos receptores ressaltou ainda mais a eficácia do método de injeção IV. Nos receptores inicialmente injetados com 3 × 105 células por via intravenosa, aproximadamente 18% das células no KM foram positivas para GFP, uma proporção semelhante à encontrada na medula renal do peixe doador Tg (mpo: EGFP) que não havia sido submetido a nenhum transplante (Figura 2D, E). Em contraste, a injeção intracardíaca resultou em cerca de 5% de células positivas para GFP, enquanto o método RO produziu apenas cerca de 2% de células positivas para GFP na medula renal dos receptores. Além disso, a taxa de enxerto correlacionou-se positivamente com o número de células injetadas, demonstrando que doses celulares mais altas levaram a um maior enxerto. Esses resultados confirmam a robustez da técnica de injeção IV em facilitar o enxerto celular e subsequente repovoamento da medula renal.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67463/67463fig01v2.jpg"> 
Figura 1: Resultados de sobrevivência pós-irradiação e injeção intravenosa em peixe-zebra adulto. (A) Os peixes Casper foram expostos a até 35 Gy de irradiação e monitoraram a sobrevida por 30 dias, confirmando 25 Gy como uma dosagem subletal (n = 10 para todos os grupos). (B) Diagramas esquemáticos que ilustram os locais de injeção para o peixe-zebra Casper e TU, juntamente com exemplos de peixes injetados com sucesso. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67463/67463fig01largev2.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67463/67463fig02v2.jpg"> 
Figura 2: Comparação de injeções retroorbitais, intracardíacas e intravenosas em peixe-zebra adulto. (A) Representações esquemáticas e resultados representativos dos métodos de injeção RO, intracardíaca e IV em peixe-zebra adulto. Os números no canto inferior direito indicam a contagem de peixes injetados com sucesso ou incorretamente em relação ao número total tentado para cada método, o sinal GFP foi verificado no microscópio fluorescente imediatamente após a injeção. (B) Sobrevida global dos receptores após transplantados com diferentes números de células da medula renal do doador por diferentes métodos de injeção (IV-100K: n = 24; Intracardíaco-100K: n = 10; RO-100K: n = 12; IV-300K: n = 20; 300K intracardíaco: n = 6; RO-300K: n = 8). (C) Observação da eficiência do enxerto em receptores pós-transplante via métodos de injeção RO, intracardíaca e IV (D) Gráfico de citometria de fluxo representativo para as células GFP-positivas em KM dos receptores 17 dias após o transplante. (E) A porcentagem de células GFP+ no KM dos receptores 17 dias após o transplante, bem como no KM de peixes Tg(mpo:EGFP) doadores sem irradiação (IV-100K: n = 30; Intracardíaco-100K: n = 28; RO-100K: n = 22; IV-300K: n = 22; Intracardíaco-300K: n = 26; RO-300K: n = 18). Os dados são médios ± s.e.m. A ANOVA de uma via foi realizada para D. O teste Log-Rank foi realizado para B. *P &lt; 0,05, **P &lt; 0,01, ***P &lt; 0,001, ****P &lt; 0,0001. Barras de escala = 1 mm (A, C). Abreviaturas: RO = retro-orbital; IV = intravenosa; GFP = proteína fluorescente verde; KM = medula renal; SSC-A = área do pico de dispersão lateral; FITC-A = área do pico do isotiocianato de fluoresceína. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67463/67463fig02largev2.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Injeção intravenosa otimizada em peixe-zebra adulto

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in ...

optimized-intravenous-injection-in-adult-zebrafish

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Aqui nós mostramos como fazer retro-orbital injeção em peixe-zebra adulto.

Retro-orbital de injeção no Zebrafish Adulto

Descrevemos uma técnica de microinjecting a aminoglicosídeos, gentamicina, em dois dias pós-fetilization (dpf) larvas de peixe-zebra para induzir lesão renal aguda (IRA). Nós também descrevem um método para montar toda a imunohistoquímica, plástico incorporação e secção de larvas de peixe-zebra para visualizar os danos mediados AKI.

Microinjeções intravenosa de larvas do peixe para o Estudo de lesão renal aguda

Demonstramos injeção intraperitoneal em peixe-zebra adulto. Usamos a 10 mL NanoFil micro controlado por um controlador MICRO4 e III UltraMicroPump. Esta demonstração inclui o uso de água fria como um anestésico.

Injeção intraperitoneal em Zebrafish Adulto

Este vídeo descreve a técnica de injeção intramuscular para administrar compostos nos músculos dorsais de um peixe-zebra adulto.

Injeção intramuscular (IM): entrega composta no músculo dorsal de um peixe-zebra adulto

Este vídeo descreve uma técnica de injeção intraperitoneal, um método para administrar soluções na cavidade abdominal de peixe-zebra adulto.

Injeção intraperitoneal: um método de administração de solução na cavidade abdominal de um peixe-zebra adulto

Este vídeo descreve a técnica de entrega de compostos no coração de peixes-zebra adultos usando injeção intratorácica.

Injeção intratorácica: entrega composta ao coração do peixe-zebra adulto

Aqui descrevemos um protocolo para a imunização do adulto peixe-zebra (Danio rerio) com uma vacina baseada em DNA e demonstrar a validação de um evento de sucesso da vacinação. Este método é adequado para o rastreio pré-clínico de candidatos vacinais em vários modelos de infecção.

Imunização do adulto Zebrafish para o rastreio pré-clínica de vacinas baseadas em DNA

Este método baseia-se na injeção de 0,5 − 3 μL de solução no tórax de zebrafish adulto. O procedimento entrega eficientemente proteínas e compostos químicos na proximidade do coração de zebrafish sem danificar o órgão. A abordagem é adequada para efeitos de teste de fatores exógenos em vários tecidos do coração.

Injeção intratorácica para o estudo do coração de zebrafish adulto

Um novo método de injeção intraperitoneal (IP) em peixe-zebra adulto é descrito. Ao manusear compostos tóxicos como a doxorrubicina, esse procedimento é mais eficaz do que os dois métodos de IP relatados anteriormente. A técnica foi projetada para ser facilmente adotada por pesquisadores com experiência limitada no modelo de peixe-zebra.

Uma técnica de injeção intraperitoneal em peixe-zebra adulto que minimiza os danos corporais e a mortalidade associada

Este manuscrito fornece o procedimento detalhado de injeção de artéria intra-ilíaca (IIA), uma técnica para entregar células cancerígenas especificamente aos tecidos dos membros posteriores, incluindo ossos, para estabelecer metástases ósseas experimentais. Embora inicialmente estabelecido com modelos de tumor de mama, esse protocolo pode ser facilmente estendido a outros tipos de câncer.

Injeção Artéria Intra-ilíaca para eficiente e seletiva Modelagem de microscópico metástase óssea

Aprenda um protocolo otimizado de injeção intravenosa em peixe-zebra adulto para estudos de doenças hematológicas. Este método melhora a sobrevivência e o enxerto celular em pesquisas.

Injeção intravenosa otimizada em peixe-zebra adulto

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